20110310球孢白僵菌对两种植物病原镰孢的拮抗作用
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材料与方法供试材料Fra bibliotek; 株白僵菌均为本实验室 &BC! 虫生真菌菌种库保存的菌种,棉花枯萎病菌和棉花红腐病菌由安徽农 业大学植保学院植物病理教研室提供。其中菌株 &BC!DD8*、33<E 和 D*;* 分别分离自马尾松毛虫 =,06 <(#/5*)& ’)0+1-1)& 、光肩星天牛 >0#’/#’2#(- 4/-?(5’,005& 和松墨天牛 @#0#+2-*)& -/1,(0-1)& ,产地分别为安徽霍 邱、蚌埠和日本;88<8、E:D8 和 E:D: 均分离自安徽宣城的松林土壤,*D<8 分离自安徽滁州琅琊山的阔叶林 土壤,*8D; 分离自福建武夷山的阔叶林土壤。 !"# 平板对峙培养 挑取少量白僵菌孢子接种于 @FG 平板,用蘸水的涂布棒涂布均匀后,E<H 培养 *I 后得到可打取菌丝 块的平板。镰孢在 @FG 平板上活化后,从 E<H 下培养 *I 的菌落边缘打取菌碟。对峙培养时,将镰孢接在 @FG 平板中央,在其周围等距离接 3 块直径为 3JJ 的白僵菌菌丝块,两者相距 *KJ。以单独接种植物病原 真菌的平板作对照,每处理重复 * 次,置于 E<H 恒温箱中培养,逐日观察各菌株的生长情况,并在两菌株
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中国生物防治学报
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球孢白僵菌对两种植物病原镰孢的拮抗作用
张胜利,李增智!
(安徽农业大学微生物防治省重点实验室,合肥 !’""’))
摘要:体外测定了球孢白僵菌 !"#$%"&’# (#))’#*# 对两种棉花病原镰孢— — —棉花枯萎病菌 +$)#&’$, -./)0-&’$, 平板对峙培养时, 两种镰孢的生长均受 A 8 BC 8 %#)’*1"23$&* 和棉花红腐病菌 +$)#&’$, %"&3’2’44’-’5") 的拮抗作用。 到明显抑制。不同含孢量的球孢白僵菌对两种镰孢的抑制效果不同,且抑制率与孢子浓度成显著的线性量 效关系;在接种量为 ) D #"( 孢子 ・ .E , # 时,对两种菌的抑制率均达到 %"F 以上,对红腐病菌的抑制率稍高。 白僵菌代谢液对两种植物病原菌也表现出抑菌作用,并且抑制率与代谢液浓度呈显著的线性量效关系。综 上述,球孢白僵菌对两种镰孢拮抗作用的机制主要涉及营养和空间竞争以及抗生作用,其中抗生作用对拮 抗作用的贡献更大。对抗生性代谢液的初步分析发现,醇沉后的上清液冻干粉经 + 种有机溶剂浸提后,无 明显的抑菌作用;而向培养基中添加球孢白僵菌多糖和蛋白粗提物均能显著抑制两种镰孢菌的菌丝生长。 因此,抑菌活性物质主要是大分子的多糖和蛋白。 关 键 词:棉花枯萎病;棉花红腐病;球孢白僵菌;拮抗;多糖;蛋白质 文献标识码:H 文章编号:#""*$%!)# (!"##) "’$"’+%$"&
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中国生物防治学报
第 E> 卷
[*] 栽试验中发现它能持续有效地控制小麦全蚀病。!"#$% 和 &#’($)% 在温室和大田试验中,用该菌处理洋葱鳞 [3] 茎明显降低了尖孢镰孢洋葱专化型 ! " #$%&’#()* + , -. , +,’-, 对洋葱的侵染。/0.#12# 等 研究发现,利用
授粉熊蜂作为媒介在温室中传播白僵菌和粉红粘帚 ./#0#&1-+2%& (#&,- ,在控制温室白粉虱和草盲蝽 3%4)& /56 0,#/-(5& 的同时,也能有效防治番茄和甜椒的灰霉病。美国田纳西州立大学 451"(6 课题小组将白僵菌 7’889 :; 菌株的分生孢子混在甲基纤维素溶液中,对番茄种子进行包衣,能保护番茄幼苗抵抗立枯丝核菌 7258#+6 [< = >] 。 1#05- &#/-05 和群结腐霉 9%125)* *%(5#1%/)* ,提高幼苗在含有立枯丝核菌和群结腐霉的土壤中的存活率 这些都表明,该菌有潜力成为具有防虫和防病双重功效的生防因子。研究该菌与更多的植物病原真菌 的关系,可以为更好地利用这种生防菌,使其在 ?@A 中发挥更大的作用提供依据。 镰孢是一类世界性分布的真菌,在许多植物上引起根腐、茎腐、茎基腐、花腐和穗腐等多种土传病害, 化学防治效果均不甚理想,而且还会造成严重的环境问题,是生产上最难防治的重要病害之一。目前人们 在广泛寻找化学杀菌剂的替代品,尤其是生物农药。由尖镰孢萎焉专化型 ! " #$%&’#(5)* + , -. , :-&50;,+1)* 引起的棉花枯萎病和由串珠镰孢 !)&-(5)* :,(15+5//5#5<,& 引起的红腐病是两种重要的棉花病害,本文研究白僵 菌对这两种镰孢的拮抗作用,试图筛选出拮抗活力较强的白僵菌菌株,并了解其拮抗机制,为开发防治这 两种棉花病害的球孢白僵菌制剂提供试验依据。
[;] 接种点连线上测量病原菌接种点到菌落前缘的距离 ,每处理分别从 3 个方向测量 3 次取平均值,按下式
计算抑菌率:@? L (AK M A)) N AK O 8DDP ,@? 代表抑制率,AK 代表单独培养菌落生长距离,A) 代表对峙培养 菌落生长距离。 !"$ 孢子悬浮液对镰孢抑制作用的测定 以平板对峙培养对棉花枯萎病菌生长抑制率最高的 33<E 菌株为供试菌株,取培养 8DI 的白僵菌平板刮 取孢子,用 DQD<P 吐温9;D 溶液配成 R O 8D; 孢子 ・ JS M 8 的孢子悬浮液母液,然后系列稀释成 R O 8D> 、 R O 8DR 、 ・ 分别吸取 8JS 孢悬液与冷却至 3DH 的 :JS @FG 培养 R O 8D< 、 R O 8D3 、 R O 8D* 和 R O 8DE 孢子 JS M 8 的孢悬液。 基混匀,制成一系列含不同孢子量的 @FG 平板。然后挑取直径 3JJ 的两种病原菌菌丝块接种于平板中央。 以不接种病原真菌的白僵菌孢子不同稀释度平板和只接种病原真菌的平板作对照,重复 * 次。倒置于 E<H
[!] 防治中发挥着重要作用,迄今已有不少应用该昆虫病原真菌防治植物病害的成功报道。\>@T03Y 等 在盆
收稿日期:!"#"$"%$#& 基金项目:国家自然科学基金 (’"%(!’)&) ;教育部高等学校博士点专项科研基金 (!""*"’)++""#) 作者简介:张胜利 (#%&+ , ) ,男,博士研究生,-$./01:20345678 9: #)’; 35.;!通讯作者,-$./01:9910: /</=8 >?=8 3@。
[:] 恒温箱中培养,逐日观察测量菌落直径,连续观察 >I。按下式计算生长抑制率 :@? L ( BI M TI) ( N BI M FI)
O 8DDP ,@? 代表抑制率,BI 代表只接种病原真菌平板的对照直径,TI 代表处理直径,FI 代表菌碟直径。 !"% 发酵滤液对镰孢抑制作用的测定 以 33<E 菌株为供试菌株,将 8JS R O 8D; 孢子 ・ (不加琼 JS M 8 的孢子悬浮液接种到含 8DDJS UFV 培养基 M8 脂的 UFGV) 的 E<DJS 三角瓶中,E<H 、8*D$ ・ J%1 下培养 8DI。发酵结束后,先用滤纸过滤,然后 3H 、<DDD ・ J%1 M 8离心 EDJ%1,上清液经 DQEE J 细菌过滤器过滤得到无菌滤液。分别将 EQ<、E、8Q<、8 和 DQ<JS 无菌 $ ! 滤液与 :JS @FG 培养基混匀制成平板,用上述方法接种两种镰孢,培养方法同上。对照加 8JS 无菌水代替 发酵滤液。 ( BI M TI) *I 和 <I 后分别测定对两种镰孢的抑制率。@? L N BI O 8DDP ,@? 代表抑制率,BI 代表对 *<D
!4(#5$2#:6* %’3&- /@4/M5@0B. 5A !"#$%"&’# (#))’#*# ,/@ >@45.5C/4<5M>@03 A=@M=B,T/B 4>B4>? /M/0@B4 +$)#&’$, -./)0-7 &’$, A 8 BC 8 %#)’*1"23$&* ,C/4<5M>@ 5A 35445@ T014,/@? + 8 %"&3’2’44’-’5") ,C/4<5M>@ 5A 35445@ 6>? 654 8 U@ ?=/1 3=14=6>, ! 8 (#))’#*# B<5T>? 5Q205=B 0@<0Q0405@ 5@ 4<> M65T4< 5A 4<> 4T5 C/4<5M>@B 8 V0AA>6>@4 ?5B>B 5A 35@0?0/ </? ?0AA>6>@4 0@<0Q04567 >AA>34B,T04< 0@<0Q0405@ 6/4> 10@>/617 3566>1/4>? 45 0@53=1=.,B=MM>B40@M 4</4 4<> /@4/M5@0B. T/B /BB530/4>? T04< 35.C>40405@ A56 @=460405@ /@? BC/3> 8 W<> 0@<0Q0405@ 5@ 4<> 4T5 C/4<5M>@B T/B Q54< 52>6 %"F /4 0@53=1=. 5A ) D #"( ・ BC56>B .E , # ,B10M<417 <0M<>6 5@ + 8 %"&3’2’44’-’5" 8 W<> .>4/Q5104> 0@ GVX B</Y> 3=14=6> 5A ! 8 (#))’#*# /1B5 ?0BC1/7>? 0@<0Q0405@,T04< 0@<0Q0405@ 6/4> 10@>/617 3566>1/4>? 45 .>4/Q5104> 35@3>@46/405@,B=MM>B40@M 4</4 4<> /@4/M5@0B. T/B /1B5 /B$ B530/4>? T04< /@40Q05403 B=QB4/@3>B 8 Z/B>? 5@ 4<> 35.C/60B5@ 5A 0@<0Q0405@ 6/4>B,/@40Q05B0B T/B 35@B0?>6>? 45 35@460Q=4> .56> 4</@ 35.C>40405@ 8 N@ 4<> /@/17B0B 5@ 4<> /@40Q05403 .>4/Q5104>,@5@> 5A 4<> 175C<0109>? B=C>6@/4/@4 >[46/34>? Q7 + ?0A$ A>6>@4 56M/@03 >[46/34/@4B B<5T>? 5Q205=B 0@<0Q0405@ 5@ 4<> +$)#&’$, BCC 8 ,T<01> /??0405@ 5A 36=?> >[46/34 5A >04<>6 C517B/33</60?> 56 C654>0@ B0M@0A03/@417 0@<0Q04>? .73>10=. M65T4< 5A 4<> 4T5 +$)#&’$, BCC 8 ,B=MM>B40@M 4</4 4<> ./0@ 0@$ <0Q04567 B=QB4/@3>B /6> C517B/33</60?> /@? C654>0@ T04< <0M< .51>3=1/6 T>0M<4 8 617 ,&58(:35445@ T014 ?0B>/B>;35445@ 6>? 654 ?0B>/B>;!"#$%"&’# (#))’#*# ;/@4/M5@0B.;C517B/33</60?>;C654>0@ 长期以来,国内关于植物病害生防真菌的研究主要集中在木霉属真菌上。但是,从 !" 世纪 %" 年代初 国外就有人开始研究利用金龟子绿僵菌 9"3#&:’;’$, #*’)-04’#" 和球孢白僵菌 !"#$%"&’# (#))’#*# (以下简称白僵 [#] 菌) 防治甜菜黑胫病 。白僵菌具有分布和寄主范围广、环境安全、易大量培养等优点,已在农林害虫生物