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农业植物病理学实验指导农业植物病理学是农业生产中极为重要的学科之一，其研究的是农作物疾病的发生与预防。
为了更好地培养学生的病理实验操作能力，本文将提供一份简单的农业植物病理学实验指导。
1. 实验一：植物病原菌的分离和鉴定实验目的：掌握分离与鉴定植物病原菌的方法，理解病原学的基础概念。
实验原料：感染有病征的植株、消毒剂、无菌玻璃棒、琼脂、静置培养皿、荧光显微镜。
实验步骤：1. 从感染病株中取样。
用无菌玻璃棒在感染病株的表面轻刮几次，然后在无菌培养基上划一条线。
2. 将无菌玻璃棒沾上感染样品，并将其划到无菌培养基上，将其密封，将其放入37℃的温室中培养3-5天。
3. 检查接种坛中的细菌单个斑点，清除任何后来发现的杂细菌，然后进行细菌鉴定，以识别不同的菌株。
使用荧光显微镜和其他实验技术来确定不同的菌株。
实验结果：1. 获得了可研究的植物病原菌。
2. 学生理解了病原学的概念和关键技术。
2. 实验二：植物病害综合鉴定实验目的：应用综合鉴定法确认植物病害。
实验原料：受感染的植物样品，显微镜、手镰、组织切片、滴定管、生长瓶、测试器。
实验步骤：1. 阐述农业病害发生的原因和病害的分类。
培养出病原菌后，学生将初步考虑在何种植物病害范围内进行综合鉴定。
2. 制备切片，利用显微镜查看组织细胞的变化，以确定该病是有效的。
3. 测试样品以确保它是含有特征性病原体的。
除了使用显微镜查看组织切片外，还可以使用滴定管和生长瓶来测试样品的pH、氧含量、有机成分等信息。
4. 将所有数据纳入综合考虑，从而确定植物病害的类型、发展和所需的病虫害防治措施。
实验结果：1. 确定了植物病害的类型和发展。
2. 学生掌握了植物病害检测的重要步骤。
3. 实验三：生物防治法实验目的：为学生提供基本原则和技术，了解生物防治如何减少植物病虫害的损失。
实验原料：扁豆种子、法国圆白菜的幼苗、甜菜虫、灰蝉、昆虫脂肪。
实验步骤：1. 学生准备研究模型—扁豆或法国圆白菜幼苗，然后在其中一部分植物上覆盖甜菜虫或灰蝉，让它们大肆繁殖和吃掉幼苗。
常用的几种典型的病原菌分离方法1．斑点病原菌的分离从病斑部分切取每边3～5 mm的小块组织，在70％酒精中浸数秒钟后，移入0.1％的升汞水溶液中处理3～5 min，以灭菌水冲洗3次，移置培养皿的培养基中，然后培养。
2．维管束组织内病原菌的分离从根茎维管束组织分离病菌，可先将寄主病部表面用70％酒精擦拭消毒，将表皮组织用灭菌的解剖刀削去，然后切取其中小块变色的维管束组织，用升汞或漂白粉液消毒后。
，用灭菌水冲洗几次，移置培养基面上。
3．根腐病病原菌的分离根腐或基腐病的分离，由材料的大小决定。
材料小的可仿照斑点病的分离法，材料大的则可以用维管束组织内病原的分离法。
4．肉质组织中病原菌的分离多肉的根、茎及果实等，可以采用维管束组织内病菌分离法除去表面组织，切取小块病组织分离。
如有杂菌感染可采用“直接接种”法，待出现症状后，用此法再行分离。
5．种子内病原菌分离将整个种子或者种子的一部分进行表面消毒(升汞或漂白粉)，用灭菌水洗涤后，移置培养基上。
6．孢子分离法能产生大量孢子的病菌如青霉素、链格孢等，则可配制成孢子悬浮液以稀释法或划线法分离之。
7、土壤带菌分离法为了研究一些真菌在土壤中存活和分布的情形，从有病的土壤中分离它们是必要的。
分离方法是将土壤取出少许，配制成悬浮液，然后用稀释法或划线法分离。
附录2 真菌单孢子分离技术一、目的要求了解单孢分离技术的基本原理，掌握简便实用的单孢分离方法。
二、基本原理单孢分离的方法很多，如振落法、稀释法和直接挑取法。
振落法和稀释法的共同点都是采用某种方法，使真菌孢子较稀疏地分散在水琼脂平板上，然后在显微镜下检查寻找在水琼脂平板表面的单个孢子，一旦找到理想的单个孢子，就通过无菌操作将其(连同一部分培养基)移植到PDA斜面培养基上，置适温下培养，形成的菌落即为单孢系菌株。
直接挑取法是在实体解剖镜下直接挑取单个孢子进行分离纯化的方法。
三、材料、用具与仪器1．材料(依本地资源情况进行选择，下列材料供参考)(1) 稻瘟病叶、病节、病穗颈(Pyricolaria oryzae)。
临床上鉴定病原菌的流程
临床上鉴定病原菌的流程一般包括以下步骤：
1. 临床表现与病史：医生首先对患者的临床表现和病史进行详细的了解和分析，包括症状、体征和患病时间等。
2. 采集临床样本：医生根据患者的症状选择合适的临床样本进行采集，常见的样本包括血液、尿液、呼吸道分泌物、组织活检等。
3. 样本处理和预处理：采集到的样本需要进行处理和预处理，以去除干扰物质，并提高病原菌的浓度和纯度。
常见的预处理方法包括离心、滤液、稀释等。
4. 细菌培养：将处理后的样本接种到含有合适营养物的培养基上进行培养，以创造繁殖菌的适宜环境。
不同病原菌有不同的培养条件和时间，常见的培养方法包括血平板法、McConkey平板法等。
5. 菌落鉴定：根据菌落的外形、颜色、形态等特征进行初步鉴定，通常利用肉眼观察菌落的特征。
6. 生化试验：对初步鉴定的结果进行进一步确认，采用生化试剂进行特异性生化反应，通过观察反应结果来确定菌株的身份。
7. 抗生素敏感性试验：对鉴定出的病原菌株进行抗生素敏感性试验，确定其对不同抗生素的敏感性，以指导临床用药。
8. 分子生物学检测：对部分病原菌，尤其是难以培养或培养时间较长的病原菌，可以采用分子生物学方法进行检测，如PCR、DNA测序等。
9. 结果报告与解读：将实验结果整理并进行报告与解读，为临床医生提供指导性的诊疗意见。
需要注意的是，临床鉴定病原菌的流程会根据临床病情、样本类型、病原菌特性等因素有所差异，上述流程仅为一般步骤的参考。
竭诚为您提供优质文档/双击可除病原菌的分离鉴定篇一：常见病原菌采样分离过程金黄色葡萄球菌采样分离过程1、样本采集及初步分离（1）奶样的采集：采集有乳房炎和隐形乳房炎症状较明显的奶牛，消毒挤奶人手、奶牛乳头，弃2-3把乳，以乳样收集管无菌收集每个乳区乳样10-30mL，编好编号，4个乳区按：左前LF、左后Lh、右前RF、右后Rh编号，采集后尽快返回实验室，如不能尽快返回，应放在低温环境中带回。
（2）乳房皮肤拭子用0.5mL肉汤润湿的消毒棉球拭子从乳房皮肤檫拭到乳头顶端，如果乳房土较多的话先檫掉土。
拭子放入5mL离心管中，再放入冰盒中，迅速带回实验室处理。
（3）鼻腔拭子用消毒棉球拭子插入动物鼻腔中，取出后放到盛有0.5mL肉汤的5mL离心管中，放入冰盒中，迅速带回实验室处理。
菌种的初步分离首次分离时，用接种环蘸取样品在科玛嘉金黄色葡萄球菌显色平板上涂布接种，37℃，16-18小时培养后，从显色平板上挑取红色的单菌落，用脑心浸液（bhI）肉汤35℃培养18小时左右。
需要注意的是金葡菌初次分离时，接种显色培养基后培养时间最好不超过18h进行观察，因为超过24h后所有的葡萄球菌属细菌皆会导致显色培养基变色，进而出现假阳性。
2、菌种的保存2mL灭菌离心管中加入400μL新鲜菌液+200μL60%灭菌甘油，-80℃（长期）或-20℃（临时）冻存。
3、菌种的复苏如需再次纯化，或进行进一步实验，可将甘油保种的菌液在显色平板或哥伦比亚血琼脂平板上划线培养，或者将保种的菌液直接接入液体培养基培养。
肠球菌采样分离过程1、样本采集及初步分离（1）肛门拭子以灭菌长棉签采集猪肛门拭子或蘸取新鲜粪便，棉拭子应以捻转方式插入肛门4-5厘米深，取出后放入1mL营养肉汤的灭菌离心管中，如不能立即接种，应放于低温环境中迅速带回实验室处理。
（2）泄殖腔拭子以灭菌短棉签采集鸡泄殖腔拭子或采集一段盲肠后蘸取新鲜粪便，棉拭子应以捻转方式插入泄殖腔2-3厘米深，取出后放入1mL营养肉汤的灭菌离心管中，如不能立即接种，应放于低温环境中迅速带回实验室处理。
首次分离时，将样品在6.5%nacl营养肉汤中，45℃，18-24小时预增菌进行选择性培养后，将上述培养物以划线方式接种在肠球菌选择性培养基（叠氮钠-结晶紫-七叶苷培养基，beA）上，37℃，培养18-24小时，从选择性培养基上挑取灰色，半透明，1-2mm大小的单菌落，用脑心浸液（bhI）肉汤37℃培养18小时左右。
2、菌种的保存2mL灭菌离心管中加入400μL新鲜菌液+200μL60%灭菌甘油，-80℃（长期）或-20℃（临时）冻存。
3、菌种的复苏如需再次纯化，或进行进一步实验，可将甘油保种的菌液在beA琼脂平板上划线培养，或者将保种的菌液直接接入液体培养基培养。
需要注意的是由于beA琼脂颜色的变化导致假阳性的发生，因此，可以将肠球菌疑似菌株在beA琼脂上进行二次筛选，提高分离准确率。
大肠杆菌采样分离过程1、样本采集及初步分离（1）肛门拭子以灭菌长棉签采集猪肛门拭子或蘸取新鲜粪便，棉拭子应以捻转方式插入肛门4-5厘米深，取出后放入1mL营养肉汤的灭菌离心管中，如不能立即接种，应放于低温环境中迅速带回实验室处理。
（2）泄殖腔拭子以灭菌短棉签采集鸡泄殖腔拭子或采集一段盲肠后蘸取新鲜粪便，棉拭子应以捻转方式插入泄殖腔2-3厘米深，取出后放入1mL营养肉汤的灭菌离心管中，如不能立即接种，应放于低温环境中迅速带回实验室处理。
首次分离时，用接种环蘸取样品在科玛嘉大肠杆菌显色平板上涂布接种，37℃，16-18小时培养后，从显色平板上挑取蓝色的单菌落，用营养肉汤37℃培养18小时左右。
2、菌种的保存2mL灭菌离心管中加入400μL新鲜菌液+200μL60%灭菌甘油，-80℃（长期）或-20℃（临时）冻存。
3、菌种的复苏如需再次纯化，或进行进一步实验，可将甘油保种的菌液在琼脂平板上划线培养，或者将保种的菌液直接接入液体培养基培养。
沙门氏菌采样分离过程1、样本采集及初步分离（1）肛门拭子以灭菌长棉签采集猪肛门拭子或蘸取新鲜粪便，棉拭子应以捻转方式插入肛门4-5厘米深，取出后放入1mL营养肉汤的灭菌离心管中，如不能立即接种，应放于低温环境中迅速带回实验室处理。
（2）泄殖腔拭子以灭菌短棉签采集鸡泄殖腔拭子或采集一段盲肠后蘸取新鲜粪便，棉拭子应以捻转方式插入泄殖腔2-3厘米深，取出后放入1mL营养肉汤的灭菌离心管中，如不能立即接种，应放于低温环境中迅速带回实验室处理。
需要注意的是成年动物沙门氏菌携带率非常低，因此对于沙门氏菌的采集应以弱雏为主要分离对象来提高分离率。
首次分离时，将样品在sc肉汤（亚硒酸盐-半胱氨酸肉汤）中，37℃，18-24小时预增菌进行选择性培养后，将上述培养物以划线方式接种在沙门氏菌选择性培养基上，37℃，培养18-24小时，从选择性培养基上挑取紫色的单菌落，用脑心浸液（bhI）肉汤37℃培养18小时左右。
2、菌种的保存2mL灭菌离心管中加入400μL新鲜菌液+200μL60%灭菌甘油，-80℃（长期）或-20℃（临时）冻存。
3、菌种的复苏如需再次纯化，或进行进一步实验，可将甘油保种的菌液在beA琼脂平板上划线培养，或者将保种的菌液直接接入液体培养基培养。
弯曲杆菌采样分离过程2、样本采集及初步分离（1）肛门拭子以灭菌长棉签采集猪肛门拭子或蘸取新鲜粪便，棉拭子应以捻转方式插入肛门4-5厘米深，取出后放入1mL营养肉汤的灭菌离心管中，如不能立即接种，应放于低温环境中迅速带回实验室处理。
（2）泄殖腔拭子以灭菌短棉签采集鸡泄殖腔拭子或采集一段盲肠后蘸取新鲜粪便，棉拭子应以捻转方式插入泄殖腔2-3厘米深，取出后放入1mL营养肉汤的灭菌离心管中，如不能立即接种，应放于低温环境中迅速带回实验室处理。
需要注意的是因此对于弯曲杆菌的采集应以成年鸡（大于20日龄）为主要分离对象来提高分离率，因为小于20日龄的鸡无法检测到弯曲杆菌。
首次分离时，用接种环直接勾取样品（盲肠内容物或粪便）在弯曲杆菌选择性培养基（skirrow培养基，由sigma 公司生产加5%无菌脱纤绵羊全血及配套增补剂）平板划线接种，42℃，培养48h，初次分离有时可培养至72h。
从选择性培养基上挑取不溶血，灰黄色或灰白色，圆形凸起，边缘整齐，1-2mm大小，透明成水泡状的单菌落，直接在含有5%羊血的血琼脂培养基或哥伦比亚血琼脂培养基上进行进一步纯化。
2、菌种的保存2mL灭菌离心管中加入400μL的bhI肉汤+200μL60%灭菌甘油，将血琼脂上的纯培养物直接用灭菌棉棒刮取到上述制备好的甘油肉汤中，-80℃长期冻存。
3、菌种的复苏如需再次纯化，或进行进一步实验，可将甘油保种的菌液在血琼脂平板或mh琼脂上划线培养。
需要注意的是初次分离弯曲菌时，粪便样品要直接接种在弯曲菌选择性培养基中，不能增菌。
为了提高分离率，可以采用skirrow（42℃）和ccDA培养基（37℃）（含有木炭-头孢哌酮-两性霉素b选择性培养基）同时接种的方法。
同时，弯曲菌在液体培养基中生长不良，保存菌种最好不要用液体培养基进行培养保种。
牛乳样品中常见病原菌采样分离过程1、隐性乳房炎检测—乳汁体细胞间接计数法隐性乳房炎快速诊断液弃去前几把乳，再将乳分别挤在盘中；诊断盘倾斜45度，弃去多余乳汁，诊断盘中各皿中再约留2毫升乳样。
每个样品加2毫升诊断液，使诊断盘做水平同心圆摇动，上下倾斜摇动50秒作判定。
判定标准：“-”0~20万/mL，均质，流动无异常，黄绿色或稍有绿色；“±”20~50万/mL，薄絮，稍有绿色，可疑；“+”50~150万/mL，明显絮状，黄绿色，隐性乳房炎；“++”150~500万/mL，黏稠挂底，黄绿色；“+++”>500万/mL，胶冻样，深绿色。
3、乳样采集消毒挤奶人手、奶牛乳头，弃2-3把乳，以乳样收集管无菌收集每个乳区乳样1-5ml，编好编号，4个乳区按：左前LF、左后Lh、右前RF、右后Rh编号，采集后尽快返回实验室，如不能尽快返回，应放在低温环境中带回。
将10-20μL乳样涂布于血琼脂培养基上，37℃培养18-24h后，挑取血琼脂培养基上各种不同菌落形态的单一菌落，直接在不同选择性培养基上进行划线培养进行进一步鉴定，或者将单一菌落置于bhI肉汤中扩大培养，进行保存备用。
4、菌种的保存2mL灭菌离心管中加入400μL新鲜菌液+200μL60%灭菌甘油，-80℃（长期）或-20℃（临时）冻存。
5、菌种的复苏如需再次纯化，或进行进一步实验，可将甘油保种的菌液在beA琼脂平板上划线培养，或者将保种的菌液直接接入液体培养基培养。
篇二：常见病原菌分离方法常用的几种典型的病原菌分离方法1．斑点病原菌的分离从病斑部分切取每边3～5mm的小块组织，在70％酒精中浸数秒钟后，移入0.1％的升汞水溶液中处理3～5min，以灭菌水冲洗3次，移臵培养皿的培养基中，然后培养。
2．维管束组织内病原菌的分离从根茎维管束组织分离病菌，可先将寄主病部表面用70％酒精擦拭消毒，将表皮组织用灭菌的解剖刀削去，然后切取其中小块变色的维管(:病原菌的分离鉴定)束组织，用升汞或漂白粉液消毒后。
，用灭菌水冲洗几次，移臵培养基面上。
3．根腐病病原菌的分离根腐或基腐病的分离，由材料的大小决定。
材料小的可仿照斑点病的分离法，材料大的则可以用维管束组织内病原的分离法。
4．肉质组织中病原菌的分离多肉的根、茎及果实等，可以采用维管束组织内病菌分离法除去表面组织，切取小块病组织分离。
如有杂菌感染可采用“直接接种”法，待出现症状后，用此法再行分离。
5．种子内病原菌分离将整个种子或者种子的一部分进行表面消毒(升汞或漂白粉)，用灭菌水洗涤后，移臵培养基上。
6．孢子分离法能产生大量孢子的病菌如青霉素、链格孢等，则可配制成孢子悬浮液以稀释法或划线法分离之。
7、土壤带菌分离法为了研究一些真菌在土壤中存活和分布的情形，从有病的土壤中分离它们是必要的。
分离方法是将土壤取出少许，配制成悬浮液，然后用稀释法或划线法分离。
附录2真菌单孢子分离技术一、目的要求了解单孢分离技术的基本原理，掌握简便实用的单孢分离方法。
二、基本原理单孢分离的方法很多，如振落法、稀释法和直接挑取法。
振落法和稀释法的共同点都是采用某种方法，使真菌孢子较稀疏地分散在水琼脂平板上，然后在显微镜下检查寻找在水琼脂平板表面的单个孢子，一旦找到理想的单个孢子，就通过无菌操作将其(连同一部分培养基)移植到pDA斜面培养基上，臵适温下培养，形成的菌落即为单孢系菌株。
直接挑取法是在实体解剖镜下直接挑取单个孢子进行分离纯化的方法。
三、材料、用具与仪器1．材料(依本地资源情况进行选择，下列材料供参考)(1)稻瘟病叶、病节、病穗颈(pyricolariaoryzae)。
