作物栽培生理实验指导书
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贵州大学高等教育自学考试
《作物栽培生理》实验指导书
课程代码：02676
(农学本科专业)
继续教育学院
2015年 元月
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前 言
本指导书根据贵州大学高等教育自学考试农学本科专业《作物栽培生理》实验大纲编写，学生按照本指导书的要求完成本课程的实践环节。学习作物栽培生理学中最基本的实验技术和方法；要求学生掌握作物栽培生理实验的基本原理和方法，掌握生理实验中一些常规仪器和设备的原理和操作方法，提高学生的动手能力，加强学生对理论教学内容的理解，并为以后的科研活动和撰写科研论文打下基础,故要求同学们认真对待.通过实验,增强学生独立工作、解决问题的能力。
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目 录
一、实验的性质与目的························································································4
二、实验的时间分配····························································································4
三、实验地点选择·······························································································4
四、实验内容安排与要求····················································································4
1、实验一： 植物组织水势的测定······································································4
2、实验二：种子发芽率的快速测定·····································································5
3、实验三：吲哚乙酸氧化酶活性的测定····························································8
五、注意事项······································································································9
六、实验方式与基本要求····················································································9
七、成绩评定·····································································································10
八、实验报告格式······························································································11
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一、实验的性质与目的
本实验课为《作物栽培生理》相配套的实践教学环节，是侧重提高学生实验技能及动手能力的实践过程。提高学生独立思考问题、解决问题及创新能力。通过该课程的学习，使学生充分了解农业实验的特点和熟悉农业生产各个环节，了解作物生长发育规律与栽培措施的关系。学会调查和分析问题的方法，可巩固和深化课堂讲授的专业理论知识，又能培养学生的实践操作技能，以实验教学作为理论联系实际的纽带，做到理论联系实际，提高毕业生的素质，更好地服务于我国的农业生产和发展，为今后学习和工作奠定良好基础。
二、实验的时间分配
序
号 实习教学工作内容 起止时间 教学工作目标、要求
1 实验准备工作 准备好有关实验的一切材料、工具。
2 学生分组在实验室实验 完成具体安排的有关实验任务
3 实习成绩评定结束 评定并上交成绩。
合 计 6学时
三、实验地点选择
四、实验内容安排与要求
实验一 植物组织水势的测定
（长度法和小液流法）
一、实验目的
1、 了解水势的概念及其对植物吸收外界水分的作用。
2、 熟练掌握长度法和小液流法测定植物组织水势的原理和方法。
二、实验内容
配制一系列梯度的蔗糖溶液，通过放入其中的土豆条的吸水和失水，使土豆条长度和外界溶液发生浓度的变化，进而判断出等渗溶液，计算出水势。
三、实验原理、方法和手段
当植物细胞组织放在外界溶液中时，如果植物的水势小于溶液的渗透势，则组织吸水体积变大并使溶液浓度变大；反之，则植物细胞内水分外流体积变小并使溶液浓度变小；若植5
物组织的水势与溶液的渗透势相等，则两者水分保持动态平衡，植物组织体积不变，外界溶液浓度也不变，此时溶液的渗透势即等于所测植物的水势。可以利用溶液浓度的变化，分析采用小叶流法、长度法等来测定实验前后的变化。然后根据范特荷夫公式计算溶液渗透势，从而得知植物组织水势。
四、实验组织形式
在教师指导下，以学生为主的开放性运行模式。。
五、实验条件
1、仪器和试剂
试管、毛细滴管、刀片、移液管、镊子、米尺、甲烯蓝、温度计、1mol/L蔗糖溶液
2、参考文献
张志良，瞿伟菁著。《植物生理学实验指导》（第三版），高等教育出版社。
六、实验步骤
（一）长度法
1、以1mol/L的蔗糖溶液为母液分别在大试管中配制0.5、0.4、0.3、0.2、0.1M蔗糖液各15ml，混匀，编号（实验组）。
2、取5只中试管，编号，从对应的大试管中各取5ml溶液为对照组。
3、每只试管取准确度量的4～5cm长、0.09cm2横截面的土豆条4条，量取总长度，记为L1，置于大试管中，放置30分钟后（摇动数次），取出各管内的土豆条测定总长度，记为L2。
4、比较实验前后土豆条总长度的变化，判断与确定等渗浓度。
（二）小液流法
1、向每一只实验组大试管中加入甲烯蓝粉末少许，振荡，使溶液变蓝。
2、用毛细滴管从实验组各大试管中吸入少许着色液，然后伸入到对应的对照组试管中部，缓慢释放出一滴，观察小液流的移动方向，记录实验结果，判断与确定与植物组织水势相等的外界溶液的浓度。
3、计算植物组织水势。ψs＝－RtiC
七、思考题
1、试比较两种方法测定的结果是否相同。
2、为什么本实验测定的是植物组织的水势而不是植物细胞的渗透势？
实验二 种子发芽率的快速测定
一、实验目的
通过本实验让学生掌握基本的测定种子发芽率的方法。
二、实验内容
种子发芽率是指在最适宜的条件下，在规定的天数内，发芽的种子占供试种子总数的百6
分比。它是决定种子品质和实用价值大小的主要依据，与播种时种子的用量直接有关。但用常规的直接发芽的方法测定发芽率所需的时间较长，特别是有时为了应急的需要，如涉及到购买种子，则更是无法知道。快速测定法将在很短时间内获得结果。
三、组织运行形式
在教师指导下，以学生为主的开放性运行模式。
I：氯化三苯四氮唑法（TTC法）
一、实验原理
凡有生命活力的细胞均具有呼吸作用从而都有氧化还原反映，而死细胞则无此反应。TTC可渗入种胚的活细胞内，并作为氢受体被脱氢辅酶（NADH或NADPH）上的氢还原，此时无色的TTC便转变为红色的三苯基甲（TTF），并吸附在活细胞的表面，根据活细胞着色的深浅可定性的判断种子活力的有无与大小。该方法在国际间、地区间交换种子最为常用。
二、仪器和试剂
恒温箱、烧杯、培养皿、镊子、刀片、天平
0.5％的TTC溶液：称取0.5gTTC放在烧杯中，加入少许的95％乙醇使其溶解，然后用蒸馏水定容至100ml，棕色瓶中保存。若溶液变为红色，表示已被氧化不能再用。
三、实验步骤
1、浸种：将待测的种子在30℃温水中浸种数小时，以增强种胚的呼吸强度，使显色迅速。
2、显色：取吸涨的种子100粒，用刀片沿着胚的中心线纵切为两半，
将一半置于1只培养皿中，加入适量的0.5％的TTC溶液（以浸没种子为度）后，置于30℃恒温箱内。0.5～1小时后，观察现象，判断种子活力的有无与大小。
将另一半种子在沸水中煮5min杀死胚，或用微波炉烤死胚，作同样染色，保温处理，作为对照。观察并与活种子比较看现象有何不同。
3、计算活种子的百分率。
II、溴麝香草酚蓝法（BTB法）
一、实验原理
凡活细胞必有呼吸作用，吸收空气中的氧气，放出二氧化碳。二氧化碳溶于水中成为碳酸，碳酸解离成H＋和HCO3－，使胚周围环境的酸度增加，可用酸碱指示剂BTB来测定酸度的改变。BTB的变色范围为pH6.0～7.6，酸性成黄色，碱性成蓝色，中间经过绿色（变色点为pH7.1）。颜色变化越明显则表明种子活力越强。死细胞没有呼吸作用，也没有BTB的颜色变化。
二、仪器和试剂
恒温箱、烧杯、培养皿、镊子、天平、漏斗、滤纸、琼脂
0.1％的BTB溶液：称取BTB0.1g，溶解于煮沸过后的100ml自来水中，然后用滤纸滤去
