细菌基因组DNA提取试剂盒(离心柱型)

细菌基因组DNA提取试剂盒（离心柱型）
GK1071 50 Preps
GK1072 100 Preps
GK1073 20 Preps
一.试剂盒组成
Components GK1071
50 Preps
GK1072
100 Preps
GK1073
20 Preps
gDNA Recovery Column 2.0-ml Collection Tube Digestion Solution(a)
Wash Solution(b)
PB Solution
Ext Solution
Elution Buffer(c)
TE(pH8.0)
Boiled RNase A
Proteinase K(d)
Lysozyme(e)
SP Buffer
Buffer CBS
protocol
50
50
25 ml
12 ml
20 ml
20 ml
10 ml
15 ml
240 µl
250 µl
30 mg
1.0 ml
15ml
1
100
100
50 ml
24 ml
40 ml
40 ml
20 ml
25 ml
480 µl
500 µl
60 mg
1.0 ml
30ml
1
20
20
10 ml
12 ml
8 ml
8 ml
10 ml
15 ml
120 µl
100 µl
15 mg
1.0 ml
6ml
1
(a)Digestion Solution低温时可能出现沉淀，请于55℃适当加温溶解后使用，不会影响实验结果。

(b) 首次使用前，必须在Wash Solution瓶中加入4倍体积的无水乙醇，充分混匀后使用。

每次使用后将瓶
盖盖紧，以保持Wash Solution中的乙醇含量。

如果发现Wash Solution由于运输或保管不当造成体积严重不准，请用量筒定容后再加入4倍体积的无水乙醇。

(c)Elution Buffer为2.5 mM Tris-HCl, pH8.5，请4℃保存。

TE (pH8.0) 或者水（pH>7.0）均可以使用，但是
DNA的洗脱效率通常要低20%左右。

(d)不得将Proteinase K直接加到Digestion Solution中，以免酶失活。

(e) Lysozyme使用前加入50µl(GK1070)、500µl(GK1071)、1ml(GK1072)或200µl (GK1073)SP Buffer，使
Lysozyme全部溶解。

分装后-20℃冻存。

客户自备：PBS缓冲液，胰蛋白酶，无水乙醇
运输储存温度
运输室温
储存 Proteinase K , Lysozyme , Boiled RNase A : -20℃
其他室温
二．主要用途
从各种培养细胞和细菌中小规模抽提基因组DNA。

三．主要特点
1.离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口特制吸附膜，柱与柱之间吸附量差异极小，重复性好。

2.不需要使用有毒的苯酚等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。

3.快速，简捷，单个样品操作一般可在50分钟内完成。

4.多次柱漂洗确保提取细菌基因组的高纯度，OD260/OD280典型的比值达1.7～1.9，长度可达50Kb～
100kb，可直接用于PCR， Southern-blot和各种酶切反应。

四．培养细胞与细菌样品准备
1．培养细胞的准备
(1) 对于悬浮培养细胞： 1,000g室温离心5分钟，彻底去除上清。

(2) 对于单层培养细胞：吸去培养基，用PBS洗涤细胞，然后用胰蛋白酶消化细胞。

当细胞从培养瓶表面脱
落以后，将细胞转移到离心管中，1,000g室温离心5分钟，彻底去上清。

(3) 将离心去上清的细胞用150µl TE(pH8.0)悬浮。

处理细胞可达1×106～1×108个，增加处理细胞数量，请相应增加处理时间。

2．细菌样品的准备
(1) 将适量的指数生长期细菌（最多可达1×109细菌，约1ml过夜培养菌液），8,000rpm，离心1分钟，彻
底弃净培养基。

(2) 加入150µl TE(pH8.0)悬浮细菌，按照下表中的要求加入Lysozyme溶液，用吸头混匀，对于革兰氏阳性
和革兰氏阴性菌酶解时间的要求是不一样的，详见下表。

柱子准备：在gDNA recovery Column中加入200μl Buffer CBS , 10,000rpm离心1分钟，弃透过液，备用。

1. 在按准备方法制备的150µl TE悬浮样品中，加入300µl Digestion Solution，混匀；加入4µl RNase A混
匀，55℃保温10分钟；再加入4µl Proteinase K， 55℃保温10～30分钟。

注意：(1)应按次序加入，不得将Proteinase K先加入Digestion Solution，再加到样品中。

(2)保温时间取决于样品的类型。

对于细胞样品，55℃保温10分钟足以使细胞裂解，释放出基
因组DNA。

降解完全的样品应是透明液体。

2. 如获得的裂解液粘稠度较低，则直接添加300µl PB Solution，充分摇动混匀，12,000rpm室温离心5分
钟，将上清全部转移到套放于2ml收集管内的gDNA recovery Column柱中。

注意：(1) 如获得的裂解液过于粘稠，则依次添加300µl Ext Solution以及300ul PB solution充分摇匀，12,000rpm室温离心5分钟，上层溶液为蓝色，基因组DNA存在于下层溶液中，两层中间可能会
有一些沉淀物。

然后用1ml Tip头伸到下层，将下层溶液全部转移到套放于2ml收集管内的
gDNA recovery Column柱中，注意尽量不要吸到上层溶液和中间层沉淀。

(2) 加入Ext和PB溶液后，一定要用力充分摇匀，否则后面离心时杂质不容易分层。

3. 8,000rpm室温离心1分钟。

取下gDNA recovery Column柱，弃去收集管中的废液。

4. 将gDNA recovery Column柱放回收集管中，加入500µl Wash Solution，8,000rpm，室温离心1分钟。

取
下gDNA recovery Column柱，弃去收集管中的废液。

5. 重复步骤4一次。

6. 将gDNA recovery Column柱放回收集管中，12,000rpm，室温离心1分钟，以去除残留的Wash
Solution。

注意：此步骤高速空离是为了去尽残留的乙醇，请勿省略，否则可能因所纯化的核酸中残留有乙醇而影响后续的实验效果。

7. 将gDNA recovery Column柱放入新的洁净的1.5ml离心管中，在gDNA recovery Column柱中央加入50～
100µl Elution Buffer，室温或37℃放置2分钟。

注意：(1)为提高洗脱效率，可以将Elution Buffer预热到55～80℃。

(2) 如果样品中基因组DNA含量很低，用30µl Elution Buffer洗脱可以提高洗脱液的样品浓度，
但产率有所下降。

8. 12,000rpm，室温离心1分钟。

离心管中的液体即为基因组DNA。

根据用途，样品可以4℃或-20℃保存。

注：重复步骤7～8，将洗脱液再次加入到吸附膜上，重新洗一次，可以提高产率10%～20%。

9. 用分光光度计测量DNA含量按1OD260=50µg/ml基因组DNA定量并标记。

进行0.7%琼脂糖凝胶电泳判定
DNA的完整性，也可以判定样品中是否有RNA。

本试剂盒抽提的DNA长度可达100kb以上。

六．储存
常温储存1.5年.
Product Use Limitation:
This product is developed, designed and sold exclusively for research purpose and in vitro use only.。