五种常用菌-抑菌活性的测定

黑龙江农业科学2008(1):25～26　Heilongjiang Agricultural Sciences生物技术　黑龙江农业科学25　银杏提取物抑菌效果的研究曲晓华,辛玉峰(曲阜师范大学生命科学学院,曲阜273165)摘要:测定了不同浓度的银杏叶提取物对五种常见菌的抑菌活性,研究了不同的p H 条件和热处理对抑菌活性的影响。

结果表明:随着银杏叶提取物浓度的增加,其抗菌活性也显著增强;细菌的最低抑菌浓度为4%,霉菌的最低抑菌浓度为6%;银杏叶提取物的活性物质具有热稳定性,高温短时间加热不影响其抗菌活性;在p H 为7的条件下,抗菌活性最强。

关键词:银杏叶提取物;抑菌活性;热稳定性中图分类号:S792.95.01 文献标识码:A 文章编号:100222767(2008)0120025202Study on Anti 2microbial Activity of the Extract of Ginkgo bilobaQU Xiao 2hua ,XIN Yu 2feng(Life Science College ,Quf u Normal U niversity ,Quf u 273165)Abstract :The anti 2microbial activities of the extract of G inkgo biloba (EGb )were assayed with the different con 2centration ,the effects of p H and heat treatment on anti 2microbial activity of EGb were also studied.The results showed :With the increase of the concentration of EGb ,the anti 2microbial activity increased significantly.The minimal inhibition concentrations (MIC )were 4%against bacteria and 6%against f ungi.The anti 2microbial activ 2ity of EGb was characterized by its heat stable ability and high temperature did not effect on its anti 2microbial ac 2tivity.When under the condition of p H equaled to 7,the anti 2microobial activity reached the highest level.K ey w ords :extract of gink go biloba (EGb );anti 2microbial activity ;heat stable ability收稿日期:2007206230基金项目:曲阜师范大学科研启动基金资助项目。

抗菌抗病毒常用实验研究方法细菌、病毒性疾病是目前国内外流行的主要传染病,尤其是近两年来,由冠状病毒引起的SARS及由流感病毒引起的禽流感给动物及人类带来的严重危害,是人所共知的"由于各种疫苗的不断出现,虽然一些细菌、病毒病已得到了有效的控制,但是其治疗尚无有效的解决方法因此研制高效、低毒的新型中药抗菌、抗病毒制剂已成为巫待解决的问题。

1、常用的抗菌方法1、1稀释法1、1、1试管稀释法培养基内抗生素的含量按几何级数稀释并接种适量的细菌，经孵育后，观察能引起抑菌作用最低抗生素浓度，称最低抑菌浓度(MIC)为该菌对药物的敏感度。

稀释法所获得的结果比较准确，常被用作校正其他方法的标准。

如以下黄贝贝等的青钱柳抗菌作用的实验研究和黄利权等的火绒草的抗菌活性研究的实验方法:1、应用试管稀释法,测定青钱柳提取物对试验菌的抑菌效果,检验不同浓度下青钱柳提取物对细菌、霉菌的抗菌作用。

结果:青钱柳提取物在体外对金黄色葡萄球菌、乙型溶血性链球菌等革兰氏阳性菌具有较强的抗菌作用;而对大肠埃希氏菌、铜绿假单孢菌等革兰氏阴性菌的抗菌作用不明显;对黄曲霉、烟曲霉等霉菌的抗菌作用不明显[1]。

2、采用试管稀释法,分别测定了火绒草水煎液、水提醇沉液、醇提物、醇提石油醚部分、醇提乙酸乙酯部分、醇提正丁醇部分、醇提水溶部分等7种提取物对大肠杆菌C83882、大肠杆菌C83903、大肠杆菌C83914、沙门氏菌C79-20、金黄色葡萄球菌Newbould S-305、金黄色葡萄球菌临床分离株等6株病原菌的最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC)。

试验结果表明,火绒草醇提物及其石油醚部分和乙酸乙酯部分对两种金黄色葡萄球菌具有较强的抑制作用,其MIC为0114 mg/ml生药浓度,MBC为0127 mg/ml生药浓度,而其它部分对金黄色葡萄球菌的抑制作用较弱。

火绒草醇提正丁醇部分和水溶部分对3株大肠杆菌和1株沙门氏菌具有较强的抑制作用,其MIC为2170 mg/ml生药浓度,MBC为2170 mg/ml 生药浓度,显示了较强的抗菌活性[2]。

一、实验目的1. 了解抑菌圈实验的基本原理和操作步骤。

2. 通过抑菌圈实验，探究不同抗生素对金黄色葡萄球菌的抑菌效果。

3. 掌握抑菌圈直径的测量方法，并分析抗生素的抑菌活性。

二、实验原理抑菌圈实验是微生物学中常用的一种实验方法，用于测定抗生素对细菌的抑菌效果。

实验原理是：将含有抗生素的纸片放置在已接种有细菌的琼脂平板上，抗生素会通过扩散作用渗透到琼脂中，抑制细菌的生长，形成透明圈，即抑菌圈。

抑菌圈的大小可以反映抗生素的抑菌活性。

三、实验材料与仪器1. 材料：金黄色葡萄球菌、青霉素、链霉素、头孢噻肟钠、肉汤培养基、琼脂、无菌生理盐水、无菌棉签、无菌镊子、无菌培养皿、无菌滤纸、酒精灯、放大镜等。

2. 仪器：恒温培养箱、天平、电子显微镜、显微镜等。

四、实验方法1. 制备菌悬液：将金黄色葡萄球菌接种于肉汤培养基中，37℃恒温培养24小时，用无菌生理盐水调整菌悬液浓度为1×10^8 CFU/mL。

2. 准备平板：将熔化的琼脂倒入培养皿中，待凝固后，用无菌棉签将菌悬液均匀涂布于平板表面。

3. 制备抑菌圈：将含有不同抗生素的纸片分别放置于平板表面，用无菌镊子轻轻按压使其与琼脂表面紧密接触。

4. 培养平板：将平板倒置放入恒温培养箱中，37℃培养24小时。

5. 测量抑菌圈直径：用放大镜观察平板，用尺子测量抑菌圈的直径，取平均值。

五、实验结果与分析1. 实验结果：实验结果显示，青霉素、链霉素、头孢噻肟钠对金黄色葡萄球菌具有较强的抑菌作用，抑菌圈直径分别为15mm、12mm、10mm；而其他抗生素对金黄色葡萄球菌的抑菌效果较差。

2. 结果分析：抑菌圈直径越大，说明抗生素的抑菌活性越强。

根据实验结果，青霉素、链霉素、头孢噻肟钠对金黄色葡萄球菌的抑菌活性较强，可作为治疗金黄色葡萄球菌感染的首选抗生素。

六、实验结论通过抑菌圈实验，我们成功探究了不同抗生素对金黄色葡萄球菌的抑菌效果。

实验结果表明，青霉素、链霉素、头孢噻肟钠对金黄色葡萄球菌具有较强的抑菌作用，可作为治疗金黄色葡萄球菌感染的首选抗生素。

（1）排除有机酸的影响将发酵液在4000r/min下离心20min，除菌体。

取上清液，调pH至5.0，排除有机酸干扰。

旋转蒸发浓缩10倍后，采用琼脂扩散法，测定对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的抑菌活性（2）排除过氧化氢的影响将过氧化氢酶溶解在50mmol/L pH 7.0的磷酸缓冲液中配成母液，加入到排除菌体和有机酸后的发酵液中，使过氧化氢酶的终浓度为5mg/mL，置于37℃的水浴中温浴2h后取出，以不用过氧化氢酶处理的发酵液为空白对照，采用琼脂扩散法，测定对金黄色葡萄球菌的抑菌活性。

（3）抑菌物质的蛋白质本质的确定把胰蛋白酶、胃蛋白酶和蛋白酶K分别溶解在3mmol/L pH 7.5的磷酸缓冲液中配成母液，分别加入到排除菌体、有机酸和过氧化氢作用后的发酵液中，使它们的终浓度为0.5 mg/mL，在37℃水浴中温浴2h后取出，以不用蛋白酶处理的发酵液为空白对照，采用琼脂扩散法，测定对金黄色葡萄球菌的抑菌活性[9]。

细菌素抗菌活性的检测细菌素抗菌活性的检测采用牛津杯法。

双碟的制备：取直径90 mm 的培养皿，注入灭菌的营养琼脂（1.5%）15 mL，水平放置使之凝固，作为底层，取指示菌培养基（浓度为0.8%，冷却至50 ℃）与指示菌菌液适量混匀，取6 mL 铺在底层培养基上，水平放置使之凝固，作为菌层。

用无菌镊子夹取已灭菌的牛津杯，打开皿盖，放在培养基上。

在牛津杯中加满相同量的抗菌液（300μL），每个样品3 个重复。

将加完样的培养皿小心放入37 ℃恒温箱内，培养18 h 后（其中以真菌做指示菌的培养时间为30 ℃、3 d）取出测量抑菌圈直径。

琼脂扩散法：先将指示菌固体培养基融化，冷却后倒平板。

待平板凝固后，均匀放入牛津杯。

再将指示菌半固体培养基融化，冷却至45～50℃，把指示菌液先稀释至10-2后，吸取50μL接入指示菌半固体培养基中，倒平板。

待平板凝固后将牛津杯拔出，在孔中加入50μL发酵液。

30℃培养24h，观察有无抑菌圈产生[56]。

矿产资源开发利用方案编写内容要求及审查大纲
矿产资源开发利用方案编写内容要求及《矿产资源开发利用方案》审查大纲一、概述
㈠矿区位置、隶属关系和企业性质。

如为改扩建矿山, 应说明矿山现状、
特点及存在的主要问题。

㈡编制依据
(1简述项目前期工作进展情况及与有关方面对项目的意向性协议情况。

(2 列出开发利用方案编制所依据的主要基础性资料的名称。

如经储量管理部门认定的矿区地质勘探报告、选矿试验报告、加工利用试验报告、工程地质初评资料、矿区水文资料和供水资料等。

对改、扩建矿山应有生产实际资料, 如矿山总平面现状图、矿床开拓系统图、采场现状图和主要采选设备清单等。

二、矿产品需求现状和预测
㈠该矿产在国内需求情况和市场供应情况
1、矿产品现状及加工利用趋向。

2、国内近、远期的需求量及主要销向预测。

㈡产品价格分析
1、国内矿产品价格现状。

2、矿产品价格稳定性及变化趋势。

三、矿产资源概况
㈠矿区总体概况
1、矿区总体规划情况。

2、矿区矿产资源概况。

3、该设计与矿区总体开发的关系。

㈡该设计项目的资源概况
1、矿床地质及构造特征。

2、矿床开采技术条件及水文地质条件。