过氧化物酶染色（Washburn法）
1. 实验原理
粒细胞和部分单核细胞的溶酶体颗粒中含有过氧化物酶，pox能分解H2O2释放出新生氧，使四甲基联苯胺氧化成联苯胺蓝，后者与亚硝基铁氰化钠结合，再进一步氧化形成稳定的蓝色物质，沉淀于酶活性的细胞质内。
2. 标本采集
2.1 病人准备：了解病人是否对局麻药有过敏史。凝血因子严重缺陷引起的出血性疾病，穿刺部位有炎症或有畸形，晚期妊娠妇女作骨髓穿刺时要慎重。
2.2 标本种类：新鲜抽取的骨髓穿刺液
2.3 标本采集要求
2.3.1 高压消毒的穿刺针，一次性无菌手套和抽取骨髓液的无菌注射器。
2.3.2 临床上首选穿刺部位为髂后上棘；翻身困难，需多部位穿刺患者可选择髂前上棘为穿刺部分。小于3岁的小儿还可选择胫骨头内侧为穿刺部位。
3. 标本储存：室温避光处保存，若不能及时测定，可采用95％乙醇固定2分钟，可保存数天。
4. 标本运输：室温运输
5. 标本拒收的标准：溶血、稀释标本不能作测定。
6. 试剂
6.1 试剂名称：血细胞pox染色试剂
6.2 试剂生产厂家：xx生物技术公司
6.3 试剂组成
试剂1：poxⅠ液（紫红色）2℃-8℃避光保存，有效期六个月。
试剂2：poxⅡ液（无色）2℃-8℃避光保存，有效期六个月。
试剂3：95％乙醇，室温避光保存。
试剂4：瑞氏染液，室温避光保存。
7. 操作步骤
7.1 新鲜涂片滴加Ⅰ液数滴（覆盖血膜为宜），室温放置1分钟，勿冲洗即滴加Ⅱ液数滴，混合后室温放置5分钟，流水冲洗。 7.2 滴加95％乙醇脱色，水洗后瑞氏染色，复染后镜检观察结果。
8. 结果判断
8.1 阳性—细胞内出现棕黄或蓝黑色颗粒沉淀物质，定位于胞质。
8.2 阴性—细胞内无棕黄色或蓝黑色颗粒。
9. 临床意义
9.1 粒细胞系统呈集中状粗颗粒强阳性反应，单核细胞系统呈弥散状颗粒弱阳性反应，部分原始单核细胞可呈阴性反应。网状细胞及吞噬细胞有不同程度的阳性。
操作文件 XYS-CZ-05
生效日期:2012年6月1日
责任部门:血液病实验室 页 码:第 页 共2页
编写：谢平 制定日期：2011.12.1
审核：伍海波
过氧化物酶(POX)染色
[原理]
粒细胞和单核细胞脑浆内含过氧化物酶，能借助受体(联苯胺)脱氢催化过氧化氢而释放新生氧。受体被氧化成联苯胺蓝。再与亚硝基铁氰化钠结合成稳定的蓝色颗粒而沉淀于脑浆内。
[试剂]
1．联苯胺溶液：联苯胺0．38，加36％亚硝基铁氰化钠溶液1ml，再取95％乙醇加到100ml，水浴加热助溶。贮于棕色瓶中，可保存数月。工作时应小心溶液污染皮肤。
2.稀双氧水：临用前将30％双氧水用蒸馏水1：80稀释。
[操作]
(1)新鲜干燥血片或骨髓片，加联苯胺液5—8滴，使布满整张涂片，固定1—2分钟。
(2)加等量稀双氧水，用吸球吹吸，使两液混匀，作用4—8分钟。
(3)涂片用流水冲洗。待干后再用瑞氏染液复染，复染时间约30分钟。
[结果观察]
可报告阳性程度或阳性细胞％。
阴性：无蓝色颗粒和蓝色物质。
弱阳性：蓝色颗粒量少且细小，相当于(十)。
阳性：‘蓝色颗粒量多，粗细不一。相当于(++)。
强阳性：细胞充满粗大紧密蓝色颗粒。相当于(+++）。
[临床意义]
(1)粒系统细胞除早期原粒细胞阴性外，晚期原粒细胞及以下各阶段细胞均含有不同程度的蓝色颗粒。嗜酸性粒细胞颗粒更粗大，呈深蓝色。嗜碱性细胞为阴性。
(2)单核细胞中，除早期原始阶段外，皆呈弱阳性反应，其颗粒细小稀疏。
(3)某些网状细胞及吞噬细胞可呈不同程度的过氧化物酶阳性反应。
(4)所有淋巴细胞过氧化物酶染色皆为阴性。
(5)该化学染色是区别急性淋巴细胞性白血病和急性非淋巴细胞性白血病的关键化学染色。FAB分型规定前者阳性率＜3％。
操作文件 XYS-CZ-05
生物实验报告
生物实验报告精选15篇
在人们越来越注重自身素养的今天，大家逐渐认识到报告的重要性，要注意报告在写作时具有一定的格式。那么什么样的报告才是有效的呢？以下是小编整理的生物实验报告，希望对大家有所帮助。
生物实验报告1
一、实验目的：
1、掌握显示细胞中过氧化物酶反应的原理和方法。2.了解细胞凋亡的生物学意义
3、掌握凋亡细胞的形态学检测方法
二、实验原理：
1、细胞内的过氧化物酶能把许多胺类氧化为有色化合物，用联苯胺处理标本，细胞内的过氧化物酶能把联苯胺氧化为蓝色的联苯胺蓝，进而变为棕色产物，因而可以根据颜色反应来判定过氧化物酶的有无或多少。中间产物蓝色联苯胺是不稳定的，无需酶的参加即可氧化为棕色化合物。
2、细胞凋亡是指细胞在生理或病理条件下，遵循自身的程序，自己结束其生命的过程。它是一个主动的、高度有序的，基因控制的，一系列酶参与的过程。
3、凋亡细胞形态学特征是:体积变小,细胞质浓缩;细胞核发生染色质凝聚和聚集于核膜周围(边缘化);细胞膜有小泡状形成;晚期细胞膜内陷形成大小不同的凋亡小体;根据细胞凋亡形态学特征进行显微观察是检测细胞凋亡的一种直观、可靠的方法。
三、实验步骤：
细胞中过氧化物酶的显示
1、在载片上滴一滴PBS缓冲液；
2、取骨髓细胞：用断颈法处死小鼠，立即剪取后肢，去除肌肉，剥出后肢股骨，剪开股骨一端，用牙签尖的一端插入剪开的小孔中，抠取少许骨髓细胞置滴有PBS的载片上； 3、涂片：用另一玻片将骨髓细胞沿一个方向涂布推开，室温晾干；
4、媒染：在涂片上滴0.5％硫酸铜液，以盖满涂片为宜，处理30秒-1分钟。5、倾去硫酸铜液，直接滴入联苯胺混合液反应6分钟（以盖满涂片为宜）6、清水冲洗，番红复染2min。
7、镜检：清水冲洗，室温晾干，先低倍镜下观察，后换高倍镜下观察（油镜100×）
细胞凋亡的形态学检测与观察吉姆萨染色:
1、取细胞爬片置于小培养皿中(有细胞面朝上)2、生理盐水轻轻漂洗细胞3、95%乙醇固定5min
过氧化物酶染色作业指导书
一、原理
血细胞内的过氧化物酶分解H2O2，释出初生态氧，使无色联苯胺氧化成蓝色联苯胺，后进一步变成棕黑色化合物，沉着于胞浆内。
二、试剂
1、 联苯胺染液：
联苯胺0.3g ，碱性品红0.3g ，95%乙醇100ml待完全溶解后与亚硝基铁氰化钠饱和水溶液（0.121mol/L）1ml混匀后，置棕色瓶内可室温保存8-10个月。
2、 过氧化氢溶液：
3%过氧化氢溶液0.3ml ，蒸馏水25ml 此液临用前新鲜配制
3、 脱色液：95%乙醇
4、 复染液：瑞氏染液
三、操作步骤
1、 用常法制备骨髓（血）涂片，待干。
2、 在新鲜涂片上滴加联苯胺溶液数滴，以覆盖骨髓（血）膜为适，染1min。
3、 滴加等量新鲜配制的过氧化氢溶液，轻轻摇动玻片或用洗耳球轻吹液面，使之混匀染色4-5分钟。
4、 用流水冲洗1分钟左右。
5、 用95%乙醇脱色，脱至红色退尽为止，水洗，待干。
6、 用瑞氏染液复染15-20分钟。
7、 水洗，待干，镜检。 四、临床意义
1、 急性粒细胞白血病时，白血病性原始粒细胞可呈阳性反应，阳性颗粒一般较多较粗大，常呈局限性分布；急性淋巴细胞性白血病时，原始淋巴细胞和幼淋巴细胞均呈阴性反应；急性单核细胞白血病时，白血病性原始单核细胞呈阴性反应，有时虽有少数可呈弱阳性反应，但阳性颗粒少而细小，常弥散分布。
2、 小型原始粒细胞和原始淋巴细胞不易区别，如果小型原始细胞呈过氧化物酶阳性反应，可确定为小型原始粒细胞。
3、 急性早幼粒细胞白血病有时须与急性单核细胞白血病鉴别，如果白血病细胞呈过氧化物酶强阳性反应，应确定为急性早幼粒细胞白血病。
4、 成熟中性粒细胞过氧化物酶活性的变化：
（1）、活性增高：
可见于再生障碍性贫血、感染（特别是化脓菌感染）、急性淋巴细胞性白血病和慢性淋巴细胞性白血病。
（2）、活性减低：
可见于急性粒细胞白血病、慢性粒细胞白血病、急性单核细胞白血病、骨髓增生异常综合症、放射病及退化性中性粒细胞。
