实验六、药物的利尿作用
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实验六、药物的利尿作用
【目的】学习利尿药的实验方法，观察利尿药对水、电解质排泄的影响，掌握其作用机制。
【原理】呋塞米作用于髓袢升支粗段，与腔膜侧K-Na-2Cl同向转运系统的Cl结合部位结合，妨碍同向转运系统，干扰NaCl的重吸收，使官腔液中的NaCl浓度增加，净水生成减少，尿的稀释功能受到抑制。同时因NaCl向间质转运减少，使肾髓质间液渗透压梯度降低，导致尿液流经结合管时，水的重吸收减少，影响尿的浓缩过程，排出大量近等渗尿液。
【实验流程】
1、麻醉家兔，保留静脉通道，并插入导尿管。
2、注射生理盐水，并收集尿液，作为用药前尿液。
3、给予呋塞米，收集尿液，作为给药后尿液。
4、比色法测定Na+浓度，并计算Na+总量。
【实验材料】雄性家兔，3%戊巴比妥钠，1%呋塞米， 0.9%氯化钠，2 ml、20 ml注射器，50 ml烧杯，导尿管，10 ml量筒。
【实验方法】取家兔1只，称重，用3%戊巴比妥钠1ml/kg经耳缘静脉注射麻醉，保留静脉通道。背位固定家兔，插入导尿管并固定。按压膀胱，弃去5分钟尿液。缓慢静脉注射生理盐水10 ml/kg，呋塞米0.5ml/kg，观察并记录各药给药前、后30 min尿量。同时可按照下述方法测定尿液中Na+含量。
【实验结果】将实验结果填入下表：
表1 呋塞米对家兔尿量和尿钠的影响
药 物 尿液量(ml) 钠浓度（mg/ml） 钠总量(mg)
生理盐水
1%呋塞米
附：尿Na+含量测定方法
【原理】用无水乙醇沉淀尿中蛋白得无蛋白尿滤液，其中钠与焦性锑酸钾作用生成焦性锑酸钠沉淀，与标准管比较求其Na+浓度。
化学反应式如下：NaCl + K[Sb(OH)6] → Na[Sb(OH)6] + KCl
【药品】
1. 钠标准液(1 ml = 0.15 mg)：取0.3815 g氯化钠加水50 ml溶解，再以无水乙醇加至100 ml，充分混匀后备用。
2. 无水乙醇。
3. 2%焦性锑酸钾：取焦性锑酸钾10g, 溶于500 mL蒸馏水中，煮沸3～5 min，用冷水冷却，加10%氢氧化钾15 ml，过滤后保存于棕色玻璃瓶中备用。
【方法】 取尿0.1 ml加无水乙醇1.9 ml，置于离心管中，用力振摇后放置10 min,
2500 rpm离心5 min，取上清液按下表程序操作。
表2 尿钠测定
试剂 标准管 测定管 空白管
尿上清液 ---- 0.5 ----
蒸馏水 0.5
钠标准液 0.5 ---- ----
2%焦性锑酸钾 5.0 5.0
5.0
(单位：ml)
操作完毕后，混匀，用分光光度计在波长520 nm比色，以空白调零点，读光密度值(OD520)。
【计算】 钠浓度(mg/ml) =( 测定管OD520×0.075)/(标准管OD520×0.025)
总钠量 = 钠(mg/ml)×30 min内尿量
【注意事项】
1. 加无水乙醇后应用力振摇，使迅速沉淀，蛋白颗粒均匀。
2. 标准液需临用前现配。
3. 操作完毕立即比色，久置颗粒变粗影响结果。
