8. 消毒剂消毒效果验证内容
8.1 消毒剂消毒效果的验证
8.1.1 菌悬液配制
接种金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌新鲜培养物至营养琼脂培养基中，于30～
35 ℃培养18～24 h；接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁琼脂培养基中，于23～28 ℃培
养24～48 h，上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1 ml 含菌数100cfu（菌落形成单位）
的菌悬液。接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂培养基上，23～28 ℃培养5～7 d，加入3～
5 ml 0.9％无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱，然后用管口带有无菌棉花的无菌毛细吸管吸出孢子
悬液至无菌试管内，用0.9％无菌氯化钠溶液制成每1 ml 含菌数（孢子数）100 cfu 的菌（孢
子）悬液。试验菌悬液应在24 h 内使用。
8.1.2 消毒剂消毒效果验证
8.1.2.1 设置三组平行试验，如下图所示 分组 用量（ml）
菌悬液 培养基 3.0%过氧化氢水溶液 0.9%氯化钠溶液
A 1 100 10 0
B 0 1 10 100
C 1 100 0 1
8.1.2.2 根据验证菌的特性，分别选择贴于营养琼脂培养基平皿及玫瑰红钠琼脂培养基平皿上，
分别于30~35 ℃培养72 h、23~28 ℃培养120 h，记录各平皿上菌落数。
8.1.2.3 每步操作应充分震荡混合，并将每组混合液分为两组，将上述样品混合后，采用薄膜过
滤法，按《微生物检查SOP》进行操作，检查微生物数量。
8.1.2.4 回收率的计算 要求C组的回收率大于70%时，消毒剂消毒效果验证可认为有效。
8.1.2.5 不符合评估标准，为不合格。依据数据分析原因，以便总结经验，对验证方案进行修改、
完善。
8.1.2.6 依据验证检测记录进行项目结果评估。见附录4《消毒剂消毒效果验证结果与评估》。
8.2 消毒剂微生物挑战试验
8.2.1用已校验的1 mL 移液管吸取＜100 cfu/mL 菌悬液，分别接种至含消毒液10ml的试管中，
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消毒剂消毒过程确认方案
文件编号：
编制/日期：
审核/日期：
批准/日期：
- 2 - 消毒剂验证方案和验证报告
公司手消毒使用含0.1％的笨扎溴铵和75％的酒精；医用手套及接触产品的器械使用75%酒精。
消毒剂消毒效果的验证方法如下：
1 采样时间：在消毒后立即采样。
2 采样方法：
被检人五指并拢，用浸有含相应中和剂的无菌洗脱液的棉拭子在双手指屈面从指根到指瑞往返涂擦2 次（一只手涂擦面积约30Cm2) ，并随之转动采样棉拭子，剪去操作者手接触部位，将棉拭子投入10mL 含相应中和剂的无菌洗脱液试管内，立即送检。
3 检测方法：
3 . 1 细菌总数检测：将采样管在混匀器上振荡20s或用力振打80 次，用无菌吸份吸取1.0mL 待检样品接种于灭菌平皿，每一样本接种2 个平皿，内加入已溶化的45℃ ～48℃ 的营养琼脂15mL～18mL ，待琼脂凝固，置36℃ ±1℃ 温箱培养48h ，计数菌落教。
采样结果计算方法：
细菌总数（ cfu/cm2）=
3.2 致病菌的检侧：
3.2.1金黄色荀萄球菌检讲：
(1)增菌、分离
取采样液lmL ，接种于5mL SCDLP 液体培养基中，于36 ℃±1℃ 增渭24h。取l 白金耳上述增菌液，在血平板上作划线分离，36 ℃ ±1℃ 培养24h 。
(2)观察菌落特征：在血珠脂平板上菌落形态为金黄色、圆形凸起、表面光滑、周围有溶血圈。
(3)镜检：挑取典型菌落作涂片染色镜检，镜下为革兰阳性、成荀萄状排列的球菌。
(4)生化反应：取可疑菌落作触酶、葡萄糖发酵、血浆凝固酶、甘露醇发酵、新生霉素敏感试验．均为阳性者即为金黄色菊萄球菌。
l ）甘露醇发酵试验：取上述可疑菌落接种于甘露醇培养基，于36 ℃ ±1℃ 培养24h ，发酵甘露醇产酸者为阳性。 采样面积 平板上菌落数x 稀释倍数 - 3 - 2 ）血浆凝固试验：① 玻片法：沽净玻片一端滴一滴灭菌生理盐水，另一端滴一滴血浆．用白金耳挑取菌落分别与生理盐水和血浆混匀，5m 内观察有无固体颗粒状物，若血桨出现凝块，生理盐水均匀浑浊为阳性，两者均混浊为阴性。② 试管法：吸取1 : 4 新鲜血0.5mL，放在灭菌小试管中，再加入等量待检菌24h 肉汤培养物，混匀后放入36 ℃ ±1℃ 孵箱中．同时以已知血浆凝固酶阳性和阴性菌肉汤培养物作对照，每30s 观察一次，6h 内出现凝块者为阳性。
1 消毒剂验证方案 文件编号
编制 版本号
审核 发布日期 年 月 日
批准 生效日期 年 月 日
消毒剂验证方案
1.简介
消毒剂常用于设备设施表面消毒。本公司使用的消毒剂有
75%酒精、0.1%新洁尔灭、2%来苏尔和 6%过氧化氢。其中 0.1%
新洁尔灭主要用于墙面、地面和门的表面消毒，75%酒精和 6%过
氧化氢主要用于设备、操作台面、门把手消毒，2%来苏尔主要用
于地漏消毒。本方案结合特定菌挑战试验和现场考察试验，对消
毒剂的杀菌效力进行确认。
2.实施日期
项目 中和剂鉴定试验 载体定量杀灭试验 现场考察
实施日期
3.验证小组名单
部门 姓名 职责
—— 批准方案、报告
QA 审核验证方案、记录和报告
QC 审核验证方案、记录和报告
生产部 审核验证方案、记录和报告
QA 编写和实施验证方案
QA 现场微生物监测取样
QC 实施验证方案
4.材料与试剂 2 4.1 菌株
（1）细菌：金黄色葡萄球菌【CMCC（B）26003】 大肠杆菌【CMCC（B）44102】
（2）细菌芽孢：枯草杆菌芽孢【CMCC（B）63501】
（3）真菌：白色念珠菌【CMCC（F）98001】
4.2 培养基 营养肉汤培养基： 营养肉汤培养基粉 20.0g 纯化水
1000ml
将上述成分混合后，加热至完全溶解，调 pH 至 7.1±0.2，分
装，于 121℃高压蒸气灭菌 15min 备用。
营养琼脂培养基： 营养琼脂培养基粉 31.0g 纯化水 1000ml
将上述成分混合后，加热至完全溶解，调 pH 至 7.1±0.2，分
装，于 121℃高压蒸气灭菌 15min 备用。
改良马丁培养基： 改良马丁培养基粉 28.0g 纯化水 1000ml
将上述成分混合后，加热至完全溶解，调 pH 至 6.4±0.2，分
装，于 115℃高压蒸气灭菌 20min 备用。
文件编号：版本号：
消毒剂消毒效果
验证方案
药业有限公司
题目：消毒剂消毒效果验证方案 文件编号： 版本号：A00 第2页 共26页 审批
起草 签名 部门 职务 日期
审核 签名 部门 职务 日期
终审
签名 部门 职务 日期
批准
签名 部门 职务 日期
文件修订情况
生效日期 描 述 版本号
年月日 新建企业，按《药品生产质量管理规范》
（2010年修订）编制。 A00
题目：消毒剂消毒效果验证方案 文件编号： 版本号：A00 第3页 共26页 目录
审批 ........................................................ 2 目录 ........................................................ 3 1. 概述..................................................... 4 2. 目的..................................................... 4 3. 范围..................................................... 4 4. 验证机构组成 ............................................. 4 4.1 验证委员会组成............................................... 4 4.2 验证小组成员及工作职责....................................... 5 5. 进度计划 ................................................. 5 6. 培训..................................................... 5 7. 参考资料 ................................................. 5 7.1 验证依据..................................................... 6 7.2 验证所需文件................................................. 6 8. 验证准备 ................................................. 6 8.1 验证用培养基和稀释液的确认................................... 6 8.2 所用仪器设备的确认........................................... 6 8.3 所用菌种的确认............................................... 6 8.4 菌液的制备................................................... 6 8.5 消毒剂的配制................................................. 7 9. 验证过程 ................................................. 7 9.1 消毒剂消毒效果确认........................................... 7 9.2 消毒剂的有效期确认.......................................... 10 10. 异常情况处理 ............................................11 11. 结论和建议 ..............................................11 12. 验证报告会签 ............................................11 13. 验证证书 ...............................................11 14. 再验证 .................................................12 15. 附件 ...................................................12 题目：消毒剂消毒效果验证方案 文件编号： 版本号：A00 第4页 共26页 1. 概述
