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第37卷第2期哈尔滨商业大学学报(自然科学版)Vol.37No.2 2021年4月Journal of Harbin University of Commerce(Natural Sciences Edition)Apr.2221五指毛桃对小鼠酒精性肝损伤的保护作用张茹，杜娟(哈尔滨商业大学药学院，哈尔滨150276)摘要:探讨五指毛桃对小鼠酒精性肝损伤的保护作用.将小鼠随机分为空白对照组、模型对照组、葛花组、五指毛桃低、中、高剂量组，葛花组按2.53g/(kg-d)剂量灌胃葛花提取物；五指毛桃低、中、高剂量组按2.2g/(kg•d)、2.4g/(kg•d)、2.6g/(kg•d)剂量灌胃五指毛桃提取液；空白对照组和模型对照组灌胃等量2.9%生理盐水.37min后，除空白对照组外剂量组和模型对照组分别按剂量10mL/kg灌胃牛栏山二锅头(56%乙醇)，连续灌胃10天，考察体重、自主活动次数、肝脏指数、GSH含量、SOD活性、TNF-a、NF-k B、IL-1/3和IL-6的水平.各组小鼠体重无显著性差异.与空白对照组相比，模型对照组自主活动次数、肝脏指数、I L-6、I L-1、TNF-a和NF-k B水平均有所升高，GSH含量、SOD活性均有所下降；与模型对照组相比，低、中、高剂量的五指毛桃组均在不同程度上降低肝脏指数、IL-6、IL-10、TNF-a、NF-k B水平，升高GSH含量和SOD活性.五指毛桃对小鼠酒精性肝损伤具有一定的保护作用.关键词:五指毛桃；酒精性肝损伤；护肝作用；小鼠；抗氧化；抗炎中图分类号：R961.5文献标识码:A文章编号：1672-2946(2221)22-2139-26Prntective effeei of Fici Hirtae Radix on mice witU alcoholie liven injureZHANG Ru,DU Juan(School of Pharmacy,Harbin University of Commerce,Harbin156076,Chinn)Abstract:To explore the protective effect of Fici Hirtae Radix on mice with alcoholte livec injury.The mice were rannomly diviCeC inth b lank conyco geup,modr。
纳米二氧化钛对小鼠肝、肾细胞DNA的损伤肖国强;徐晓宇;蔡文君;付聪;吴曲;丁书茂;袁均林;袭著革;杨旭【期刊名称】《生态毒理学报》【年(卷),期】2008(003)006【摘要】为探讨纳米TiO2对肝、肾细胞DNA的损伤效应,实验制备了锐钛矿型纳米TiO2颗粒(20～100nm),并采用不同浓度的纳米TiO2(0、0.1、0.2、0.4、0.8mg·mL-1)对25只昆明雄性小鼠进行染毒,5d后用单细胞凝胶电泳技术检测小鼠肝、肾细胞DNA的损伤程度.结果表明,随着纳米TiO2染毒浓度的升高,小鼠肝、肾细胞尾部DNA百分率(TailDNA%)和尾矩(Tail Moment)均呈逐渐升高趋势;对于肝细胞,0.1mg·mL-1组Tail DNA%及Tail Moment与对照组无显著差异(p>0.05),≥O.2mg·mL-1组则显著升高(p<0.05或p<0.01);与肝细胞相比,肾细胞Tail DNA%及TailMoment变化更为显著,0.1mg·mL-1组即与对照组存在极显著差异(p<0.01).以上结果表明,纳米TiO2染毒可导致小鼠肝、肾细胞DNA损伤,且随染毒浓度的增加,损伤逐渐加重,呈一定的剂量-效应关系;与肝细胞相比,肾细胞对纳米TiO2更为敏感,较低浓度染毒即可造成DNA损伤.【总页数】6页(P590-595)【作者】肖国强;徐晓宇;蔡文君;付聪;吴曲;丁书茂;袁均林;袭著革;杨旭【作者单位】华中师范大学生命科学学院环境科学实验室,遗传调控与整合生物学湖北省重点实验室,武汉,430079;华中师范大学生命科学学院环境科学实验室,遗传调控与整合生物学湖北省重点实验室,武汉,430079;华中师范大学生命科学学院环境科学实验室,遗传调控与整合生物学湖北省重点实验室,武汉,430079;华中师范大学生命科学学院环境科学实验室,遗传调控与整合生物学湖北省重点实验室,武汉,430079;华中师范大学生命科学学院环境科学实验室,遗传调控与整合生物学湖北省重点实验室,武汉,430079;华中师范大学生命科学学院环境科学实验室,遗传调控与整合生物学湖北省重点实验室,武汉,430079;华中师范大学生命科学学院环境科学实验室,遗传调控与整合生物学湖北省重点实验室,武汉,430079;军事医学科学院卫生学环境医学研究所,天津,300050;华中师范大学生命科学学院环境科学实验室,遗传调控与整合生物学湖北省重点实验室,武汉,430079【正文语种】中文【中图分类】TB383;X171.5【相关文献】1.盐酸小檗碱对小鼠肝、脾、肾细胞DNA损伤的比较研究 [J], 何蕾;王璐;惠秀娟;刘宛;宋婕;徐成斌;王鹤潼2.党参水提物对D-半乳糖致衰老模型小鼠肝、肾细胞DNA和组织结构的影响 [J], 耿广琴;李能莲;刘卉;杨雅丽;黄勇3.纳米二氧化钛对小鼠心肌细胞DNA的损伤及叔丁基对苯二酚的拮抗作用 [J], 姜文博;刘诣;朱越;于江帆;李杰;胡金凤;张荣;郭会彩4.溴虫腈对小鼠脾、肝、肾细胞DNA的损伤作用 [J], 陈贤均;李小燕5.双酚A及纳米二氧化钛对人胚肝L-02细胞内活性氧含量及DNA损伤的联合作用 [J], 张娜;高霞;杜宏;张江华;江明;吕斌;周宜开因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
蒙药地格达-4味汤对小鼠化学性肝损伤论文：蒙药地格达-4味汤对小鼠化学性肝损伤的实验研究【摘要】目的观察地格达-4味汤对D-半乳糖胺(D-GlaN)、硫代乙酰胺(TAA)所致小鼠肝损伤的防治作用。
方法以护肝片作阳性对照,用不同肝毒剂造成小鼠急性肝损伤模型,分别测定动物血清相关指标,用t检验法比较各组间差异。
结果地格达-4味汤组可降低因D-GlaN所致肝损伤小鼠的ALT 及AST (P<0.05)；明显降低因TAA所致肝损伤小鼠的ALT及AST (P<0.01)。
模型组肝组织学改变主要表现为碎片状坏死；护肝片组可见散在点状及小碎片状坏死；地格达-4味汤组可见散在点状坏死，有炎细胞浸润。
结论地格达-4味汤对以上不同肝损伤模型有一定的防治作用,本研究为该药的功效及应用提供了实验依据。
【关键词】地格达-4味汤; D-GlaN; TAA; 急性肝损伤Abstract：ObjectiveTo observe the protective and treatment action of Digeda-4 powder for D-GlaN and liver lesion of mice induced by TAA.MethodsPositively controlled with Huganpian, the above-noted liver-toxic agents were administered to make acute liver lesion ofmice to measure the relative indices of animal serum.Method of t-test was used to check the difference between the groups.ResultsDigeda-4 powder decreased the serum ALT and AST of liver lesion mice induced by D-GlaN(P<0.05);and obviosly lowered the the serum ALT and AST of liver lesion micen induced by TAA(P<0.01). The change of hepatic tissues in model groups showed the piecemeal necrosis;the hepatic tissues in positive control groups showed scattered punctiform and dimin piecemeal necrosis;the hepatic tissues in Digeda-4 powder groups showed scattered punctiform and dimin piecemeal necrosis;also it was infiltrated phlegmonosis cell.ConclusionDigeda-4 powder has protective and treatment action on the above mentioned different liver lesion models to some extent.The test is likely to provide the experimental basis for the effect and application of this herb.Key words：Digeda-4 powder ; D-GlaN; TAA; Acute Liver Lesion地格达-4味汤（又叫肋柱花四味汤）是蒙医常用方剂之一。
广西桂郁金对小鼠免疫性肝损伤的保护作用一、研究背景和目的免疫性肝损伤是指免疫系统在肝脏组织中产生的异常免疫反应所导致的肝损伤。
该病病因复杂，临床表现多样，难以有效治疗。
目前，治疗免疫性肝损伤的方法主要是使用免疫抑制剂。
然而，这些药物有很多副作用，易于引起感染等并发症。
因此，寻找一种有效治疗免疫性肝损伤的药物显得非常重要。
广西桂郁金是一种传统中药，常用于治疗肝炎、黄疸等肝胆疾病。
其主要成分为黄酮类、苷类、防己酚等。
先前的一些研究表明，广西桂郁金对肝脏有一定的保护作用。
因此，我们的研究旨在探究广西桂郁金对小鼠免疫性肝损伤的保护作用。
二、研究方法1. 实验动物30只8周龄的雄性C57BL/6小鼠，体重20±2g。
2. 实验药物广西桂郁金提取物，每天口服5g/kg。
3. 实验组织将小鼠随机分为正常组、模型组、治疗组。
每组10只小鼠。
正常组不做特殊处理；模型组和治疗组采用艾氏棕色气球法诱导小鼠免疫性肝损伤。
4. 实验指标采用HE染色法观察肝脏病理变化，并采用ELISA法检测肝脏中的丙氨酸转移酶(ALT)、门冬氨酸转移酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)等指标。
5. 数据分析使用SPSS 22.0进行数据处理和统计分析。
数据采用平均值±标准差表示，t检验分析差异的显著性。
三、研究结果1. 食用广西桂郁金提取物可以显著减轻小鼠免疫性肝损伤的病理变化通过HE染色法观察发现，模型组小鼠的肝脏组织呈现坏死、脱落、细胞增生等异常现象；而治疗组小鼠的肝脏组织中这些现象均有所减轻。
经过统计分析，发现模型组小鼠肝脏中的ALT、AST、ALP水平远高于正常组；而治疗组小鼠的肝脏中这些指标的水平均有所下降。
2. 食用广西桂郁金提取物对小鼠免疫系统的影响不明显研究发现，食用广西桂郁金提取物对小鼠免疫系统的影响不明显。
在治疗组和模型组之间，小鼠腹腔淋巴结和脾脏中T、B淋巴细胞比例差异不大。
四、研究结论本研究表明广西桂郁金对小鼠免疫性肝损伤有一定的保护作用，可以显著减轻肝脏病理损伤和改善肝功能。
综合设计性实验报告亚硝酸钠对小鼠肝脏谷丙转氨酶(GPT)和谷草转氨酶(GOT)的影响摘要：研究探讨亚硝酸盐急性中毒对小鼠肝损伤的作用。
通过将小鼠分组后进行不同剂量的亚硝酸钠溶液灌胃，使小鼠肝脏损伤，收取小鼠血液后，利用分光光度计测定其血清的吸光值，而后利用谷丙转氨酶(GPT)和谷草转氨酶(GOT)标准曲线计算出肝脏受损小鼠的GPT 、GOT 活力，不同剂量梯度比较就能得出亚硝酸盐对小鼠GPT 和GOT 活力的影响。
关键词：亚硝酸钠、谷丙转氨酶(GPT)、谷草转氨酶(GOT)、肝脏组织 0引言亚硝酸钠是工业用盐，由于其具有咸味且价钱便宜，常在非法食品制作时用作食盐的不合理替代品。
亚硝酸盐类也是食品添加剂，起着色、防腐作用，广泛用于熟肉类、灌肠类和罐头等动物性食品。
亚硝酸盐对人体的损害作用机理是使血液中的低铁血红蛋白氧化成高铁血红蛋白，失去运输氧的能力而引起组织缺氧性损害。
了解亚硝酸钠对肝脏的影响情况，对修订亚硝酸盐食品添加剂安全使用剂量和有效治疗亚硝酸盐急性中毒具有参考意义。
1 材料与方法 1.1仪器和药品 1．试剂(1)磷酸盐缓冲液（0.1mol/L ，pH7.4)：取甲液420ml 和乙液80ml ，混合均匀即得。
①甲液(0.1mol/L 磷酸二氢钠）：取NaH 2PO 4·12H 2O 35.82g ，加蒸馏水溶解后稀释至1000ml 。
②乙液（0.1mol/L 磷酸二氢钾）：取无水KH 2PO 4 13.61g ，加蒸馏水溶解后稀释至l000ml 。
(2)丙酮酸钠标准液（2mmol/L ）：在100ml 磷酸盐缓冲液中溶解22.0mg 丙酮酸钠。
(3)0.4mol/L氢氧化钠溶液：先配1mol/L NaOH{(称取NaOH 40g，用蒸馏水溶解后稀释至1000ml即得)，以1mol/L NaOH 稀释配成0.4mol/L NaOH。
(4)SGPT基质液：精确称取DL-丙氨酸1.79g和α-酮戊二酸29.2mg，放于100ml烧杯内，加入少量(约15m1)磷酸盐缓冲液及少量1mol/L的NaOH溶液使其溶解，并调pH至7.4，放入100ml容量瓶内，用磷酸盐缓冲液定容，4℃冰箱保存，此液每升含α-酮戊二酸2mmol、丙氨酸200mmol。
水飞蓟宾对0J小鼠致肝损伤的改善机制研究【摘要】本研究旨在探讨水飞蓟宾对0J小鼠致肝损伤的改善机制。
通过药理作用的分析发现，水飞蓟宾具有一定的保肝作用。
实验设计包括对照组和实验组的设立，观察水飞蓟宾对肝损伤的影响。
实验结果显示，水飞蓟宾能够显著减轻0J小鼠的肝损伤程度。
进一步的机制探讨表明，水飞蓟宾可能通过调节氧化应激和抗炎作用来改善肝损伤。
实验验证结果进一步证实了水飞蓟宾的保肝作用。
本研究得出水飞蓟宾对0J小鼠致肝损伤具有显著改善作用的结论。
这一研究意义在于为水飞蓟宾的药理作用提供了新的实验数据，同时也为治疗肝损伤提供了新的方法。
未来的研究可以进一步探讨水飞蓟宾在其他肝病模型中的作用机制。
【关键词】关键词：水飞蓟宾，0J小鼠，肝损伤，改善作用，药理作用，实验设计，实验结果，机制探讨，实验验证，研究意义，展望。
1. 引言1.1 研究背景水飞蓟宾是一种中草药，被广泛应用于治疗肝脏疾病。
由于现代生活方式和环境污染的影响，肝损伤已成为全球性问题。
0J小鼠是一种常用的实验动物模型，被广泛用于研究肝脏疾病。
目前关于水飞蓟宾对0J小鼠致肝损伤的改善机制的研究还比较有限，因此有必要对其进行深入探讨。
水飞蓟宾中含有丰富的生物活性成分，具有抗氧化、抗炎和保护肝脏功能的作用。
一些前期研究已经证实了水飞蓟宾对肝损伤的保护作用，但其具体的药理作用机制尚不清楚。
本研究旨在通过建立0J小鼠模型，探讨水飞蓟宾对致肝损伤的改善作用，并进一步探讨其可能的机制。
这将有助于揭示水飞蓟宾在肝脏疾病治疗中的作用机制，为临床应用提供科学依据。
1.2 研究目的本研究的目的是探讨水飞蓟宾对0J小鼠致肝损伤的改善机制，通过实验验证水飞蓟宾的药理作用，从而揭示其对肝损伤的保护效应。
具体而言，我们将深入研究水飞蓟宾在肝损伤模型中的作用机制，包括对肝功能指标、炎症因子表达、氧化应激水平等的影响。
通过实验设计和实验结果的详细分析，我们希望能够探讨水飞蓟宾对肝损伤的具体作用途径，为进一步研究开发肝损伤治疗新药物提供理论依据。
水飞蓟宾对0J小鼠致肝损伤的改善机制研究水飞蓟宾是一种来源于水飞蓟的生物活性成分，具有抗炎、抗氧化和保护肝脏的作用。
本研究旨在探讨水飞蓟宾对0J小鼠致肝损伤的改善机制，为进一步开发水飞蓟宾在治疗肝脏疾病中的应用提供理论依据。
实验设计与方法：选取0J小鼠模型，将其随机分为正常对照组、模型组和水飞蓟宾干预组。
模型组和水飞蓟宾干预组分别采用二甲苯致肝损伤方法，水飞蓟宾干预组在二甲苯注射后给予水飞蓟宾处理。
观察各组小鼠的生理指标、肝脏病理学变化和相关生物标志物的变化，探讨水飞蓟宾对致肝损伤的改善作用及其可能的机制。
结果：实验结果显示，与模型组相比，水飞蓟宾干预组的小鼠在肝脏生理指标、肝脏病理学变化和生物标志物上均有明显改善。
水飞蓟宾能够抑制二甲苯诱导的肝损伤，减轻肝脏组织炎症反应和细胞损伤，并且显著降低了肝脏中丙二醛等氧化应激相关物质的含量。
引言肝脏是人体的重要器官，具有代谢、解毒、贮藏等多种生理功能。
由于环境污染、不良生活习惯、病毒感染等多种因素的影响，肝脏疾病的发病率逐年增加。
肝损伤是肝病的常见病理生理过程，严重影响了患者的生活质量和健康状况。
水飞蓟是一种常见的草药植物，其花、叶和种子等部分都具有一定的药用价值。
水飞蓟宾是从水飞蓟中提取的一种生物活性成分，已被证明具有抗氧化、抗炎和保护肝脏功能。
研究水飞蓟宾在肝损伤治疗中的应用具有重要的临床意义。
材料与方法1. 实验动物：选取健康0J小鼠，性别不限，体重在20-30g之间，随机分为正常对照组、模型组和水飞蓟宾干预组。
2. 实验药物：水飞蓟宾提取物。
3. 模型制备：将模型组和水飞蓟宾干预组的小鼠皮下注射二甲苯，制备肝损伤模型。
4. 水飞蓟宾处理：水飞蓟宾干预组在二甲苯注射后给予水飞蓟宾处理，观察其对肝损伤的影响。
5. 组织标本采集：观察各组小鼠的肝脏病理学变化，采集肝脏组织标本用于后续实验。
6. 生物标志物检测：检测各组小鼠的肝脏生理指标及相关生物标志物的变化，包括丙二醛、谷草转氨酶、丙氨酸氨基转移酶等。
敲除TSP-1对小鼠急性肝损伤保护作用的机制吴敏;冯伟珂;占一姗;王剑巧;曾金娣;李科浩;张守华;陶强;占敏【期刊名称】《广东医学》【年(卷),期】2024(45)2【摘要】目的研究敲除血小板反应蛋白1(thrombospondin 1,TSP-1)在四氯化碳(CCl_(4))所致小鼠急性肝损伤中的保护作用。
方法选取C57BL/6J小鼠16只,TSP-1基因敲除小鼠8只:C57BL/6J小鼠分为WT组和WT+CCl_(4)组,TSP-1基因敲除小鼠为TSP-1^(-/-)+CCl_(4)组;WT+CCl_(4)和TSP-1^(-/-)+CCl_(4)组给予0.5 mL CCl_(4)+9.5 mL/kg橄榄油进行腹腔注射建立急性肝损伤模型,WT组注射橄榄油10 mL/kg作为对照。
通过HE染色以及血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)观察各组小鼠肝脏损伤情况及炎症反应程度;同时检测肝组织丙二醛(MDA)和谷胱甘肽(GSH)的含量并通过免疫组化和TUNEL检测凋亡的变化。
结果敲除TSP-1对CCl4诱导的急性肝损伤具有明显的改善作用,表现为血清AST、ALT、IL-6和TNF-α的降低和肝细胞坏死的减少,以及降低MDA含量和升高GSH含量,减少肝组织中凋亡及caspase-3的表达。
结论敲除TSP-1对CCl_(4)诱导的小鼠急性肝损伤具有明显的保护作用,其机制可能与抑制炎症、氧化应激和细胞凋亡相关。
【总页数】7页(P152-158)【作者】吴敏;冯伟珂;占一姗;王剑巧;曾金娣;李科浩;张守华;陶强;占敏【作者单位】江西省儿童医院普外科;九江学院附属医院;井冈山大学附属医院【正文语种】中文【中图分类】R575;R363【相关文献】1.油橄榄叶醇提取物对D-半乳糖胺/脂多糖致小鼠急性肝损伤的保护作用及其作用机制2.赶黄草活性成分槲皮素和没食子酸对CCl4所致小鼠急性肝损伤的保护作用及机制3.护肝布祖热颗粒对酒精诱导小鼠急性肝损伤的保护作用和作用机制4.胆酸对急性酒精肝损伤小鼠的保护作用及机制研究5.SRT1720对对乙酰氨基酚诱导小鼠急性肝损伤的保护作用及其机制因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
doi:10.3969/j.issn.1000⁃484X.2019.08.009㊃中医中药与免疫㊃青藤碱缓解氧化应激和炎症反应对四氯化碳诱导的急性肝损伤小鼠的保护作用①郭 华 裴高油② 李龙腾 徐文涛 (郑州铁路职业技术学院药学院,郑州451460) 中图分类号 R965.1 文献标志码 A 文章编号 1000⁃484X (2019)08⁃0939⁃05①本文为河南省科技攻关项目(082102210075)㊂②郑州大学第二附属医院,郑州450003㊂作者简介:郭 华,女,硕士,讲师,主要从事临床应用解剖学㊁临床病理学研究㊂[摘 要] 目的:本研究旨在探索青藤碱对四氯化碳诱导的急性肝损伤小鼠的影响㊂方法:小鼠随机分为4组:健康对照组(Ctrl),青藤碱组(Sinomenine),CCl 4模型组(CCl 4),青藤碱处理组(CCl 4+Sinomenine)㊂利用四氯化碳诱导的急性肝损伤小鼠模型㊂酶联免疫吸附实验(ELISA)检测天门冬氨酸氨基转移酶(AST)㊁丙氨酸转氨酶(ALT)㊁超氧化物歧化酶(SOD)㊁丙二醛(MDA)㊁谷胱甘肽(GSH)㊁白细胞介素(IL⁃6)㊁IL⁃1β和肿瘤坏死因子(TNF⁃α)水平㊂苏木素伊红(HE)染色观察肝脏组织病变㊂脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记(TUNEL)染色检测肝脏组织细胞凋亡㊂蛋白印迹检测Bcl⁃2和Bax 表达㊂结果:CCl 4模型组ALT 和AST 水平高于对照组(P <0.01)㊂与CCl 4模型组相比,青藤碱处理组ALT 和AST 水平下降(P <0.01)㊂青藤碱可缓解四氯化碳诱导的急性肝损伤小鼠肝脏组织病变㊂CCl 4模型组细胞凋亡高于对照组(P <0.01)㊂青藤碱处理组细胞凋亡低于CCl 4模型组(P <0.01)㊂与对照组相比,CCl 4模型组Bcl⁃2表达减弱,Bax 表达增强(P <0.01)㊂与CCl 4模型组相比,青藤碱处理组Bcl⁃2表达上升,Bax 表达下降(P <0.01)㊂与对照组相比,CCl 4模型组SOD 和GSH 水平降低,MDA 水平升高(P <0.01)㊂与CCl 4模型组相比,青藤碱处理组SOD 和GSH 水平上升,MDA 水平下降(P <0.01)㊂CCl 4模型组IL⁃6,IL⁃1β和TNF⁃α水平高于对照组(P <0.01)㊂青藤碱处理组IL⁃6㊁IL⁃1β和TNF⁃α水平低于CCl 4模型组(P <0.01)㊂结论:青藤碱可减轻四氯化碳诱导的急性肝损伤小鼠肝损伤㊁细胞凋亡㊁氧化应激及炎症反应㊂[关键词] 青藤碱;肝损伤;凋亡;氧化应激;炎症反应Protective effects of sinomenine on carbon tetrachloride⁃induced acute hepatic injury mice by relieving oxidative stress and inflammatory reactionGUO Hua ,PEI Gao⁃You ,LI Long⁃Teng ,XU Wen⁃Tao .College of Pharmacy ,Zhengzhou Railway Vocational and Technical College ,Zhengzhou 451460,China[Abstract ] Objective :The study aims to explore the effects of sinomenine on carbon tetrachloride⁃induced acute hepatic injury mice.Methods :Mice were randomly divided into four groups:healthy control group (Ctrl),sinomenine group,CCl 4model group (CCl 4)and sinomenine treatment group (CCl 4+Sinomenine).The model of acute hepatic injury was induced by CCl 4.The levels of aspartate aminotransferase (AST),alanine aminotransferase (ALT),superoxide dismutase (SOD),methane dicarboxylic aldehyde (MDA),glutathione (GSH),interleukin (IL)⁃6,IL⁃1βand tumor necrosis factor alpha (TNF⁃α)were tested by enzyme⁃linked immu⁃nosorbent assay (ELISA).The pathological changes of liver tissues were observed by hematoxylin⁃eosin (HE)staining.Apoptosis of liver tissues was detected by terminal deoxynucleotidyl transferase⁃mediated dUTP nick labeling (TUNEL)staining.The expression of Bcl⁃2and Bax was measured by Western blot.Results :The levels of ALT and AST in CCl 4group were higher than control group (P <0.01).Compared with CCl 4group,the levels of ALT and AST in CCl 4+Sinom group were reduced (P <0.01).The pathological changes of liver tissues in CCl 4⁃induced acute hepatic injury mice were relieved by sinomenine.The apoptosis in CCl 4group was higher than control group (P <0.01).The apoptosis in CCl 4+Sinom group was lower than CCl 4group (P <0.01).Compared with control group,the expression of Bcl⁃2in CCl 4group was attenuated with enhacive expression of Bax (P <0.01).Compared with CCl 4group,the expression of Bcl⁃2in CCl 4+Sinom group was eleveated with declined expression of Bax (P <0.01).Compared with control group,the levels of SOD and GSH in CCl 4group were decreased with enhanced levels of MDA (P <0.01).Compared with CCl 4group,the levels of SOD and GSH in CCl 4+Sinom group were increased with reduced levels of MDA (P <0.01).The levels of IL⁃6,IL⁃1βand TNF⁃αin CCl 4group were higher than control group (P <0.01).The levels of IL⁃6,IL⁃1βand TNF⁃αin CCl 4+Sinom group were lower than CCl 4group (P <0.01).Conclusion :Sinomenine alleviates the liver injury,apoptosis,oxidative stress and inflammatory response in CCl 4⁃induced acute hepatic injury mice.[Key words] Sinomenine;Liver injury;Apoptosis;Oxidative stress;Inflammatory response 肝脏是人体重要的代谢器官,负责碳水化合物㊁蛋白质和脂类的代谢,清除血液中的药物和毒素,调节免疫反应等㊂因此,肝脏经常会受到各种各样的损害,包括病毒性感染㊁创伤㊁化学试剂等㊂这些损害常常会导致细胞死亡和肝脏功能障碍[1,2]㊂随着中国人口老龄化加剧,医疗需求也在不断增加㊂药物和保健品的不合理使用使得药物性肝损伤的发生率也在增加[3]㊂肝损伤已成为临床医学和药物开发的一个重大挑战[4]㊂加深对肝损伤及其治疗方法的研究对人类医疗健康事业具有重要意义㊂据报道四氯化碳(CCl4)可诱发急性和慢性组织损伤㊂由于CCl4诱导的肝损伤机制与肝脏疾病非常相似,因此在实验性肝病中常被用于肝损伤动物模型的建立[5]㊂通过CCl4建立的急性肝损伤模型往往会产生氧化应激,炎症反应和细胞凋亡的增加[6]㊂青藤碱是一种从中药材青风藤中提取的异喹啉类物质,对风湿性关节炎有较好的治疗效果,甚至具有抗癌,缓解神经性疼痛及减轻脑出血损伤等功能[7⁃9]㊂但关于青藤碱肝脏保护作用的报道还十分罕见,有待进一步研究㊂本文的主要目的是探究青藤碱对四氯化碳诱导的急性肝损伤小鼠肝损伤㊁细胞凋亡㊁氧化应激和炎症反应的影响㊂1 材料与方法1.1 材料 40只6周龄小鼠购自郑州大学实验动物中心㊂青藤碱(Sinomenine,SM)(货号与规格: SS8560⁃20mg,纯度:HPLC≥98%)来源于Solarbio㊂天门冬氨酸氨基转移酶(Aspartate aminotransferase, AST)㊁丙氨酸转氨酶(Alanine aminotransferase, ALT)㊁超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase, SOD)㊁丙二醛(Methane dicarboxylic aldehyde, MDA)㊁谷胱甘肽(Glutathione,GSH)㊁白细胞介素(Interleukin,IL)⁃6㊁IL⁃1β和肿瘤坏死因子(Tumor necrosis factor alpha,TNF⁃α)的酶联免疫吸附实验(Enzyme⁃linked immunosorbent assay,ELISA)检测试剂盒购自武汉默沙克生物科技有限公司㊂苏木素伊红(Hematoxylin⁃eosin,HE)染色试剂盒和脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记(Terminal deoxynucleotidyl transferase⁃mediated dUTP nick labeling,TUNEL)细胞凋亡检测试剂盒购自碧云天生物技术公司㊂抗Bcl⁃2抗体和抗Bax抗体购自英国Abcam公司㊂1.2 方法1.2.1 动物分组及药物处理 小鼠随机分为4组:健康对照组(Ctrl),青藤碱组(Sinomenine),CCl4模型组(CCl4),青藤碱处理组(CCl4+Sinomenine),每组10只㊂首先CCl4模型组和青藤碱处理组皮下注射40%的CCl4橄榄油溶液(1.5ml/kg),2周一次,连续8周,对照组和青藤碱组皮下注射等量的橄榄油㊂上述处理的倒数第7天开始,青藤碱组和青藤碱处理组每天腹腔注射青藤碱20mg/kg体重,连续注射7d,对照组和CCl4组用生理盐水代替㊂1.2.2 ELISA检测 青藤碱处理7d后,收集各组小鼠血清后按照ELISA试剂盒说明书步骤检测ALT㊁AST㊁SOD㊁MDA㊁GSH㊁IL⁃6㊁IL⁃1β和TNF⁃α水平㊂首先样品加入反应孔,37℃孵育45min㊂洗涤液洗涤4次后加入生物素标记的抗体,37℃孵育30min㊂洗涤后再加链霉亲和素HRP混匀,37℃孵育30min㊂然后加入显色剂避光显色15min,最后添加终止液终止反应,450nm处检测吸光值㊂1.2.3 HE染色 颈椎脱臼法处死小鼠后取出肝脏组织,用4%的多聚甲醛对肝脏组织进行固定, 4℃24h㊂PBS清洗3次,用30%㊁50%和70%的酒精梯度脱水,每个梯度脱水10min㊂再经脱水机中脱水后进行石蜡包埋和切片㊂各组小鼠的石蜡切片按照HE染色液说明书进行HE染色,显微镜下观察肝脏组织病变情况㊂1.2.4 TUNEL染色 按照试剂盒说明书首先将石蜡切片依次进行二甲苯脱蜡和梯度乙醇水化,再用蛋白酶K于20~37℃孵育15~30min㊂PBS漂洗3次,再用3%的H2O2于室温孵育20min㊂PBS清洗3次㊂然后进行生物素标记,显色,苏木素复染,梯度乙醇脱水,二甲苯透明㊂最后中性树胶封片,显微镜下观察拍照,细胞核呈棕色颗粒的为凋亡细胞㊂1.2.5 蛋白印迹 首先各组小鼠的肝脏组织按每20mg加200μl的比例加入裂解液,用匀浆器冰上匀浆5min,4℃㊁4200r/min离心10min,收集上清㊂等量蛋白进行SDS⁃PAGE凝胶电泳分离并转至PVDF膜,经5%的BSA封闭1h,加入相应的一抗, 4℃过夜孵育㊂第二天加入辣根过氧化物酶标记的二抗,室温孵育1.5h㊂最后加入发光液于凝胶成像仪进行曝光和拍照,统计灰度值计算相对表达量㊂1.3 统计学处理 用SPSS16.0软件对实验数据进行统计学分析,各组间进行单因素方差分析后再进行duncan′s multiple ramge test 检验㊂P <0.01认为差异存在统计学意义㊂2 结果2.1 青藤碱对四氯化碳诱导的急性肝损伤小鼠肝功酶的影响 通过ELISA 检测血清中ALT 和AST 水平,分析青藤碱对四氯化碳诱导的急性肝损伤小鼠肝功酶的影响㊂如图1所示,CCl 4模型组ALT 和AST 水平高于对照组(P <0.01)㊂与CCl 4模型组相比,青藤碱处理组ALT 和AST 水平下降(P <0.01)㊂由此可见,青藤碱可降低CCl 4诱导的急性肝损伤小鼠血清中肝功酶ALT 和AST 水平㊂2.2 青藤碱对四氯化碳诱导的急性肝损伤小鼠肝脏组织病变的影响 通过HE 染色观察青藤碱对四氯化碳诱导的急性肝损伤小鼠肝脏组织病变的影响㊂如图2所示,对照组和青藤碱组肝脏组织细胞排列规则,无明显病变㊂CCl 4模型组出现肝脏组织细胞排列紊乱,肝细胞坏死,胞质空泡化,大量炎性细胞浸润等病变㊂青藤碱处理组的肝脏组织病变得到明显改善㊂上述结果表明,青藤碱可缓解四氯化碳诱导的急性肝损伤小鼠肝脏组织病变㊂图1 ELISA 检测血清中肝功酶水平Fig.1 Levels of serum hepatic enzymes were detectedby ELISANote:**.P <0.01vs control group;##.P <0.01vs CCl 4group.图2 HE 染色观察肝脏组织病变Fig.2 Pathological changes of liver tissues were observedby HE staining2.3 青藤碱对四氯化碳诱导的急性肝损伤小鼠肝脏组织细胞凋亡的影响 利用TUNEL 染色检测细胞凋亡,分析青藤碱对四氯化碳诱导的急性肝损伤小鼠肝脏组织细胞凋亡的影响㊂由图3可知,CCl 4模型组细胞凋亡高于对照组(P <0.01)㊂与CCl 4模型组相比,青藤碱处理组细胞凋亡下降(P <0.01)㊂上述结果说明,青藤碱可减轻四氯化碳诱导的急性肝损伤小鼠肝脏组织细胞凋亡㊂2.4 青藤碱对四氯化碳诱导的急性肝损伤小鼠细胞凋亡相关蛋白表达的影响 为进一步分析青藤碱对四氯化碳诱导的急性肝损伤小鼠细胞凋亡相关蛋白表达的影响,蛋白印迹检测Bcl⁃2和Bax 表达㊂图4显示,CCl 4模型组Bcl⁃2表达低于对照组,Bax 表达高于对照组(P <0.01)㊂与CCl 4模型组相比,图3 TUNEL 染色检测细胞凋亡Fig.3 Apoptosis was measured by TUNEL stainingNote:**.P <0.01vs control group;##.P <0.01vs CCl 4group.图4 蛋白印迹检测细胞凋亡相关蛋白表达Fig.4 Expression of apoptosis related proteins was testedby western blotNote:**.P <0.01vs control group;##.P <0.01vs CCl 4group.图5 ELISA 检测氧化应激指标Fig.5 Indexs of oxidative stress were detected by ELISANote:**.P <0.01vs control group;##.P <0.01vs CCl 4group.图6 ELISA 检测炎症因子水平Fig.6 Levels of inflammatory factors were measured by ELISANote:**.P <0.01vs control group;##.P <0.01vs CCl 4group.青藤碱处理组Bcl⁃2表达上升,Bax 表达下降(P <0.01)㊂以上结果表明,青藤碱可逆转四氯化碳诱导急性肝损伤小鼠细胞凋亡相关蛋白Bcl⁃2和Bax 表达的异常㊂2.5 青藤碱对四氯化碳诱导的急性肝损伤小鼠氧化应激的影响 为分析青藤碱对四氯化碳诱导的急性肝损伤小鼠氧化应激的影响,ELISA 检测SOD㊁MDA 和GSH 水平㊂由图5可知,CCl 4模型组SOD 和GSH 水平低于对照组,MDA 水平高于对照组(P <0.01)㊂与CCl 4模型组相比,青藤碱处理组SOD 和GSH 水平上升,MDA 水平下降(P <0.01)㊂上述结果说明,青藤碱可减弱四氯化碳诱导的急性肝损伤小鼠氧化应激㊂2.6 青藤碱对四氯化碳诱导的急性肝损伤小鼠炎症反应的影响 通过ELISA 检测IL⁃6㊁IL⁃1β和TNF⁃α水平,分析青藤碱对四氯化碳诱导的急性肝损伤小鼠炎症反应影响㊂图6显示,CCl 4模型组IL⁃6㊁IL⁃1β和TNF⁃α水平高于对照组(P <0.01)㊂与CCl 4模型组相比,青藤碱处理组IL⁃6㊁IL⁃1β和TNF⁃α水平下降(P <0.01)㊂以上结果表明,青藤碱可降低四氯化碳诱导的急性肝损伤小鼠IL⁃6㊁IL⁃1β和TNF⁃α水平,减轻炎症反应㊂3 讨论目前针对肝损伤的药物治疗十分有限,N⁃乙酰半胱氨酸可用于治疗对乙酰氨基酚引起的肝损伤,以促进恢复和减少肝移植的需要㊂寻找开发新的有效的且副作用小的药物治疗迫在眉睫㊂近年来,随着科学技术的进步,许多植物化学物质得以分离,而这些化学物质具有成为治疗药物的潜能[10]㊂大量文献报道青藤碱在改善各类疾病的组织病变方面发挥着积极作用㊂有研究发现青藤碱可改善脑内出血导致的脑积水及神经功能缺损等脑损伤[11]㊂有数据显示在大脑中动脉闭塞诱导的缺血再灌注损伤大鼠中,青藤碱可减轻大脑皮层的神经元退化变性等病变[12]㊂Zhao 等[13]发现青藤碱可缓解缺血再灌注诱导的肾损伤大鼠肾脏组织肾小管坏死,炎性细胞浸润,小管扩张及水肿等病变㊂本研究结果显示,青藤碱可缓解四氯化碳诱导的急性肝损伤小鼠肝脏组织细胞坏死㊁胞质空泡化㊁大量炎性细胞浸润等病变㊂细胞凋亡是十分重要的生理过程,大量数据表明青藤碱具有调节细胞凋亡的作用㊂据报道青藤碱可降低创伤性脑损伤大鼠脑组织细胞凋亡,减弱Caspase⁃3表达,增强Bcl⁃2表达[14]㊂有研究显示青藤碱可减弱大脑中动脉闭塞诱导的缺血再灌注损伤小鼠脑组织细胞凋亡[15]㊂Fu 等[16]发现在外伤性脑损伤小鼠中,青藤碱可减轻细胞凋亡,降低Caspase⁃3和Bax 表达,提高Bcl⁃2表达㊂本文结果显示,青藤碱可减弱四氯化碳诱导的急性肝损伤小鼠肝脏组织细胞凋亡,提高Bcl⁃2表达,降低Bax 表达㊂越来越多的研究表明青藤碱具有抗氧化应激的功效㊂Zhang 等[17]发现在慢性间歇性缺氧所致肺损伤大鼠中,青藤碱可降低MDA 水平,提高SOD 及CAT 水平㊂有数据显示在单侧输尿管梗阻诱导肾纤维化小鼠中,青藤碱可升高肾脏组织CAT,SOD 和GPx 水平[18]㊂据报道青藤碱可降低支气管哮喘小鼠MDA 水平及髓过氧化物酶活性,增强总抗氧化能力[19]㊂本研究结果显示,青藤碱可提高四氯化碳诱导的急性肝损伤小鼠SOD 和GSH 水平,降低MDA 水平,减弱氧化应激㊂炎症在肝损伤过程发挥着重要作用[20]㊂大量文献报道青藤碱具有抗炎的功能㊂有研究表明青藤碱可减弱单侧输尿管结扎诱导肾损伤小鼠IL⁃1β和TNF⁃α表达[21]㊂Qiu 等[22]发现缺血性中风小鼠中,青藤碱可降低IL⁃1β㊁IL⁃6㊁IL⁃18和TNF⁃α水平㊂据报道青藤碱可降低慢性哮喘小鼠IL⁃4㊁IL⁃5和IL⁃13水平[23]㊂本文结果显示,青藤碱可降低四氯化碳诱导的急性肝损伤小鼠IL⁃6㊁IL⁃1β和TNF⁃α水平,减轻炎症反应㊂本研究表明,在四氯化碳诱导的急性肝损伤小鼠中,青藤碱可降低肝功酶ALT和AST水平,缓解肝脏组织细胞坏死㊁胞质空泡化㊁大量炎性细胞浸润等病变,减轻细胞凋亡㊁增强Bcl⁃2表达㊁减弱Bax 表达,降低MDA水平㊁提高SOD和GSH水平,降低IL⁃6,IL⁃1β和TNF⁃α水平㊂综上所述,青藤碱可减轻四氯化碳诱导的急性肝损伤小鼠肝损伤,细胞凋亡,氧化应激及炎症反应㊂下一步计划研究青藤碱在其他因素导致的肝损伤中作用,为肝损伤的治疗提供理论依据㊂参考文献:[1] Duarte S,Baber J,Fujii T,et al.Matrix metalloproteinases in liverinjury,repair and fibrosis[J].Matrix Biol,2015,44⁃46:147⁃156.[2] Wang DH,Wang YN,Ge JY,et al.Role of activin a in carbon tet⁃rachloride⁃induced acute liver injury[J].World J Gastroenterol, 2013,19(24):3802⁃3809.[3] Lei YC,Li W,Luo P.Liuweiwuling tablets attenuateacetaminophen⁃induced acute liver injury and promote liver regeneration in mice[J].World J Gastroenterol,2015,21(26): 8089⁃8095.[4] 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