生物制品分析概论

比活性：
比活性

效价单位数 蛋白的mg数
2. 酶法分析 以酶为分析试剂或工具。
（三）生物检定法
生物检定法是利用生物体包括整体动物、离体 组织、器官、细胞和微生物评价药物生物活性的一 种方法。它以药物的药理作用为基础，以生物统计 为工具，运用特定的实验设计在一定条件下比较供 试品和相应的标准品或对照品所产生的特定反应， 通过等反应剂量间比例的运算或限值剂量引起的生 物反应程度，从而测定供试品的效价、生物活性或 杂质引起的毒性。
（二）多肽和蛋白质
多肽类：五肽胃泌素、生长抑素、胸腺五肽、胸 腺法新、鲑降钙素、醋酸丙氨瑞林、醋酸奥曲肽、 醋酸去氨加压素、醋酸曲普瑞林等；
蛋白质类：胰岛素、硫酸鱼精蛋白、重组人胰岛
素、重组人生长激素等。
（三）酶类与辅酶类药物 辅酶Q10、胃蛋白酶、凝血酶等
（四）多糖类药物 肝素、硫酸软骨素钠、灵芝多糖、透明质
（二）安全性检查
1. 热原与细菌内毒素检查法
热原：家兔法 细菌内毒素：鲎试剂法
2. 异常毒性检查法
试验动物：小鼠
3. 过敏反应检查
检查药物中的异性蛋白。 试验动物：豚鼠
4. 降压物质检查法
检查药物中可能导致血压降低的杂质。 检查方法：猫血压法 猫 注 射药液观察血压下降程度
5. 无菌检查
采用遗传修饰，将所需制品的编码DNA 通过一种质粒或病毒载体，引入适宜的微 生物或细胞系，DNA经过表达和翻译后成 为蛋白质，再进行提取和纯化而回收所需 制品制得。如重组人表皮生长因子。
（五）微生态活菌制品
这类药物中含有大量抗体，注入体内不 需自身制造抗体就可以获得免疫力。只能作 为应急措施，排泄时间快，预防时间短。
（三）血液制品

3）用生理氯化钠溶液充分浸泡琼脂糖胶板，以除去未结合蛋白。
4）将浸泡好的琼脂糖凝胶板放入0.5%氨基黑溶液中染色，用脱 色液脱色至背景无色，沉淀线呈清晰蓝色为止。
应仅与抗人血清或血浆产生沉淀线，与抗马、抗猪、 抗牛、抗羊血清或血浆不产生沉淀线。
鉴别试验
沈阳药科大学
系将供试品通过电泳分离成区带的各抗原，然后与
鉴别试验
ChP人血白蛋白的鉴别
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1）将完全溶胀的1.5%琼脂糖溶液倒于水平板上（每平方厘米加 0.19ml琼脂糖），凝固后打孔，直径3mm，孔距3mm（方阵型）。
2）中央孔加入抗血清，周边孔加入供试品溶液，并留一孔加入
免疫双扩散法
相应阳性对照血清。每孔加样20μ l，然后置水平湿盒中，37℃ 水平扩散24小时。
根据用途分为三类
1）预防类：细菌类疫苗、病毒类疫苗、联合疫苗 2）治疗类：抗毒素及免疫血清、血液制品、细胞因子及DNA重组技术制品 和单克隆抗体
3）诊断类：体内诊断类、体外诊断类
根据所用材料、制法或用途分为以下几类：
一、分类
疫苗类药物
指用病毒或立克次体接种于动物、 鸡胚，或经组织培养后加以处理 制造而成。
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安全性
使用安全，副作用小。
使用后能产生相应效力。 02
有效性
制品的生产工艺、储存条件、 成品的药效、稳定性、外观、 包装、使用方法和价格可接受。
03
可接受性
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CONTENTS
第三节
3
鉴别试验
鉴别试验
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免疫双扩散法
01 02
免疫电泳法
免疫印迹法
03
04
免疫斑点法

⒌ 糖类的分离纯化方法
因各种糖类的性质和原料来源 不同没有统一的提取纯化工艺， 只介绍多糖和粘多糖的一般分离
纯化方法。
⑴提取方法：非降解法和降解法
非降解法:适用于从含一种粘多 糖的动物组织中提取粘多糖。溶剂 为水和盐溶液。
降解法:适用于从组织中提取结 合比较牢固的粘多糖。碱降解、酶 降解。
⑵分离方法 常用的分离方法： 沉淀法 离子交换层析法 ①乙醇沉淀法：4～5倍体积的乙醇 可以使任何结缔组织中的粘多糖 完全沉淀。
(1)氨基酸及其衍生物类药物 (2)多肽及蛋白质类药物
(3)酶与辅酶类药物
(4)核酸及其降解物和 衍生物类药物 (5)糖类药物 (6)脂类药物 (7)细胞生长因子类 (8)生物制品类
2.按原料来源分类
(1)人类组织来源的生物药物
(2)动物组织来源的生物药物 (3)植物组织来源的生物药物 (4)微生物来源的生物药物 (5)海洋生物来源的生物药物
②吸附法： 氨基酸对吸附剂吸附力的差异进 行分离 ③离子交换法： 氨基酸属于两性电解质，常用ห้องสมุดไป่ตู้ 酸型阳离子交换树脂。
第二节
人体来源的药物
一.人体来源药物的特点与研究意义
⒈特点： ⑴安全性好 ⑵效价高疗效可靠 ⑶稳定性好
⒉研究意义：
⑴资源有限性 受法律和伦理的制 约,仅血液、尿液、胎盘可用作原 料。 ⑵研究的重要意义 对医学和药学有 重大意义。
⑷亲和层析法
大部分生物活性物质都有其作用的 靶物质。如酶和底物、抗原和抗体、 激素与受体等，它们之间有特异的亲 和作用。利用该性质进行的特异层析 分离技术称为亲和层析。专一性强。
⒋核酸类药物的分离纯化方法
主要方法有：提取法和发酵法 ⑴提取法生产DNA和RNA主要技 是先提取核酸与蛋白质复合物, 再解离核酸与蛋白质,然后分离 RNA与DNA。 ⑵发酵法主要用于生产单核苷酸。

具有简便、快速、重现性好、样品用量少等优点。
Hale Waihona Puke HPGFC法测定重组人肿瘤坏死因子 （rh-TNF）衍生物的分子量
色谱条件 色谱柱：Beckman SEC 3000 (300×7.5
mm) 流动相2PO42SO4(1:1)
检测波长：280 nm 柱温：室温
流速：1.0 ml/min
Standards: 醛缩酶-2、血清白蛋白-3、碳酸肝酶-4、抑蛋白 酶肽-5
二、安全性检查
❖ （一）热原检查法和细菌内毒素检查 法
❖ （二）异常毒性检查
❖ （三）过敏试验
❖
检查异性蛋白
❖ （四）降压试验
❖
检查组胺、类组胺或其他导致血压
下降的物质
❖ （五）无菌试验
检查药品及敷料是否有活菌的一种方法
定第
四
节
：
含 效含
量 （ 效
价量 测测 定定
价
）
测
HPLC SDS-PAGE
❖ 依据生物制品的化学结构、理化性质和 生物学特点，利用化学法、物理法及生 物学方法进行某些特殊反应，或测定某 些专属的理化常数如紫外吸收系数、等 电点、电泳迁移率、色谱保留时间和肽 图等，判断与确证产品的真伪。（一组 实验）
一、理化鉴别法
➢ 1、化学鉴别法 利用药物与某试剂在一定条件下反应，
生成有颜色的产物或沉淀进行鉴别。如胰岛 素的沉淀反应。 ➢ 2、紫外分光光度法
➢ 2、电泳法
等电点聚焦电泳、SDS聚丙烯酰胺凝胶电 泳等。可用于蛋白质类生物制品的鉴别。
三、 生物鉴别法
（一）血清学法-体外抗原抗体试验 抗原抗体类生物制品的鉴别
抗原抗体在体外结合时，可因抗原 物理性状不同或参与反应的成分不同而 出现各种类型的反应，如凝集反应、沉 淀反应、中和反应和补体结合反应，即 经典血清学反应，在此基础上，又衍生 出免疫扩散、免疫电泳、荧光标记、酶 标记等高度敏感的检测技术。