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丙戊酸对乳腺癌细胞放射敏感性的影响

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丙戊酸对乳腺癌细胞放射敏感性的影响赵锡鹏，罗月，董超，张凤梅，凤志慧（山东大学公共卫生学院环境与健康系，山东济南250012）

摘要：目的探讨丙戊酸（VPA）对乳腺癌细胞MCF7放射敏感性的影响。方法MCF7细胞用VPA临床安全剂量0．5mmol·L－1和临界剂量1mmol·L－1分别预处理0，24，48和72h，8Gy电离辐射后6h，免疫荧光染色法观察磷酸化组蛋白H2AX（γ-H2AX）焦点形成。对数生长期的MCF7细胞分别以VPA0．5

和

1mmol·L－1预处理72h，4Gy电离辐射后48h，MTT法检测细胞存活率。MCF7细胞用VPA0．5mmol·L－1

预

处理24h后，按照每皿接种细胞数分别给予电离辐射2Gy（每皿500和1000），4Gy（每皿2000和4000）和6Gy（每皿8000和16000），计算克隆形成率。MCF7细胞分别用VPA0．5和1mmol·L－1预处理0，24，48和72h，流式细胞仪检测细胞周期。结果与正常对照组相比，单独VPA0．5mmol·L－1

处理0，24，48

和72h后，γ-H2AX焦点阳性率分别为（5．3±0．6）%，（10．8±1．0）%，（12．6±0．9）%和（17．8±1．1）%（r

=

0．985，P＜0．05）；VPA1mmol·L－1对γ-H2AX焦点形成有相同的影响趋势。单独照射组细胞核内γ-H2AX焦点阳性率为100%，其中表示DNA损伤较重的焦点较大且明亮的B类细胞所占比例为（16．5±1．8）%；与单独照射组相比，VPA0．5mmol·L－1预处理0，24，48和72h后，B类细胞所占比例分别为（16．5±1．8）%，（28．9±1．0）%，（58．0±2．0）%和（70．8±0．9）%（r=0．986，P＜0．05）；VPA1mmol·L－1对辐射诱导的γ-H2AX

焦点形成的影响有相同趋势。MTT和细胞克隆形成实验结果显示，与正常对照组相比，单独给予VPA0．5mmol·L－1

可显著降低细胞克隆形成率（P＜0．05）；与单独照射组相比，VPA预处理后接受电离辐射能显

著降低细胞存活率（P＜0．05）和细胞克隆形成率（P＜0．05）；VPA0．5和1mmol·L－1对细胞周期影响均无统计学差异。结论临床安全剂量和临界剂量VPA对肿瘤细胞具有放射增敏作用，且对肿瘤细胞生长具有抑制作用，其机制与增加电离辐射所致的DNA双链断裂损伤的蓄积有关。关键词：丙戊酸；乳腺癌；DNA损伤；放射增敏；细胞周期中图分类号：R979．1文献标志码：A文章编号：1000-3002（2015）02-0247-06DOI：10．3867/j．issn．1000-3002．2015．02．010

丙戊酸（valproicacid，VPA）在临床上被广泛应用于治疗癫痫病和其他痉挛性疾病，是具代表性的组蛋白去乙酰化酶（histonedeacetylase，HDAC）抑制剂之一［1］。近年来研究发现，VPA、伏立诺他、曲古抑菌素A和苯异羟肟酸-24781等新型HDAC抑制剂均可以造成DNA双链断裂增加［2］，例如苯异羟肟酸-24781能显著增加HCT116，NCI-H460和A549细胞对电离辐射（ionizingradiation，IR）的敏感性，使其细胞克隆形成率明显下降［3］；伏立诺他可抑制人卵巢癌紫杉醇耐药细胞OC3/P的基金项目：国家自然科学基金（81172527）；国家自然科学基金项目（81472800）；山东省科技发展计划（2013GGE27052）作者简介：赵锡鹏（1988－），男，硕士研究生，主要从事DNA损伤修复的分子机制与放射毒理研究。通讯作者：凤志慧，E-mail：fengzhihui@sdu．edu．cn，Tel：（0531）88382137存活，对肝癌细胞具有杀伤作用［4－5］。已有研究报

道，VPA1mmol·L－1可增强乳腺癌细胞对IR的敏感性［6］，但VPA治疗癫痫病的正常血药浓度为50～120mg·L－1（相当于0．3～0．8mmol·L－1

）。VPA在

治疗癫痫病的安全血药剂量或临界剂量内对乳腺癌细胞放射敏感性的影响尚未见报道。故本研究选择VPA在癫痫治疗的临床安全剂量0．5mmol·L－1

和临界

剂量1mmol·L－1，探讨其对乳腺癌细胞放射敏感性的影响，为应用于肿瘤放射治疗提供实验依据。

1材料与方法

1．1细胞和主要试剂

MCF7细胞购自美国ATCC公司；胎牛血清购

自美国Hyclone公司；高糖DMEM购自上海立菲生物技术有限公司；胰蛋白酶购自北京索莱宝生物科技有限公司；VPA，MTT和DAPI均购自美国Sigma公司；抗磷酸化的组蛋白H2AX（γ-H2AX）

抗体购自

·742·中国药理学与毒理学杂志2015年4月第29卷第2期ChinJPharmacolToxicol，Vol29，No2，Apr2015美国Millipore公司；荧光标记羊抗鼠二抗购自美国Invitrogen公司。1．2仪器设备CO2细胞培养箱，北京博奥恒信生物科技有限公司；超净工作台，济南杰康净化设备厂；8孔细胞培养板，美国BD公司；普通光学倒置显微镜、荧光显微镜，日本Olympus公司；PrimusS型医用直线加速器，德国西门子公司；电泳仪，美国Bio-Rad公司；高速离心机，美国Thermo公司；M200PRO酶标仪，瑞士Tecan公司。1．3细胞培养MCF7细胞培养于含10%胎牛血清的DMEM培养基中，置于37℃，5%CO2饱和湿度培养箱中，培养至80%～90%融合度时，用0．25%含EDTA胰酶消化传代。取对数生长期的细胞进行实验。1．4电离辐射将受试细胞置于医用直线加速器上接受IR处理。细胞照射的条件：6MVX射线，吸收剂量率2．33Gy·min－1；射野为40cm×40cm。根据吸收剂量率，计算IR剂量2，4，6和8Gy照射细胞所需的时间分别为0．86，1．72，2．58和3．43min。1．5免疫荧光染色实验观察焦点形成MCF7细胞消化后接种于4块8孔细胞培养板中，用VPA0．5和1mmol·L－1预处理细胞24，48和72h，取其中2块板接受8Gy的IR照射，另2块板无IR处理，均继续培养6h后，PBS洗3次，室温下用4%甲醛固定15min，0．2%TritonX-100处理10min，PBS洗3次，10%血清37℃封闭30min。用含1%BSA-0．1%TritonX-100的PBS按1∶500稀释γ-H2AX一抗，4℃孵育过夜后，按1∶300稀释羊抗鼠荧光标记二抗，室温下避光封闭40min。PBS洗后，用DAPI（0．1mg·L－1）染色2min，用抗荧光淬灭剂封片，荧光显微镜下观察焦点形成情况。焦点形成的判定标准：①无IR暴露条件下，以细胞核内焦点数＞10者定为阳性细胞；②IR暴露条件下，因受照射细胞均有大量γ-H2AX焦点形成，根据焦点的形态不同将所观察的细胞分成A类和B类细胞，A类细胞内焦点较小而且亮度较弱，B类细胞内焦点较大且明亮。分别计数这两类细胞，进行统计学分析。1．6MTT法检测MCF7细胞存活取MCF7细胞制备细胞悬液，每孔接种6000个细胞于96孔板，每孔100μL。培养过夜，除对照组外，分别用VPA0．5和1mmol·L－1预处理72h，每个梯度设置6复孔，同时设调零孔和对照孔。IR4Gy组和IR+VPA0．5和1mmol·L－1组给予4Gy的IR，照射后44h，每孔加入含20μLMTT的培养液120μL，继续培养4h后，每孔加入150μLDMSO，充分振摇10min，酶标仪在波长490nm处

检测吸光度值（A490nm），计算细胞存活率。细胞存活率（%）=实验组A490nm/对照组A490nm×100%。

1．7细胞克隆形成实验

取MCF7细胞消化制备细胞悬液接种至60mm培养皿中培养。对照组：按每皿500和1000个细胞接种于60mm培养皿中培养；VPA0．5mmol·L－1

组：按每皿500和1000个细胞接种于60mm培养皿中过夜，更换含VPA0．5mmol·L－1继续培养24h后换为新鲜培养液；IR2，4，6Gy组和IR+VPA0．5mmol·L－1

组：按每皿500，1000，2000，4000，8000

和16000个细胞接种于60mm培养皿中，过夜，IR+VPA0．5mmol·L－1组更换为含VPA0．5mmol·L－1

继

续培养24h，随后两组细胞分别给予3个剂量IR照射：2Gy（每皿500，1000个细胞）、4Gy（每皿2000，4000个细胞）和6Gy（每皿8000，16000个细胞）。上

述4个处理组均同时设3个平行对照。培养15d，当培养皿中出现肉眼可见克隆时，用20%乙醇溶解稀释甲素（结晶紫）至0．1%，用该甲紫溶液固定并染色细胞克隆30min后，用去离子水冲洗3次，置空气中干燥。倒置显微镜下计数≥50个细胞的克隆数，结果取平均值，并计算克隆形成率。克隆形成率（%）=每皿克隆数/每皿接种细胞数×100%。

1．8流式细胞仪检测细胞周期

将细胞种于p60培养皿中过夜，除对照组外，分别给予VPA0．5和1mmol·L－1处理24，48和72h，用胰酶消化和收集各组细胞，转移至15mL离心管中，1000×g离心5min，弃上清，加入约5mLPBS，混匀后1000×g离心5min，弃上清。加70%冷乙醇，置于－20℃过夜后1000×g离心5min，弃

上清，PBS洗1次，再次1000×g离心5min，弃上清。室温下PI染液染色30min，用流式细胞仪对细胞周期进行检测。1．9统计学分析

实验结果采用x±s表示，应用SPSS13．O中单因素方差分析（one-wayANOVA）方法中的LSD检验，两组间比较采用t检验。

2结果

2．1VPA对IR诱导的γ-H2AX焦点形成的影响

如图1所示，VPA0．5mmol·L－1处理MCF7细胞24h后，与正常对照组（图1A1和1B1）相比，γ-H2AX焦点数目明显增加（图1A2和1B2），焦点

·842·中国药理学与毒理学杂志2015年4月第29卷第2期ChinJPharmacolToxicol，Vol29，No2，Apr2015

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盐酸二甲双胍增强宫颈癌细胞对放射线敏感性作用

盐酸二甲双胍增强宫颈癌细胞对放射线敏感性作用

盐酸二甲双胍增强宫颈癌细胞对放射线敏感性作用顾兵;曹风军;戈伟【摘要】Objective To investigate the enhancing radiosensitization effect of metformin on cervical cancer Hela cell and to explore its mechanism. Methods The radiosensitization effect was observed by Clone forming assay;Hela cell cycle distribution was detected by flow cytometry method;Apoptotic changes was measured by fluorescence microscope and DAPI(4', 6-diamidino-2-phenylindole) staining; The expression of vascular endothelial growth factor ( VEGF ) protein was detected by Western blotting. Results Compared with radio alone,the cell survival rate was reduced either by combination with metformin or by metforminalone(P<0.05).The cell survival rate also depended on drug by various schedules and drug concentration(P<0.05).Metformin alone or combined with radiation could arrest cell cycle in G2/M phase(P<0.01),induce cell apoptosis.The levels of protein of VEGF was decreased by metformin, radiation alone or combination( P<0.05) . Conclusion Metformin has a radiosensitization effect on Hela cell cultured in vitro, which may be related to arresting in G2/M phase, inducing cell apoptosis and down-regulating the level of VEGF protein.%目的研究盐酸二甲双胍对人宫颈癌Hela 细胞株的体外放射增敏作用及其机制.方法克隆形成法检测盐酸二甲双胍放射增敏作用及给药时序、浓度的影响;流式细胞法检测细胞周期分布;4',6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)染色镜下观察法检测细胞凋亡情况;Western blotting法检测血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达.结果盐酸二甲双胍与放射线联合作用后细胞存活率均较单纯放射组明显降低(P<0.05),不同浓度、不同时序处理,细胞存活率差异有统计学意义,先照射后给药效果优于先给药后照射(P<0.05);盐酸二甲双胍与放射线均能将Hela细胞阻滞于G2/M期,联用阻滞效果更加显著(P<0.01);盐酸二甲双胍与放射线均能破坏细胞核,联用后细胞核皱缩、碎裂现象更加显著;盐酸二甲双胍与放射线单独及联用均能下调VEGF蛋白表达(P<0.05).结论盐酸二甲双胍可通过阻滞宫颈癌Hela细胞周期于G2/M期、下调VEGF蛋白表达来诱导细胞发生凋亡并增强其对放射线的敏感性.【期刊名称】《医药导报》【年(卷),期】2017(036)011【总页数】5页(P1255-1259)【关键词】盐酸二甲双胍;癌,宫颈;放射增敏【作者】顾兵;曹风军;戈伟【作者单位】武汉大学人民医院肿瘤中心,武汉 430060;湖北医药学院附属人民医院肿瘤中心,十堰 442000;武汉大学人民医院肿瘤中心,武汉 430060【正文语种】中文【中图分类】R977;R965盐酸二甲双胍(metformin，Met)是治疗糖尿病的一线药物，目前在妇科临床上主要用于改善多囊卵巢综合征患者的胰岛素抵抗和高胰岛素血症。

槲皮素对宫颈癌Hela细胞放疗增敏及抑制转移的作用研究

槲皮素对宫颈癌Hela细胞放疗增敏及抑制转移的作用研究

槲皮素对宫颈癌Hela细胞放疗增敏及抑制转移的作用研究槲皮素对宫颈癌Hela细胞放疗增敏及抑制转移的作用研究摘要：宫颈癌是女性常见的恶性肿瘤之一，放疗是宫颈癌的主要治疗手段之一。

然而，宫颈癌患者的放疗效果存在一定的局限性，因此，提高放疗的生物学效果成为临床亟需解决的问题之一。

槲皮素是一种天然化合物，近年来研究表明其具有抗肿瘤活性。

本研究旨在探究槲皮素对宫颈癌Hela细胞放疗增敏及抑制转移的作用。

方法：本研究利用体外细胞实验，采用CCK-8法和划痕实验评估槲皮素对Hela细胞株的增敏及抑制转移作用。

同时，通过Western blot检测细胞凋亡相关蛋白的表达水平。

结果：实验结果表明，槲皮素在一定浓度下能显著抑制Hela细胞的增殖，同时明显促进细胞凋亡。

此外，槲皮素还能显著降低Hela细胞的迁移和侵袭能力。

进一步的Western blot结果表明，槲皮素能显著上调细胞凋亡相关蛋白（如Bax、Cleaved Caspase-3）的表达水平，同时下调抗凋亡蛋白（如Bcl-2）的表达水平。

结论：本研究发现，槲皮素具有抑制宫颈癌Hela细胞增殖及抑制转移的作用，并且能增强Hela细胞对放疗的敏感性。

这些结果表明，槲皮素可能成为宫颈癌辅助放疗的潜在药物。

然而，本研究仅仅是体外细胞实验，并未涉及动物模型和临床试验，因此，还需要进一步的研究来验证槲皮素的抗肿瘤活性以及其在宫颈癌治疗中的临床应用前景。

关键词：槲皮素；宫颈癌；Hela细胞；放疗；增敏；抑1. 引言宫颈癌是女性常见的恶性肿瘤之一，近年来其发病率呈现上升的趋势。

放疗是宫颈癌的主要治疗手段之一，可以通过直接杀死肿瘤细胞或者抑制肿瘤细胞的增殖来达到治疗的效果。

然而，宫颈癌患者的放疗效果存在一定的局限性，例如放疗后会出现耐药现象，一些肿瘤细胞可能通过转移方式逃避放疗的杀伤，从而导致治疗效果的降低。

因此，提高放疗的生物学效果成为临床亟需解决的问题之一。

槲皮素是一种天然化合物，广泛存在于多种植物中。

tch治疗方案

tch治疗方案

TCH治疗方案简介TCH治疗方案是一种针对特定疾病的药物治疗方案。

该方案使用三种不同的药物组合，分别为Taxotere、Carboplatin和Herceptin，简称TCH。

TCH治疗方案主要用于乳腺癌患者，尤其是HER2阳性乳腺癌患者。

HER2阳性乳腺癌是一种具有较高风险和较差预后的特殊类型的乳腺癌。

TCH治疗方案被证实可以显著改善疾病预后，提高治愈率和生存率。

药物成分TCH治疗方案包含三种药物：Taxotere、Carboplatin和Herceptin。

TaxotereTaxotere是一种紫杉醇类抗肿瘤药物。

它通过干扰肿瘤细胞的有丝分裂过程，抑制细胞增殖，从而抑制肿瘤的生长和扩散。

Taxotere可以有效治疗乳腺癌，并且被广泛应用于不同阶段的乳腺癌治疗中。

CarboplatinCarboplatin是一种含铂类抗肿瘤药物。

它通过与DNA结合，阻碍DNA合成和修复，从而杀死肿瘤细胞。

Carboplatin可以增强乳腺癌对化疗的敏感性，并且与Taxotere联合使用可以协同作用，提高治疗效果。

HerceptinHerceptin是一种针对HER2阳性乳腺癌的靶向治疗药物。

它通过结合HER2受体，抑制信号通路，阻断肿瘤细胞的生长和扩散。

Herceptin可以减少HER2阳性乳腺癌的复发和转移风险，提高患者的生存率和治愈率。

治疗方案TCH治疗方案通常以化疗周期进行，每个周期的时间间隔为3周。

具体的方案如下：1.第1周期：Taxotere（75毫克/平方米）+ Carboplatin（AUC 6）+Herceptin（初始剂量8毫克/平方米）2.第2-6周期：Taxotere（75毫克/平方米）+ Carboplatin（AUC 6）+Herceptin（维持剂量6毫克/平方米）在治疗期间，医生会根据患者的具体情况进行剂量调整和药物组合调整，以达到最佳治疗效果。

不良反应TCH治疗方案可能会引起一些不良反应，具体包括：1.骨髓抑制：包括白细胞减少、贫血和血小板减少等。

注射用醋酸亮丙瑞林微球治疗雌激素受体阳性的绝经前乳腺癌

注射用醋酸亮丙瑞林微球治疗雌激素受体阳性的绝经前乳腺癌

注射用醋酸亮丙瑞林 微球治疗雌激素受体 阳汇性报人：的WPS 绝经前乳腺癌
目录
注射用醋酸亮丙瑞 林微球的作用机制
注射用醋酸亮丙瑞 林微球的临床应用
注射用醋酸亮丙瑞 林微球的疗效评价
注射用醋酸亮丙瑞 林微球的作用机制
醋酸亮丙瑞林 微球是一种长 效缓释制剂， 可以持续释放 药物，减少给
药次数。
醋酸亮丙瑞林 微球通过抑制 雌激素受体阳 性的乳腺癌细 胞的生长和繁 殖，达到治疗
因此，醋酸亮 丙瑞林微球对 雌激素受体阳 性的绝经前乳 腺癌具有治疗
作用
醋酸亮丙瑞林微球是一种长效的促性腺激素释放激素（GnRH）激动剂 它可以抑制卵巢功能，降低雌激素水平，从而抑制乳腺癌细胞的生长 醋酸亮丙瑞林微球在绝经前乳腺癌治疗中具有重要的地位，因为它可以控制病情，延长生存期 醋酸亮丙瑞林微球与其他药物联合使用，可以提高治疗效果，降低复发风险
长期疗效评价还显示，注射用醋酸亮丙瑞林微球在治疗过程中，患者的生活质量得到了显 著提高。
长期疗效评价表明，注射用醋酸亮丙瑞林微球是一种安全、有效的治疗方法，值得在临床 上推广使用。
疗效：注射用 醋酸亮丙瑞林 微球在治疗雌 激素受体阳性 的绝经前乳腺 癌方面具有显
著疗效
安全性：与其 他治疗方法相 比，注射用醋 酸亮丙瑞林微 球的安全性较
效果。
醋酸亮丙瑞林 微球还可以调 节患者的激素 水平，减轻更
年期症状。
醋酸亮丙瑞林 微球的作用机 制还包括促进 骨密度增加， 预防骨质疏松。
醋酸亮丙瑞林 微球是一种合 成的促性腺激
素释放激素 （GnRH）类似
物
它通过抑制雌 激素受体阳性 细胞的生长和 繁殖，从而降 低雌激素水平
醋酸亮丙瑞林 微球还可以诱 导雌激素受体 阳性细胞的凋 亡，进一步减 少雌激素水平