当前位置：文档之家 › 大川芎方中天麻效应组分的体内移行研究

大川芎方中天麻效应组分的体内移行研究

  • 格式：pdf
  • 大小：414.22 KB
  • 文档页数：4

大川芎方中天麻效应组分的体内移行研究林晓1，2，袁莹2，洪燕龙1，徐德生3，沈岚2，冯怡1*（1.上海中医药大学中药现代制剂技术教育部工程研究中心，上海201203；2.上海中医药大学中药学院，上海201203；3.上海中医药大学附属曙光医院，上海200021）

［摘要］目的：借鉴血清药物化学的方法，探讨大川芎方中天麻的药效物质基础，为有效、全面地控制大川芎方及其制剂

的质量奠定基础。方法：通过HPLC指纹图谱，比较空白血浆与含药血浆，空白脑脊液与含药脑脊液的成分异同，确定天麻效应组分的体内移行成分，并应用HPLC-DAD-MSn分析技术推测移行成分的化学结构。结果：灌胃大川芎方效应组分后，血浆中较明显来源于天麻效应组分的色谱峰有2个，经推断分别为天麻素和巴利森苷类成分；而脑脊液中未明显检测到来源于天麻效应组分的色谱峰。结论：天麻体内移行成分研究有助于阐明其效应物质基础。［关键词］天麻；效应组分；移行成分；物质基础

［稿件编号］20101201011［基金项目］国家“重大新药创制”科技重大专项（2009ZX09502-009）；上海市科委项目（09DZ2292000）；上海市教育委员会科研创新

项目（09YZ117，11zz112）；上海市教育委员会重点学科资助项目（J50302）；上海中医药大学杏林学者培养计划项目（R110212）［通信作者］*冯怡，Tel/Fax：（021）51322491，E-mail：fyi@vip.sina.com

大川芎方源于金·刘完素《宣明论方》，由川芎、天麻2味药组成，具有活血化瘀、平肝息风、通络止痛之功效，临床主要用于血瘀所致血管神经性头痛，是治疗偏头痛的经典中药复方。然而大川芎方的药效物质基础尚不明确，为进一步阐明其作用机制及建立完善的质量标准带来了困难。本课题组对大川芎方治疗偏头痛的物质基础部位进行提取、纯化，得到了富集程度较高的大川芎方效应组分，即川芎效应组分与天麻效应组分［1］。前期研究表明，此效应组分可以有效缓解头痛症状。中药成分复杂，口服给药后，被吸收的成分可能才是其真正的起效成分，因此，对中药及复方进行血中药物化学研究，可以帮助弄清其入血成分、代谢产物，揭示其药效物质基础［2］。对川芎效应组分血液、脑脊液移行成分研究表明，阿魏酸和洋川芎内酯I为其主要入血成分，其中后者为川芎效应组分既入血又入脑的化学成分［3］。本文旨在以上研究的基础上，进一步对大川芎方中天麻效应组分的血浆与脑脊液移行成分进行研究，从而为更加有效、全面地控制大川芎方及其制剂的质量奠定基础。1材料

Agilent1100高效液相色谱仪（美国Agilent公

司），LCQdeca型质谱仪（美国Finnigan公司）。天麻素对照品（中国药品生物制品检定所，批号110807-200205）；天麻药材经本校生药教研室赵志礼教授鉴定为兰科植物天麻GastrodiaelataBL.的干燥块茎，购于上海康桥饮片公司（产地四川，批号070302）。甲醇（Sigma公司，色谱纯）；乙腈（Sig-ma公司，色谱纯）；冰醋酸（国药集团化学试剂有限

公司，分析纯）；肝素钠（上海第一生化药业有限公司），使用时用生理盐水配成10%浓度；戊巴比妥钠（上海医药集团有限公司信谊制药总厂），用时配成

4%浓度；高氯酸（中国医药生物上海化学试剂

公司）。SD大鼠，雄性，体重（250±10）g，由上海中医

药大学实验动物中心提供，合格证号SCXK（沪）2003-0002。适应性喂养1周，每天自由进食、饮水。2方法

2.1天麻素对照品溶液的制备取天麻素对照品

约10mg，精密称定，置10mL量瓶中，用甲醇定容，作为对照品溶液，进样前经0.45μm微孔滤膜滤过。2.2天麻效应组分溶液的制备取天麻粗粉一定

量，加10倍量70%乙醇，提取2次，每次1h，滤过，·5711·

第36卷第9期2011年5月Vol.36，Issue9May，2011合并滤液，减压回收乙醇，浓缩至相当于生药0.50g·mL－1，5000r·min－1离心15min，取上清液，减压浓缩至相当于生药4.0g·mL－1，加乙醇至醇含量70%，静置24h，滤过，加40%NaOH溶液调pH至8.0，静置24h，滤过，用70%乙醇溶液定容至1.0g·mL－1，作为天麻效应组分溶液。2.3天麻效应组分样品液的制备分别精密量取天麻效应组分1.0g·mL－1的溶液2mL于5，25mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀后经0.45μm水相微孔滤膜滤过，作为天麻效应组分HPLC样品溶液和LC-MS2样品溶液。2.4灌胃给药分组本实验动物分为4组。空白组以10mL·kg－1灌胃生理盐水；天麻效应组分组以10mL·kg－1灌胃1.36g·mL－1天麻效应组分溶液；川芎效应组分［3］组以10mL·kg－1灌胃5.43g·mL－1川芎效应组分溶液；大川芎方效应组分组以10mL·kg－1灌胃6.79g·mL－1大川芎方效应组分溶液。2.5空白与含药血浆样品的制备SD大鼠24只，雄性，体重（250±10）g，适应性喂养7d后，称重，标号，随机分为4组，分别灌胃上述4组样品。受试前禁食12h，全程不禁水。4个实验组均在给药30min后眼眶取血，血样注入1mL离心管中，加入肝素钠，轻轻混匀，4000r·min－1离心10min后取上清液0.5mL，加入0.1mL70%高氯酸溶液，涡旋15s，4000r·min－1离心10min，吸取上清夜作为血浆样品溶液。2.6空白与含药脑脊液的制备各组在灌胃30min后眼眶取血，取血后腹腔注射40mg·kg－1戊巴比妥钠进行麻醉，在给药1h后用1mL注射器于枕骨大孔处抽取脑脊液200μL，注入离心管中，12000r·min－1离心10min，吸取上清液作为脑脊液样品溶液。2.7色谱条件Kromasil-C18色谱柱（4.6mm×250mm，5μm）；流动相乙腈-1%醋酸，梯度洗脱，0min2%乙腈，15min2%乙腈，40min25%乙腈；柱温25℃；流速0.8mL·min－1；检测波长270nm。2.8质谱条件电喷雾离子源，正、负离子检测；源电压4.00kV；辅助气流速1．5L·min－1；鞘气流速18L·min－1；毛细管温度275℃；毛细管电压3V；全离子扫描方式，扫描范围m/z100～1000；MS2碰撞能量40%。3结果3.1天麻效应组分的化学组成天麻为传统名贵

中药，主要含有酚类成分，还有少量的含氮化合物如核苷类和氨基酸类化合物［4］。天麻效应组分指纹图谱呈现23个共有峰，采用HPLC-DAD-MS2技术推断出5个主要共有峰的化学组成，见图1，2和表1。其中，3～5号峰表现出相似的光谱和质谱特征，为巴利森苷类成分。

·6711·

第36卷第9期2011年5月Vol.36，Issue9May，2011表1天麻效应组分各化学成分HPLC-DAD-MS2数据及结果推测No.tR/minλmax/nmMS［M－H］－MS［M+NH4］+MS2［M－H］－化合物

113．05220，270285161，123天麻素

232．64236，273412434339，308，285，233，179，162S-（4-hydroxybenzyl）-glutathion

335．97220，270995746459，441，423，397，379，369，263，173，161

巴里辛

436．52220，270727746459，441，423，397，379，369，263，173，161巴里辛C539．85220，270727746459，441，423，397，379，369，263，173，161巴里辛B

天麻素和柠檬酸的聚合物（即巴利森苷类化合物）相应的质谱较复杂，不仅有聚合键（酯苷键）的断裂，还有组成单体各自的特征断裂。例如：由3分子天麻素和1分子柠檬酸聚合脱水形成的巴利森苷，其负离子质谱中主要显现2个酯苷键的断裂，表现为连续失去天麻素残基得到碎片离子m/z727，459，还有一系列离子（m/z441，423，397，379，369）来自于叔醇羟基的脱水和酯苷键水解后产生的游离羧基所表现的脱二氧化碳或邻二羧基的脱水。此外，还有天麻素残基相关的离子m/z263，161和柠檬酸的特征离子m/z173，129，111［5］。3.2大川芎方中天麻效应组分血与脑脊液中移行成分研究对比4组血浆样品及天麻效应组分的HPLC指纹图谱，灌胃大川芎方效应组分后，血浆中较明显来源于天麻效应组分的吸收峰有2个。结合天麻效应组分HPLC-MS2鉴定结果和紫外数据，推断1号峰为天麻素，5号峰为巴利森苷类成分。对比4组脑脊液样品及天麻效应组分的HPLC指纹图谱发现，脑脊液中未明显检测到来源于天麻效应组分的色谱峰。4讨论天麻效应组分中主要含有酚类成分，酚类化合物的一级质谱在正离子模式下显现较强的加氨离子［M+NH4］+，负离子模式下多表现较强的［M－H］－。简单酚类化合物的二级质谱较简单，主要表现为官能团酚羟基和羰基的特征断裂。如天麻素作为对羟基苯甲醇的葡萄糖苷，其负离子二级质谱中除了对羟基苯甲醇的特征离子外，主要表现苷键断裂产生的2个互补离子m/z123，161。虽然天麻效应组分HPLC图谱中保留时间为16.5，25.5min的色谱峰有较强的紫外吸收，但在质谱图中相应保留时间色谱峰的丰度较低，几乎无法检测到。这可能是由于天麻所含化学成分多为结构较简单的对羟苄基衍生物，这类成分相对分子质量较小，与HPLC-ESI-MS相比更适合采用GC-EI-MS进行分析。实验中分别考察了有机溶剂法和加酸法处理血浆的效果。结果表明，加酸法优于有机溶剂法，且高氯酸法优于三氯乙酸法。因此，最终采用高氯酸法处理血浆样品。现代药理学研究表明，川芎、天麻在治疗偏头痛时的起效途径不同，川芎主要作用于血管，而天麻主要作用于神经［6］，2味药相辅相成可以有效地治疗

偏头痛。大川芎方血中移行成分研究表明，川芎、天麻效应组分按原方配伍给药后血中没有出现新的成分，阿魏酸、洋川芎内酯I为川芎效应组分的主要入血成分，其中洋川芎内酯I为川芎效应组分既入血又入脑的化学成分［3］，而天麻素、巴利森苷为天麻

效应组分的主要入血成分，提示这些成分很可能是大川芎方效应组分的药效物质基础。其中，阿魏酸与天麻素已经被证实是大川芎方治疗偏头痛的有效成分，而洋川芎内酯I治疗偏头痛的作用也已被我们所证实［7］，但未见有关巴利森苷治疗偏头痛的文

献报道，对其进行相关的药理研究有助于进一步阐明大川芎方效应组分的物质基础，从而为建立其完善的质量控制标准奠定基础。［参考文献］［1］洪燕龙，冯怡，徐德生，等．大川芎方治疗偏头痛效应组分的提

取、纯化工艺研究［J］．中药材，2007，30（6）：721．［2］王喜军．中药及中药复方的血清药物化学研究［J］．世界科学

合集下载

【方剂】大定风珠，天麻钩藤饮，镇肝熄风汤，羚角钩藤汤消风散，牵正散，大秦艽汤，川芎茶调散

【方剂】大定风珠，天麻钩藤饮，镇肝熄风汤，羚角钩藤汤消风散，牵正散，大秦艽汤，川芎茶调散

【方剂】大定风珠，天麻钩藤饮，镇肝熄风汤，羚角钩藤汤消风散，牵正散，大秦艽汤，川芎茶调散方剂之治风剂之平熄内风之大定风珠2010年12月27日星期一下午 06:22大定风珠《温病条辨》[组成] 1、生白芍六钱(18g) 2、阿胶三钱(9g) 3、生龟板四钱(12g) 4、干地黄六钱(18g) 5、麻仁二钱(6g) 6、五味子二钱(6g) 7、生牡蛎四钱(12g) 8、麦冬连心，六钱(18g) 9、炙甘草四钱(12g) 10、鸡子黄生，二枚(2个) 11、鳖甲生，四钱(12g)[用法] 水八杯，煮取三杯，去滓，再入鸡子黄，搅令相得，分三次服(现代用法：水煎，去渣，入阿胶烊化，再入鸡子黄，搅匀，分三次温服)。

[功用] 滋阴熄风。

[主治] 阴虚风动证。

手足瘈疭，形消神倦，舌绛少苔，脉气虚弱，时时欲脱者。

[方解] 大定风珠证乃温病后期，邪热久羁，灼伤真阴；或因误汗、妄攻，重伤阴液所致。

肝为风木之脏，阴液大亏，水不涵木，虚风内动，故手足瘈疭；真阴欲竭，故见形瘦神倦，舌绛少苔，脉气虚弱，有时时欲脱之势。

此时邪热已去八九，真阴仅存一二。

治当滋阴养液，以填补欲竭之真阴，平熄内动之虚风。

君药鸡子黄、阿胶为血肉有情之品，滋阴养液以熄虚风。

臣药生白芍、干地黄、麦冬壮水涵木，滋阴柔肝，重用。

佐药龟板、鳖甲、牡蛎、麻仁、五味子、生白芍、甘草，阴虚则阳浮，故以龟板、鳖甲、牡蛎介类潜镇之品，滋阴潜阳，重镇熄风；麻仁养阴润燥；五味子酸收，与滋阴药相伍，而收敛真阴；与生白芍、甘草相配，酸甘化阴。

以上诸药，协助君、臣药加强滋阴熄风。

炙甘草调和诸药，为使药。

大定风珠配伍，以大队滋阴养液药为主，配以介类潜阳之品，寓熄风于滋养之中，使真阴得复，浮阳得潜，则虚风自熄。

大定风珠由加减复脉汤(炙甘草、干地黄、生白芍、阿胶、麦冬、麻仁)加味变化而成。

由于温病时久，邪热灼伤真阴，虚风内动，故加鸡子黄、五味子、龟板、鳖甲、牡蛎等滋阴潜阳之品，从而由滋阴润燥之方衍化而成滋阴熄风之剂。

中药配方方解

中药配方方解

名方篇真武汤（称玄武汤）《伤寒论》组方：茯苓15克芍药10克白术10克生姜10克制附子5克用法：煎汤，每日三次，每日一剂。

或共细为末，每次3g，每天两次。

适应症：用于治疗阴虚证而引起的新陈代谢功能低下，由于表阳虚，内阴寒，外虚热，内水冲而引起的心惊头昏欲倒，腹痛下痢，大致可归纳为：○1阳症的流感，肺炎，胸膜炎，肺结核。

○2神经系统痴患，神经衰弱，脑出血高血压脑病。

○3心脏病中的心瓣膜病，心力衰竭，心悸，浮肿等。

○4消化系统疾病，胃，肠功能低下，肠炎，肠结核胃下垂等。

○5泌尿系统疾病，慢性肾炎和肾萎缩。

○6半身不逐，疟疾，湿疹，老年性瘙痒症，遗尿。

方解：茯苓逐胃内积水，镇静上冲之气，白术助茯苓去水，芍药补里虚，调整胃肠功能；附子的温补力很强，和生姜一起，提高新陈代谢的活力，恢复元气，由于有些药力的综合作用，使体液得到调节，胃肠功能改善。

而治心悸并使元气恢复。

药物功效：芍药为活血、茯苓为利尿药，干姜为驱风附子为温中药。

附记：本方适用于阴虚证所致之新陈代谢功能低下症，表阳虚，内阴寒所致之心悸、头昏等。

苓姜术甘汤《金匮要略》组方：茯苓20克干姜10克白术15克甘草10克用法：水煎服，每日一剂，一天三次。

或共细为末（或制成蜜丸），每次5g，每日三次。

适应症：用于腰以下发冷的表证。

治腰痛、腰冷，坐肾神经痛，夜尿症，遗尿症，白带多，以及皮肤湿疹，溃疡等。

方解：主要治疗寒湿证，具有温表利水作用。

茯苓、白术逐表湿利水；干姜温表利水；甘草和干姜一起，温里补下焦，有制止尿频的作用。

本方用于治表寒证的腰痛，坐骨神经痛、夜尿症，遗尿症等，具有温表作用。

当归芍药散《金匮要略》组方：当归15克川芎15克芍药20克茯苓10克白术10克泽泻10克用法：共细为末，每次4g，每日3次。

适应症：本方用于体虚贫血、足冷、乏力、月经不调等症。

如贫血、低血压，腰腿发冷月经不调，不孕症，神经衰弱，半身不遂等和神经质。

方解：当归补血润血，治贫血，芍药理气止痛；川芎补血理气；茯苓利水；白术、泽泻利尿。

微粉中药的应用与存在问题探讨

微粉中药的应用与存在问题探讨

微粉中药的应用与存在问题探讨摘要】本文对微粉中药的特点、应用优势以及存在的问题进行了全面阐述，并对微粉中药的研究与应用提出建议。

【关键词】微粉中药应用优势存在的问题建议中药是我国劳动人民几千年同疾病作斗争过程中不断积累的经验总结，在应用于临床时须经过适当的加工，才能更好的发挥其独特疗效，其中粉碎是不可缺少的加工环节。

通过粉碎可以增加药物的表面积，促进药物溶解；利于制备各种剂型；便于调配、服用等。

传统的中药粉碎速度慢，产生的“头子”多，易产热，粉末粒径大，在一定程度上阻碍了中药的现代化发展。

上世纪八十年代发展起来的超微粉碎技术，解决了中药传统粉碎的很多难题，尤其适用于含遇热易分解成分的中药、纤维性强的中药、质地坚硬的矿物药以及子仁类、树胶类、贵重稀少中药的粉碎。

通过超微粉碎技术得到的中药粉末称为微粉中药，其粉体更加细腻、均匀，改善了中药的品质，提高了中药的利用率，推动了中药的现代化、标准化。

笔者近年通过课题研究，发现微粉中药在临床应用及制药业有很大的优势，也存在一些亟待解决的问题。

1 微粉中药的应用优势1.1提高有效成分溶出率，增强疗效微粉中药粒径小，表面积大，能充分与溶媒接触，便于活性成分的溶出，另外其质地细腻均匀，能很好的吸附于人体皮肤或黏膜，从而更好的发挥疗效。

张尚斌等[1]对脑髓康胶囊进行剂型改革，其中天麻、全蝎经微粉工艺，进行为期半年的临床疗效观察，结果表明改革后的剂型比原剂型临床疗效有了明显的提高。

张兰英等[2]对普通粉碎和超微粉碎制成的糖泰胶囊和芩连胶囊进行药理效应对比，结果表明超微粉碎制成的样品其药理效应明显高于普通粉碎制成的样品，从而说明超微粉碎后能增强疗效。

刘莉等[3]用扭体法及热板法比较川芎超微粉、细粉及水提物、醇提物和双提物的镇痛作用，结果川芎超微粉的镇痛效果最好，表明川芎超微粉较细粉更能增加有效成分的溶出，提高药效。

陈旭[4]通过三七超微粉碎对生物体内吸收影响的研究结果显示，三七经超微粉碎后，药物的吸收效果更好。

药象体会：当归、川芎、白芍、天麻

药象体会：当归、川芎、白芍、天麻

药象体会：当归、川芎、白芍、天麻20090814根尘不偶老师讲药象体会：当归、川芎、白芍、天麻前一段时间呢，主要忙着校对《四圣心源》，没有来跟大家交流。

主要想给大家校对一个完美的版本，尽量没有错误，花的时间也比较多。

最近是刚刚校对完，所以能够稍微轻松一下，来跟大家聊聊。

因为我们这个讲堂呢，爱好者为主，咱们讲得呢尽量轻松一些，既是学习，也是一种放松。

所以我讲的时候呢，可能会讲的比较随意一些，不会太严谨，大家主要听个意思就可以了。

以前药性呢，给大家讲了中土的药性。

中土的药物基本上都讲完了。

最后一次是给大家讲了一个框架，就是所有的药物其实都是可以看成一味药。

它也是完全符合一气周流的这个体系，都在一气周流这个圈里、这个范围里面。

每一味药我们都可以在这个体系里给它一个位置，它属于哪个位置的一味药，不管有多少，都可以安排进来。

所以今天呢，我们就从左右一气的角度，给他们安排座位了。

上次给大家讲这个框架，底下是附子，上面是麻黄，这是左路的；右路的，上面是石膏，下面是大黄还是什么。

好像就给大家讲了这么一个框架。

今天就在这个框架的基础上，把其他常用的药物往里面安插一下，慢慢把所有的药物组成一个完整的体系。

那时候我们对所有的药就是一个药的感觉了，临床用药的时候就比较自如了，左右逢源、信手拈来、应对得当，比较简单了。

左路这个药呢，从一气周流的角度来讲，左路主升发，阴出于阳，由阴出阳、由阴化阳的一个过程，所以药物也是对应于这个过程。

所以左路的药物基本上都是偏升发、偏柔韧，都具有这样类似的特点，跟右路是完全不一样的。

因为这个一气周流，它是浑然一体，左路升的同时，右路也在降。

左右其实不可能截然分开，升降也不可能截然分开，所以我们讲的时候呢，有可能把这个左路的药和右路的药对比着、混合着一块讲，大概会分一分，但是不会那么绝对。

今天晚上就给大家讲几味左路比较常用的药，以前也跟大家聊过，主要讲当归、川芎、白芍、天麻，讲这四味药。

我们首先来讲一下当归。