新型精子功能分析系统的临床应用评价

·１０　·中国性科学　２０２１年４月　第３０卷　第４期　ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＨｕｍａｎＳｅｘｕａｌｉｔｙ，　Ａｐｒｉｌ２０２１，　Ｖｏｌ．３０，Ｎｏ．４【基金项目】广东省卫生和计划生育委员会基金（Ａ２０１７１５２）△【通讯作者】陆杉，Ｅ ｍａｉｌ：ｇｚｌｕｓｈａｎ＠１２６ ｃｏｍＤＯＩ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７２ １９９３．２０２１．０４．００４·男科与性医学·不育男性精子自发顶体反应率、顶体酶活性与精液常规参数及精子功能指标的相关性分析周欢群　蒋满波　周文　谢妍　吴爱华　王爱爱　倪运萍　陆杉△广东省中医院生殖医学科，广州５１０００６【摘要】　目的　探讨不育男性精子自发顶体反应率、顶体酶活性与精液常规参数及精子功能指标的相关性。

方法　选取２０１９年４月至２０２０年２月广东省中医院生殖医学科诊治的７７例不育男性作为研究对象。

收集其实验室检测的精液分析数据进行回顾性分析。

收集患者精子自发顶体反应、顶体酶活性、精子 透明质酸结合试验、精子ＤＮＡ碎片、精子核蛋白、混合抗球蛋白反应试验（ＭＡＲ）、精液常规分析的数据资料。

采用Ｓｐｅａｒｍａｎ相关性分析精子自发顶体反应率、顶体酶活性与精液常规参数及精子功能指标的相关性。

结果　精子自发顶体反应率与精子总数、尾部畸形率呈正相关（ｒ＝０ ２２１、０ ２７８，Ｐ＝０ ０４５、０ ０１５），与平均路径速度（ＶＡＰ）、顶体酶活性呈负相关（ｒ＝－０ ２２３、－０ ２５３，Ｐ＝０ ０４３、０ ０３７）；精子顶体酶活性与精子存活率呈正相关（ｒ＝２ ８４，Ｐ＝０ ０１８），与尾部畸形率呈显著负相关（ｒ＝－０ ３０４，Ｐ＝０ ００１）。

精子自发顶体反应率、顶体酶活性与精子ＤＮＡ碎片率、精子核蛋白不成熟度、精子 透明质酸结合率及ＭＡＲ均无明显相关性（Ｐ＞０ ０５）。

结论　精子自发顶体反应率、顶体酶活性与部分精液参数有相关性，但与多项精子功能指标无明显相关性。

健康域公卫引言男性不育是高发于男性群体的生殖系统疾病，是指夫妻生活正常，且无避孕措施，因男性因素造成不育症状。

其致病因素与性病史、吸烟饮酒和环境污染有关,多需要通过精液质量检测诊断该病，而后开展针对性治疗[1]。

DFI （DNA 碎片指数）是精液质量的常用诊断指标，可以评估疾病程度。

顶体酶活性可以判断精子活性，其指数降低则精子具有较差的穿越力，进而降低精子质量。

现阶段，以上两项指标是男性不育的常规诊断指标，便于疾病的早期治疗。

为此，本研究选取1727例男性筛查者，分析以上两项指标的诊断效果。

1资料与方法1.1一般资料选择2016年6月~2021年12月入院诊断的1727例男性筛查者，其中男性不育患者481例。

根据DFI 分组，一组306例，不育时长为9个月~3年，平均（1.24±0.48）年。

二组113例，不育时长为10个月~3年，平均（1.30±0.44）年。

三组35例，不育时长为11个月~4年，平均（1.30±0.34）年。

四组27例，不育时长为8个月~4年，平均（1.51±0.33）年。

根据顶体酶活性分组，≤48.2U/106为27例，不育时长为8个月~3年，平均（1.17±0.66）年；＞48.2U/106为416例，不育时长为10个月~4年，平均（1.21±0.69）年。

经假设检验并无差异，＞0.05。

1.2方法根据精液检查与处理实验室手册对精液进行常规检测，用改良的牛鲍氏计数板测量精液密度，采取手工法计数。

用快速染色法（Diff-Quik ）测定精子形态学特点，正常形态4%为参考值的具体下限。

所有操作人员经过系统化培训以后上岗，具备熟练的操作能力。

顶体酶活性检测采取顶体酶试剂盒，根据改良后的Kennedy 法实施检测，将精液标本混匀以后进行计数操作，使每个反应管内部的精子个数大概是7.5×106个，对各个标本设置对照以及反应管，然后添加反应液以及抑制剂。

进口计算机辅助精子分析系统参数
1、进口精子计算机辅助分析软件，获得中国药监局注册（SFDA认证）
2、显微镜：进口正立相差显微镜，x10 ,x20倍正相差物镜和x40, x100倍平场消色差物镜
3、样本放置：可放置多种不同的计数池如马克板、迈克肖玻片、普通玻片等。

检测样本量：1ul-10ul1。

分析速度：< 2秒（按单视野分析500条精子计算）
4、版本：最新4.2版本或以上
5、完全中文操作界面，已包括自动扫描载物台驱动程序
6、精子活动力动态分析功能：正相差光学图像分析，精确区分精子和杂质，对分析视野内的精子标记编号，点击或输入精子编号可实时显示每条精子的运动轨迹，提供手工修正功能
7、人工纠错功能：可对每条精子分析状况进行人工修正补偿
8、质量控制功能：有提供精子活动相差视频质控图像，实现精子活动力分析质量控制
9、精子密度检测质量控制：可检测精子密度质控珠，生产精子密度质控表
10、精子活动力检测质量控制：提供精子活动相差视频质控图像，实现精子活动力分析质量控制
11、网络数据库和网络链接功能：病历数据库使用SQL Server 2008 express网络数据库，提供数据库链接表和提供XML 文件
12、软件向上升级兼容功能：支持显微镜载物台自动扫描
13、精子密度，活动力检测成本：不需使用任何消耗品：“零成本”。

精液检查质量标准及实验分析目的：男性不育症病因复杂，常见的有生殖器发育异常、性功能障碍及精液异常三大类。

男性不育症的检查主要通过检查精液的质量及精子数量及功能，了解男性的生育能力。

方法：运用显微镜计数法对本院2007年1月～2010年6月男性不育患者的精液进行常规检查并作统计分析。

结果：2007年1月～2010年6月期间37例不育男性精液的常规检查，其中精子密度高于6×109/L 20例，占54.05％，低于2×109/L 9例，占24.32％，低于1×109/L 3例，占8.11％，无精子5例，占13.51％。

结论：精子密度对生育力有影响，但用它来判断男性生育力是不全面的。

如何扩大精液的常规检验，待于进一步的探讨和完善，从而对男性不育症的诊断和治疗提供参考依据。

标签：男性不育症；精子检查；显微镜计数法精子形态和精子密度、活力都是评价男性生育力的重要参数，有研究资料表明，正常精子形态是体外受精主要预测参数，形态正常精子比例与受孕有直接关系，比精子密度、精液量和精子运动性更能在受孕中起预测作用[1]。

精液检查的目的为评估男性生育功能，提高不育症诊断和疗效观察的依据；辅助诊断男性生殖系统疾病[2]，现就本院检验科对37例男性患者的精液常规检查进行探讨分析：1 资料与方法1.1 一般资料37例男性患者年龄28～35岁，平均31.5岁，婚龄为3年以上，性生活正常，亦未避孕但妻子未怀孕者36例，占97.3%，婚前体检中因生殖器疾病进行精液检查者1例，占2.7%。

1.2 标本采集患者禁性生活3～7 d，不少于48 h，不超过7 d，将一次射出量装入洁净、干燥容器内，不能用胶乳避孕套，因其干扰精子的存活，标本在1 h内送到检验室，冬季应注意保温，最好在20～40℃，结果出现异常应在1周后复查，2次采集间隔应大于7 d，不能超过3周，反复查2～3次才能得到较正确的结果。

标明受检查者姓名，记录采集时间。

精子上游存活实验目的：比较不明原因性不孕患者男性精子与已经受孕的男性的精子上游后存活时间及活率变化的差异。

方法：采用上游法处理不孕组及正常组男性的精液，观察24、48、72、96、120 h后精子总活率的变化及前向运动精子、非前向运动精子比例的变化。

结果：不孕组男性精子的存活时间短于正常组，活率下降较正常组明显。

结论：精子上游存活法可以反映精子的受精能力。

标签：精子；上游法；活率男性不孕虽然逐渐增加，但是用哪种指标能切实反映生育力的讨论一直在进行。

有不少研究认为，不孕症夫妇中，男性精子的活力、活率、密度和畸形率均高于正常生育夫妇的男性精子的各项指标，但也有不少文章指出，男性精子的常规动态、形态指标与不孕与流产无明显相关性。

文献[1]报道，精子DNA断裂的彗星检测法能有效判断精子的质量，但该方法操作复杂，计算困难，并不能真正的应用于临床。

因此，如何判断男性精子质量对不孕或流产的影响，成为目前男性不育诊治的障碍。

笔者所在生殖中心实验室人员在做实验室质控时发现，有些样本的精子在培养箱内存活时间较长，最长可达7 d，但有些精液标本在培养箱内存活较短，最短的在24 h内完全死亡，那么精子在体外的存活时间是否也是男性生育力的一种指标呢？笔者设计了如下实验，来了解不明原因不孕症患者的精子存活情况。

1 资料与方法1.1 一般资料选取46对不明原因性不孕夫妇为不孕组，取男方精子，先行常规的动态及形态分析，以WHO第5版标准，活率≥50%，密度≥15×106个/L入选[2]。

排除女方的输卵管异常、染色体异常、生殖系统解剖异常、内分泌异常、生殖系统炎症、ACAb、AsAb、严重的内科合并症等。

同时在围保门诊90例正常受孕的孕中期女性的丈夫，在知情同意的情况下取精，作为对照组，精子动态及形态分析同病例组，正常者入组，共入选61例。

1.2 方法采用Falcon无菌取精杯取精后用伟力精子自动检测仪进行动态分析，取1 ml 精液置入5 ml无菌、无毒Falcon试管内，放入5%CO2、湿度55%、37 ℃恒温培养箱内，液化后，采用HTF精子洗涤培养液洗涤，采用精子上游法优化精子，记录动态参数，每间隔24 h做一次动态分析共5次。

精子常规参数与IVF-ET结局相关性的临床研究刘海娟，胡海翔，徐少强，罗少波［摘要］目的探讨精子常规参数与体外受精-胚胎移植结局的相关性。

方法回顾性分析2018年1—12月在空军特色医学中心接受体外受精-胚胎移植(in vitro ferfizafion-embryo transfer,IVF-ET)治疗的49例不育患者，分为精液质量异常组和正常组，比较2组患者的临床结局。

结果2组年龄、不育年限、其性伴侣年龄、胚胎移植日子宫内膜的厚度、胚胎移植日雌二醇水平比较，差异均无统计学意义(P>0.05)。

精子密度、活动率、活动力(a+b级)、正常形态百分率组间比较，差异均有统计学意义(P<0.05)。

精液质量异常组和正常组临床妊娠率分别为16.7%和44%,差异有统计学意义(*=4.307, P=0.038)。

结论精子常规参数对IVF-ET临床结局有一定影响作用，进一步证实将精子常规参数的检査作为男性不育症基础检测项目的必要性。

［关键词］精子常规参数，精子形态，体外受精-胚胎移植，临床结局［中图分类号］R828.1［文献标识码］A［文章编号］2095-3402(2020)06-506-03DOI：10.3969/j.issn.2095-3402.2020.06.014Correlations between routine parameters of sperms and IVF-ET outcomeLIU H aijuan*HU H aixiang,XU S haoqiang,LUO Shaobo.*Department of E ndocrinology,Dongzhimen Hospital,Beijing University of Chinese Medicine,Beijing100700,ChinaCorresponding author:HUHaixiang,E-mail:*******************[Abstract]Objective To explore the correlation between routine parameters of sperms and IVF-ET outcome. Methods Retrospective analysis was conducted of49patients with infertility who had receivedlVF-ET treatment at the Air Force Specialty Medical Center between January and December in2018.These patients weredivided into the abnormal semen quality group and normal group.The difference in clinical outcomes was compared between these two groups. Results There was no statistically significant difference between the two groups in age,years of infertility,age of their sexual partners,thickness of the endometrium or levels of E2on the day of ET(P>0.05).However,there was statistically significant significance in sperm density,activity rate,activity(a+b)and percentage of normal morphology between the two groups(P<0.05).The rate of clinical pregnancy in the abnormal group was16.7%,compared with44%in the normal group.There was statistically significant significance between the two groups(才=4.307,P=0.038).Conclusion The routine parameters of sperms have some effect on the clinical outcomes of IVF-ET.There is the need to consider the examination of routine parameters of sperms a basic testing item for male infertility.[Key words]routine parameters of sperm;sperm morphology;IVF-ET;clinical outcome随着人们生活习惯、饮食偏好、工作环境等潜移默化的演变，不孕不育发病率呈逐年上升趋势叫不育症是生殖医学领域重要的研究课题之一。