目录
实验一显微摄影术
实验二细胞凝集反应与细胞膜的渗透性
实验三线粒体和液泡系的超活染色与观察
实验四叶绿体的分离与荧光观察
实验五石蜡切片法
实验六植物染色体标本的制备与观察
实验七动物细胞培养
原代细胞培养
传代细胞培养与观察
实验一显微摄影术
一、实验目的
掌握显微摄影装置及其操作技术;独立完成显微摄影全过程
二、实验用品
1.器材:
复式显微镜及其摄影装置、黑白胶片、显影罐、温度计、电炉、暗房袋、暗盒、相纸、剪刀、塑料盘、烧杯、量筒、天平、生物样品等
2.试剂:
①显影液(D72通用显影液):
用50℃蒸馏水150ml,先将小袋药粉溶解,再将大袋药粉放入,搅动至完全溶解,加水至250ml.待温度降至20℃左右时使用.
②定影液:
用50℃蒸馏水150ml将药粉完全溶解后,加水至250ml,待温度降至约20℃时使用.
三、实验原理与方法
显微摄影使通过摄影装置,拍摄显微镜视场中被检样品的光学影象的一种技术.
具体实验步骤以简图表示如下:
显微摄影装置的安装与调试
显微镜的光路调整:通过调中,使照明光束与显微镜的光学系统的光轴合一.
装入胶片
取景聚焦
暴光:1/15sec(应先测光:绿灯亮可以正确暴光)
黑白胶片的冲洗:显影3min→停显10sec→定影15min→水洗:流水冲洗
30min→晾干
印相放大:取景聚焦→暴光→显影→停显10sec→定影15min→水洗:流水冲洗30min
上光剪切
四、实验结果与分析
独立完成摄影操作、上交一张照片并对所拍摄的样品加以简要说明;分析拍摄中应注意的主要问题及改进措施.
实验二细胞凝集反应与细胞膜的渗透性
一、实验目的：
了解细胞膜的表面结构；细胞膜的渗透性及各种物质进入细胞膜的速度。
二、实验的原理：
（一）细胞凝集反应
细胞膜是由脂类双分子层镶嵌蛋白质构成的单位膜，而脂类和蛋白质又与糖分子结合为细胞表面的分枝状糖外被。
凝集素是一类可逆结合特异糖基的蛋白质，具有使细胞凝集、血型鉴定、促进淋巴细胞分裂、防害抗虫等作用。凝集素使细胞凝集是由于它与细胞外被的寡糖链相连接，起到“桥”的作用。
（二）细胞膜的渗透性
细胞膜是细胞与环境之间进行物质与能量交换的一种选择性通透屏障，可选择性地控制不同物质进出细胞，各种物质跨膜运输的方式是不同的，物质的通透性是由物质本身属性和膜的结构性质（如脂溶性、分子大小、所带电荷等）共同决定的；另外物质穿膜的通透性还要受到细胞生理状态和环境条件（如麻醉剂、热、辐射、pH值、盐不平衡等）的影响。
渗入红细胞内的物质，增加了细胞内的渗透压，使细胞外的水分进入红细胞，细胞膨胀破裂，称为溶血。由于各种物质透入细胞的速度不同，溶血的时间不同。
三、实验用品
1.器材:显微镜、天平、载玻片、滴管、离心管、烧杯、10ml移液管、试管、试管架
2.材料:土豆块茎
3.试剂:２％鸭血红细胞、PBS缓冲液、土豆、0.17mol/L氯化钠、0.32mol/L乙醇等试剂
四、实验方法
(一)细胞凝集反应
1２％鸭血红细胞悬液制备
新鲜鸭血加ＡＣＤ抗凝剂，生理盐水洗５次，每次２０００r/min，离心５min，按红细胞压积用生理盐水配成２％鸭血红细胞悬液．
2土豆凝集素制备
土豆２克，加１０mlＰＢＳ缓冲液，浸泡２h.
3细胞凝集反应
土豆凝集素１滴
２％鸭血红细胞液１滴
载玻片上混匀，静置２０min，镜检．
４对照
ＰＢＳ１滴
２％鸭血红细胞液１滴
（二）细胞膜的渗透性
１低渗溶液
试管一支：
鸭血红细胞液１ml
ddH2O10ml
轻摇混匀，观察颜色变化，若有溶血，记下自加入鸭血到溶液透明澄清的时间（注意结合镜检）．
２等渗溶液
0.17mol/L氯化钠、0.17mol/L氯化铵、0.17mol/L醋酸铵、0.17mol/L硝酸铵、0.12mol/L草酸铵、0.12mol/L硫酸铵、0.32mol/L葡萄糖、0.32mol/L甘油、
0.32mol/L乙醇、0.32mol/L丙酮等８种溶液进行同样实验，步骤同上．
五、结果与讨论
1.简图表示血细胞凝集原理;
2.以图表的方式记录细胞渗透性的实验结果并进行比较分析．
实验三线粒体和液泡系的超活染色与观察
一实验目的
１观察动植物活细胞内线粒体、液泡系的形态数量与分布；
２学习一些细胞器的超活染色技术．
二实验原理
活体染色是指对生活有机体的细胞或组织能着色但又无毒害的一种染色方法.其目的是显示生活细胞内的某些结构,而不影响细胞的生命活动和产生任何理化变化以致引起细胞死亡.活染技术可用来研究生活状态下的细胞形态结构和生理、病理状态.
根据所用染色剂的性质和染色方法的不同,活体染色可分为体内活染与体外
活染两类.体内活染是以胶体状的染料溶液注入动植物体内,染料的胶粒固定于细胞内某些特殊结构内以达到易于识别的目的.体外活染又称超活染色，是由活的动植物分离出部分细胞或组织小块，以染料溶液浸染，染料因其＂电化学＂特性与被染部分相互吸引被选择固定在活细胞的某种结构中而显色．
但不是任何染料都可作为活体染色剂使用,一般应选择那些无毒或毒性小的
碱性染料(易溶于类脂质)并配成较稀的溶液来使用.詹纳斯绿Ｂ和中性红两种碱性染料是活体染色中重要的染料，对线粒体和液泡系的染色各有专一性．詹纳斯绿Ｂ可专一性地对对线粒体进行活染,这是由于线粒体内的细胞色素氧化酶系的作用,使染料始终保持氧化状态(即有色状态),呈蓝绿色;而线粒体周围的细胞质中,这些染料被还原为无色的色基.中性红对液泡系的染色具有专一性,只将活细胞中的液泡系染成红色,细胞核和细胞质不着色,这可能与液泡中的某些蛋白质有关.
三实验用品
１器材：
显微镜、恒温水浴锅、、剪刀、镊子、解剖刀、载玻片、盖玻片、吸管、牙签、吸水纸
