《生物化学与分子生物学综合实验》实验教学大纲
1、课程属性：任选
2、实验属性：独立设课
3、学时学分：总学时30、实验学时30、学分1.5
4、实验应开学期：春季
5、先修课程：有机化学、分析化学、普通化学、生物化学
一、课程的性质与任务
生物化学与分子生物学综合实验的实验课是在学习生物化学与分子生物学理论课的基
础上进行的一个实践性环节，本课程的教学任务是让学生运用已学过的知识验证一些结论、结果和现象，及综合运用已学过的理论知识设计实验或进行综合性的实验，巩固和加深对生
物化学与分子生物学课程中基本理论知识的理解，训练学生理论知识的运用能力、实验操作
技能、仪器仪表的使用能力、实验数据的处理和分析能力。
二、实验目的与基本要求
本实验课配合理论教学，通过实验从实践中进一步学习，掌握和运用学过的基本理论；
运用生物化学与分子生物学理论分析实验过程中的各种现象和问题，培养、训练学生的分析
和解决问题的能力。
学生必须完成的基本要求：准备实验，预习实验；写出预习报告，拟定记录表格；测取
实验数据；整理实验数据；写出实验报告。
三、实验考核方式及办法
考核方式：考查。实验成绩评分办法：实验技能占40%，实验态度占20%，实验报告
占20%，实验室常识占20%。
四、实验项目一览表
生物化学与分子生物学综合实验项目一览表
序
实验类型
实验要
求适用专业
学
时
号
实验项目名称
1
蛋白质含量测定（考马斯亮蓝G-250法）设计性必做农科类、植保、工程类3蛋白质含量测定（双缩脲法）设计性必做农科类、植保、工程类
2蛋白质含量测定（Folin酚试剂法）
设计性必做农科类、植保、工程类3蛋白质含量测定（紫外吸收法）设计性必做农科类、植保、工程类
3淀粉酶活力测定综合性必做农科类、植保、工程类
6 4质粒DNA的提取综合性必做农科类、植保、工程类3 5质粒DNA的琼脂糖凝胶电泳分析综合性必做农科类、植保、工程类3
6聚合酶链式反应（PCR）技术及电泳检测综合性必做农科类、植保、工程类
6
7SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白综合性必做农科类、植保、工程类
6质分子量
五、实验项目的具体内容
实验一蛋白质含量测定（考马斯亮蓝G-250 法）
1、本次实验的目的和要求
学习和掌握考马斯亮蓝G-250 法测定蛋白质含量的原理和方法。比较不同方法测定蛋白质含量的异同。
2、实验内容或原理
考马斯亮蓝G-250在游离状态下呈棕褐色，当它与（浓度0~100卩g /ml）蛋白质结合呈蓝
色，颜色随蛋白质浓度的增加而加深，在595nm 波长下光吸收和蛋白质浓度成正比。
3、需用的仪器和试剂
试管、离心管、研钵、移液管、离心机、分光光度计、牛血清白蛋白、考马斯亮蓝G-250
4、实验步骤
标准曲线的配制、样品中蛋白质的提取、结果与计算
5、教学方式
学生为主，教师辅助，充分预习，独立完成。
6、考核要求
以出勤、随堂提问、实验报告和预习报告为主要考核内容。
7、实验报告要求
实验报告应包括下列各项：
（ 1 ）报告的题目（要简明确切）；
（ 2 ）写报告人及共同测定人员的姓名；
（3）实验目的；
（4）实验原理；
（ 5 ）实验仪器和试剂（包括主要仪器的规格、主要试剂的名称）；
（6）实验数据记录（包括原始数据记录表格和整理后的数据记录表格）；
（7）实验结果。明确提出本次实验的结论，用公式计算。
（8）分析与讨论，要对实验结果做出估计，分析误差大小及原因，对实验中发现的问题应进行讨论，对实验方法、实验设备有何改进建议也可写入此栏；
（9）回答思考题。
实验二蛋白质含量测定（双缩脲法）
1 、本次实验的目的和要求
学习和掌握双缩脲法测定蛋白质含量的原理和方法。比较不同方法测定蛋白质含量的异同。
2、实验内容或原理
碱性溶液中双缩脲（NH2-C0-NH-C0-NH）能与Cu2+产生紫红色的络合物，这一反应称为“双缩脲反应” 。蛋白质分子中的肽键也能与铜离子发生双缩脲反应，溶液紫红色的深浅与蛋白质含量在一定范围内符合朗伯-比尔定律，而与蛋白质的氨基酸组成及分子质量无关。其可测定范围为1〜10mg蛋白质，适用于精度要求不高的蛋白质含量测定。Tris，—些氨基酸，
EDTA等会干扰该测定。
3、需用的仪器和试剂
试管、离心管、研钵、移液管、离心机、分光光度计、牛血清白蛋白、双缩脲试剂、NaOH
4、实验步骤
标准曲线的配制、样品中蛋白质的提取、结果与计算
5、教学方式学生为主，教师辅助，充分预习，独立完成。
6、考核要求以出勤、随堂提问、实验报告和预习报告为主要考核内容。
7、实验报告要求实验报告应包括下列各项：
（1）报告的题目（要简明确切）；
（2）写报告人及共同测定人员的姓名；
（3）实验目的；
（4）实验原理；
（5）实验仪器和试剂（包括主要仪器的规格、主要试剂的名称）；
（6）实验数据记录（包括原始数据记录表格和整理后的数据记录表格）；
（7）实验结果。明确提出本次实验的结论，用公式计算。
（8）分析与讨论，要对实验结果做出估计，分析误差大小及原因，对实验中发现的问题应进行讨论，对实验方法、实验设备有何改进建议也可写入此栏；
（9）回答思考题。
实验三蛋白质含量测定（Folin 酚试剂法）
1、本次实验的目的和要求
掌握Folin- 酚法测定蛋白质含量的原理方法，熟悉分光光度计的操作。比较不同方法测定蛋白质含量的异同。
2、实验内容或原理
Folin- 酚法测定蛋白质含量的过程包括两步反应: 第一步是在碱性条件下蛋白质与
CuSQ作用生成络合物，第二步是此络合物还原Folin试剂（磷钼酸和磷钨酸试剂），生成深蓝色的化合物，且颜色深浅与蛋白质的含量成正比关系。该方法灵敏度高于双缩脲法100倍。
3、需用的仪器和试剂
分光光度计、水浴锅、试管、具塞试管、小烧杯、漏斗及架、电子天平、吸管、容量瓶、滤纸、玻棒、研钵、离心机、离心管、Folin- 酚试剂
4、实验步骤
标准曲线的配制、样品中蛋白质的提取、结果与计算
5、教学方式
学生为主，教师辅助，充分预习，独立完成。
6、考核要求以出勤、随堂提问、实验报告和预习报告为主要考核内容。
7、实验报告要求
实验报告应包括下列各项：
（1）报告的题目（要简明确切）；
（2）写报告人及共同测定人员的姓名；
