体细胞胚胎发生和人工种子 PPT课件

（一）体细胞胚状体的概念及其特点
1、定义：
离体培养下没有经过受精过程，但经过了胚胎发育过 程所形成的体细胞胚或胚状体。
2、体细胞胚的结构与发育特点：
（1）与器官发生形成个体的途径相比： （2）与合子胚相比
2、体细胞胚的结构与发育特点
第五章 愈伤组织的培养
第一节 愈伤组织的诱导和分化 第二节 愈伤组织中的形态发生 第三节 人工种子
教学目的：
掌握愈伤组织诱导与形态发生的基本知识， 熟悉人工种子的制作技术，了解愈伤组织的 增殖方式及其状态的调控技术。
教学重点：
1、愈伤组织的诱导； 2、愈伤组织器官的形成； 3、体细胞胚胎发生； 4、人工种子。
①体细胞胚人工种子； ②非体细胞胚人工种子。
三、人工种子的优点：
①在无性繁殖植物中，有可能建立一种高效快 速的繁殖方法，它既能保持原有品种的种性， 又可以使之具有实生苗的复壮效应；
②可以对优异杂种种子不通过有性制种而快速 获得大量种子，特别是对于那些制种困难的植 物更具有重要的实用意义；
③对于一些不能正常产生种子的特殊植物材料 如三倍体、非整倍体、基因工程植物等，有可 能通过人工种子在短期内加大繁殖应用；
2、人工种子概念的发展：
（1）早期的人工种子：仅仅局限于由人工种皮包被 的体细胞。
体细胞人工种子的局限性：使其应用受限
• ①体细胞诱导在植物种类上的局限性； • ②体细胞胚在群体上的变异； • ③木本植物经过胚途径繁殖其幼年期较长等问题。
（2）人工种子概念的延伸（日本）：
认为使用适当方法包埋组织培养所获得的具有发育成 完整植株的分生组织（芽、愈伤组织、胚状体和生长 点等）、可取代天然种子播种的颗粒均为人工种子。
②成簇成团的体积小而细胞质致密的细胞，这类细胞具有成 胚能力，因而，把这类细胞团又称为胚性细胞团。

人工种子的研究进展
人工种子的概念
植物人工种子 的概念最早1978 年由Mrashige提 出，是指将植物 离体培养中产生 的体细胞胚、不 定芽、顶芽、腋 芽等繁殖体包裹 在能提供养分的 胶囊和具有保护 功能的外膜内， 形成类似于天然 植物种子的结构， 在适宜条件下能 萌发生长成完整 植株。
人工种子的结构
人工种子要真正进入商业市场 并与自然种子竞争，必须降低生产 成本。由于人工种子是由组织培养 产生的，需要一定时间才能很好地 适应外界环境，因此人工种子在播 种到长成自养植株之前的管理也非 常重要，在推广之前必须经过农业 试验，并对栽培技术及农艺性状进 行研究。
人工种子的应用前景
• 人工种子作为一种可替代天然种子的人造 体，可直接播种于田间。在作物遗传育种、 良种繁育和栽培等方面起到巨大的推进作 用，由此产生的“ 种子革命” 将造福于整 个人类。 • 人工种子的研究范围从过去的模式植物转 向石斛、半夏等具有重要经济价值的粮食 作物 、观赏植物和药用植物，大大增加了 它的应用价值与商业价值，将推动经济的 发展。
• 完整的人工种子包括:繁殖体（胚状体）﹑人工胚 乳﹑人工种皮
人工种子的制作过程
• 人工种子的制作过程：大致包括体细胞胚的同步 化控制﹑胚状体的包埋﹑人工种子的储藏及萌发 检测
人工种子的研究进展
20多 年来、已 有几十个 国家的科 研人员从 事着这方 面的研究。
人工种子的研究进展
欧洲把它列入“ 尤里卡” 计 划，美国 P u r d u e 大学的 K i t t o和J a n I d e 在 1985 年以胡萝 胚状体为包裹材料首次制造出小圆 片状的人工种子 ，几乎是同期Re d e n b a u g h 与1986年首次使 用海藻酸钠为介质包裹单的胚状体 制成圆球形的人工种子 。

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（二）、局限性
1、一些具有重要性状的植物目前发生体细胞胚的能力较弱， 再生系统尚不健全，难以形成有活力的胚并同步化发育。
2、制作的人工种子成本远高于自然种子，无竞争力。
3、人工种子的贮藏、运输以及机械化播种等问题尚未解决 。
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第29页，此课件共3凝胶中直接加入大量元素、碳水化合物及防病用抗生 素。
• 微型包裹法 将碳水化合物和大量元素包裹在微型胶囊内，然 后再把微型胶囊和种胚一起包裹在海藻酸钠中。
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2、植物组织培养的应用：
现在已有胡萝卜、芹菜、柑橘、咖啡、棉花、玉米、水 稻、橡胶等几十种植物的人工种子试种成功，但由于成本 较高，中国尚未应用于生产。
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二、愈伤组织器官的发生
• 不定芽方式
• 胚状体形成的方式
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• 不定芽方式（adventitious bud type）是指
愈伤组织培养物，通过形成不定芽再生成 植株。这是愈伤组织中常见的器官发生方 式。
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• 愈伤组织通过不定芽方式再分化形成再生植株的方式主 要有四种：
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人工种皮需要满足的条件：
• 1、具有一定的透气性，不能影响胚状体的呼吸；
• 2、具有一定的硬度，经得起种子储存和运输中的挤 压和机械播种中的磨损；
• 3、易于降解；
• 4、含有其他有利于胚状体存活、生长的成分。
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B. 体细胞胚包裹的材料：
• 凝胶 • 可以使人工种皮具有柔软性，不仅适于胚

第一节 人工种子的概念
• 一. 基本概念
• 广义 而言，人工种子是在胚状体或一块组 织（顶芽、腋芽）、一个器官（小鳞茎等） 之外加上必要的营养成分（人工胚乳）后， 用具有一定通透性而无毒的材料将其包裹 起来，形成的与天然种子相似的颗粒体
• 狭义 的概念是指植物离体培养中产生的胚 状体（包括体细胞胚和性细胞胚），包裹 在含有养分和具有保护功能的物质中，并 在适宜条件下能够发芽出苗的颗粒体。
• 1986年Redenbaugh等成功地利用藻酸钠包埋 单个体细胞胚，生产人工种子。 • 胡萝卜、棉花、玉米、甘蓝、莴苣、苜蓿等人工 种子制作获得成功。
• 目前已有许多国家的植物基因公司和大学实验室 从事这方面研究。欧共体将人工种子的研制列人 “尤里卡”计划，我国也于1987年将其列入国家 高新技术研究与发展计划(863计划)。经过20多 年的努力，人工种子研究已取得了很大进展。
茶树
体细 胞胚
不定 芽 体细 胞胚 不定 芽, 4%
0.5-1.0
1.0
0.5
GA(0.3), IAA(0.3-0.5) IAA(0.3) 1.0
Step II, 30
MS, 2-3%
1.0
0.5
25 Step I, 25
MS, 2-3% MS, 3% 1.0
1.0 0.2
表7.3 部分植物繁殖体诱导培养条件
植物 种类
繁殖 体类 型 体细 胞胚 微芽 体细 胞胚 桉树 微芽 培养程序 及培养天 数
Step I, 21
培养基 及蔗糖 浓度
MS, 3%
激素浓度（mg./L）
2,4-D 2.0 NAA 1.0 Zeatin 1.0 BA Kin
其它成分 (mg/L)

2 间接途径
间接体细胞胚胎发生中，外植体已分化的细胞先脱分化， 并对其发育命运重决定而诱导出胚性细胞――诱导胚胎决定 细胞（IEDCs），进而形成体细胞胚。
-
1 茎尖培 养诱导形 成胚性愈 伤组织
MS培养 基附加 2.0mg/L 2,4-D
2 胚性 愈伤组 织悬浮 培养增 殖
MS培养 基附加 2.0mg/ L 2,4-D
多 核明显，大，核仁
多
白色 粗糙 松散，水渍状 极少或无 管状或不规则形 稀薄，染色浅 少 核小，核仁少，或 无核
植物体细胞胚胎发生和诱导器官发生相 比具有明显的特点：
1、具有两极性 2、存在生理隔离 3、重演受精卵形态发生的特性
二 、体细胞胚胎发生的方式
**植物组织培养过程中植物体细胞胚胎途径可归纳 为两类：直接途径和间接途径。 **直接途径是直接从原外植体不经愈伤组织阶段发 育而成 **间接方式是体胚从愈伤组织或悬浮细胞、有时也 从已形成的体胚的一组细胞中发育而成，如香雪兰 （Freesia refracta）花序外植体经直接体细胞胚胎发生 途径形成再生植株。
林木植物胞胚胎及人工种子
森环森保所 韩素英 2012.10
-
体细胞胚及人工种子
第一节 体细胞胚的概念及其发生途径
体细胞胚胎发生的意义 体细胞胚胎发生的概念 体细胞胚胎发生的方式 体细胞胚胎的起源 体细胞向胚性转变的制机 体细胞胚胎发育成植株的能力 影响体细胞胚胎发生的因素 举例：落叶松体细胞胚胎发生
3 由细
4 体细
胞集合
胞胚萌
体形成
发并形
体细胞
成小植
胚
株
MS培养 基附加
2.0mg/ L 2,4-D
MS培 养基附 加

Lipid transfer PR-protein Heat-shock
心形胚
心形胚 原胚、球形胚、心形胚 球形胚、心形胚 原胚 原胚 原胚 原胚 球形胚、心形胚、鱼雷胚 球形胚、心形胚 胚性细胞、原胚 球形胚 原胚、球形胚、心形胚、鱼 雷胚 胚性细胞、球形胚、心形胚 胚性细胞、球形胚、心形胚 、鱼雷胚、小植株 球形胚、心形胚
第七章 植物体细胞胚胎发生
本章主要内容
体细胞胚胎的概念、特点和意义 影响体细胞胚发生的因素 体细胞胚胎发生的生物学 人工种子
一、体细胞胚胎的概念、特点和意义
概念
离体培养下没有经过受精过程，但经过胚 胎发生和胚胎发育过程所形成的类胚结构，称 为胚状体（embryoid）或体细胞胚（somatic embryo）。
饥饿；有丝分裂阻止
2、人工种子包埋
包埋材料： 海藻酸钠、明胶、果胶酸钠、琼脂、树胶
包埋方法： 液胶包埋法；干燥包埋法；水凝胶法
人工胚乳研制
木薯淀粉与海藻酸钠混合胚乳是目前比较理想 的材料，还可以在胚乳中加入激素（GA3等）、 缓释物（活性炭等）、固化剂（CaCl2等）、抗生 素、其他混合物等制作全能性人工胚乳。
人工种皮研制
壳聚糖、El-vax-4260（10％环己烷）等
三、人工种子转换实验
转换指人工种子在一定条件下，萌发、生长、 形成完整植株的过程。可以分为无菌条件下的转 换和土壤条件下的转换。
2、培养基的影响
碳源
碳水化合物的种类和浓度可以影响体细胞胚的生长 发育，蔗糖是体胚发生最有效的还原碳源。但在一些 试验中，某些糖的培养效果优于蔗糖。还可添加半乳 糖、可溶性淀粉等促进体胚的生长发育。
糖类还可作渗透调节剂对体胚发育或成熟起作用。

器官发生
• 概念：离体培养的组织、细胞在诱导 条件下经分裂和增殖再分化形成不定 根和不定芽等器官的过程。
• 发生方式：
– 直接发生：（具有初生分生能力的）外 植体直接分化成器官的过程。如落地生 根.
2023/12/31
– 间接发生：外植体（已分化的成熟组织 ）经脱分化形成愈伤组织再分化形成器 官的过程。
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组织的分化与器官建成
• 维管组织的分化
• 早期研究发现（Wetmore，1955），丁香的芽可 以诱导邻近的组织分化出维管束，后证明这是芽中 IAA的作用。将一块含有14C-IAA和蔗糖的琼胶楔 形物插入到愈伤组织切口中，14C-IAA表明蔗糖和 IAA通过琼胶扩散到愈伤组织，从而在愈伤组织中 造成这两种物质的梯度，在楔形物一颇有同感形成 维管束的瘤状物，瘤状物含有一形成层带，一面形 成韧皮部，一面形成木质部，与正常的维管束有类 似的排列。增加IAA的浓度，导致木质部形成，增 加蔗糖浓度则导致韧皮部形成。生长素水平恒定时 ，2%蔗糖则全部分化出木质部，4%蔗糖几乎全部 分化出韧皮部，3%蔗糖则可以分化出二者。所以， 生长素和蔗糖浓度决定愈伤组织中维管束的类型与
第七章 器官发生与体细胞胚胎发生
植物细胞全能性实现的过程: 外植体脱分化
愈伤组织
再分化
不定芽
胚状体
丛芽
生根
发育成完整的植株
发育成完整的植株
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• 脱分化:成熟细胞转变成分生状态并 形成愈伤组织的过程.
• 再分化:由分生状态的愈伤组织或外 植体分化出各种器官的过程.
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影响体细胞胚胎发生的因素

45、法律的制定是为了保证每一个人 自由发 挥自己 的才能 ，而不 是为了 束缚他 的才能 。—— 罗伯 事 常成 于困约 ，而败 于奢靡 。——陆 游 52、 生 命 不 等 于是呼 吸，生 命是活 动。——卢 梭
体细胞胚胎发生与人工种子 共39页
41、实际上，我们想要的不是针对犯 罪的法 律，而 是针对 疯狂的 法律。 ——马 克·吐温 42、法律的力量应当跟随着公民，就 像影子 跟随着 身体一 样。— —贝卡 利亚 43、法律和制度必须跟上人类思想进 步。— —杰弗 逊 44、人类受制于法律，法律受制于情 理。— —托·富 勒
53、 伟 大 的 事 业，需 要决心 ，能力 ，组织 和责任 感。 ——易 卜 生 54、 唯 书 籍 不 朽。——乔 特
55、 为 中 华 之 崛起而 读书。 ——周 恩来

淡黄 光滑 坚硬但易碎 大量 小，圆球形 浓厚，染色深
多
核明显，大，核仁 多
白色 粗糙 松散，水渍状 极少或无 管状或不规则形 稀薄，染色浅 少
核小，核仁少，或 无核
胚性细胞团特征：成簇、成团，体积小，细胞质致密
三、体细胞胚的来源
**体细胞胚胎发生途径有直接途径和间接途径，但无论哪一 种发生途径，绝大多数研讨报道以为体细胞胚胎来源于单细 胞,从多种植物中都察看到单个胚性细胞，有不均等分裂的二 细胞原胚和均等分裂的二细胞原胚、多细胞原胚、球形胚直 到成熟胚。也有研讨以为来源于多细胞。
〔引自Miguel等，2019〕
2、植物激素与体细胞胚发生
**离体植物细胞在开场往往缺乏合成生长素和细 胞分裂素的才干，但是在大多数情况下，这些细 胞的分裂和分化以及形状建成过程中又必需生长 素和细胞分裂素两种激素的共同作用。
**在培育介质中添加不同种类或不同浓度的外源 激素诱导形状发生已遭到广泛的注重。
五、体细胞胚发育成植株的才干
1 体细胞胚发育成植株的才干
**普通来说胚胎一旦被分化出来或甚至完成诱导之后转移 到根本培育基上即可发育成熟，并可构成小植株。
**如陈东方等〔1986〕对棒头草幼穗培育的研讨阐明，体 细胞胚构成之后，可以在原来培育基上或MS无任何附加成 分的培育基上以及1/2MS加IAA或NAA 0.5mg/L和6-BA 0.5mg/L培育基上萌生构成小植株。
1 直接途径 直接发生体胚的来源细胞可以是外植体表皮、亚表皮、幼
胚、悬浮培育的细胞和原生质体。 普通以为直接方式发生体胚是由原先就存在于外植体中的胚 性细胞――预胚胎决议细胞〔PEDCs〕培育后直接进入胚胎发 生而构成体胚，如柑桔属的珠心组织〔在体内或离体情况〕 经过预胚胎决议细胞直接进展体胚发生的最好例子.

4）由花药花粉培养产生的单倍体胚状体，如曼陀罗、烟草、青椒等；
5）源于原生质体的胚状体，如玉米、黄瓜。
体细胞胚胎发生的同步控制
在培养中体细胞胚胎的发生一般是不同步的。控制胚状体的同步发育是人工种子的重要条件。
现在常用以下几种方法对体细胞胚的发生进行同步控制。
1）同步脱分化促进细胞的同步分裂 细胞培养初期加入DNA合成抑制剂（如五氨基脲嘧啶），使细胞DNA合成暂时停止。一旦除去DNA抑制剂，细胞开始进入同步分裂。
凝胶囊中直接加入大量元素、碳水化合物及防病用抗生素。
2）微型包裹法
首先将碳水化合物和大量元素包裹在微型胶囊内，然后再把微型胶囊和种胚一起包裹在褐藻酸钙（人工种子）中。目的是使人工胚乳的营养成分在人工种子内缓慢地释放，提高种子的存活时间。
2、人工种子的研究现状
人工种子具备了组培试管苗的全部优点，具有巨大的应用潜力：
1、愈伤组织的诱导
愈伤组织的形成大致要经过起动期、分裂期和形成期三个阶段。
1）起动期 当外植体已分化的活细胞在外源植物生长物质的作用下，通过脱分化起动而进入分裂时期，进而形成愈伤组织。此期的细胞大小无明显变化，胞内RNA含量迅速明显增加，细胞核变大。
2）分裂期 是指细胞通过一分为二的方式不断增生子细胞的过程。外植体的细胞一旦经过诱导，其外层细胞开始细胞分裂，使细胞脱分化。此期细胞分裂快、结构疏松、缺少组织结构。
图15.3 人工种子的结构
1 、人工种子的制备
A、体细胞胚的制备
体细胞胚的发生方式
体细胞胚胎（胚状体）可由表皮细胞、愈伤组织、悬浮细胞、花粉、原生质体等发生：
1） 来源于外植体的表皮细胞，如石龙芮、刺五加、芹菜等；
2） 来源于愈伤组织细胞，如玉米、西洋参桃等；

人工种皮
分内种皮和外种皮 对人工种皮的要求：具有保护胚的功能，并
且无毒性、通气好、抗污染、抗压性好、不 粘连、适于贮藏和运输。 内种皮：聚氧乙烯、海藻酸钠、明胶、琼脂 等。
外种皮常用材料：
Elvax 4260(乙烯、乙烯基乙酸和丙烯酸 共聚物，1987，美国)涂膜，价高，操作 复杂，效果不佳。
1.经济作物和粮食作物的人工种子日益增多
2.以微器官作为繁殖体的报道日益增多，其 中包括微芽、微枝、原球茎、小鳞茎、小 块茎。
以器官为繁殖体的人工种子
物种
繁殖体
主要结果
印度桑(Morus indica)
芽
无菌条件下发芽成苗
檀香(Santalum ablum)
芽
无菌条件下发芽成苗
花叶芋(Caladium bicolor) 芽
※ 具有较好的成熟性，能耐一定程度的脱水。
其次，作为实用化的体 细胞胚种子还必须满足 一定的数量需求，规模 化生产是其基本前提。
Choi等（2002）建立 了人参体细胞胚大规模 液体培养体系，每 500ml容器可生产体细 胞胚12,000个。在体细 胞发育至子叶期早期， 将期转入1/2MS无机盐 加9％蔗糖的培养基中诱 导，获得了良好效果。
石槲兰(Dendrobium)
原球茎 无菌条件下发芽
唐菖蒲(Gladiolus hortalans) 球茎 无菌条件下发芽
香蕉(musa acuminata)
微芽 无菌条件下发芽
杨树(Popupus beijingy) 芽
无菌条件下发芽
以体细胞胚为繁殖体的人工种子
物种
主要结果
胡萝卜(Daucus carota)
➢ 根据植物类型不同，可选择不同的外植体作为 芽发生的来源:

一、大蒜脱毒苗的培育
• （一）脱毒的方法:茎尖培养、茎盘培
养、花序轴培养、茎盘圆顶培养、体细 胞胚再生培养。
1. 茎尖培养脱毒
• 2.花序轴培养脱毒
茎尖分生组织
（1）培养方法
• 大蒜鳞茎先在4℃下贮藏30d左右，以打破休眠。 • 蒜瓣表面消毒后→剥取0.2～0.9mm长的带一个或不
带叶原基的茎尖→接种在附加6-BA 2.0mg／L+NAA 0.6mg／L的 (MS、B5、LS)培养基上→40d后开始分 化→形成侧芽→ 100d后形成丛生芽。
1.茎尖培养脱毒
• 剪取5cm左右的顶梢 → 剪去叶片 → 自来水冲 洗 → 70％酒精浸3～5s → 0.1％升汞消毒2～ 10min → 无菌水冲洗3～5次 → 剥离茎尖外面的 幼叶和鳞片 →切取茎尖分生组织 →接种于诱 导培养基MS+BA0.5+GA3 0.1+IBA0.2 →分化培养 基MS+BA0.5～1.0→ 20d分化丛生芽→生根培养基 1/2MS+IBA0.2～1.0→生根→炼苗→移栽
培养条件
• 培养基含蔗糖30g／L、琼脂8g／L、pH 5.8～6.0。
• 培养温度为25±1℃ • 光照强度1200～2 000Lx，12h/d。
（2）影响茎尖脱毒的主要因素
①培养基
②茎尖大小
③ 热处理或茎 尖培养结合热 处理
2. 花序轴培养脱毒
• 蒜薹总苞段→ 70％酒精表面消毒1min →0.1％氯化 汞中灭菌12min →无菌水冲洗4～5次后→剥去外层 苞叶→横切花序轴顶部→去除花茎部分→将花序轴 接种于固体培养基上。
每10 ~ 18 d将上述悬浮培养物移入 1/2MS固体培养基上使体细胞胚成苗。

（ 4 ）由于从任何材料都能得到胚状体，为基因工程技术应用于 生产提供桥梁； （ 5 ）在人工种子的制作过程中可加入生长调节物质、微生物或 农药，人为控制植物的生长发育和抗逆性；
（6）人工种子在一定程度上可取代天然种子而节约粮食。
人工种子的制备方法和技术

1、目标物和外植体的选取

2、胚状体和胚类似物的诱导
一次分裂多为不均等分裂，顶细胞继续分裂形成多细
胞原胚，基细胞进行少数几次分裂形成胚柄。
体细胞胚发生中极性获得的诱导因子是植物激素和
外界刺激。
体细胞发生的生理隔离
在多种植物中观察到，早期的胚性细胞与周围
细胞还存在胞间连丝，但随着胚性细胞的发育，细
胞壁加厚，胞间连丝消失或被堵塞。
从大量体胚发生观察结果看，生理隔离是普遍
液胶包埋法、干燥包裹法和水凝胶法
人工种子制作流程图
人工种子的贮藏与萌发

1、人工种子贮藏技术
低温贮藏；液体芽试验
人工种子利用中的问题

（1）高质量的胚状体和不定芽的获得不普
遍；


（2）成本问题 ；
（3）移栽后的管理很重要。
结 束
质部等，三倍体的胚乳和单倍体的小孢子。可见物种、 外植体性质以及倍数性等的差异都不限制胚状体发生。
体细胞胚胎发生的方式
直接发生：从培养中的器官、组织、细胞或原生质体
直接分化成胚，中间不经过愈伤组织阶段。 间接发生：外植体先愈伤化，然后由愈伤组织细胞分 化成胚，这种方式最为常见。且胚状体的形成分两 个阶段完成：（1）胚胎发生从（EC）的形成 ； （2）胚状体的发育。
有营养物质和保护功能的物质中，在适宜的条件 下发芽出苗的颗粒体
结构：体细胞胚、人工胚乳、人工种皮

根据繁殖体的类型可分为两类： 一类是体细胞胚人工种子； 另一类是非体细胞胚人工种子
据报道，目前已对26个科，36个属的植物进行了人工种子研究。其研究范围显示出两大特点： 一是重要经济作物和粮食作物的人工种子报道日益增多； 二是以微器官为繁殖体的报道日益增多，其中包括微芽、微枝、原球茎、小鳞茎、小块茎等。
微芽
21
MS, 3%
0.05-0.2
5.0
桉树
体细 胞胚
Step I, 20
B5, 4-5%
2.0-4.0
1.0
Step II, 28-56
改良H, 3%
0.2-0.5
0.5
ADE(40)
微芽
25
改良H, 3%
0.2-0.5
0.5-2.0
ADE(40)
MS, 3%
1.0
0.2
1.0
Step II, 20
MS, 0.2-0.3%
0.2
1.0
不定芽
25
MS, 2-3%
0.01
0.2
IAA(0.3), GA(0.1)
兰花
原球茎
25
MS, 2%
0.1
椰子汁(10%)
部分植物繁殖体诱导培养条件 （引自陈正华等，1998 ）
45（有菌）
以海藻酸钠作包埋剂的操作程序是： 在配制好的海藻酸钠溶液中，按一定比例加入繁殖体并混匀。 将其逐滴滴入2.0%-2.5%的CaCl2溶液中，经20－30min.的离子交换作用即形成含有繁殖体具有一定刚性的人工种子， 用无菌水漂洗20min.以终止反应。
图5.5 多头自动人工种子包被系统示意图。 1.双活塞泵；2. 灭菌器； 3.加湿器； 4. 振动器； 5. 脉动腔膜；6. 同轴沟； 7. 脉动腔； 8. 喷碟； 9. 旁路系统； 10. 反应池；11. 搅拌子；12. 硬化溶液及其输入。 （引自Brandenberger和Widmer，1998）。

胚状体和2％藻酸钠混合，吸管吸入，滴 到2.5%氯化钙水溶液中，两种离子交换，在 胚状体外面产生褐藻酸钙的胶囊，形成人工 种皮。 胶囊大小，人工种皮厚度都可以控制。 人工胚乳：营养物质、植物激素和抗菌物质。
影响胚状体发生和发育的因素 1
1、供体植物的基因型 2、外植体的来源和培养物的生理状况 双子叶植物的下胚轴和子叶、禾谷类幼 胚的盾片和幼穗都是容易诱导胚状体的外植体
随着胚性愈伤组织继代培养次数的增加， 胚状体发生能力逐渐降低。而有些植物的愈伤 要经长期培养才产生胚状体。
影响胚状体发生和发育的因素 2
第二节 人工种子
人工种子（artificial seeds）：将植物组培产生的 胚状体包裹上用有机化合物和营养物质制作的 人工种皮。 人工种子制作要求：要求能够同步地、大规模地 产生成熟的体细胞胚状体；给胚状体包裹上高 质量的人工种皮；最后解步发育的方法： 1、用 DNA抑制剂处理细胞培养物 5-氨基尿嘧啶；低温处理抑制细胞分裂，再把温度提 高到正常的培养温度，也可达到部分同步化。 2、分离过筛 可获得大小均一的胚性细胞团，再转移到无激素培养基 上培养，可得到大小基本一致的胚状体。 3、利用气体调控胚状体的同步发生 间歇性地向悬浮培养物中通氮气或乙烯可达到胚状体发 生的同步化。 4、利用渗透压调控胚状体的同步生长 胚状体由小到大，其渗透压由高到低。可用高浓度的蔗 糖培养基来控制胚的发育，使其停留于某一阶段，然 后降低蔗糖浓度，使胚状体进入同步发育的状态。
影响胚状体发生和发育的因素 3
☆一般，赤霉素对胚状体的形成没有好处。 ☆脱落酸（ABA）对胚状体的后期发育有促进作用。 ☆腺嘌呤有利于胚状体的诱导。
5、培养基的氮源 还原性氮（铵态氮）高低直接影响胚状体的诱导效果 MS培养基有利于胚状体形成 有机氮源有利于胚状体发生。 脯氨酸对禾谷类胚状体发生有重要作用。 6、天然提取物与活性炭对胚状体形成作用 椰乳对胚胎发生最有效物质；活性炭吸附有毒有害物质。