GP73与肝癌关系研究进展

血清肿瘤标志物GP73对原发性肝癌诊断价值的系统评价摘要：目的探究几种血清肿瘤标志物（ＧＰ７３）、异常凝血酶原（ＤＣＰ）和磷脂酰基醇蛋白聚糖－３（ＧＰＣ－３）……在原发生的肝癌（ＰＨＣ）治疗中的诊断价值。

关于ＰＨＣ手机方法，我们对25例病人，在慢性肝硬化和肝癌，或者在消化系统中存在恶性肿瘤的病人及健康的车选取10例。

我们采用常规的酶联免疫分析法分别定检测每组中血清ＧＰＣ－３、ＧＰ７３、ＤＣＰ，其中我们采用了微量离心柱和电化学发光法并计算。

结果肝癌组ＧＰ７３浓度明显高于其他组（Ｐ＜０．０５）。

而肝癌组的ＧＰＣ－３和ＤＣＰ浓度也显然高于其他组（Ｐ＜０．０５），除了肝硬化组除外。

在单项测算中我们发现ＧＰ７３的灵活度（７1．０％）、精准度（85.２％）一及在ＲＯＣ曲线之下的占有面积（0.813）都是最高的，关于ＧＰＣ－３的特异性，它的最高值（９5．３％）。

在实验过程里ＧＰ７３他几项指标在联合上的特异性达到99.9%，在相对平行的检测里3种血清标志物在联合的检测中，它的灵敏度达至（98.0％）。

结论肿瘤标志物ＧＰ７３和ＡＦＰ－Ｌ３独立诊断ＰＨＣ的灵活性以及特异性都比独自用ＡＦＰ要好，要是一起联合别的标志物便可大大提升对ＰＨＣ诊断的安全性和稳妥性。

关键词：肿瘤；酶联免疫测定；肿瘤标志物；诊断可以说在原发性肝癌（ＰＨＣ）上它是致死病人死亡的最大恶性肿瘤之一［１］。

现在目前检测原发性肝癌经常使用的肿瘤标志物是血清甲蛋白（AFP）。

但血清甲蛋白的灵敏度以及特异性往往达不到理想的效果［２］。

肿瘤标志物７３（ＧＰ７３）和血清（ＧＰＣ－３）以及甲胎蛋白异质体３（ＡＦＰ－Ｌ３）它们三个可变成诊断ＰＨＣ和预后最新血清[3-4]]。

为探讨这些血清标志物对我国肝癌的诊断价值，我们联合检测谢谢血清目的是为了探讨它对我国肝癌的医疗价值，我们一共测算了25例ＰＨＣ病人血清里的ＧＰ７３、AFP-L3、GPC-3、癌胚抗原水平，而且解析了这三种血清在联合检测上的效能。

目 录一、摘要中文论著摘要 (1)英文论著摘要 (5)二、英文缩略语表 (9)三、论文前言 (10)材料与方法 (14)实验结果 (23)讨论 (34)结论 (36)四、本研究创新性自我评价 (37)五、参考文献 (38)六、附录综述 (42)在学期间科研成绩 (51)致谢 (52)个人简介 (54)·中文论著摘要·GP73通过调控肿瘤相关巨噬细胞参与肝癌进展的分子机制研究目 的本文旨在探讨在血清中高尔基体糖蛋白GP73(Golgi Protein 73,GP73)的高表达对肿瘤相关巨噬细胞(tumor-associated macrophages，TAMs)的影响，阐明其通过影响肿瘤微环境促进肝癌细胞生长和迁移的潜在分子机制，为肝癌预后提供潜在的诊断和治疗靶点。

方 法1. 利用TCGA数据库，从中获取423例肝癌患者肝组织中GP73和巨噬细胞分泌的多种炎症细胞因子的mRNA表达水平，采用Pearson积矩相关系数对GP73与炎症因子的表达水平进行相关性分析。

2. 采用真核表达系统纯化全长形式的GP73和C端截短形式的GP73蛋白（C-GP73）；采用密度梯度离心法从健康人外周血中分离单核细胞（Peripheral blood mononuclear cells，PBMCs），加入巨噬细胞集落刺激因子M-SCF刺激其分化为巨噬细胞；将纯化的GP73和C-GP73蛋白与巨噬细胞孵育不同时间，PBS 刺激的巨噬细胞作为对照组，利用流式细胞术，检测TAMs表面分子标志物CD163及CD206的变化水平。

收集GP73和C-GP73蛋白刺激巨噬细胞后的培养上清，采用细胞因子芯片技术，检测巨噬细胞分泌不同类型细胞因子的变化水平；选取与肿瘤生长和转移相关的细胞因子，通过酶联免疫吸附实验，进一步验证细胞因子芯片的结果。

3. 收集129例肝癌及癌旁组织标本，制备肝癌组织芯片；应用多标记免疫荧光染色技术，采用全自动定量病理成像系统（Vectra® Polaris™，PerkinElmer），对标本中GP73表达水平、TAMs分子标志物CD206及巨噬细胞分子标志物CD68进行半定量分析；采用Spearman秩和检验方法，对GP73与肿瘤组织中TAMs 富集程度的相关性进行分析。

一种新的血清肝癌标志物——GP73肖潇【摘要】血清甲胎蛋白(AFP)检查是目前应用最广泛的肝癌肿瘤标志物,部分肝癌患者AFP检测结果呈阴性.学者们一直在寻找新的血清肝癌标志物,高尔基体蛋白73(GP73)是一种2型高尔基体膜蛋白.众多研究表明,GP73对肝癌诊断的敏感性和特异性均优于AFP,而核心岩藻糖化GP73则更为理想.因此,GP73与AFP和(或)其他肝癌标志物联合检测可能会大幅度提高早期肝癌的诊断率.%Serum alpha-fetoprotein( AFP )examination is the most widely used tumor marker, but some patients with liver cancer AFP test results were negative. Scholars have been looking for new serum tumor markers of liver cancer. The Golgi protein 73( GP73 )is a type 2 Golgi membrane protein, many studies have shown that GP73 sensitivity and specificity for diagnosis of hepatocarcinoma are better than AFP,while the core fucosylated GP73 is more ideal. So GP73 and AFP and/or other tumor markers combined detection may substantially improve the diagnostic rate of early hepatocarcinoma.【期刊名称】《医学综述》【年(卷),期】2012(018)020【总页数】3页(P3380-3382)【关键词】肝癌;血清肿瘤标志物;高尔基体蛋白73【作者】肖潇【作者单位】第三军医大学大坪医院野战外科研究所消化内科,重庆,400042【正文语种】中文【中图分类】R446.61肝癌是全球常见的十种恶性肿瘤之一，全世界每年约有25万人死于肝癌，中国因肝癌死亡的人数占全球死亡人数的45%～50%［1］。

高尔基体蛋白73在原发性肝癌诊断中的价值摘要】目的探讨高尔基体蛋白73（GP73）在诊断原发性肝癌中的临床应用价值。

方法收集117例甲胎蛋白阳性患者（>10ng/mL）血清样本，采用酶联免疫吸附法测定GP73含量。

结果高尔基体蛋白73在原发性肝癌组为117.63±25.78ng/mL，显著高于肝硬化组（81.24±18.49ng/mL）、肝炎组（78.12±16.01ng/mL）和对照组（45.49±8.78ng/mL），差异有显著性（P<0.01）；高尔基体蛋白73诊断原发性肝癌的ROC曲线下面积分别为0.881。

结论高尔基体蛋白73可以作为原发性肝癌临床诊断的分子标志物，对临床具有辅助诊断和鉴别诊断价值。

【关键词】原发性肝癌高尔基体蛋白73【中图分类号】R730.4 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2013）29-0217-02肝癌是我国常见的消化系统恶性肿瘤之一。

早诊断、早治疗是提高肝癌患者生存率的最佳途径[1]。

甲胎蛋白(Alpha fetoprotein，AFP)是当前被广泛认可的诊断原发性肝癌最有价值的血清学标志物，但对慢性肝病基础上较为常见的良性病变与小肝癌的鉴别仍较困难。

有文献报道高尔基体蛋白73(Golgiprotein 73，GP73)最有可能成为更好的诊断肝癌，特别是肝癌早期诊断的血清学标记物[2]。

本研究以甲胎蛋白阳性的排除相关肝病、慢性肝炎、肝硬化和原发性肝癌患者为研究对象，检测患者血清中GP73含量，以探讨其对肝癌早期及鉴别诊断的临床应用价值。

资料与方法1.资料选取本院2007年1月－2012年12月住院的AFP阳性（>10ng/mL）患者117例，其中，肝癌患者51例，年龄35～74岁，平均年龄54岁，男41例，女10例；非肝癌患者66例，其中：肝硬化32例，慢性乙型肝炎24例，对照（排除相关肝病）10例；年龄34～82岁，平均年龄58岁，男53例，女13例。

・214・ChineseHepatology,Feb.2020,Vol.25,No.2.综述.GP73与肝癌临床诊断和治疗的研究进展孙振宇袁旦平徐力善高尔基体蛋白73(Golgi protein-73,GP73)是肝癌最有价值的标志之一。

GP73水平的增加与肝硬化、肝癌、乙型肝炎相关的急性慢性肝功能衰竭以及预测肿瘤转移密切相关。

研究表明肝癌患者血清GP73表达水平升高，促进了肝癌的侵袭与迁移。

目前GP73已作为肝癌早期诊断的血清标记物已被纳入肝癌的临床实验室检查。

而随着人们对GP73的深入研究发现,GP73与多种肝癌治疗的药物存在相关性，并且血清GP73含量的多寡也可直接影响到肝癌的发生及发展,这表明GP73或将成为肝癌临床治疗的新靶点。

目前国内外对于GP73的研究主要集中在GP73促进肝癌发生和进展的生物学功能研究，本文就近年来有关GP73与肝癌的临床诊断和治疗的研究进展进行综述。

一、GP73的上调机制GP73最初是在2000年由研究成人巨细胞肝炎的美国学者Kladney RD发现的⑵。

关于GP73在肝癌中的上调机制以及GP73的生物学功能，目前国内外尚无定论。

有研究指出，GP73的升高是由于乙型肝炎病毒所引起的Notch1通路激活所致GP73在诱导小鼠急性肝炎模型中表现出明显升高的趋势,并推测GP73水平的升高可能与血清炎性因子表达水平的升高密切相关刘宁等研究表明,转化生长因子(可以刺激机体应答，促使血清中GP73的表达水平上调,GP73的上调表现在蛋白水平与mRNA水平上5。

可见GP73的上调机制和炎症密切相关,并可能涉及如Notch1等通路的参与，GP73上调的具体机制和相关通路还有待进一步验证和商榷方可下定论。

关于上调后的GP73如何促进肝癌的发展，其研究焦点主要集中在上皮间质化(Endothelialtomesenchymal transition, EMT)之上，相关研究表明在GP73过表达的肝癌细胞系中可以检测到EMT标志物的增加，而在GP73敲低的肝癌细胞系中可以检测到间质上皮化标志物的增加，得出GP73通过上调EMT进而促进了肝癌侵袭性的结论6。

用于肝癌筛查的新的标志物：Meta-analysis Caroline D. M. Witjes1• Susanna M. van Aalten2•Ewout W. Steyerberg3• Gerard J. J. M. Borsboom3•Robert A. de Man4• Cornelis Verhoef5• Jan N. M. IJzermans21,2肝胆移植外科，伊拉斯谟大学医学中心，230,3015，荷兰鹿特丹，e-mail: c.witjes@erasmusmc.nl3公共卫生学系，伊拉斯谟大学医学中心，荷兰鹿特丹4肝消化内科，伊拉斯谟大学医学中心，荷兰鹿特丹5肿瘤外科，伊拉斯谟大学医学中心，荷兰鹿特丹引文HCC的发病率在许多国家呈上升的趋势［1］。

AFP和超声检查被广泛的应用于肝癌的筛查。

然而，当cut-off值定为20ng/mL时，AFP检测的敏感性只有60%；超声检查的敏感性只有65-80%，其特异性大于等于90%［2］。

由于缺乏有效的检查方法，因此有必要研究新的HCC的标志物。

一些研究已经报道能够检测HCC，包括DCP、PIVKAⅡ、AFP-L3、α-岩藻糖苷酶、GPC-3、HSP-70。

然而这些血清标志物的敏感性和特异性偏低，已经被证明不能满足筛查的需要。

WHO推荐的用于疾病有效筛查的一般标准为：疾病筛查应该体现死亡的主要原因、疾病的自然史、符合成本效益、筛查的方法应该被人们所接受。

另外，诊断和治疗的设备应该是可用的。

此外，在疾病的早期，检查结果可以改善疾病的治疗［2］。

HCC的筛查符合这些标准［1,3］。

为了确定HCC筛查最佳的方法，我们通过系统综述和Meta-analysis，讨论最可能成为HCC筛查的新的生物标志物。

材料和方法通过对PubMed、Embase和Web of Science数据库进行系统性检索，确定了2005年1月～2010年10月间发表的以尿液、血清或唾液中的HCC生物标志物的文章为研究重点。

GP73蛋白在肝病中的表达特点及与肝癌预后相关性
的研究的开题报告
题目: GP73蛋白在肝病中的表达特点及与肝癌预后相关性的研究
背景和意义:
GP73蛋白是一种在肝脏中高表达的糖蛋白，其特异性表达使其成为肝细胞内质网病变的标志之一。

许多研究表明，GP73蛋白的表达与肝病的诊断和预后密切相关。

肝病特别是肝癌是全球性医学难题，然而目前
对于GP73蛋白在肝癌预后中的作用及其表达特点的深入研究尚未开展。

因此，本研究旨在探究GP73蛋白在肝癌中的表达特点，为肝癌及其他肝病的诊断和治疗提供重要指导。

研究目的:
1 探究GP73蛋白在肝病中的表达特点及其变化规律；
2探讨GP73蛋白在肝癌预后中的作用，确定其与肝癌预后的相关性，为肝癌的预后评价提供依据。

研究方法:
1. 采集肝病患者及正常对照的肝组织标本，应用免疫组织化学等方
法检测GP73蛋白的表达情况；
2. 采集肝癌患者的肝组织标本，利用免疫组化及基因测序等技术研
究GP73蛋白在肝癌中的表达变化及其与肝癌预后的相关性；
3.分析肝癌患者的预后指标，如5年生存率，疾病复发率等，平衡
其他因素，探究GP73蛋白表达在肝癌预后中的作用。

预期结果:
1.探明GP73在肝癌预后中的作用，并确定其与肝癌预后的相关性；
2.研究肝病患者和正常人体内GP73蛋白的表达特点及其变化规律；
3.为实现个性化治疗和监测提供预测性预后标志。

关键词:
GP73蛋白，肝癌，预后，肝病。

在全球范围内,肝癌的死亡率位于人类恶性肿瘤的第3位[1]。

近数十年以来,其发病率呈上升趋势,严重危害着人类的生命健康[2]。

肝细胞癌(he-patocellular carcinoma,HCC)是肝癌最常见的组织收稿日期:2022-12-07;修回日期:2023-01-30;网络首发日期:2023-04-17基金项目:医学分子生物学国家重点实验室专项经费项目(2060204)作者简介:郭月(1998—),女,湖北荆门人,硕士研究生,主要从事GP73在肝脏疾病中的研究;郭月和刘梦媛对本文的贡献相同,为本文共同第一作者;*通信作者:邹飞(1965—),男,湖北监利人,副教授,主要从事免疫调节研究,E-mail:*******************。

DOI:10.16605/ki.1007-7847.2022.12.0237GP73及其相关miRNA 在肝癌中的研究进展郭月1,2,刘梦媛3,李博韬2,吴江锋2,4,马岚2,4,邹飞2*(1.三峡大学肿瘤微环境与免疫治疗湖北省重点实验室,中国湖北宜昌443002;2.三峡大学基础医学院,中国湖北宜昌443002;3.宜昌市夷陵医院,中国湖北宜昌443000;4.器官纤维化与药物靶向递送研究所,中国湖北宜昌443002)摘要:高尔基体蛋白73(Golgi protein 73,GP73)是位于顺式高尔基体膜上的糖基化跨膜蛋白,其在肿瘤的发展进程中具有重要作用,是肿瘤治疗的潜在靶标。

目前研究表明,GP73可作为辅助诊断肝细胞癌(hepatocellu-lar carcinoma,HCC)的血清学标志物。

随着GP73的深入研究,与GP73有关的微RNA (microRNA,miRNA)也逐渐被挖掘出来。

GP73相关miRNA 与多种肿瘤的发生、发展密切相关,其中miR-212、miR-27a 等miRNA 能抑制HCC 的侵袭及转移,GP73与miR-27b 、miR-493-5p 等能作为HCC 患者预后的生物标志物。

高尔基体蛋白73（GP73）在肿瘤诊断中的临床应用摘要】原发性肝癌是目前世界上致死率最高的恶性肿瘤之一，在全世界范围内的发病率有逐年上升的趋势。

早期诊断对肝癌患者的预后至关重要。

对于肝癌的高危人群，现在最常用的监测手段是定期检测血浆中甲胎蛋白(AFP)水平和影像学检查如超声等。

然而，甲胎蛋白的敏感性和特异性都不令人满意。

近年来，蛋白组学技术的发展使得筛选新的肿瘤标志物成为可能，各种有希望的新的肿瘤标志物被相继发现，其中高尔基体蛋白73 (GP73)最有可能成为更好的诊断肝癌，尤其是早期肝癌的血清标志物。

在仅有的少数报道中，其敏感性可达69% ，特异性可达90% ，而其异构体敏感性和特异性可达90%和100%。

除此之外，新发现的肝癌患者血清中高表达的标志物有甲胎蛋白异质体(AFP2L3)、异常凝血酶原(DCP) 、α2L2岩藻糖苷酶(AFU)、磷脂酰基醇蛋白聚糖23 (GPC23)、肝细胞生长因子(HGF) 、转化生长因子β1 (TGFβ1)、血管内皮生长因子(VEGF)、粘液素1 (MUC21，KL21)等。

这些新的血清标志物，正在被各种临床研究进行检测，有希望改变肝癌早期诊断和治疗的现状。

我们正在进行GP73的大样本临床研究，取得初步结果。

肝细胞癌(hepatocellularcarcinoma，HCC)的增长速度之快已成为一个世界性难题，其发病率在全球位居第4位，总发患者数约56.4万[1]。

在我国，由于乙型肝炎病毒(hepatitisBvirus，HBV)携带者数量之庞大，与此相关的HCC患者已占世界的55%左右，其死亡率在恶性肿瘤中排第2位。

乙型肝炎、肝硬化及肝癌在医疗费用及社会负担中占有相当大的比重。

在过去相当长的时间里，早期诊断HCC主要是依靠影像学手段及血清甲胎蛋白(alpha-fetoprotein，AFP)，但影像学检查对肿瘤体积较小者不易被发现;临床上最常用的AFP也因其敏感性(39%-64%)不高并不令人满意[2]。

GP73、AFP 异质体联合检测在原发性肝癌早期诊断中的应用进展原发性肝癌已成为五大恶性肿瘤之一，是导致肿瘤患者死亡的第三大因素。

在我国，原发性肝癌更是极为常见的恶性肿瘤之一，死亡率较高，仅次于胃癌、食管癌。

一直以来，原发性肝癌诊断是临床上的重点、难点，最近几年，临床上对原发性肝癌的研究取得了显著的进步，治疗方法已从单一外科治疗发展到外科治疗为主、局部治疗为辅、多学科的综合治疗，因此早期发现原发性肝癌对提高临床治疗有效率具有极其重要的作用，尤其是新技术、新方法的出现，明显改善了原发性肝癌的临床诊断和治疗效果，极大地提高了我国原发性肝癌患者的生存率及生活质量。

[Abstract] Primary liver cancer （PHC）has become one of the five malignant tumors，is the third major factor leading to the death of patients with cancer.In China，PHC is one of the extremely common malignant tumors with a higher mortality rate，and the mortality rate is next only to gastric cancer，esophageal cancer.All the time since，the diagnosis of PHC is the focus and difficulty in clinical medicine，in recent years，the clinical research on PHC has made significant progress，the treatment method has been developed from the single surgical treatment to the multi-disciplinary comprehensive treatment of surgical treatment mainly，local treatment auxiliarily，therefore early detection of PHC has extremely important role for improving the effective rate of clinical treatment，especially the emergence of new technologies and new methods significantly improve the clinical diagnosis and treatment of PHC，which greatly improve the survival rate and quality of life in patients with PHC in China.[Key words] Primary liver cancer；Early diagnosis；GP73；AFP corpora heterogenium；Development history源自肝细胞和肝内胆管上皮细胞的恶性肿瘤被称为原发性肝癌[1]（以下简称肝癌），以肝细胞癌和肝内胆管细胞癌最为常见，其中肝细胞癌所占比例高达90%以上，因此通常情况下，肝癌指的就是肝细胞癌。

收稿日期：2011-08-15修回日期：2011-10-20基金项目：国家科技部十一五“重大新药创制”科技重大专项资助项目（2009ZX09103-680）．作者简介：江均昌（1985－），女，生物化学与分子生物学硕士．通讯作者：周林福（1973－），男，副教授，硕士生导师，从事传染病学研究；Email ：239zlf@zju．edu．cn．http ：∥www．journals．zju．edu．cn /med DOI ：10．3785/j．issn．1008-9292．2012．02．017高尔基体驻膜糖蛋白73的研究进展及其与肝癌等疾病的联系江均昌，周林福综述（浙江大学医学院生物化学与遗传学系，浙江杭州310058）［摘要］高尔基体驻膜糖蛋白73（GP73）是定位于高尔基体的Ⅱ型跨膜蛋白，在肝癌组织中高表达，并分泌入血。

研究表明，GP73作为血清标志物检测肝癌的特异性和灵敏度均优于AFP 。

另外，GP73在前列腺肿瘤、肾脏肿瘤、肺癌、食道肿瘤、精原细胞瘤等疾病中的表达也有增高，因此，GP73也可能成为这些疾病辅助诊断的新型指标。

但是，目前GP73的生理功能和表达调控机制尚不清楚。

文中将从理化性质、细胞内分布、表达调节、与疾病相关性和临床应用等方面对GP73的迄今研究状况作一较为全面的综述。

［关键词］肝肿瘤/诊断；高尔基体；糖蛋白类/血液；肿瘤标记，生物学；高尔基体驻膜糖蛋白73；肝癌；血清肿瘤标志物［中图分类号］R 735．7［文献标志码］A［文章编号］1008-9292（2012）02-0215-07Advances on Golgi glycoprotein 73and its association with diseasesJIANG Jun-chang ZHOU Lin-fu （Department of Biochemistry and Genetics ，Zhejiang University School of Medicine ，Hangzhou 310058，China ）［Abstract ］Golgi glycoprotein 73（GP73）is a transmembrane glycoprotein residing in the cis-Golgi complex ，which is strongly expressed in hepatocellular carcinoma （HCC ）and secreted into the blood．It has been regarded as a promising serum tumor marker for the detection of HCC with higher sensitivity and specificity than AFP．GP73is also significantly elevated in kidney cancer ，prostate cancer ，lungadenocarcinoma ，esophageal cancer and seminomas ；therefore ，it would be helpful for the diagnosis of these diseases．However ，the function of GP73and the regulatory mechanism for its expression are unclear．In this article ，the physical-chemical properties ，the regulation of its expression ，the relation with various cancers and the clinical applications of GP73are reviewed．［Key words ］Liver neoplasms /diag ；Golgi apparatus ；Glycoproteins /blood ；Tumor markers ，biological ；Golgi glycoprotein 73；Hepatocellular carcinoma ；Serum tumor marker［J Zhejiang Univ （Medical Sci ），2012，41（2）：215-221．］第41卷第2期2012年浙江大学学报（医学版）JOURNAL OF ZHEJIANG UNIVERSITY （MEDICAL SCIENCES ）Vol 41No 22012GP73是近年新发现的Ⅱ型高尔基体驻膜糖蛋白，与肝癌等肿瘤密切相关，可能发展成为一个新的血清肿瘤标志物，具有重要的临床价值。