荧光蛋白的研究进展与应用
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肠屏障相关紧密连接蛋白免疫荧光1. 引言1.1 背景介绍肠道是人体最大的外界环境与内部环境接触的部位,它既需要充分吸收养分,又需要有效阻止有害物质的进入。
肠屏障是肠道内的保护屏障,它由肠上皮细胞和相关蛋白结合而成,起着防止有害物质侵入体内、维持内环境稳定的重要作用。
肠屏障相关紧密连接蛋白是一类位于肠上皮细胞之间的蛋白质,其主要作用是通过连接细胞与细胞之间的紧密连接,形成一个完整的屏障,防止细菌、毒素和其他有害物质通过间隙进入体内。
近年来,研究人员对肠屏障相关紧密连接蛋白进行了深入的研究,以揭示其在肠道健康和疾病发生中的作用机制。
本文将介绍肠屏障的功能及重要性,以及肠屏障相关紧密连接蛋白的研究进展。
还将探讨免疫荧光技术在肠屏障相关紧密连接蛋白研究中的应用,并展示相关研究结果。
通过深入分析肠屏障相关紧密连接蛋白的分子机制,我们可以更好地理解肠道屏障功能的调节机制,为相关疾病的防治提供新的思路和策略。
1.2 研究目的研究目的是对肠屏障相关紧密连接蛋白进行深入探讨,了解其在维持肠道屏障功能和免疫调节中的作用机制。
通过分析这些紧密连接蛋白在肠道屏障维持和破坏过程中的表达和功能变化,可以揭示肠道疾病发生发展的机制,并为相关疾病的预防和治疗提供理论依据。
研究还旨在探索免疫荧光技术在肠屏障相关紧密连接蛋白研究中的应用价值,为肠屏障研究提供新的技术手段和方法。
通过本次研究,我们希望能够深入了解肠屏障相关紧密连接蛋白的功能和作用机制,为肠道健康提供新的治疗策略和研究方向。
1.3 研究方法研究方法是指在进行肠屏障相关紧密连接蛋白免疫荧光研究时所采用的方法和技术。
在本研究中,我们将主要采用以下几种方法:1.标本采集:我们将从实验动物或人体肠道组织中采集样本进行研究。
在进行标本采集过程中,需要严格遵循相关伦理要求,确保样本的来源合法和道德。
2.免疫荧光染色:免疫荧光技术是本研究的核心技术之一。
通过使用特异性的抗体标记肠屏障相关紧密连接蛋白,我们可以在细胞或组织中准确地识别和定位这些蛋白质的表达情况。
绿色荧光蛋白的研究进展作者:杨慧敏, 李文刚, 吴高锋, 魏娟, 王鑫作者单位:杨慧敏,吴高锋,魏娟,王鑫(河南农业大学,郑州,450002), 李文刚(郑州牧专,郑州,450011)刊名:中国畜牧兽医英文刊名:CHINA ANIMAL HUSBANDRY & VETERINARY MEDICINE年,卷(期):2008,35(8)引用次数:1次1.方六荣.陈焕春表达绿色荧光蛋白伪狂犬病病毒转移载体的构建及转移特性[期刊论文]-中国兽医学报 20012.李夏.陈素文.喻达辉绿色荧光蛋白及其在转基因动物研究中的应用[期刊论文]-南方水产 20053.范伟兴.宋建兰表达绿色荧光蛋白伪狂犬病病毒Bartha-K61株TK突变株的构建[期刊论文]-畜牧兽医学报2003(05)4.林爱星.刘小军.陈永福绿色萤光蛋白及其在转基因表达检测中的应用 1997(03)5.岳莉莉.齐义鹏.社会胜用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统高效表达绿色荧光蛋白标记的HB Ve抗原[期刊论文]-病毒学报 1998(03)6.Chafee I.Too Y.Euskirchen G Green fluorescent protein as a marker for gene expiree 19947.Fleckenstein J M.Holland J T.Hasty D L Interaction of an outer membrane p rotein ofenterotoxigenic Escherichia coliwith cell surface heparan sulfate proteoglycans 2002(03)8.Galipeau J.Li H.Paquin A Vesicular stamatitis delivery in experimental brain cancer 1999(12)9.Grignani F.Kinsella T.Mencarelli A High-efficiency gene transfer and selection of human hematopoietic progenitor cells with a hybrid EBV/retroviral vector expressing the green fluorescence protein 1998(01)10.Heim R.Cubitt A B.Tsien R Y Improved green fluorescence 1995(6516)11.Heim S.Freeman R B J.Eulitz C Auditory temporal processing deficit in dyslexia is associated with enhanced sensitivity in the visual modality 2001(03)12.Ikawa M.Kominami K.Yoshimura Y Green fluorescent protein as a maker in transgenic mice 1995bas Y A.Gurskaya N G.Yanushevich Y G Diversity and evolution of the green fluorescent protein family 200214.Loimas S.Toppinen M R.Visakorpi T Human prostate carcinoma cells as targets for herpes simplex virus thymidine kinase-mediated suicide gene therapy 2001(02)15.Ogawa H.Inouye S.Tsuji F Localization,trafficking,and temperature Dependence of the Aequorea GFP in culture dvertebratet 199516.Rasher D C.Eckerd S W W Primary structure of The Aquaria Victoria green fluorescent protein1992(02)17.Valdivia R H.Alexander E H Applications for green fluorescent protein (GFP) in the study of hostpathogen interactions 199618.Wang S.Hazelrigg T Implications for bed mRNA localization from spatial distribution of exuprotein in Drosophila genesis 1994(6479)1.期刊论文罗文新.陈敏.程通.管宝全.李少伟.李少菁.张军.夏宁邵橙色荧光蛋白--绿色荧光蛋白GFPxm的改造-生物工程学报2003,19(1)最近报道了从大型多管水母中分离出新的gfp基因.经大肠杆菌表达并纯化出的绿色荧光蛋白(GFPxm)具有476nm的激发峰和496nm的发射峰,但是只能在低温下成熟的缺点限制了它的应用.这里进一步报道GFPxm的12种突变型.在大肠杆菌中的表达结果表明,有7种突变型在37℃条件下产生高的荧光强度.在25、32和37℃条件下表达6 h,GFPxm16、GFPxm18和GFPxm19的相对荧光强度均高于增强型绿色荧光蛋白(EGFP),而GFPxm16和GFPxm163在42℃高温表达时仍能保持高的荧光强度.这7种突变型中的4种在哺乳动物细胞中已获得良好表达.此外,有6种突变型的荧光光谱红移,目前所达到的最长激发峰为514nm、最长发射峰为525nm.另外有3种突变型具有包括紫外在内的两个激发峰,1种突变型只有单一的紫外激发峰.首次报道具有橙色荧光的突变型OFPxm,它的激发峰为509nm、发射峰为523nm.523nm属于黄绿色,但肉眼看到的蛋白为橙色.OFPxm在高温下可得到高水平表达且很好地成熟,但是因为低的量子产率而荧光强度相对较低.2.学位论文左妍四环素-绿色荧光蛋白生物传感器的构建及活性测定2004将来源于水母的绿色荧光蛋白基因(gfp)和来源于E.coli转座子Tn10的四环素阻遏蛋白基因(tetR)共同构建到E.coli表达载体pET-30a+上,使融合蛋白两部分蛋白间插入不同长度肽联,获得TetR C-端与GFP N-端融合蛋白:TR∷GFP和TR∷GFPs.在E.coli BL21中诱导表达并纯化了两种形式的融合蛋白.TR∷GFP(蛋白间间隔19aa)保留了GFP的荧光特性,即在395nm激发,可以510nm附近有最大发射峰.在四环素存在时,TR∷GFP在400nm-700nm范围内的荧光强度普遍增强,在510nm处增幅最大,由原来1.132增至2.214,增幅为95.6﹪,而四环素对相同浓度的GFP与TetR荧光影响不大,表明TR∷GFP,能感受外界四环素.TR∷GFPs(蛋白间间隔5aa)具备GFP荧光性质,但不具备感受四环素能力.对其中GFP部分定点突变(T203Y),获得发射荧光红移的突变融合蛋白(TR∷GFPsm).在E.coli BL21中诱导表达并纯化了TR∷GFPs和TR∷GFPsm,TR∷GFPsm经395nm激发,在526nm处出现最大发射峰;在四环素存在时,TR∷GFPsm在400nm-700nm范围内荧光强度普遍增强,以526nm处增幅最大,由原来20.33增至41.6,增幅为104.6﹪;而四环素对相同浓度的GFP与TetR荧光影响幅度较小,表明TR∷GFPsm,能感受外界四环素.用不同浓度的tc滴定TR∷GFPsm,显示4.1218μM的TR∷GFPsm随着tc浓度的增加,荧光强度相应呈指数增长,最终达到饱和.初步说明TR∷GFPsm具有tc生物传感器性质.为了使TetR与四环素结合所产生的构象变化能更好地传递给GFP,将TetR插入到GFP171aa-172aa,构建了GFP与TetR中间融和蛋白GFP()TR,在E.coli BL21中诱导表达,该融合蛋白失去荧光性质.为了获得对四环素更为敏感的传感器,用易错PCR构建了TR∷GFP和TR∷GFPsm突变体库,初步摸索了平板筛选荧光突变体的方法.3.期刊论文左妍.杨克迁四环素-绿色荧光蛋白融合蛋白的构建及其活性测定-生物工程学报2005,21(1)将来源于水母的绿色荧光蛋白基因(gfp)和来源于E.coli转座子Tn10的四环素阻遏蛋白基因(tetR)共同构建到E.coli表达载体pET-30a+上,获得TetR C-端与GFP N-端融合蛋白.对经诱导表达并纯化后的融合蛋白(TR::GFP)进行荧光发射光谱分析表明,该融合蛋白保留了GFP的荧光特性,即在395 nm激发下,可在510 nn附近有特征发射峰.在加入四环素后,融合蛋白在395 nm激发下,在400 nm~700nm范围内的发射光谱发生明显变化,荧光强度普遍增加,且以510 nm处最大发射峰增幅最大,由原来1.132增至2.214,而四环素对相同浓度的GFP与TetR荧光影响不大,结果表明该融合蛋白,能感受外界四环素,并产生一定的荧光变化.4.学位论文邹奇大鼠肝卵圆细胞移植对暴发性肝衰的治疗作用及示踪研究2007目的:建立成年大鼠肝卵圆细胞增殖模型,进一步进行卵圆细胞的分离、纯化、鉴定和培养;利用绿色荧光蛋白基因转染和荧光染料羧基荧光素乙酰乙酸琥珀酰亚胺酯(CFDA-SE)染色两种方法进行标记,比较两种方法标记细胞的可行性;随后选择较优标记方法标记的卵圆细胞移植治疗暴发性肝功能衰竭大鼠,探索卵圆细胞移植治疗暴发性肝衰的可行性及有效性。
绿色荧光蛋白——结构及应用孙艺佩【摘要】绿色荧光蛋白(GFP)有稳定、灵敏度高、无毒害、载体便于构建等优点,因此在各个领域已经有了广泛的应用,在细胞生物学与分子生物学领域中,基因常被用作一个报导基因作为生物探针,拿来映证某些假设的实验方法;在医学领域,常用利用绿色荧光蛋白观测肿瘤发生、生长和转移等过程.本文就绿色荧光蛋白的发现与应用背景、结构、生色机理、相对于其他荧光分子的优点和在各领域的应用进行了综述.【期刊名称】《化工中间体》【年(卷),期】2017(000)008【总页数】2页(P124-125)【关键词】绿色荧光蛋白(GFP);荧光生色机理;生色团;技术应用【作者】孙艺佩【作者单位】山东省实验中学山东 250000【正文语种】中文【中图分类】Q绿色荧光蛋白(Green fluorescent protein,GFP)是一类能被蓝紫光激发而发出绿色荧光的蛋白,1962年,下村修等人于维多利亚管状水母中第一次发现并提取出了绿色荧光蛋白。
1994年,马丁·查尔菲首次在实验中成功表达GFP基因,向人们展示了绿色荧光蛋白作为遗传标签的价值。
同年,钱永健与其同事提出GFP生色团发光机理并改造GFP,使其更易作为标记物应用于各类试验。
2008年,诺贝尔化学奖授予钱永健、马丁·查尔菲和下修村,以表彰他们发现和发展了绿色荧光蛋白。
这一发现成果为生命科学的进步提供了更便捷的渠道。
从维多利亚多管水母中分离出来的野生型GFP由238个氨基酸残基组成,分子量约27kDa。
它具有β-桶的结构,几乎是个直径2.4nm,长4.2nm的完美圆柱。
11个β-折叠链形成β-筒的外周,筒两端分别被一些分子量较小的短α-螺旋覆盖,组成生色团的三个残基(Ser65-Tyr66-Gly67)与α-螺旋共价相连,位于圆筒中央螺旋中部。
β-圆筒与短α-螺旋形成致密的结构域,使配体不能扩散进入,生色团被严格保护在筒内,因此其性质稳定,不易被淬灭。
一、gcamp荧光蛋白的概念gcamp是一种常用的荧光探针,用于监测细胞内钙离子浓度的变化。
它由荧光蛋白和钙结合蛋白组成,当靶向细胞内钙离子浓度增加时,gcamp荧光蛋白会发生构象改变,从而产生荧光信号。
gcamp荧光蛋白的激发和发射光谱是评价其性能和应用的重要指标。
二、gcamp荧光蛋白的激发光谱激发光谱是指在不同波长的激发光照射下,荧光蛋白所发出的荧光光谱。
gcamp荧光蛋白的激发光谱范围通常在450nm至500nm之间,具体波峰位置和相对强度取决于该种gcamp的具体构型和化学结构。
通过对gcamp荧光蛋白进行激发光谱分析,可以确定最佳的激发波长,从而在实际应用中更好地激发其荧光信号。
三、gcamp荧光蛋白的发射光谱发射光谱是指在激发光的照射下,荧光蛋白所产生的荧光光谱。
gcamp荧光蛋白的发射光谱范围通常在510nm至550nm之间,具体波峰位置和相对强度也取决于其构型和化学结构。
发射光谱的分析可以帮助确定最佳的检测波长范围,从而提高检测的灵敏度和准确性。
四、gcamp荧光蛋白的激发和发射光谱特点gcamp荧光蛋白的激发和发射光谱具有以下特点:1. 宽波长范围:gcamp荧光蛋白的激发和发射光谱覆盖了较宽的波长范围,这使得它可以适用于不同波长激发光源的激活和检测。
2. 高荧光强度:gcamp荧光蛋白在适当的激发光波长下,具有较高的荧光强度,可以在低浓度下进行高灵敏度的检测。
3. 稳定性:gcamp荧光蛋白在不同环境条件下具有较好的稳定性,能够在细胞内部稳定地发出荧光信号,对于长时间持续监测具有优势。
五、gcamp荧光蛋白的应用由于gcamp荧光蛋白具有优良的激发和发射光谱特性,因此被广泛应用于生物医学研究领域,如神经科学、细胞生物学等领域:1. 神经元活动成像:gcamp荧光蛋白可以被用来标记神经元,并通过检测钙离子在神经元内的动态变化来研究神经元的活动情况。
2. 药物筛选:gcamp荧光蛋白可以被用来研究药物对细胞内钙离子浓度的影响,进行药物筛选和药理学研究。
生物荧光探针的原理及应用综述1 生物荧光探针的基本原理荧光探针是指能够通过荧光发射产生信号的分子或化合物。
荧光分子能够吸收特定波长的光并以较长波长的荧光形式发射出来。
在生物研究中,荧光探针可用作分子标记,以跟踪生物分子(如蛋白质、核酸、糖类等)在细胞或组织中的分布、动态变化等。
荧光探针可分为非共价和共价两种类型。
非共价荧光探针一般应用于无细胞或无机物中。
共价探针则是通过共价键与目标分子结合并发出荧光信号。
生物荧光探针的共价基本原理包括:探针与目标分子产生共价结合,导致荧光氧化还原反应、光致断裂产生荧光等过程。
2 常见的生物荧光探针类型2.1 荧光染料荧光染料是指能够特异性地与目标分子结合从而发出荧光信号的化合物。
荧光染料可以自然地、共价地或靶向结合到特定的细胞结构或生物分子中。
常见且热门的荧光染料有荧光素、FITC、罗丹明、乙烯基荧光染料等。
2.2 荧光蛋白荧光蛋白原是从发光细菌中发现的蛋白质,是一种能发出强光的天然荧光染料。
在细胞或组织研究中,人工合成的荧光蛋白(如绿色荧光蛋白、红色荧光蛋白、黄色荧光蛋白等)被广泛应用于荧光显微镜分析、蛋白质标记、酶观察等方面。
2.3 量子点量子点是一种具有独特光学特性的新型探针,是一种纳米级别的半导体颗粒。
量子点利用电子从价带到导带的跃迁,通过吸收和发射光来产生荧光。
由于其非常小的粒径和荧光能量可调性,量子点在分子标记、细胞成像、癌症诊断、药物递送等领域呈现出广泛的应用前景。
3 生物荧光探针在生物学领域的应用生物荧光探针在生物研究中具有广泛的应用,在许多领域都发挥着重要的作用。
3.1 细胞成像在生物领域,荧光探针广泛应用于细胞成像。
它们能够用来对细胞结构、蛋白质位置、细胞凋亡等进行标记,并通过荧光显微镜观察。
荧光探针能够让研究者追踪分子的位置和行为,显示环境的变化以及让人们更好地理解细胞如何工作。
3.2 蛋白质标记生物荧光探针可以连接到蛋白质上,使得研究者通过荧光显微镜观察特定蛋白质在细胞中的运动和位置。
生物发光技术的研究现状及发展趋势生物发光技术是指利用生物体自身产生的光来进行研究、检测和治疗等方面的技术。
其基本原理是利用特定的生物体(如荧光蛋白)发射特定波长的光,通过仪器检测从而达到特定的目的。
近年来,生物发光技术在医学、生物学、环境保护等领域中得到了广泛的应用和迅速的发展。
一、生物发光技术在医学领域的应用生物发光技术在医学领域中成为了一种十分重要的检测和治疗手段。
比如,利用荧光蛋白标记特定组织或细胞,可以在体内进行实时观测和影像记录,有助于研究疾病的发生机理以及监测疾病的治疗进展情况。
对于肿瘤的早期诊断和治疗,生物发光技术也发挥了重要的作用。
利用荧光蛋白标记肿瘤细胞,可以实现对肿瘤的精准定位,从而对肿瘤进行局部治疗,避免对正常细胞的损害。
二、生物发光技术在生物学研究中的应用生物发光技术在生物学研究中的应用也十分广泛。
比如,利用荧光蛋白标记特定的蛋白质,可以实现对其在细胞中的位置和数量的监测,从而研究其功能和调控机理。
同时,利用荧光蛋白标记DNA,可以在细胞内实时观测DNA复制和修复等过程,为基因工程和基因治疗提供了基础。
还可以利用荧光蛋白进行分子诊断,如利用与荧光蛋白结合的分子探针检测细胞内某个基因的表达情况。
三、生物发光技术在环境监测中的应用除了在医学和生物学中的应用,生物发光技术在环境保护领域中也有广泛应用。
比如,在水体污染监测中,可以利用变色菌和荧光细菌对水中毒性物质进行检测。
对于土壤污染的监测,可以利用土壤中特殊的微生物群落发射荧光来检测残留的污染物。
此外,生物发光技术还可以用于空气检测、食品安全监测等方面。
四、生物发光技术的发展趋势随着生物发光技术的广泛应用和研究深入,其发展趋势也日益清晰。
一方面,生物发光技术在基础研究领域中仍将继续发挥重要作用,应用范围将更广泛、更精准、更高效。
另一方面,生物发光技术的应用将逐渐扩展到更多的领域,如农业、水产养殖、食品安全等。
同时,开发更高效、更稳定的荧光蛋白及相关分子探针,将成为生物发光技术的一个重要方向。
绿色荧光蛋白标记技术原理绿色荧光蛋白标记技术,听起来是不是有点高大上?其实它的原理并不复杂,就像在大自然中,有些动物能发光一样,比如那些闪闪发光的小水母。
科学家们发现了一种叫做绿色荧光蛋白(GFP)的东西,这种蛋白质在紫外光照射下会发出绿色的光,简直像是给细胞穿上了炫酷的衣服,让它们闪闪发亮。
想象一下,细胞们聚在一起,争相展示自己的“荧光衣”,那画面得多好看啊!好啦,咱们先来聊聊这项技术的基础。
绿色荧光蛋白最初是从一种叫水母的生物中提取出来的。
科学家们就像小侦探一样,四处寻找那些能发光的生物,最终在水母的身上找到了这个神奇的蛋白。
这种蛋白质不仅能发光,还特别稳定,几乎不容易被破坏。
这就让科学家们兴奋得像得了彩票一样,因为它可以用来标记细胞、观察细胞的活动,简直是生物研究中的一把“瑞士军刀”。
科学家们开始想办法把绿色荧光蛋白引入其他生物中。
这就像给细胞做手术,把这个发光的小家伙植入它们的基因里。
经过一番操作后,细胞就能发光了,仿佛在说:“看!我也能发光!”这让研究人员能够实时观察细胞的行为,了解它们是怎么工作的。
这种技术的应用可广泛了,不光是基础研究,在药物开发、疾病诊断方面都有大显身手的机会。
就好像在厨房里,厨师用不同的调料做出各种美味,绿色荧光蛋白也为科学研究增添了无限可能。
再来聊聊这个技术的实际应用。
科学家们用绿色荧光蛋白标记不同类型的细胞,比如肿瘤细胞、神经细胞等等。
比如说,研究肿瘤的时候,科学家可以将肿瘤细胞标记上绿色荧光蛋白,然后用显微镜观察它们的生长和扩散,简直就像是在看一场细胞的“真人秀”。
通过观察细胞的行为,研究人员能够发现肿瘤是如何发展的,甚至能找出一些新药物的靶点。
再比如,在神经科学研究中,科学家们利用这个技术可以标记神经元,观察神经元之间是如何传递信号的。
想象一下,神经元就像一个个小小的邮递员,负责送信,绿色荧光蛋白就好比是邮递员的制服,让它们在复杂的网络中一目了然。
研究人员能清楚地看到哪些神经元在工作,哪些在休息,这对了解大脑功能、治疗神经系统疾病至关重要。
蛋白质工程的主要研究方法和进展李 强 施碧红* 罗晓蕾 左祖祯 邢佩佩 刘 璐(福建师范大学生命科学学院,福建福州 350108)摘 要:蛋白质工程是用分子生物学手段对蛋白质进行分子改造的技术。
介绍了蛋白质工程的几种常用方法及其基本原理和研究进展。
关键词:蛋白质工程;定点诱变;定向进化中图分类号 Q816 文献标识码 A 文章编号 1007-7731(2009)05-47-02Advances in The Techni q ues of P rotein EngineeringL i Q iang et al (Co llege o f L ife Sc iences,Fu jian N or m a lU n i versity,Fuzhou350108,Chi na)Ab strac t:P ro tein eng ineer i ng is a techn i que used to i m prove prote i n m o l ecular In th i s paper,seve ra l m ethods and t he ir pr i nci p les and their advantag es f o r m olecu lar m odifica ti on have been rev ie w edK ey words:P rote i n eng i neer i ng;site-d i rected m utag enesis;d irected evoluti on20世纪70年代以来,对蛋白质的分子改造渐渐进入研究领域,通过对蛋白质分子进行突变,得到具有新的表型和功能或者得到比原始蛋白相对活力更高的突变体,对蛋白质的分子改造技术逐渐纯熟。
蛋白质工程的主要技术分为理性进化和非理性进化,已经在农业、工业、医药等领域取得了较大的进展。
1 理性进化理性进化主要是利用定点诱变技术,通过在已知D NA序列中取代、插入或缺失一定长度的核苷酸片段达到定点突变氨基酸残基的目的。
食品与药品Food and Drug2009年第11卷第05期742008年10月8日,瑞典皇家科学院决定将2008年度诺贝尔化学奖共同授予Osamu Shimomura (下村修)、Martin Chalfie (马丁·沙尔菲)和RogerY .Tsien (钱永健),以表彰他们在绿色荧光蛋白(green fluorescent protein ,GFP )发现和研究方面所做的贡献,这也使得在生物学研究领域早已普遍使用的荧光蛋白走进了普通大众的视野。
下村修的主要贡献是首次从多管发光水母中分离出GFP ,并发现其在紫外灯照射下发出绿光。
沙尔菲证明了GFP 在各种生物现象中作为发光遗传标签的价值。
钱永健阐明了GFP 的发光机制,并开发了具有其他颜色荧光的蛋白质,让研究者能够给予不同的蛋白质和细胞不同的颜色,以便在同一时间跟踪几个不同的生物过程[1,2]。
GFP 是20世纪90年代中期发展起来的一种全新的报告分子。
同以往常用的报告基因,如β-半乳糖甘酶基因(lac Z gene )、氯霉素乙酰转移酶基因(cat g e n e )、荧光素酶基因(luc g e n e )以及其他抗生素基因相比,GFP 不需要任何外源性底物和辅助因子,无毒、稳定、无污染,而且可以在紫外线或蓝光激发下直接观察。
GFP 作为一种新型标记物,目前已被广泛应用于动物学、植物学、生物学、药学等领域的研究中[3]。
1GFP 的发展历程萤火虫发出荧光,是由荧光酶催化底物分子荧光素,发生化学反应后产生荧光。
发现蛋白质自身发光无需任何底物这一现象,始于下村修和已故美绿色荧光蛋白黄思玲(山东福瑞达生物化工有限公司,山东济南250101)国科学家约翰森的研究。
1962年,下村修与约翰森在纯化水母素的研究过程中,有一天下修村下班前将水母发光蛋白的提取产物倒进水池里,出门前关灯后发现水池闪闪发光。
后来发现这种蛋白质副产物在阳光下呈绿色,钨丝下呈黄色,紫外光下呈强绿色。
新型荧光探针在生物医学领域的应用研究 引言: 随着科学技术的不断发展,新型荧光探针在生物医学领域的应用研究正逐渐展开。作为一种具有高灵敏度、非侵入性和实时检测能力的技术,荧光探针在生物医学研究中扮演着重要的角色。本文将着重介绍新型荧光探针在生物医学领域的应用研究进展,并分析其应用前景。
一、新型荧光探针的分类和特点 1.1 荧光探针的分类 新型荧光探针可以根据其结构、发光机制和应用领域进行分类。例如,根据结构可以分为有机小分子探针和生物大分子探针;根据发光机制可以分为光固定、离子感知和生物分析等探针;根据应用领域可以分为生物成像、分子探测和药物传递等探针。
1.2 荧光探针的特点 新型荧光探针具有多种特点,使其在生物医学领域得到广泛应用。首先,它们具有高灵敏度,能够对微量物质进行检测。其次,荧光探针具有非侵入性,避免了传统生物样本检测中的侵入性操作。最后,荧光探针还具有实时检测能力,可以提供准确和及时的数据。
二、新型荧光探针在生物成像中的应用 2.1 荧光探针在细胞成像中的应用 荧光探针在细胞成像中广泛应用于细胞生物学研究、免疫细胞检测和药物筛选等方面。通过选择合适的探针,可以实现对细胞结构、功能和药物靶点的高效观察。
2.2 荧光探针在分子成像中的应用 分子成像是用于鉴定和定位分子的技术,广泛应用于生物医学研究领域。新型荧光探针可以通过与特定分子的相互作用实现对分子的定位和检测,从而为研究人员提供更准确和详细的分析结果。
三、新型荧光探针在分子探测中的应用 3.1 荧光探针在蛋白质分析中的应用 蛋白质是生物体内功能最为重要的分子之一,因此对蛋白质的分析和检测具有重要意义。新型荧光探针可以通过与特定蛋白质结合,实现对蛋白质的高效检测和定量分析。
3.2 荧光探针在基因检测中的应用 基因检测是一项重要的生物医学研究内容,通过对基因的检测可以了解生物体内遗传信息的变化。新型荧光探针可以通过与特定基因序列的结合来实现对基因的检测和定位。
石河子大学分子生物学实验结课论文绿色荧光蛋白(GFP)原核表达分析学生姓名学号专业年级、班级指导教师所在学院中国·新疆·石河子2016年1月绿色荧光蛋白(GFP)原核表达分析摘要:本实验主要探讨目的蛋白(GFP)在大肠杆菌中的表达的情况以及鉴定目的蛋白形成的是包涵体还是可溶性蛋白。
本实验先对菌液进行培养、活化、然后采用IPTG分别对其不同时间点的诱导,用SDS-PAGE来确定目的蛋白的可溶性及其分子量,掌握GFP 诱导不同时间的表达情况的检测方法。
关键词:绿色荧光蛋白;SDS-PAGE;原核表达1 前言1.1实验目的掌握聚合酶链式反应(PCR)的原理和操作方法;了解重组载体的构建方法;锻炼学生查阅文献资料、设计与优化实验的能力;加强学生对化学生物学中常用研究方法的认知。
1.2实验背景绿色荧光蛋白(green fluorescent protein GFP) 是源于多管水母属等海洋无脊椎动物的发光蛋白,其在蓝光或紫外光下可发出明亮的绿色荧光,可以作为报告基因检测蛋白的特异性表达或进行细胞定位研究。
与以往lacZ、CAT 等报告基因相比,有很多无可比拟的优越性: GFP 不具有种属依赖性,在多种原核和真核生物细胞中都表达;荧光强度高,稳定性高;不需要反应底物与其他辅助因子,受蓝光激发产生绿色荧光,尤其适用于体内的即时检测;另外GFP 分子量小,易于融合,适用于多种转化方式,对受体无毒害,安全可靠;并且通过替换一些特殊氨基酸,可以使之产生不同颜色的光,从而适应不同的研究需要。
正是由于GFP 检测具有高灵敏度,操作简单,无需使用同位素等优点,近年来广泛用于基因的表达与调控、蛋白质的定位、转移以及相互作用、信号传递、转染与转化,以及细胞的分离与纯化等研究领域。
绿色荧光蛋白还在监测目的基因表达、研究细胞内物质代谢及追踪细胞系的分化等方面有着广泛应用。
采用GFP作为标记基因,可直接收集转化细胞供实验,缩短了筛选时间、减少对细胞活性的影响并可作为活体标记,为研究发育的基因调控和分子机制提供了一种简洁有效的手段。
生物发光原理与应用生物发光现象是一种自然界中非常神奇的现象。
生物体在无需外部光源的情况下能够发出独特的发光信号,这种现象被广泛应用于生物学研究、医学诊断与治疗、环境监测等领域。
本文将深入探讨生物发光的原理与应用。
一、生物发光原理生物发光是一种化学反应,即生物体内一些化学物质通过酶催化反应而产生。
主要的生物发光方式有两种:生物荧光和生物化学发光。
这两种发光方式都依赖于一种特殊的化学反应系统,即荧光素-酶催化体系。
1. 生物荧光对于生物荧光来说,最常见的例子就是孔雀石蛋白和荧光蛋白。
在这些生物体内,荧光蛋白与荧光素结合,并且只有特定的激发光波长下,才能发出荧光。
这种荧光信号可以用来追踪生物体内的化学反应进程,以及检测不同细胞和组织中的代谢活动。
2. 生物化学发光与荧光不同,生物化学发光是一种常见于昆虫、鱼类和微生物等生物体内的发光方式。
生物化学发光依赖于一种特殊的化学物质,即荧光素或荧光素类似物。
在存在特定的酶催化情况下,荧光素会与其他分子发生氧化反应,从而释放出能量,进而以光的形式发射出来。
这种发光方式在夜光昆虫中尤为突出,这些昆虫通过发光来吸引异性或迷惑天敌。
二、生物发光应用生物发光作为一种特殊的现象和信号,在科学研究和应用领域有着广泛的应用价值。
1. 生物学研究生物发光作为一种天然的荧光标记,在生物学研究中发挥了重要作用。
通过基因工程技术,科学家们成功研究出多种能够发光的荧光蛋白,并将其广泛应用于细胞内标记和定位、蛋白质相互作用研究以及基因表达调控等领域。
这些研究帮助我们更好地了解生物体内部的机制和功能。
2. 医学诊断与治疗生物发光在医学诊断中有着重要的应用价值。
例如,荧光素酶标记法是一种常用的免疫检测方法,可以应用于肿瘤标记物检测、传染病诊断和药物筛选等方面。
另外,生物发光还可以用于光动力疗法,该疗法利用特殊荧光素的发光产生的氧化反应,达到杀死肿瘤细胞或病原体的目的。
3. 环境监测生物发光在环境监测中也有着一定的应用前景。
分子生物学综合实验论文题目: 绿色荧光蛋白(GFP)的基因克隆及表达中国·黄石2010年12月绿色荧光蛋白(GFP)基因的克隆与表达胡丽丹(湖北师范学院生命科学院0803班湖北黄石 43500)摘要:绿色荧光蛋白(GFP)是一类存在于包括水母、水螅和珊瑚等腔肠动物体内的生物发光蛋白。
用碱裂解法提取的的质粒pEGFP-N3和pET-28α经过Bam H I和Not I双酶切连接后,得到pET-28α-pEGFP-N3重组质粒。
取部分的重组质粒做酶切实验,验证重组质粒的存在性,剩下的重组质粒导入表达菌E. coLi BL-21大肠杆菌感受态细胞中。
重组有GFP基因的E. coLi BL-21,在含有1 μL/mL 的卡纳霉素的LB培养基上培养。
当A600达到0.7时,用终浓度为0.8 mM的异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导培养3小时,离心得到下层绿蓝色沉淀物即可。
关键词:绿色荧光蛋白 GFP 基因的克隆荧光蛋白水母CLoning and Expression of Green FLuorescent Protein GeneHU Li-Dan( Class three Grade eight, College of Life Sciences department,Hubei Normal university ,Huangshi 435000)Abstract:Green fluorescent protein(GFP),one kind of bioluminenscent proteins ,hasbeen found existing in the internal of Coelenterates,such as fellyfish,polyp and coral pEGFP-N3 and pET-28αwas harvested by sodium dodecylsulfate(SDS) alkaline process extraction and Agarose Gel Electrophoresis.After treating the two targeted plasmids with Bam H I and Not I, the recombinant plasmid,namely pET-28α-pEGFP-N3, can be retrieved by furthermore Agarose Gel Electrophoresis. Taking slight recombinant plasmid proves that recombinant plasmid does exist by dienzyme cutting(Bam H I and Not I).The recombinant plasmid lefting would be transported to E. coLi BL-21the competent cells. E. coLi BL-21containing recombinant GFP gene was grown overnight in LB solid medium containing kanamycin (Final concentration: 1 μL/mL). When absorbance at 600 nm value was 0.7, isopropyL β-D-thiogalactopyranoside was added to 0.8 mM and the incubation was continued an addition 3 h.Key words:Green fluorescent protein Fellyfish Genetic Cloning Fluorescin目录1.前言: (1)1.1绿色荧光蛋白(GREEN FLUORESCENT PROTEIN,GFP) (1)1.1.1 GFP研究背景 (1)1.1.2 GFP研究应用 (2)1.2基因的克隆与表达 (3)2.实验试剂及实验仪器: (5)2.1实验试剂与材料: (6)2.2实验仪器: (7)3.实验方法 (7)3.1质粒提取方法: (7)3.2琼脂糖凝胶电泳及回收: (9)3.3酶切及连接: (11)3.4E. CO L I DH5Α或E. CO L I BL21感受态制备及转入: (12)3.5酶切验证重组质粒: (13)3.6GFP基因的表达 (14)3.6.1活化菌种 (14)3.6.2扩大培养 (14)3.6.3 IPTG诱导GFP基因的表达 (14)4.结果与分析 (14)4.1质粒提取过程中现象与结果: (14)4.2琼脂糖凝胶电泳 (15)4.3E. CO L I DH5Α或E. CO L I BL21感受态制备及转入结果: (16)4.4酶切验证重组质粒 (16)4.5GFP基因的表达结果: (17)5.讨论: (18)5.1提取质粒出现图六的原因是: (18)5.2琼脂糖凝胶电泳出现图七、图八原因: (18)5.3E. CO L I DH5Α或E. CO L I BL21感受态制备及转入出现图九、十原因: .. 19 5.4酶切验证重组质粒出现图十一原因: (19)5.5GFP基因的表达结果如图十二、十三原因: (19)6.参考文献 (20)前言:1.1绿色荧光蛋白(green fluorescent protein ,GFP )1.1.1 GFP 研究背景绿色荧光蛋白是一类存在于包括水母、水螅和珊瑚等腔肠动物体内的生物发光蛋白。
生物荧光成像技术的原理及应用生物荧光成像技术是一种非常重要的生物学研究技术。
它以显微镜为主要仪器,通过使用荧光探针的荧光特性,对生物样品进行实时、非侵入式地成像,从而深入研究生物分子在活细胞、组织、动物和生态环境中的分布、运动、交互和反应机制。
本文将重点介绍荧光成像技术的原理、应用和展望。
一、荧光成像技术的原理荧光成像技术是一种物理化学技术,利用荧光探针的特殊性质进行成像。
荧光探针作用于样品后,被激发后的荧光物质会发出特殊波长的荧光,这种荧光可以被转换成电信号或者图像,并且可以在电视屏幕或者计算机显示出来。
因此,荧光成像技术可以被用来检测和显示分子或者细胞的位置和行为。
荧光探针分为天然荧光物质和人工合成荧光物质两类。
其中,天然荧光物质包括叶绿素和激素等,这些物质在自然状态下就具有荧光特性,并且可以用于研究植物和动物细胞的光合作用和神经调控等生物过程。
而人工合成荧光物质则是通过化学合成技术生成的一类高亮度、高稳定性、高选择性的荧光探针。
人工合成荧光物质可以被用于特定分子标记,从而帮助研究人员观察特定分子在活体中的响应和变化。
二、生物荧光成像技术的应用荧光成像技术广泛应用于生物学、医学和生态学领域,其中包括以下几个方面。
1. 生物分子成像荧光成像技术可以通过对分子或者化合物进行标记来研究它们在细胞、组织、器官和整个生物体内的分布、转化和交互。
例如,可以利用荧光探针标记亚细胞结构,如线粒体、内质网、溶酶体、高尔基体等,从而观察细胞内这些结构的运动和分布情况。
同时,通过荧光蛋白标记显微观环境内的虫蚊和昆虫等生物,也可用于研究生态环境中的物种分布和生存状态。
2. 生物流体动力学成像流体存在于生物体内,例如血液、淋巴液、细胞液和细胞外液等都是生物的流体形态。
荧光成像技术可以利用荧光探针来标记和追踪这些流体,以及了解其流动状况和分布路径。
例如,在心血管疾病中,荧光标记可以用来观测血小板流动、血栓形成等病理生理现象;在肝脏学和肿瘤学中,荧光标记可以用于研究肿瘤细胞和白细胞的迁移趋势和细胞间的相互作用。
生物发光机制及其在生物医学研究中的应用研究进展生物发光现象是指生物体产生的可见光或紫外线,这是由于一些生物体内部的物质,如细胞色素,生物酶,蛋白质等受到外部刺激后,释放出能量,产生了光的发射,这种现象称为生物发光。
生物发光在医学研究中具有重要的应用价值,本文将介绍生物发光机制及其在生物医学研究中的应用研究进展。
一、生物发光机制生物发光机制是生物发光现象的物理化学基础,生物体内发光作用最常见的机制包括荧光作用、生物化学发光和生物体内利用外源性物质发光等三种。
荧光作用是指某些物质受到激发后,产生可见的荧光,这些物质被称为荧光染料,荧光染料具有含有芳环或双键等共轭结构,能吸收紫外线光线后,激发至高能态,随后快速发生非辐射跃迁,能量转移到基态分子中,形成荧光(荧光染料)现象。
生物化学发光是指由生物活性分子产生的发光现象,生物体内化学反应引起活性分子的能量释放和电子的非辐射跃迁,随后放射出光子,形成发光现象,如生物发酵过程,活性氧产生反应等都能够产生生化发光现象。
利用外源性物质产生发光现象就是在生物体内部加入一定的发光化学物质,通过作用引起生物体内的发光现象,这种方法被广泛应用于荧光显微技术中。
二、生物医学中的应用研究生物发光作为一种重要的生物学现象在生物医学研究中有着广泛的应用。
1. 生物荧光技术生物荧光技术指利用荧光染料或荧光蛋白等方法对生物体内蛋白质、细胞等进行成像、检测、分析等技术,已广泛用于细胞成像、蛋白质鉴定、DNA微阵列等生物技术领域中。
例如,奥地利学者穆勒和斯特克在1990年发明了绿色荧光蛋白,这项技术已被广泛用于生物成像、细胞进化等领域。
2. 癌症检测生物发光现象已被应用于癌症检测。
肿瘤细胞具有高度代谢活性,细胞分裂和增殖需要更多的能量和氧气,这会导致肿瘤细胞内氧分子量的减少,进而导致脱氧核苷酸发生超氧自由基反应和产生丙酮酸物质等过程,这种情况下,细胞就会产生生物发光现象。
因此,观察细胞内发光现象可以为肿瘤的检测提供一种新的检测方法。
生物发光与生物荧光成像技术生物发光和生物荧光作为生物学研究领域中的两个重要现象,已经被广泛应用于生命科学。
通过光学显微镜等设备,科学家们可以利用这两种现象来研究细胞和生物分子的运动、变化和互动情况。
在这篇文章中,我将介绍生物发光和生物荧光的基本概念、机制和应用,以及一些现代生物荧光成像技术的发展和应用。
生物发光和生物荧光的基本概念生物发光是指一些微生物或动物体内酶促反应产生的发光现象。
比如,萤火虫体内酶促反应将氧气和荧光素转化成氧化荧光素时,会产生强烈的发光。
而生物荧光则是指一些细胞或生物分子在受到特定波长的光激发后,会放出一种较弱但持久的发光。
比如,绿色荧光蛋白(GFP)是一种存在于水母等生物中的蛋白质,它在受到紫外线激发后会放出绿色荧光。
这两种现象都源于生物体内的化学反应,但机制有些不同。
生物发光主要是通过氧化还原反应产生的,而生物荧光则是通过一系列的电子跃迁来实现的。
不同的生物体和物种会产生不同种类的发光和荧光现象,其中一些种类已经被广泛研究和应用。
生物发光和生物荧光的应用在生命科学领域中,生物发光和荧光被广泛应用于生物成像、生命活动监测、基因表达分析等方面。
比如,在药物研发中,科学家可以利用荧光蛋白标记药物或生物分子,以跟踪其运动、变化和互动情况,从而了解它们的作用机理和效果。
在生物医学领域中,医生可以利用生物荧光成像技术来观察患者内部器官或组织的情况,实现无损检测。
生物荧光成像技术的发展随着生命科学研究的推进,生物荧光成像技术也在不断发展。
其中一个重要的进展是发展了基于转录调控的荧光标记体系,被称为“基因表达报告体系”。
这种体系通过将荧光蛋白的表达和特定基因的转录调控相结合,可以实现高效的荧光标记,并可以跟踪和研究不同基因在细胞和组织中的表达和调控。
同时,随着成像技术和成像设备的不断改进,比如:双光子激发荧光显微镜、荧光内窥镜等,生物荧光成像技术也变得更加精细和准确。
总结生物发光和生物荧光是生物学研究中的两个重要现象。