风湿三联

风湿三项（CRP、RF、ASO）C反应蛋白（CRP）是一种能与肺炎双球菌C多糖体反应的急性期反应蛋白，能激活补体，促进吞噬和其他的免疫调控作用。

它广泛分布于人体，胸水、腹水、心包液、血液等处。

在炎症、组织损伤时常迅速升高。

CRP能激活补体、促进粒细胞和巨噬细胞的运动与吞噬，有调理素样作用，并具有其他的免疫调控作用；能促进测定正常人末稍血单核细胞对黑色素瘤细胞的破坏作用；能影响淋巴细胞对促细胞分裂物质的反应性，与部分T淋巴细胞结合，抑制其功能；能抑制混合淋巴细胞反应；抑制血小板第3因子活化和内源性ADP与5—羟色胺释放，对血小板凝集和血块收缩有抑制作用。

一、测定方法：C反应蛋白（CRP）目前主要用免疫化学法，如单向免疫扩散、火箭免疫电泳和胶乳凝集法、ELISA法等。

其原理都是利用特异抗CRP抗体与检样中CRP反应，根据形成的沉淀环直径、沉淀峰高度、凝集程度或呈色程度，判定检样中CRP含量。

二、胶乳凝集法：①原理：用纯化的抗人CRP抗体致敏的胶乳试剂，能和患者血清中的CRP起专一性反应，数分钟内呈现清晰的凝集颗粒。

其检出CRP的敏感度为1.0—1.5ug/ml，患者血清6倍稀释后测定，阳性结果表示患者血清CRP含量＞10ug/ml。

②操作方法：1、血清样品1份用蒸馏水2份稀释，56℃30分钟灭活。

2、在反应板格子内滴加稀释血清1滴（约50ul），再滴加缓冲液1滴，摇匀。

3、滴加CRP胶乳试剂1滴，轻轻摇动5分钟，有清晰凝集者为阳性，表示血清样品CRP浓度大于10ug/ml。

不出现清晰凝集者为阴性。

③干扰因素：1、类风湿因子（RF）干扰本试验，产生假阳性结果，故类风湿关节炎患者欲用本试验判断其疾病是否活动，应先对其血清样品进行预处理，以破坏RF。

2、血清样品不宜用生理盐水稀释。

3、胶乳试剂不可冰冻，应保存于2—8℃。

4、在使用前要充分摇匀。

5、室温如低于20℃，加胶乳试剂后应延长摇动时间2分钟。

三、ELISA法：1、参考值：血清中CRP含量与年龄相关。

新生儿0.1—0.6mg/L；幼儿0.15—1.6mg/L；学龄儿童0.17—2.2mg/L；成人0.42—5.2mg/L；孕妇血清CRP含量甚高，可达4.4—4.68mg/L。

四、临床意义：⑴CRP是一种急性期蛋白，在各种急性和慢性感染、组织损伤、恶性肿瘤、心肌梗塞、手术创伤、放射线损伤等时，CRP在病后数小时迅速升高，病变好转时又迅速降至正常。

此反应不受放疗、化疗、皮质激素治疗影响。

⑵各种化脓性炎症、组织坏死（心肌梗塞、严重创伤、烧伤等）、恶性肿瘤、风湿性疾病等，血清CRP含量增高。

⑶风湿热急性期及活动时，CRP含量可高达200mg/L。

病情好转逐渐下降到正常。

抗链球菌溶血素“O”（ASO）A族溶血性链球菌（A链）在生长过程中可产生多种毒素和酶，如链球菌溶血素O（SLO）、脱氧核糖核酸酶、链激酶、透明质酸酶等。

A簇溶血性链球菌的重要代谢产物之一为链球菌溶血素“O”，具有一定抗原性，能刺激机体产生相应抗体。

链球菌溶血素“O”是具有溶血性的蛋白质，能溶解人类和一些动物的红细胞。

按此原理可在被检病人血清倍比稀释后，加入一定量的链球菌溶血素“O”，如病人血清中含有抗体（抗链球菌溶血素“O”），则链球菌溶血素“O”失去溶血能力，不溶血的管数越多表示抗链球菌溶血素“O”的效价越高。

检测血清中的相应抗体，有利于A族溶血性链球菌感染的诊断。

其中以抗链球菌溶血素O（ASO）抗体应用最广泛。

一、原理：被测血清中如有抗链球菌溶血素O（ASO），在与抗链球菌溶血素O（ASO）胶乳试剂反应时，可引起后者凝集。

预先用2.5结合单位/ml SLO中和时，不出现凝集者说明血清中的ASO ＜250U，仍出现凝集者，说明ASO＞250U。

二、试剂：1、ASO胶乳试剂：将羧化聚苯乙烯胶乳与纯化的链球菌溶血素O（SLO）用碳化二亚胺交联，离心洗涤后，用PH7.6磷酸盐缓冲液配成1%悬液，加1.0g/L NaN3防腐。

2、2.5结合单位/ml链球菌溶血素O（SLO）：用生理盐水将液体链球菌溶血素O（SLO）稀释到2.5结合单位/ml（标定方法按常用Todd溶血法，滴度为250U的被测血清，1：50稀释后，与等体积2.5结合单位/ml SLO混合，其抗链球菌溶血素O（ASO）恰被中和）。

三、操作：1、被测血清用生理盐水作1：50稀释，56℃30分钟灭活。

2、于方格涂黑玻璃板上，滴加灭活的稀释待测血清1滴，再滴加2.5结合单位/ml链球菌溶血素O（SLO）1滴，摇动玻片2—3分钟，使血清与链球菌溶血素O（SLO）充分混匀。

3、滴加抗链球菌溶血素O（ASO）胶乳试剂1滴，轻轻摇动玻片8分钟，观察结果。

四、结果判断：无凝集者为阴性，有明显凝集者为阳性。

阳性血清应复试。

将中和用的溶血素O改为5.0结合单位/ml，再按上法检测，如结果仍为阳性，则报告为强阳性。

五、注意事项：1、血清溶血、黄疸、高胆固醇和血清污染长菌者皆可使ASO升高；2、加入溶血素应以旋转式轻轻摇匀，以防还原溶血素重新氧化；3、每次试验应以已知血清滴定抗原效价，正式试验亦需有已知血清作对照。

六、临床意义：1、溶血性链球菌感染1周后，ASO即开始上升，4—6周内达高峰。

风湿热病人于感染后4—6周时，80%可见ASO增高，如有血沉增快及白细胞增多，应结合临床表现，考虑风湿活动。

2、高胆固醇血症、巨球蛋白血症及多发性骨髓瘤病人，ASO也可增高，可能被检血清中有某种抑制溶血的物质存在。

类风湿因子（RF）类风湿因子（RF）是在类风湿性关节炎（RA）病人血清中发现，是一种以变性IgG为靶抗原的自身抗体，主要存在于类风湿性关节炎患者的血清和关节液中，它是一种抗变性Ig G的抗体，属IgM型。

可与IgGFc段结合。

RA病人和约50%的健康人体内都存在有产生RF的B细胞克隆，在变性IgG（或与抗原结合的IgG）或EB病毒直接作用下，可大量合成RF。

健康人产生RF的细胞克隆较少，且单核细胞分泌的可溶性因子可抑制RF的产生，故一般不易测出。

RF主要为IgM类自身抗体，但也有IgG类、IgA类、IgD类和IgE类。

各类RF临床意义有所不同。

测定IgG、IgA、IgM类RF通常用ELISA间接法，即用热凝集兔IgG包被反应板微孔，加入检样后，再分别加抗人IgG、IgA、IgM酶标记抗体，使反应后再与底物呈色。

为防止各Ig类别RF相互干扰，酶标记抗体使用标记的抗体F（ab＇）2片段。

一、原理：将变性IgG包被于聚苯乙烯胶乳颗粒上，这种致敏胶乳在与待测血清中的RF相遇时，即发生肉眼可见的凝集，此称胶乳凝集试验。

在用热凝集变性IgG包被聚苯乙烯反应板的微孔中，加入待测血清，如有RF存在，则相互结合，随后再加入酶标记热凝集变性的IgG与之反应，在加入底物后即可显色。

根据显色程度可判断有无RF存在及其水平，此为双抗原夹心ELISA法。

二、胶乳凝集试验：RF是一种主要发生于类风湿性关节炎患者体内的抗人变性IgG抗体，可与IgG的Fc段结合。

将变性IgG包被于聚苯乙烯胶乳颗粒上，此致敏胶乳在与待测血清中的RF相遇时，即可发生肉眼可见的凝集。

三、操作：1、56℃30分钟灭活，（灭活C1q以阻止假阳性凝集）。

将待测血清用0.1mol/L PH8.2甘氨酸缓冲盐水作1：20稀释（生理盐水1ml中加血清0.05ml）。

2、取此稀释血清1滴（约0.05ml），加于黑色方格玻片的方格内，加乳胶RF试剂1滴，立即摇动反应板3分钟，使其充分混匀后，于直射光下观察。

每次试验均设阳性与阴性对照。

四、参考值：正常人1：20稀释血清为阴性。

五、结果判断：胶乳凝集试验正常人多为阴性反应，如3分钟内出现显凝集者为阳性。

阳性反应的标本应将血清进行倍比稀释测定滴度。

ELISA法可根据显色程度，与阳性和阴性对照参比，作出阳性或阴性的判断。

六、临床意义：RF主要为IgM类自身抗体，但也有IgG类、IgA类和IgE类。

各类RF临床意义有所不同。

RF是一种以变性IgG为靶抗原的自身抗体。

未经治疗的类风湿性关节炎患者其阳性率为80%，且滴定度常在1：160以上。

临床上动态观察滴定度多少，可作为病变活动及药物治疗后疗效的评价。

其他风湿性疾病如SLE阳性率为20%—25%；硬皮病与皮肌炎阳性率为10%—24%，滴定度较低。

类风湿性关节炎（RA）患者和约50%的健康人体内都存在有产生RF的B细胞克隆，在变性IgG（与抗原结合的IgG）或EB病毒直接作用下，可大量合成RF。

健康人产生RF的细胞克隆较少，且单核细胞分泌的可溶性因子可抑制RF的产生，故一般不易测出。

RF有IgG、IgA、IgM、IgD和IgE五类，用凝集试验法测出的主要是IgM类。

多数作者认为，IgM类RF的含量与RA的活动性无密切关系；IgG类RF的含量与RA患者的滑膜炎、血管炎和关节外症状密切相关。

IgA类RF见于RA、硬皮病、Felty综合征和SLE，是RA临床活动的一个指标。

IgD类RF研究甚少。

IgE类RF除RA患者外，也见于Felty综合征和青年型RA。

在RA患者，高效价的RF存在并伴有严重的关节功能受限时，常提示预后不良。

在非类风湿患者中，RF的阳性率随年龄的增加而增加，但这些人以后发生RA者极少。