葛根素提取工艺的研究

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葛根素提取工艺的研究硅胶GF 254薄层板上, 以二甲苯-醋酸乙酯-甲酸(7B 2B 1) 上层液为展开剂, 展开, 取出, 凉干, 喷以1%三氯化铝乙醇溶液, 在紫外光灯(365nm) 下检视。

供试品色谱中, 在与对照药材色谱相应的位置上, 显相同的亮蓝色斑点, 阴性对照样品则无此斑点。

212 含量测定21211 标准曲线的制备:精密称取120e 干燥至恒重的芦丁对照品1012mg, 置50m l 量瓶中, 加60%乙醇适量, 超声处理5m in 使溶解, 并加60%乙醇至刻度, 摇匀, 即得对照品溶液。

精密量取对照品溶液110、210、310、410、510ml 分别置10ml 量瓶中, 各加60%乙醇至5ml, 加5%亚硝酸钠溶液013ml, 摇匀, 放置6m in, 加10%硝酸铝溶液013ml, 摇匀, 放置6min, 加氢氧化钠试液4m l, 再加60%乙醇至刻度, 摇匀。

以相应的试剂溶液为空白。

按分光光度法(中国药典2000年版一部附录ÕB) , 在500nm 的波长处测定吸收度, 以吸收度为纵坐标, 浓度为横坐标, 绘制标准曲线。

回归方程为:Y =841261X+014009, 对照品在20190~102100L g /ml 范围内呈良好线性关线, r=019996。

21212 供试品溶液的制备:取本品研细, 精密称取0124g , 加60%乙醇50ml, 水浴回流提取1h, 提取液加60%乙醇至50ml, 摇匀, 滤过, 得续滤液, 即为供试品溶液。

21213 稳定性试验:精密吸取供试品溶液210ml, 按标准曲线项下方法, 自/分别置于10ml 量瓶中0起, 同法操作, 以同一显色后的供试液每隔5min 测定1次吸收度, 结果吸收度值显色30min 后下降约2%, 测定时间一般宜在15~30min 内。

21214 精密度试验:对同一供试液重复取样, 显色, 测定吸收度, 以测定结果RSD 反映测定结果的精密度, 结果RSD=115%(n=5) 。

21215 重复性试验:取同一批号的天丁颗粒, 称取5份, 按供试品溶液的制备和标准曲线项下方法测定总黄酮含量, 结果平均含量为3175%, RSD =019%(n=5) 。

21216 加样回收率试验:取已知总黄酮含量的样品研细, 精密称取约0120g 各5份, 分别精密加入110ml 芦丁对照品溶液, 摇匀, 然后按供试品溶液制备方法制得供试液并测定总黄酮的含量, 计算回收率, 结果平均回收率为95188%, RSD 为1111%(n =5) 。

21217 样品测定:精密量取供试品溶液210ml, 然后按标准曲线项下方法测定总黄酮的含量, 结果见表。

表批号[***********]011112样品中总黄酮测定结果总黄酮含量(%)[1**********]9RSD(%) [1**********]2注:本课题为广东省中医药管理局科研项目(编号:100102)参考文献1 江苏新医学院1中药大辞典1上海:上海科学技术出版社, 1986B 11462 国家药典委员会1中华人民共和国药典1一部1北京:化学工业出版社, 2000B 1413 周日宝, 等1皂角刺及其伪品同属植物棘刺的理化鉴别1湖南中医学院学报, 1999, 19(1) B 17(2019-04-07收稿)葛根素提取工艺的研究张新广王冬梅(广东省东莞市人民医院, 东莞523018)摘要目的:改良葛根素的制备工艺。

方法:以葛根中总黄酮的含量为指标比较各种溶剂的提取效率, 并考察葛根素的分离以及富集方法。

结果:葛根水提含量有8514%, 使用大孔吸附树脂分离、富集收率可达90%。

结论:葛根水提得率较高, 用D101大孔吸附树脂富集较好。

关键词葛根素制备大孔树脂葛根为豆科植物野葛(Puer ar ia Lobata (w illd) Ohw i) 的根, 为常用中药, 具有解肌退热、生津、透疹、升阳止泻等功效112。

主要成分为异黄酮类化合物, 如大豆苷、大豆苷原、葛根素、三萜类、香豆素类等122, 有效成分为葛根素, 即8-B -D -葡萄吡喃糖-4-1, 7二羟基异黄酮132。

葛根素具有扩张冠脉和脑血27期2019年管、降低心肌耗氧量、改善心肌收缩功能、促进血液循环等作用, 适应于冠心病、心绞痛、心肌梗塞、视网膜动脉静脉阻塞、突发性耳聋等疾病, 疗效显著142。

因此, 葛根素的开发研究引起了人们的高度重视, 不断有新产品推出。

目前从葛根中提取葛根素的方法主要有两大类:一类是溶剂提取后用不同极性溶剂萃取来分离; 另一类是溶剂提取后再用树脂吸附法进行分离。

对于前一类方法因为要使用大量的有机溶剂, 我们认为后一种方法更适合于药品的生产。

1 仪器与试药U V -2102PCS 型紫外可见分光光度计(尤尼柯上海仪器有限公司) 。

生药材葛根(产地湖南) 购自上海保康中药材饮片厂, 经上海中药研究所鉴定, 符合中华人民共和国药典2000年版(一部) 规定, 为豆科葛属植物野葛Puer aria lobata (Willd) Ohw i 的干燥根。

对照品葛根素购自中国药品生物制品检定所。

95%乙醇、甲醇均为分析纯。

2 方法与结果211 总黄酮含量测定方法21111 标准曲线的制备:精密称取对照品葛根素5mg 于25ml 量瓶中, 加95%乙醇溶解并稀释至刻度, 摇匀, 分别吸取012、014、016、018、110ml 置于10ml 量瓶中, 各加乙醇110ml, 再用蒸馏水稀释至刻度, 摇匀, 以乙醇溶液(1y 10) 作空白对照, 在250nm 处测定吸收度(A) 。

以吸收度与浓度(C) 回归得曲线:A=01073898C-010308, r=019992。

21112 含量测定:取葛根药材粉末5g 置于圆底烧瓶中, 加入4倍量95%乙醇回流提取3h, 浓缩得干浸膏。

精密称取干浸膏样品约30mg 于50ml 量瓶中, 加95%乙醇20~30ml, 超声振荡使其溶解, 冷却后加95%乙醇至刻度, 摇匀。

精密吸取110ml 置于25m l 量瓶中, 加水至刻度。

同时吸取110ml 乙醇同法处理作空白对照, 于250nm 处测定吸收度。

由回归方程计算总黄酮的含量。

212 提取溶剂的选择选用水、甲醇、95%乙醇作提取溶剂对葛根中提取葛根素的效率进行比较。

具体操作:将葛根粉碎过10目筛, 取一定量葛根粉装入提取瓶中, 第一次用4倍量溶剂回流提取115h, 第二次用2倍量溶剂回流提取1h, 合并两次提取液, 得葛根素粗提液, 浓缩得粗提浸膏。

按照含量测定方法检测药渣中葛根素的含量。

根据原料药材中葛根素的含量, 得葛根素的提取率。

通过比较可以看出, 用水作提取溶剂提取率虽然较醇类稍低, 但差别不大, 其中甲醇提取率稍高, 但由于甲醇有一期9月定的毒性, 操作条件要求较高, 而95%的乙醇和水的提取率差别不大, 用水作提取溶剂, 提取率在85%以上, 提取效果较好。

而且用水作提取溶剂安全无毒、操作方便, 便于工业化生产, 所以选用水作提取溶剂。

结果如表1。

表1溶剂水甲醇乙醇(95%)不同溶剂提取效果比较原料药中葛根素含量(%)317317317药渣中葛根素含量(%)[1**********]5提取率(%) [1**********]9213 葛根素的分离精制将上述水提物用水溶解后, 滤去不溶物, 将样品加入到预处理好的大孔树脂柱上, 经吸附饱和后, 水液弃去, 用蒸馏水洗去糖类、蛋白质、鞣质等水溶性杂质, 至洗脱液近无色; 用70%乙醇洗脱, 收集洗脱液, 浓缩回收乙醇至无醇味, 浓缩至比重d=112时加正丁醇萃取4次, 合并正丁醇萃取液, 回收正丁醇至干, 固体物用适当溶剂反复重结晶, 烘干, 得葛根素粗提品。

从葛根中提取葛根素, 必须通过精制, 才能达到标准要求。

在葛根素的精制中, 操作关键是葛根素和其水溶性成分的分离以及葛根素的富集方法。

对于其富集我们选用了大孔树脂吸附法, D101大孔吸附树脂用于葛根素的精制, 不仅吸附量较好, 而且洗脱和再生简便, 可反复使用。

所以我们选择D101大孔吸附树脂作为富集剂。

根据正交实验结果可推出精制葛根素的优化选, 设计了3P 3正交表(表2、表3) 。

表2因素1A 吸附剂用量(倍)B 乙醇用量(倍)C 乙醇浓度(%) 表3实验号12345678961060正交实验结果表葛根素精制品得率%[***********][**************]6271270381480正交实验因素水平表水平分析实验结果后, 最佳实验条件为A 3B 3C 2, 综合考虑成本等主要因素的影响, 选取最佳工艺为A 2B 2C 2。

即用D101大孔吸附树脂作富集剂, 用相对于粗提浸膏7倍量的树脂吸附, 用12倍量的70%乙醇水溶液作洗脱剂, 并按此进行验证实验, 葛根素的提取率可达90%以上, 证明此方法可行。

具体操作:取10g 粗提浸膏, 用水溶解过滤, 上吸附柱, 吸附饱和后, 用去离子水洗至无色, 除去其中的水溶性杂质, 然后用不同浓度的乙醇洗脱, 得葛根素的醇提液, 回收溶剂后得葛根素精制品。

3 结论与讨论311 通过以上研究, 我们确定葛根素的最佳提取工艺为:使用水回流提取, 得到总黄酮, 再使用大孔树脂富集精制, 得到葛根素。

同时采用紫外分光光度法进行含量测定, 方法简单准确率较高。

312 本工艺在对提取溶剂的考察时, 考虑到甲醇有毒且对生产成本和操作等都有较高要求, 对于乙醇由于收率上无大的差异, 同样考虑成本和操作等因素, 以水做为提取剂是最为适合工业化生产的。

313 在样品的精制方面采用大孔树脂具有操作简单, 再生简便, 样品损失较少的优点。

参考文献1 赖洋林, 等1葛根的实验研究与临床应用新进展1中国中药杂志, 1989, 14(5) B 522 李琰, 等1葛根提取工艺的考察1北京中医药大学学报,2001, 24(4) B 243 张尊听, 等1秦岭野葛异黄酮成分研究1中国药学杂志,1999, 34(5) B 3014 朱应磊, 等1葛根素的药理学和临床应用研究进展1中草药, 1997, 28(11) B 693(2019-04-21收稿)改进包衣工艺解决糖衣片龟裂问题郑仲毅刘中丽(深圳市中药总厂, 深圳518029)摘要采用滑石粉混悬胶糖浆包糖衣层, 同时采用加入保湿剂甘油的色糖浆包色衣层, 可解决糖衣片在干寒条件下出现的龟裂问题。

关键词糖衣片龟裂包衣工艺目前薄膜衣片已比较普遍, 部分老品种的糖衣片也改为薄膜衣片。

但在许多中药厂仍有不少糖衣片的老品种, 这些老品种由于在疾病治疗中疗效确切, 目前还在生产和销售, 而且短时间内还不可能全部改为薄膜衣片。