消毒剂消毒效力及有效期验证
方案(总10页)
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消毒剂的选用原则：
目的：确认各洁净级别的操作间及设备外表面按照规定的消毒程序消毒能够达到消毒、防止污染的目的，并在消毒剂有效期内能确保其消毒效力能符合要求。
范围：本验证方案适用于本公司洁净区的墙面、天花板、门窗、机器设备、仪器、操作台、地漏、推车、桌椅等表面以及操作人员双手（手套）的消毒等。
1.参考文件
1.1.《医疗器械生产质量管理规范》
1.2.《中国药典》2015版第4部微生物限度检查法
2.概述
2.1.本公司的洁净区为D级，拟定用于洁净区表面消毒的有五种消毒剂：75%乙醇、%新洁
尔灭溶液、%新洁尔灭溶液、%醋酸氯己定溶液、%醋酸氯己定溶液。本次验证方案将选
用以上5种消毒剂分别进行验证试验。
作用对象一样的消毒剂每月轮换使用，避免表面微生物产生耐药菌株。在利用消毒剂
进行表面擦拭消毒过程中消毒剂的作用时间应不少于10分钟，利用消毒剂进行浸泡消
毒
的不少于5分钟。
消毒剂的种类、消毒对象、消毒方法和有效期
2.2.
中，用定量悬浮试验法和表面实验法进行实验室考察试验部分。
洁净区设施表面材质基本都是不锈钢和玻璃两种，故表面试验法选用不锈钢载片和玻
璃裁片模拟洁净区设施表面进行验证试验。
两种试验方法作用的消毒剂见表。
行取样，测定其微生物数量。
3.确认前准备
3.1.验证用试剂与材料
3.1.1.菌种
3.1.2.
规格：：55mm，取样面积为25m2
3.1.3.消毒液拟定选用的中和剂
%无菌氯化钠溶液（NS）
3.1.5.器具及设备
3.2.
4.消毒剂消毒效力试验
4.1.中和剂鉴定试验
4.1.1.试验目的
通过该试验，确认所用的中和剂对对应的消毒剂有良好的中和作用，对试验用菌剂及其恢复期培养示范有害或不良影响。
4.1.2.菌液的制备及计数
4.1.2.1金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草杆菌芽孢菌工作菌液的制备
接种金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草杆菌芽孢菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中，30～35℃培养18～24小时。取上述培养物用％无菌氯化钠溶液做10倍系列稀释成1×108~5×108CFU/ml的工作菌液（如肉汤培养物的浓度已为
1×108~5×108CFU/ml，可不再用％无菌氯化钠溶液稀释）。
计数时，将1×108~5×108CFU/ml的工作菌液10倍系列稀释成含50～100CFU/ml菌液，并同时采用营养琼脂培养基30～35℃培养2天计数。计算该稀释级的平均菌落数，将计数结果换算成每毫升浓菌液的菌落数。
4.1.2.2白色念珠菌工作菌液的制备
接种白色念珠菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中，23～28℃培养24～48小时。取上述培养物用％无菌氯化钠溶液做10倍系列稀释成1×108~5×108CFU/ml 的工作菌液（如肉汤培养物的浓度已为1×108~5×108CFU/ml ，可不再用％无菌氯化钠溶液稀释）。计数时，将1×108~5×108CFU/ml 的工作菌液10倍系列稀释成含50～100CFU/ml
菌液，并同时采用改良马丁琼脂培养基23～28℃培养3天计数。计算该稀释级的平均
菌落数，将计数结果换算成每毫升浓菌液的菌落数。 4.1.3. 鉴定试验操作
4.1.3.1配制75%乙醇、%新洁尔灭溶液、%新洁尔灭溶液、40mg/L 的二氧化氯、60mg/L 的二氧
化氯，具体操作执行《清洁剂和消毒剂管理》。将配置好的消毒剂置20℃±1℃恒温水浴锅中备用。 4.1.3.2分组操作
试验分组及稀释操作方法简表
第1组
目的：观察消毒液对试验菌有无杀灭或抑制能力。 操作：
取消毒剂+工作菌液，混匀作用10min 后，取混合液+稀释液，混匀作用10min ，取注皿，平行制备2皿。金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草杆菌芽孢菌用营养琼脂培养基，倒置30～35℃培养3天计数；白色念珠菌用玫瑰红钠琼脂培养基，倒置23～28℃培养5天计数计数。 第2组
组号 混合液A
混匀作用 10min
混合液B 混匀作用 10min
取混合液B 或混合液B 的稀释级溶液平板计数（2皿/组） 取工作菌液加入下
列溶液中 取混合液 A 加入下列溶液 1 消毒剂 稀释液 混合液B 、10-1
2 消毒剂 中和剂 混合液B 、10-1
3 中和剂
稀释液 10-2
、10-3
4 中和产物（消毒液与中和剂比例为1:1） 稀释液 10-2
、0-3
5 稀释液
稀释液
10-2
、10-3
6
稀释液和中和剂各注入无菌平皿中，各制备2皿。
目的：观察残留消毒剂被中和后受到消毒剂作用后的试验菌是否恢复生长。
操作：
取消毒剂+工作菌液，混匀作用10min后，取混合液 +中和剂，混匀作用10min，用稀释液稀释成10-1。分别取未稀释溶液（混合液+中和剂的混合液）及10-1注皿，各平行制备2皿。金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草杆菌芽孢菌用营养琼脂培养基，倒置于30～35℃培养3天计数；白色念珠菌用玫瑰红钠琼脂培养基，倒置于23～28℃培养5天计数。
第3组
目的：观察中和剂是否有抑菌性
操作：
取中和剂+工作菌液，混匀作用10min，取混合液 l+稀释液，混匀作用10min后，用稀释液进行10倍系列稀释成10-2、10-3。取相应稀释级注皿，各稀释级平行制备2皿。金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草杆菌芽孢菌用营养琼脂培养基，倒置30～35℃培养3天计数；白色念珠菌用玫瑰红钠琼脂培养基，倒置30～35℃培养3天计数计数。
第4组
目的：观察中和产物，或未被完全中和残留消毒剂对试验菌的生长繁殖是否有影响。操作：
取消毒剂和中和剂1:1的混合液+工作菌液，混匀作用10min，取混合液 l+稀释液，混匀作用10min后，用稀释液进行10倍系列稀释成10-2、10-3。取相应稀释级注皿，各稀释级平行制备2皿。金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草杆菌芽孢菌用营养琼脂培养基，倒置30～35℃培养3天计数；白色念珠菌用玫瑰红钠琼脂培养基，倒置30～35℃培养3天计。
第5组
目的：作菌落数对照用
操作：
取稀释液+工作菌液，混匀作用10min，取混合液 l+稀释液，混匀作用10min后，用稀释液进行10倍系列稀释成10-2、10-3。取相应稀释级注皿，各稀释级平行制备2皿。金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草杆菌芽孢菌用营养琼脂培养基，倒置30～35℃培养3天计数；白色念珠菌用玫瑰红钠琼脂培养基，倒置30～35℃培养3天计数。
