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细菌内毒素检查SOP（动态浊度法）1．目的为规范细菌内毒素含量测定的操作，特制定本SOP。
2．范围本SOP适用于细菌内毒素含量测定的操作。
3．定义3.1.动态浊度法是检测反应混合物的浊度到达某一预先设定的吸光度所需要的反应时间，或是检测浊度增加速度的方法。
3.2.细菌内毒素国家标准品系自大肠埃希菌提取精制而成，用于标定、复核、仲裁鲎试剂灵敏度和标定细菌内毒素工作标准品的效价。
3.3.细菌内毒素工作标准品系以细菌内毒素国家标准品为基准标定其效价，用于试验中的鲎试剂灵敏度复核、干扰试验及各种阳性对照。
3.4.细菌内毒素检查用水系指内毒素含量小于0.015 EU/ml（用于凝胶法）或0.005 EU/ml （用于光度测定法）且对内毒素试验无干扰作用的灭菌注射用水。
4．职责4.1.QC负责本规程的起草、修订、培训及执行。
4.2.QA、QC组长、质量管理部经理负责本规程的审核。
4.3.质量负责人/质量受权人负责本规程的批准。
4.4.QA负责本规程执行的监督。
5．引用标准《中华人民共和国药典》2020年版三部。
6．材料6.1.仪器设备细菌内毒素测定仪、漩涡混合器、干烤箱6.2.试剂及溶液6.2.1.鲎试剂6.2.2.细菌内毒素工作标准品：国家标准品或经过国家标准品标定的工作标准品。
6.2.3.细菌内毒素检查用水：内毒素含量应小于0.005EU/ml。
6.3.使用的器具移液器、无热原稀释管和反应管、无热原枪头。
7．流程图无8．程序8.1.原理细菌内毒素能激活鲎试剂(TAL)中的酶系统，使凝固酶原变成凝固酶，进而凝固酶再激活其中的凝固蛋白原变成凝固蛋白，呈现凝胶反应，动态浊度法是检测反应混合物的浊度到达某一预先设定的吸光度所需要的反应时间，计算内毒素浓度与反应时间关系的双对数标准曲线，利用标准曲线对供试品的内毒素含量进行定量测定。
8.2.试验前准备8.2.1.采样管用硅胶塞塞口，经180℃干烤2小时，除内毒素备用。
盐酸左氧氟沙星注射液中细菌内毒素的定量检查
苑庆华;孙淑莲;芮菁;华晓东
【期刊名称】《华西药学杂志》
【年(卷),期】2003(18)4
【摘要】目的建立定量检测盐酸左氧氟沙星注射液中细菌内毒素的方法。
方法采用中国药典 2 0 0 0年版附录检测细菌内毒素的动态比浊法。
结果盐酸左氧氟沙星注射液在稀释至 4倍时检测可排除干扰因素的影响 ,内毒素回收率在 5 0 %～2 0 0 %范围。
结论细菌内毒素动态比浊法定量检查盐酸左氧氟沙星注射液中的内毒素可行。
【总页数】2页(P286-287)
【关键词】盐酸左氧氟沙星注射液;细菌内毒素;定量检查;动态比浊法
【作者】苑庆华;孙淑莲;芮菁;华晓东
【作者单位】天津市药品检验所
【正文语种】中文
【中图分类】R978.19;R927.12
【相关文献】
1.骨肽注射液中细菌内毒素定量检查研究 [J], 丁秀旻
2.动态浊度法定量检查细菌内毒素在血站原辅材料质量控制中的应用 [J], 孙振秀;孙振平;乔显森
3.盐酸左氧氟沙星注射液中细菌内毒素检查法的研究 [J], 彭燕;施震;罗毅
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药典三部版通则细菌内毒素检查法标准化工作室编码[XX968T-XX89628-XJ668-XT689N]1143 细菌内毒素检查法本法系利用鲎试剂来检测或量化由革兰阴性菌产生的细菌内毒素，以判断供试品中细菌内毒素的限量是否符合规定的一种方法。
细菌内毒素检查包括两种方法，即凝胶法和光度测定法，后者包括浊度法和显色基质法。
供试品检测时，可使用其中任何一种方法进行试验。
当测定结果有争议时，除另有规定外，以凝胶限度试验结果为准。
本试验操作过程应防止内毒素的污染。
细菌内毒素的量用内毒素单位（EU）表示，1EU与1个内毒素国际单位（IU）相当。
细菌内毒素国家标准品系自大肠埃希菌提取精制而成，用于标定、复核、仲裁鲎试剂灵敏度、标定细菌内毒素工作标准品的效价，干扰试验及检查法中编号B和C溶液的制备、凝胶法中鲎试剂灵敏度复核试验、光度测定法中标准曲线可靠性试验。
细菌内毒素工作标准品系以细菌内毒素国家标准品为基准标定其效价，用于干扰试验及检查法中编号B和C溶液的制备、凝胶法中鲎试剂灵敏度复核试验、光度测定法中标准曲线可靠性试验。
细菌内毒素检查用水应符合灭菌注射用水标准，其内毒素含量小于0.015EU/ml（用于凝胶法）或0.005EU/ml（用于光度测定法），且对内毒素试验无干扰作用。
试验所用的器皿需经处理，以去除可能存在的外源性内毒素。
耐热器皿常用干热灭菌法（250℃、30分钟以上）去除，也可采用其他确证不干扰细菌内毒素检查的适宜方法。
若使用塑料器皿，如微孔板和与微量加样器配套的吸头等，应选用标明无内毒素并且对试验无干扰的器具。
供试品溶液的制备某些供试品需进行复溶、稀释或在水性溶液中浸提制成供试品溶液。
必要时，可调节被测溶液（或其稀释液）的pH值，一般供试品溶液和鲎试剂混合后溶液的pH值在6.0～8.0的范围内为宜，可使用适宜的酸、碱溶液或缓冲溶液调节pH值。
酸或碱溶液须用细菌内毒素检查用水在已去除内毒素的容器中配制。
注射用盐酸溴己新原料中细菌内毒素的检测随着医学技术的不断进步，注射用药品在治疗疾病中起着非常重要的作用。
由于注射用药品直接进入人体血液循环系统，对药品的质量要求非常严格，尤其是对细菌内毒素的检测。
细菌内毒素是一种致病因子，即使是微量的细菌内毒素也可能对人体造成严重危害。
对注射用药品中的细菌内毒素进行准确、快速的检测具有重要意义。
本文就是对注射用盐酸溴己新原料中细菌内毒素的检测进行深入探讨。
一、注射用盐酸溴己新原料二、细菌内毒素的危害细菌内毒素是一种由细菌生长代谢产生的毒素，能够引起机体发炎反应，并对人体造成直接危害。
细菌内毒素主要存在于细菌的细胞内，但在细菌死亡或破裂时可以释放到外界。
即使是微量的细菌内毒素也可能引起中毒反应，表现为发热、血压下降、器官功能损害等严重症状，甚至危及生命。
药品中的细菌内毒素含量必须控制在合理范围内，以确保药品的安全性和有效性。
为了确保注射用盐酸溴己新原料中的细菌内毒素符合国家标准和药典要求，必须采用可靠、准确的检测方法进行监测。
目前，常用的细菌内毒素检测方法包括生物学法、理化法和免疫学法等。
1. 生物学法生物学法是一种常用的细菌内毒素检测方法，主要通过动物实验或细胞培养的方式，观察细菌内毒素引起的生物反应来进行检测。
这种方法的优点是对多种类型的细菌内毒素都有良好的检测能力，但缺点是需要较长的检测时间、操作复杂且存在一定的伦理争议。
在实际生产中并不常用。
2. 理化法理化法是利用化学或物理手段对细菌内毒素进行检测的方法，常用的包括气相色谱法、液相色谱法、质谱法等。
这些方法具有检测速度快、操作简便、灵敏度高等优点，但对于某些细菌内毒素的检测有一定的局限性，且需要较为复杂的仪器设备。
3. 免疫学法免疫学法是目前常用的细菌内毒素检测方法之一，其原理是利用抗原与抗体之间的特异性反应来检测细菌内毒素。
常用的免疫学法包括酶联免疫吸附试验（ELISA）、免疫斑点法、免疫印迹法等。
这些方法具有检测速度快、操作简便、结果准确等优点，已经成为目前最为广泛应用的细菌内毒素检测方法。
内毒素检测标准及方法
内毒素检测的标准及方法主要包括以下几个方面：
检测标准：
1.细菌内毒素检查包括两种方法，即凝胶法和光度测定法，后者包括浊度法和显
色基质法。
供试品检测时，可使用其中任何一种方法进行试验。
当测定结果有争议时，除另有规定外，以凝胶法结果为准。
2.细菌内毒素的量用内毒素单位（EU）表示，1EU与1个内毒素国际单位（IU）
相当。
检测方法：
内毒素检测主要使用鲎试验法，这是国际上至今为止检测内毒素最好的方法，具有简单、快速、灵敏、准确的特点，被欧美药典及我国药典定为法定内毒素检查法，并已被世界各国所采用。
鲎试剂按实验方法可分为凝胶法、动态浊度法、终点浊度法、动态显色法、终点显色法。
其中凝胶法操作简单、经济，不需要专用测定设备，可以进行定性或半定量测定。
请注意，进行内毒素检测时应严格遵守相关标准和操作规范，确保结果的准确性和可靠性。
葡萄糖酸钙注射液的细菌内毒素检查
严宏凤;陈圆;于生兰
【期刊名称】《中国农学通报》
【年(卷),期】2009(0)24
【摘要】建立葡萄糖酸钙注射液的细菌内毒素检查方法。
根据2005年版《中国兽药典》一部附录细菌内毒素检查法进行试验。
结果表明当水为溶剂时,供试品对细菌内毒素检查法有干扰作用;改用稀释剂I作为溶剂,干扰预试验和干扰试验表明,供试品在2倍以上稀释浓度时可排除干扰。
结论:葡萄糖酸钙注射液按限值
L=2.5Eu/ml进行细菌内毒素检查是可行的,可以用细菌内毒素检查法代替热原法检测葡萄糖酸钙注射液。
【总页数】4页(P24-27)
【关键词】葡萄糖酸钙注射液;细菌内毒素检查;干扰试验
【作者】严宏凤;陈圆;于生兰
【作者单位】江苏畜牧兽医职业技术学院
【正文语种】中文
【中图分类】S859.2
【相关文献】
1.葡萄糖酸钙注射液细菌内毒素检查法的初步实验研究 [J], 陈松旺;范明;翁一玲
2.葡萄糖酸钙注射液细菌内毒素检查法研究 [J], 张红宇;高菊珍;王璐
3.葡萄糖酸钙注射液细菌内毒素的鲎法检测 [J], 吴胜红;贾月光;夏恪迪
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细菌内毒素检测标准一、范围：本试验为《中国药典（二部）》附录“细菌内毒素检查法”中规定的“凝胶法”，系利用鲎试剂与细菌内毒素产生凝胶反应的机理，经判定供试品中细菌内毒素的限量是否符合规定。
二、依据：GB/T14233.2-2005医用输液、输血、注射器具检验方法。
第二部分：生物学试验方法。
《中华人民共和国药典》2010年版二部三、器具及试剂：1.器材：（1）锥形瓶（2）三角烧瓶（3）无热原剪刀、镊子（4）恒温培养箱（5）超净工作台（6）恒温水浴箱（7）电热干燥箱（8）旋涡混合器（9）移液器2.试剂：（1）细菌内毒素国家标准品（2）细菌内毒素工作标准品（3）鲎试剂（4）细菌内毒素检查用水四、实验前准备：1.器具处理：试验所用器皿需经处理除去可能存在的外源性内毒素。
玻璃器皿置电热干燥箱内1800C干烤至少2h，或2500C干烤至少30min。
塑料器皿置30%双氧水中浸泡4h，再用细菌内毒检查用水充分冲洗后置600C烘干备用。
2.鲎试剂灵敏度复核实验：当使用新批号的鲎试剂或试验条件发生了任何可能影响检验结果的改变时，应进行鲎试剂灵敏度试验。
试验步骤按《中国药典（二部）》附录“细菌内毒素检查法”中规定进行。
3.供试品干扰实验：（1）对未知或可疑的供试品初次进行细菌内毒素试验之前应先进行干扰试验，以检验供试品对细菌内毒素试验是否有抑制或增强作用，以及其他影响细菌内毒素试验准确性和敏感性的干扰作用。
当鲎试剂、供试品来源、供试品配方或生产工艺有变化或其他任何影响细菌内毒素试验结果的试验条件改变时，应重新进行干扰实验。
（2）每种产品应取3批并分别使用不少于两个制造商生产的鲎试剂进行干扰实验。
供试液制备按《中国药典（二部）》附录“细菌内毒素检查法”规定进行。
（3）如供试品对细菌内毒素试验有干扰作用，可选用下列适宜方法排除干扰：a)使用更灵敏的鲎试剂对供试品进行更大倍数稀释;b)采用无热原氨基甲烷缓冲液稀释供试液;c)采用无热原氢氧化钠或盐酸溶液调节供试液pH值在6.0-8.0范围;d)采用阳离子缓冲（MgSO4或MgCl2）稀释供试液以调节离子浓度。
加替沙星葡萄糖注射液细菌内毒素的测定
孔少珊
【期刊名称】《药学与临床研究》
【年(卷),期】2005(013)005
【摘要】目的探讨定量检测加替沙星葡萄糖注射液(GGI)中细菌内毒素的方法.方法采用<中华人民共和国药典>2000年版附录的细菌内毒素检查方法及指导原则进行实验.结果 2个厂家4个批号的GGI在浓度≤0.167 mg·ml-1时,对细菌内毒素检查无干扰,所测样品(100 ml:0.2 g加替沙星:0.5 g葡萄糖)细菌内毒素的量均小于0.75 EU·mg-1,回收率在50%～200%之间.结论可建立GGI的细菌内毒素检查法代替热原法.
【总页数】2页(P69-70)
【作者】孔少珊
【作者单位】广东省珠海市拱北医院,珠海,519015
【正文语种】中文
【中图分类】R927.12
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4.动态比浊法测定葛根素葡萄糖注射液中细菌内毒素的含量 [J], 周学琴;郭长杰
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注射用盐酸溴己新原料中细菌内毒素的检测注射用盐酸溴己新是一种广泛应用于疾病治疗的药物。
然而，在生产和使用过程中，可能会存在细菌内毒素的污染。
细菌内毒素是一种由细菌合成的有毒蛋白质，是病原微生物造成感染时产生的中毒原因之一。
如果注射用盐酸溴己新中存在细菌内毒素，可能会对人体造成危害。
因此，对注射用盐酸溴己新原料中细菌内毒素的检测是非常必要的。
一、细菌内毒素相关知识细菌内毒素是一种有机化合物，它通常是由某些细菌在生长过程中产生的。
这些内毒素是一类蛋白质，非常抗原性，可以引起强烈的免疫反应。
细菌内毒素可以直接引起疾病，也可以通过刺激机体免疫系统来引起疾病。
一些典型的细菌内毒素如下：1.革兰氏阴性菌内毒素：如大肠杆菌外毒素、克雷伯杆菌外毒素等。
2.革兰氏阳性菌内毒素：如金黄色葡萄球菌的外毒素等。
3.弯曲菌内毒素：如霍乱弧菌外毒素等。
二、注射用盐酸溴己新的制备注射用盐酸溴己新的生产工艺非常复杂，一般包括残留的有机溶剂检验、细菌内毒素检测、对照实验等步骤。
其中，细菌内毒素检测是重要的一环。
注射用盐酸溴己新的制备过程如下：1.首先，采用合适的原料和工艺参数，通过一系列化学反应合成出盐酸溴己新。
2.在制备好的盐酸溴己新中加入适当的缓冲剂和稳定剂等辅料，使药物能够适合注射剂。
3.经过灭菌，将药物装入玻璃制品中，发货简单易于存储。
注射用盐酸溴己新原料中细菌内毒素检测一般采用免疫学方法，具体包括玻璃酶原猪血浆( LAL )试验和内毒素结合抑制试验等。
LAL试验是单一细胞因子比色法中应用最广泛的一种。
LAL试验是从假单胞菌( Limulus polyphemus )静脉注射中获得的体液(即半胱氨酸 )为基础开发的。
它是一种简单、准确、可靠、敏感度高的检测方法，它可以有效地检测注射用盐酸溴己新原料中微生物内毒素的含量。
内毒素结合抑制试验是根据内毒素与抗内毒素的相互作用将其结合起来的原理来检测细菌内毒素的。
首先，准备内毒素抗体，将其溶解于透明的板上，随后将酵素标记的内毒素加入混合物中反应。
注射用盐酸溴己新原料中细菌内毒素的检测细菌内毒素是细菌体内所产生的一种有毒的代谢产物，当细菌死亡或分裂破裂时，内毒素会释放到外界，而内毒素对动物和人类均具有极强的毒性和致病性，可能导致休克、高热、出血、多器官功能障碍综合征等症状。
因此，注射用药品中存在内毒素可能对人体健康产生严重危害，必须进行严格的检测和控制。
目前，国际上通用的检测内毒素的方法主要有以下三种：LAL法、石蜡酸盐凝胶电泳法和微生物毒性试验法。
其中，LAL法是目前应用最广泛的一种方法，它是利用内毒素和大马士革草蛤（Limulus polyphemus）中的血凝素发生凝胶反应的原理进行的。
该方法具有灵敏度高、专属性强、操作简便的特点，可以检测出极微量的内毒素，并且被认为是目前最先进、最有效的内毒素检测方法。
LAL法的具体操作步骤如下：首先，将所需的试剂（包括LAL试剂、11mM的钙离子溶液、双氧水、甲醇等）准备好。
按照LAL试剂的说明书进行试剂的配制和稀释，使其达到所需的浓度。
然后，将所需检测的注射用盐酸溴己新原料样品、阳性对照品和阴性对照品放置于室温下，使其升至常温。
取10μl样品（含所需检测的内毒素）及对照品放置于96孔酶联免疫吸附板中，并加入相应的试剂。
在37℃恒温箱中反应20-30分钟后，观察各孔的反应情况，如有凝胶形成，则表示样品中存在内毒素。
需要注意的是，在进行LAL法检测的过程中，一定要保证试剂的纯度和质量，以避免对检测结果的影响。
同时，为了保证检测结果的准确性和可靠性，需要进行多次反复实验，并对检测结果进行统计分析。
综上所述，细菌内毒素的检测是注射用盐酸溴己新原料和制剂质量控制中的重要环节。
LAL法是目前最先进、最有效的内毒素检测方法，具有灵敏度高、专属性强、操作简便的特点。
在实际操作中，需要注意细致操作，保持试剂的纯度和质量，以确保检测结果的准确性和可靠性。
氧氟沙星、乳酸环丙沙星、葡萄糖酸依诺沙星注射液细菌内毒
素检查方法标准研究
肖文华;杨雅婷;周素文
【期刊名称】《中国药品标准》
【年(卷),期】2005(6)3
【摘要】目的:建立氧氟沙星、乳酸环丙沙星、葡萄糖酸依诺沙星注射液细菌内毒素检查方法.方法:按2000年版中国药典二部附录XIE、XIXF进行实验和结果判断.结果:氧氟沙星、乳酸环丙沙星、葡萄糖酸依诺沙星注射液最大无干扰浓度分别为3、4、4倍稀释液(0.67mg/ml、0.5mg/ml、0.5mg/ml).结论:氧氟沙星、乳酸环丙沙星、葡萄糖酸依诺沙星注射液可以建立细菌内毒素检查项.
【总页数】4页(P29-32)
【作者】肖文华;杨雅婷;周素文
【作者单位】湖北省药品检验所,武汉,430064;湖北省药品检验所,武汉,430064;湖北省药品检验所,武汉,430064
【正文语种】中文
【中图分类】R9
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1.盐酸左氧氟沙星注射液细菌内毒素检查方法的研究 [J], 秦继红;顾炳仁
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3.葡萄糖酸依诺沙星注射液中细菌内毒素的检查 [J], 廖一静;麦曦;李蔚雯;徐文芳
4.葡萄糖酸依诺沙星注射液与盐酸左氧氟沙星注射液治疗急性感染性腹泻的疗效比较 [J], 庄智峰;李月
5.葡萄糖酸依诺沙星注射液中细菌内毒素的检测 [J], 宋晓红;李仕荣
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氟罗沙星葡萄糖注射液细菌内毒素检查
张玉臣
【期刊名称】《西北药学杂志》
【年(卷),期】2005(020)003
【摘要】目的建立氟罗沙星葡萄糖注射液细菌内毒素的检查法.方法按中国药典2000年版二部附录ⅪE,XIXF进行试验和结果判断.结果用标示灵敏度为
0.06EU·mL-1的鲎试剂,氟罗沙星葡萄糖注射液稀释8倍后,对细菌内毒素检查无干扰作用.结论可以用细菌内毒素检查法代替家兔检查法控制其热原.
【总页数】2页(P124-125)
【作者】张玉臣
【作者单位】青海省药品检验所,青海,西宁,810000
【正文语种】中文
【中图分类】R927.12
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1.细菌内毒素检查法检测注射用盐酸大观霉素中细菌内毒素的研究 [J], 孙菊元;顾炳仁
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5.氟罗沙星葡萄糖注射液细菌内毒素检查法的可行性研究 [J], 冀建明;叶良君
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葡萄糖酸钙注射液细菌内毒素检查法研究
张红宇;高菊珍;王璐
【期刊名称】《中国药品标准》
【年(卷),期】2007(8)3
【摘要】目的:对葡萄糖酸钙注射液进行细菌内毒素检查法研究,建立其细菌内毒素检查方法.方法:按《中国药典》2005年版二部附录XIE细茵内毒素检查法进行.结果:葡萄糖酸钙注射液在2.5mg/ml稀释浓度对细茵内毒素检查法无干扰作用,其细菌内毒素限值L为0.1Eu/mg.结论:可采用细茵内毒素检查法替代家兔热原法对葡萄糖酸钙注射液进行细菌内毒素检查.
【总页数】4页(P55-58)
【作者】张红宇;高菊珍;王璐
【作者单位】云南省药品检验所,昆明,650011;云南省药品检验所,昆明,650011;云南省药品检验所,昆明,650011
【正文语种】中文
【中图分类】R921.2
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氧氟沙星葡萄糖注射液细菌内毒素检测
郁相云;雷孝义;白松涛
【期刊名称】《现代预防医学》
【年(卷),期】2003(30)5
【摘要】目的 :建立快速准确检测氧氟沙星葡萄糖注射液中细菌内毒素的方法 ,减少热原反应的发生。
方法 :按中国药典 2 0 0 0年版二部附录规定 ,用不同厂家的鲎试剂对供试品进行干扰试验。
结果 :氧氟沙星葡萄糖注射液对细菌内毒素检测不干扰。
结论 :对氧氟沙星葡萄糖注射液进行细菌内毒素检测是可行的。
【总页数】2页(P681-682)
【关键词】氧氟沙星葡萄糖注射液;鲎试剂;干扰试验;细菌;喹诺酮类;抗生素
【作者】郁相云;雷孝义;白松涛
【作者单位】深圳市龙岗中心医院;深圳市龙岗区卫生防疫站
【正文语种】中文
【中图分类】R978.1;R378
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