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各种缓冲液的配制方法之袁州冬雪创作Na2HPO4-柠檬酸钠缓冲液（1）醋酸盐溶液的配制：醋酸－醋酸钠缓冲液(pH3.6)取醋酸钠5.1g,加冰醋酸20ml，再加水稀释至250ml,即得. 醋酸－醋酸钠缓冲液(pH3.7) 取无水醋酸钠20g,加水300ml溶解后，加溴酚蓝指示液1ml及冰醋酸60～80ml，至溶液从蓝色转变成纯绿色，再加水稀释至1000ml，即得.醋酸－醋酸钠缓冲液(pH3.8) 取2mol/L醋酸钠溶液13ml与2mol/L醋酸溶液87ml,加每1ml含铜1mg的硫酸铜溶液0.5ml,再加水稀释至1000ml，即得.醋酸－醋酸钠缓冲液(pH4.5)取醋酸钠18g,加冰醋酸9.8ml,再加水稀释至1000ml,即得. 醋酸－醋酸钠缓冲液(pH4.6)取醋酸钠5.4g,加水50ml使溶解，用冰醋酸调节pH值至4.6，再加水稀释至100ml，即得. 醋酸－醋酸钠缓冲液(pH6.0)取醋酸钠54.6g，加1mol/L醋酸溶液20ml溶解后，加水稀释至500ml，即得.用醋酸和醋酸钠配制的缓冲溶液的PH=PKa+lg[C(NaAc)/C(HAc)]（在此，C(HAc)指醋酸的浓度，C(NaAc)指醋酸钠的浓度,Ka是醋酸的解离常数=1.8*10-5（1.8乘10的-5次方），PKa=-lgKa=4.75，将PH=5.5代入，可得C(NaAc)/C(HAc)=5.6 通常我们配制时会使C(HAc)=0.1mol/L，或是C(HAc)=0.2mol/L等.若是配制C(HAc)=0.1mol/L，则C(NaAc)=0.56mol/L 称量醋酸钠固体质量为82*0.56=46克量取冰醋酸体积为0.1*1000/17.5=5.7mL.将称好的醋酸钠和量好的冰醋酸加入1000mL水中溶解、搅拌平均即可.当然若想配制其它的浓度，也可照公式计算即可，通常缓冲溶液不克不及配的太稀，否则缓冲才能要下降，太浓的话又华侈试剂.0.2mol/L苯二甲酸氢钾溶液：称取在硫酸干燥器中干燥过24小时的苯二甲酸氢钾20.44g溶于水中，稀释至500ml.磷酸盐缓冲液（PBS）配制方法0.01M PBSPBS (135 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 1.5 mM KH2PO4, and 8 mM K2HPO4，pH 7.2)称 NaCl， KCl， KH2PO4(or Na2HPO4)和 K2HPO4，溶于800 ml 蒸馏水中，用HCl调节溶液的pH值至7.4，最后加蒸馏水定容至1 L.保管于4℃冰箱中即可.需要注意的是，通常所说的浓度0.01 M指的是缓冲溶液中所有的磷酸根浓度，而非Na 离子或K 离子的浓度，Na 离子和K 离子只是用来调节渗透压的.母液的配制：Na2HPO4：称取 Na2HPO4-12H2O，溶于 1000ml 水NaH2PO4：称取 NaH2PO4-2H2O，溶于1000ml 水各种浓度PB(pH=7.4)的配制：先配 PB (pH=7.4，100ml)：取19ml 0.2mol/L的 NaH2PO4，81ml 0.2mol/L 的 Na2HPO4, 即可.然后只需将 PB (pH=7.4)按相应比例适当稀释即可，如：PB（PH=7.4）：取 500ml PB，加水稀释至 1000ml 即可. PB （PH=7.4）：取50ml PB，加水稀释至 1000ml 即可.PB （PH=7.4）：取100ml 0.2 M PB，加水稀释至 1000ml 即可.若需要 NaCl的话，加入 NaCl 至0.9%（g/100ml）即可.另：其它各种另 PH值的 PB（100ml)配方：pH NaH2PO4（ml） Na2HPO4（ml）5.8 92 85.9 90 106.1 85 156.8 51 496.9 45 557.0 38 627.1 33 677.2 28 727.3 23 777.4 19ml 81ml7.5 16 847.6 13 877.9 7 93磷酸盐缓冲液（PBS）配制方法称取8g NaCl、 KCl、 Na2HPO4和 KH2PO4,溶于800ml蒸馏水中，用HCl调节溶液的pH值至7.4，最后加蒸馏水定容至1L即可.在15lbf/in2(1034×105Pa)高压下蒸气灭菌（至少20分钟），保管存于室温或4℃冰箱中.需要注意的是，通常所说的浓度指的是缓冲溶液中所有的磷酸根浓度，而非Na 离子或K 离子的浓度，Na 离子和K 离子只是用来调节渗透压的.如果是用于免疫组化的话，则需要在配置的时候分别加入100 u/ml青霉素和链霉素之后再调PH、定容、灭菌消毒.PH 7.6 7.4 7.2 7.0 H2O 1000 1000 1000 1000NaCl 8.5 8.5 8.5 8.5 Na2HPO4 2.2 2.2 2.2 2.2根据经历来看，新鲜配置的PBS搅匀后其PH值约在7.2-7.4之间，可是在温度的影响下，尤其在夏天，其电离常数发生了改变，在颠末昼夜的时间后，PH值会分明改变（我亲自测过偏酸）.所以做实验的同学可要注意了，PH值能够会影响实验成果，甚至能够导致阴性.所以务必记得这个时候和天气，要加强实验条件节制问题.每次使用前最好用试纸测一下过夜了的PBS，如果发生偏酸或偏碱，注意重新换新液. PBS缓冲液称取NaCl 8g，KCl ，Na2HPO4?12H2O , KH2PO4 ，溶于900ml 双蒸水中，用盐酸调pH值至7.4，加水定容至1L，常温保管备用.PBST缓冲液取300μl Tween-20 加入PBS 100ml中，混匀后即刻使用.现用现配.如果是把所有固体加大十倍，配置为稀释液，工作时候十倍稀释，那末，在刚配好稀释液时，PH在6.5左右，分明偏酸.不克不及用盐酸调.虽然可以用氢氧化钠颗粒调，但是有更方便的方法.十倍稀释以后，PH自动升高到所需要的值.不需要其它任何处理.这个可以先取少量试一试，配好之后再测一次~2. 向烧杯中加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解.3. 滴加浓盐酸将pH值调节至8.0，然后加入去离子水将溶液定容至1 L.4. 高温高压灭菌后，室温保管.注意：上述PBS Buffer中无二价阳离子，如需要，可在配方中补偿1 mM CaCl2和0.5 mM MgCl2.0.05mol/L PBS(磷酸缓冲液Phosphate Buffer Solution，PBS)的配制：甲液：0.05mol/L Na2HPO4溶液：称取磷酸氢二钠,加蒸馏水至1000ml ;乙液：0.05mol/L KH2P04溶液: 称取磷酸二氢钾, ,加蒸馏水至1000m1.将甲乙液分装在棕色瓶内，于4℃冰箱中保管，用时甲、乙两液各按分歧比例混合，即可得所需pH的缓冲液,见下表: pH 甲液ml 乙液mI5.29 2.5 97.55.59 5.0 95.05.91 10.0 90.06.24 20.0 80.06.47 30.0 70.06.64 40.0 60.06.81 50.0 50.06.98 60.0 40.07.17 70.0 30.07.38 80.0 20.07.73 90.0 10.08.04 95.0 5.0你要配制pH=6.8的PBS，可用甲、乙液各50ml混合即可.硼砂易失去结晶水，必须在带塞得瓶中保管；硼砂溶液也可以用半中和的硼酸溶液代替0.02mol/LKCl溶液：溶7.455g氯化钾于水中，稀释至500ml0.02mol/L苯二甲酸氢钾溶液：称取在硫酸干燥器中干燥过24小时额苯二甲酸氢钾20.44g溶于水中，稀释至500ml0.2mol/L磷酸二氢钾溶液：溶13.616g磷酸二氢钾于水中，稀释至500ml。
常用pH缓冲溶液的配制和pH值（一）溶液配制注意事项1．药品要有较好的质量试剂分为优级纯（保证试剂，Guaranteed reagent，G．R．）、分析试剂（Antalytical reagent，A．R．）化学纯（Chemical pure，C．P．）和实验试剂（Laboratory reagent，L．R．）等等。
工业用的化学试剂，杂质较多，只在个别情况下应用，如配洗液用的硫酸、配干燥剂的氯化钙等。
2．药品称量要精确。
3．配制试剂用水应用新鲜的去离子水或双蒸馏水，比电阻值在50万欧姆以上，pH在5.5~7.0之间才可应用，在组织培养等特殊用途时应注意此项要求，配制一般化验用溶液只要求用双蒸馏水或去离子水。
４．配好后的溶液，应立即除菌处理（如高压灭菌、抽滤或加抑菌物质），以防杂菌生长。
（二）0.067（1/15）Mol/L磷酸缓冲液1．1/15Mol/L磷酸二氢钾溶液的配制：称取磷酸二氢钾（KH2PO4，A．R．）9.08g，用蒸馏水溶解后，倾入1 000ml容量瓶内，再稀释至刻度（1 000ml）。
2．１/15Mol/L磷酸二氢钠溶液的配制：称取无水磷酸氢二钠（Na2HPO4，A.R.）9.47g（或者Na2HPO4·2H2O 11.87g）用蒸馏水溶解后，放入1 000ml容量瓶内，再加蒸馏水稀释至刻度（1 000ml）。
3．按附表的比例，配制成不同pH值的缓冲溶液。
附表1 磷酸盐缓冲液配制法（单位：毫升）pH 1/15Mol/L Na2HPO4 1/15Mol/L KH2PO4 pH 1/15Mol/L Na2HPO4 1/15Mol/L KH2PO45.8 8.0 92.0 7.1 66.6 23.45.9 9.9 90.1 7.2 72.0 28.06.0 12.2 87.8 7.3 76.8 23.26.1 15.3 84.77.3 80.8 19.26.2 18.6 81.47.5 84.1 15.96.3 22.4 77.6 7.6 87.0 13.06.4 26.7 73.37.7 89.4 10.66.5 31.8 68.27.8 91.58.56.6 37.5 62.5 7.9 93.2 6.86.7 43.5 56.5 8.8 94.7 5.36.8 49.6 50.4 8.1 95.8 4.26.9 55.4 44.6 8.2 97.0 3.07.0 61.1 38.9 8.4 98.0 2.0（三）0.15Mol/L PB液附表2 0.15Mol/LPB液配制法pH 0.15Mol/L Na2HPO4（ml） 0.15Mol/L NaH2PO4（ml）6.4 26.5 73.56.6 37.5 62.56.8 49.0 51.07.2 72.0 28.07.4 81.0 19.07.6 87.0 13.0Na2HPO4·2H2O分子量=175.05 0.15Mol/L溶液含26.7g/L。
常见缓冲溶液配制方法乙醇－醋酸铵缓冲液(pH3.7)：取5mol/L醋酸溶液15.0ml，加乙醇60ml和水20ml，用10mol/L氢氧化铵溶液调节pH值至3.7，用水稀释至1000ml。
三羟甲基氨基甲烷缓冲液(pH8.0)：取三羟甲基氨基甲烷12.14g，加水800ml，搅拌溶解，并稀释至1000ml，用6mol/L盐酸溶液调节pH值至8.0。
三羟甲基氨基甲烷缓冲液(pH8.1)：取氯化钙0.294g，加0.2mol/L三羟甲基氨基甲烷溶液40ml使溶解，用1mol/L盐酸溶液调节pH值至8.1，加水稀释至100ml。
三羟甲基氨基甲烷缓冲液(pH9.0)：取三羟甲基氨基甲烷6.06g，加盐酸赖氨酸3.65g，氯化钠5.8g，乙二胺四醋酸二钠0.37g，再加水溶解使成1000ml，调节pH值至9.0。
乌洛托品缓冲液：取乌洛托品75g，加水溶解后，加浓氨溶液4.2ml，再用水稀释至250ml。
巴比妥缓冲液(pH7.4)：取巴比妥钠4.42g，加水使溶解并稀释至400ml，用2mol/L盐酸溶液调节pH 值至7.4，滤过。
巴比妥缓冲液(pH8.6)：取巴比妥5.52g与巴比妥钠30.9g，加水使溶解成2000ml。
巴比妥－氯化钠缓冲液(pH7.8)：取巴比妥钠5.05g，加氯化钠3.7g及水适量使溶解，另取明胶0.5g 加水适量，加热溶解后并入上述溶液中。
然后用0.2mol/L盐酸溶液调节pH值至7.8，再用水稀释至500ml。
甲酸钠缓冲液(pH3.3)：取2mol/L甲酸溶液25ml，加酚酞指示液1滴，用2mol/L氢氧化钠溶液中和，再加入2mol/L甲酸溶液75ml,用水稀释至200ml,调节pH值至3.25～3.30。
邻苯二甲酸盐缓冲液(pH5.6)：取邻苯二甲酸氢钾10g，加水900ml,搅拌使溶解，用氢氧化钠试液(必要时用稀盐酸)调节pH值至5.6，加水稀释至1000ml，混匀。
枸橼酸盐缓冲液：取枸橼酸4.2g,加1mol/L的20％乙醇制氢氧化钠溶液40ml使溶解,再用20％乙醇稀释至100ml。
一.常用贮液与溶液1mol/L亚精胺（Spermidine）: 溶解2.55g亚精胺于足量的水中，使终体积为10ml。
分装成小份贮存于-20℃。
1mol/L精胺（Spermine）：溶解3.48g精胺于足量的水中，使终体积为10ml。
分装成小份贮存于-20℃。
10mol/L乙酸胺（ammonium acetate）：将77.1g乙酸胺溶解于水中，加水定容至1L后，用0.22um孔径的滤膜过滤除菌。
10mg/ml牛血清蛋白(BSA）：加100mg的牛血清蛋白（组分V或分子生物学试剂级，无DNA酶）于9.5ml水中（为减少变性，须将蛋白加入水中，而不是将水加入蛋白），盖好盖后，轻轻摇动，直至牛血清蛋白完全溶解为止。
不要涡旋混合。
加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于-20℃。
1mol/L二硫苏糖醇（DTT）：在二硫苏糖醇5g的原装瓶中加32.4ml水，分成小份贮存于-20℃。
或转移100mg的二硫苏糖醇至微量离心管，加0.65ml的水配制成1mol/L二硫苏糖醇溶液。
8mol/L乙酸钾（potassium acetate）：溶解78.5g乙酸钾于足量的水中，加水定容到100ml。
1mol/L氯化钾（KCl）：溶解7.46g氯化钾于足量的水中，加水定容到100ml。
3mol/L乙酸钠（sodium acetate）：溶解40.8g的三水乙酸钠于约90ml水中，用冰乙酸调溶液的pH至5.2，再加水定容到100ml。
0.5mol/L EDTA:配制等摩尔的Na2EDTA和NaOH溶液（0.5mol/L），混合，NaOH的20g和2H2O?Na2EDTA的186.1g或称取的三钠盐。
EDTA后形成．并溶于水中，定容至1L。
1mol/L HEPES：将23.8gHEPES溶于约90ml的水中，用NaOH调pH （6.8-8.2），然后用水定容至100ml。
1mol/L HCl：加8.6ml的浓盐酸至91.4ml的水中。
常用缓冲溶液的配制方法1．甘氨酸–盐酸缓冲液(0。
05mol/L)X毫升0.2 mol/L甘氨酸+Y毫升0。
2 mol/L HCI，再加水稀释至200毫升甘氨酸分子量 = 75。
07，0。
2 mol/L甘氨酸溶液含15.01克/升.2．邻苯二甲酸–盐酸缓冲液（0.05 mol/L)邻苯二甲酸氢钾 + 0.2 mol/L HCl，再加水稀释到20毫升X毫升0.2 mol/L邻苯二甲酸氢钾分子量 = 204。
23,0。
2 mol/L邻苯二甲酸氢溶液含40。
85克/升3．磷酸氢二钠–柠檬酸缓冲液Na 2HPO 4分子量 = 14.98，0。
2 mol/L 溶液为28。
40克/升. Na 2HPO 4-2H 2O 分子量 = 178.05，0.2 mol/L 溶液含35.01克/升。
C 4H 2O 7·H 2O 分子量 = 210.14，0.1 mol/L 溶液为21。
01克/升。
4．柠檬酸–氢氧化钠-盐酸缓冲液①使用时可以每升中加入1克克酚,若最后pH值有变化,再用少量50％氢氧化钠溶液或浓盐酸调节，冰箱保存。
②5．柠檬酸–柠檬酸钠缓冲液（0。
1 mol/L）柠檬酸C 6H 8O 7·H 2O ：分子量210。
14,0.1 mol/L 溶液为21.01克/升。
柠檬酸钠Na 3 C 6H 5O 7·2H 2O ：分子量294.12，0.1 mol/L 溶液为29.41克/毫升。
6．乙酸–乙酸钠缓冲液（0.2 mol/L ）Na 2Ac·3H 2O 分子量 = 136.09，0。
2 mol/L 溶液为27.22克/升.7．磷酸盐缓冲液(1）磷酸氢二钠–磷酸二氢钠缓冲液（0.2）Na2HPO4·2H2O分子量 = 178.05,0。
2 mol/L溶液为85.61克/升。
Na2HPO4·2H2O分子量 = 358.22，0。
2 mol/L溶液为71.64克/升.Na2HPO4·2H2O分子量 = 156.03，0。
最全常见缓冲液的缓冲范围参考下图：常见缓冲液的缓冲范围常用缓冲液的配制方法1.甘氨酸-盐酸缓冲液（0.05M）甘氨酸分子量＝75.07 0.2M甘氨酸溶液含15.01g/L2.邻苯二甲酸-盐酸缓冲液（0.05M）邻苯二甲酸氢钾分子量＝2.4.23 0.2M邻苯二甲酸氢钾溶液含40.85g/L 3.磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液Na2HPO4分子量＝141.98 0.2M溶液含28.40g/L Na2HPO4·2H2O分子量＝178.05 0.2M溶液含35.61g/L C6H8O7·H2O分子量＝210.14 0.1M溶液含21.01g/L4.柠檬酸-氢氧化钠-盐酸缓冲液节，冰箱保存。
5.柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液（0.1M）C6H8O7·H2O分子量＝210.14 0.1M溶液含21.01g/L Na3C6H5O7·2H2O分子量＝294.12 0.1M溶液含29.41g/L6.乙酸-乙酸钠缓冲液（0.2M）NaAc分子量＝136.09 0.2M溶液为27.22g/L7.磷酸盐缓冲液(1)磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液（0.2M）Na2HPO4·2H2O分子量＝178.05 0.2M溶液含35.61g/L Na2HPO4·12H2O分子量＝358.22 0.2M溶液含71.64g/L NaH2PO4·H2O分子量＝138.01 0.2M溶液含27.6g/L NaH2PO4·2H2O分子量＝156.03 0.2M溶液含31.21g/L(2) 磷酸氢二钠-磷酸二氢钾缓冲液（1/15M）KH2PO4分子量＝136.09 1/15M溶液含9.078g/L 8.磷酸二氢钾-氢氧化钠缓冲液（0.05M）9.巴比妥钠-盐酸缓冲液（18℃）10.Tris-盐酸缓冲液三羟甲基氨基甲烷(Tris)分子量＝121.14 0.1M溶液为12.114g/LTris溶液可以从空气中吸收二氧化碳，使用时注意将瓶盖严11.硼酸-硼砂缓冲液（0.2M硼酸根）硼砂Na2B4O7·10H2O分子量＝381.43 0.05M(=0.2M硼酸根)溶液为19.07g/L 硼酸H3BO3分子量＝61.84 0.2M溶液为12.37g/L硼砂易失去结晶水，必须在带塞的瓶中保存12.甘氨酸-氢氧化钠缓冲液（0.05M）13.硼砂-氢氧化钠缓冲液（0.05M硼酸根）硼砂Na2B4O7·10H2O分子量＝381.43 0.05M(=0.2M硼酸根)溶液为19.07g/L 14.碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液（0.1M）Na2CO3·10H2O分子量＝286.2 0.1M溶液为28.62g/LNaHCO3分子量＝84.0 0.1M溶液为8.40g/L。
1．甘氨酸–盐酸缓冲液（0.05mol/L）之老阳三干创作mol/L mol/L HCI, 再加水稀释至200毫升mol/L甘氨酸溶液含15.01克/升.2．邻苯二甲酸–盐酸缓冲液（0.05 mol/L）mol/L mol/L HCl, 再加水稀释到20毫升mol/L3．磷酸氢二钠–柠檬酸缓冲液Na2HPO4 mol/L溶液为28.40克/升.Na 2HPO 4-2H 2 mol/L 溶液含35.01克/升. C 4H 2O 7·H 2 mol/L 溶液为21.01克/升. 4．柠檬酸–氢氧化钠-盐酸缓冲液① 使用时可以每升中加入1克克酚, 若最后pH 值有变动, 再用少量50% 氢氧化钠溶液或浓盐酸调节, 冰箱保管. ②5．柠檬酸–柠檬酸钠缓冲液（0.1 mol/L ）柠檬酸C 6H 8O 7·H 2 mol/L 溶液为21.01克/升.柠檬酸钠Na 3 C 6H 5O 7·2H 2mol/L 溶液为29.41克/毫升. 6．乙酸–乙酸钠缓冲液（0.2 mol/L ）Na2Ac·3H2 mol/L溶液为27.22克/升.7．磷酸盐缓冲液（1）磷酸氢二钠–磷酸二氢钠缓冲液（0.2）Na2HPO4·2H2 mol/L溶液为85.61克/升.Na2HPO4·2H2 mol/L溶液为71.64克/升.Na2HPO4·2H2 mol/L溶液为31.21克/升.（2）磷酸氢二钠–磷酸二氢钾缓冲液（1/15 mol/L）Na2HPO4·2H2O分子量 = 178.05, 1/15M溶液为11.876克/升. KH2PO4分子量 = 136.09, 1/15M溶液为9.078克/升.8．磷酸二氢钾–氢氧化钠缓冲液（0.05M）X毫升0.2M K2PO4 + Y毫升0.2N NaOH加水稀释至29毫升9．巴比妥钠-盐酸缓冲液（18℃）10．Tris–盐酸缓冲液（0.05M, 25℃）50毫升0.1M三羟甲基氨基甲烷（Tris）溶液与X毫升0.1N盐酸混匀后, 加水稀释至100毫升.三羟甲基氨基甲烷（Tris）HOCH2 CH2OHCHOCH2 NH2分子量=121.14;0. 1M溶液为12.114克/升.Tris溶液可从空气中吸收二氧化碳, 使用时注意将瓶盖严.11．硼酸–硼砂缓冲液（0.2M硼酸根）硼砂Na2B4O7·H2O,分子量=381.43;0.05M溶液（=0.2M硼酸根）含19.07克/升.硼酸H2BO3,分子量=61.84,0.2M溶液为12.37克/升.硼砂易失去结晶水, 必需在带塞的瓶中保管.11．硼酸-硼砂缓冲液（0.2M硼酸根）硼砂Na2B4O7·10H2O,分子量=381.43;0.05M溶液（=0.2M硼酸根）含19.07克/升.硼酸H2BO3, 分子量=61.84, 0.2M溶液为12.37克/升.硼砂易失去结晶水, 必需在带塞的瓶中保管. 12．甘氨酸–氢氧化钠缓冲液（0.05M）甘氨酸分子量=75.07;0.2M溶液含15.01克/升.13．硼砂-氢氧化钠缓冲液（0.05M硼酸根）硼砂Na2B4O7·10H2O,分子量=381.43;0.05M溶液为19.07克/升.14．碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液（0.1M ） Ca 2+、Mg 2+存在时不得使用Na 2CO 2·10H 2O 分子量=286.2;0.1M 溶液为28.62克/升. N 2HCO 3分子量=84.0;0.1M 溶液为8.40克/升. 15．“PBS”缓冲液。
各种缓冲液的配制方法Na2HPO4-柠檬酸钠缓冲液24。
2柠檬酸. H2O，分子量=210.14 0.1mol/L溶液含21.01g/L2柠檬酸钠. 2H2O，分子量=294.12；0.1mol/L溶液含29.4 g/L2（1）醋酸盐溶液的配制：醋酸－醋酸钠缓冲液(pH3.6)取醋酸钠5.1g,加冰醋酸20ml，再加水稀释至250ml,即得。
醋酸－醋酸钠缓冲液(pH3.7)取无水醋酸钠20g,加水300ml溶解后，加溴酚蓝指示液1ml及冰醋酸60～80ml，至溶液从蓝色转变为纯绿色，再加水稀释至1000ml，即得。
醋酸－醋酸钠缓冲液(pH3.8)取2mol/L醋酸钠溶液13ml与2mol/L醋酸溶液87ml,加每1ml含铜1mg的硫酸铜溶液0.5ml,再加水稀释至1000ml，即得。
醋酸－醋酸钠缓冲液(pH4.5)取醋酸钠18g,加冰醋酸9.8ml,再加水稀释至1000ml,即得。
醋酸－醋酸钠缓冲液(pH4.6)取醋酸钠5.4g,加水50ml使溶解，用冰醋酸调节pH值至4.6，再加水稀释至100ml，即得。
醋酸－醋酸钠缓冲液(pH6.0)取醋酸钠54.6g，加1mol/L醋酸溶液20ml溶解后，加水稀释至500ml，即得。
用醋酸和醋酸钠配制的缓冲溶液的PH=PKa+lg[C(NaAc)/C(HAc)]（在此，C(HAc)指醋酸的浓度，C(NaAc)指醋酸钠的浓度,Ka是醋酸的解离常数=1.8*10-5（1.8乘10的-5次方），PKa=-lgKa=4.75，将PH=5.5代入，可得C(NaAc)/C(HAc)=5.6 通常我们配制时会使C(HAc)=0.1mol/L，或是C(HAc)=0.2mol/L等。
若是配制C(HAc)=0.1mol/L，则C(NaAc)=0.56mol/L 称量醋酸钠固体质量为82*0.56=46克量取冰醋酸体积为0.1*1000/17.5=5.7mL。
将称好的醋酸钠和量好的冰醋酸加入1000mL水中溶解、搅拌均匀即可。
Elisa 相关试剂的配制1、抗体或免疫球蛋白稀释液0.01mol/L pH7.2PBSNaH2PO4·2H2O——0.39克；Na2HPO4——1.27克；NaCl——0.85克；NaN3——200 mg；H2O（蒸馏水）至1000ml2、ELISA洗液及HRP标记抗体稀释液PH7.4，PBSTNaCl——2.0克；KH2PO4——0.2克；Na2HPO4·12H2O——2.9克；KCl——0.2克；NaN3——0.2克；H2O至1000ml 吐温（Tween）20 0.5ml；4°C保存备用3、包被液（简称CB）pH9.6Na2CO3——1.59克；NaHCO3——2.93克；NaN3——0.2克；H2O至1000ml 密封盖好，4°C存放备用4、ELISA底物液（可溶性底物）磷酸-柠檬酸缓冲液pH5.00.1mol/L柠檬酸（21.014克/100ML）——24.3ml；0.2mol/L Na2 HPO4（28.4克/L)——25.7ml；H2O ——50ml；4°C存放备用5、DAB底物液（不溶性底物，组化病理等）0.05mol/L pH7.6 tris-HCLTris——6.05克；HCL(36%)——3.15克（约2.7ml浓HCL）；H2O 至1000ml DAB为3´，3´二氧基联苯胺，不溶性底物，呈棕红色ELISA试剂配制及实验流程是酶联接免疫吸附剂测定(( Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay )的简称。
以双抗体夹心法举例说明。
试剂配制：(1) 包被缓冲液(PH9.6 +0.2 0.05M碳酸盐缓冲液)： Na2CO3——1.59g ;NaHCO3 ——2.93g ；加蒸馏水至1000ml。
（用时稀释成1x，加0.1%BSA）(2)洗涤缓冲液(PH7.4 0.15M PBST)：0.05%Tween-20——0.5ml；加在PBS缓冲液1000ml 中。
D－PBS是杜氏磷酸缓冲液全称为：Dulbecco's Phosphate Buffered SalineDulbecco's 磷酸盐缓冲溶液配方 Dulbecco's Phosphate-Buffered Saline （D-PBS）（不含钙、镁离子）组分分子量浓度 (gm/L) 摩尔浓度 (mM)氯化钾 (KCl) 75 0.20 2.67磷酸二氢钾 (KH2PO4) 136 0.20 1.47氯化钠 (NaCl) 58 8.00 138.00磷酸氢二钠 (Na2HPO4) 142 1.15 8.10含0.05%吐温-20的pH7.4的磷酸盐缓冲液(简称为PBS-T)配制方法为:称取磷酸二氢钾(KH2PO4)0.2g，磷酸氢二钠(Na2HPO4·12H20)2.9g，氯化钠(NaCl)8.0g，氯化钾(KCl)0.2g，吐温-200.5mL，加水至1000mL。
乙醇－醋酸铵缓冲液(pH3.7) 取5mol/L醋酸溶液15.0ml，加乙醇60ml和水20ml,用10mol/L氢氧化铵溶液调节pH值至3.7，用水稀释至1000ml，即得。
三羟甲基氨基甲烷缓冲液(pH8.0) 取三羟甲基氨基甲烷12.14g,加水800ml,搅拌溶解，并稀释至1000ml,用6mol/L盐酸溶液调节pH值至8.0,即得。
三羟甲基氨基甲烷缓冲液(pH8.1) 取氯化钙0.294g,加0.2mol/L三羟甲基氨基甲烷溶液40ml使溶解，用1mol/L盐酸溶液调节pH值至8.1，加水稀释至100ml，即得。
三羟甲基氨基甲烷缓冲液(pH9.0) 取三羟甲基氨基甲烷6.06g,加盐酸赖氨酸3.65g、氯化钠5.8g、乙二胺四醋酸二钠0.37g，再加水溶解使成1000ml，调节pH值至9.0，即得。
乌洛托品缓冲液取乌洛托品75g，加水溶解后，加浓氨溶液4.2ml，再用水稀释至250ml,即得。
三、核酸电泳相关试剂、缓冲液的配制方法50×TAE Buffer (pH8.5)组份浓度 2 M Tris-醋酸，100 mM EDTA配制量 1 L配制方法 1.称量下列试剂，置于1 L烧杯中。
2.向烧杯中加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。
3.加入57.1 ml的乙酸，充分搅拌。
4.加去离子水将溶液定容至l L后，室温保存。
10×TBE Buffer (pH8.3)组份浓度890 mM Tris-硼酸，20 mM EDTA配制量 1 L配制方法l.称量下列试剂，置于l L烧杯中。
2.向烧杯中加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。
3.加去离子水将溶液定容至l L后，室温保存。
10×MOPS(3-吗啉基丙磺酸)Buffer组份浓度200 rnM MOPS，20 mM NaOAc，10 mM EDTA配制量 1 L配制方法 1.称41.8 g MOPS，置于1 L烧杯中。
2.加约700 ml DEPC处理水，搅拌溶解。
3.使用2 N NaOH调节pH值至7.0。
4.再向溶液中加入下列试剂。
5.用DEPC处理水将溶液定容至1 L。
6.用0.45 m滤膜过滤除去杂质。
7.室温避光保存。
注：溶液见光或高温灭菌后会变黄。
变黄时也可使用，但变黑时不要使用。
溴乙锭(10 mg/ml)组份浓度10 mg/ml溴乙锭配制量100 ml配制方法 1.称量1 g溴乙锭，加入到100 ml容器中。
2.加入去离子水100 ml，充分搅拌数h完全溶解溴乙锭。
3.将溶液转移至棕色瓶中，室温避光保存。
4.溴乙锭的工作浓度为0.5 g/ml。
注意：溴乙锭是一种致癌物质，必须小心操作。
Agarose凝胶配制方法 1.配制适量的电泳及制胶用的缓冲液(通常是0.5×TBE或1×TAE)。
2.根椐制胶量及凝胶浓度，准确称量琼脂糖粉，加入适当的锥形瓶中。
3.加入一定量的电泳缓冲液(总液体量不宜超过锥形瓶的50%容量)。
注：用于电泳的缓冲液和用于制胶的缓冲液必须统一。
4.在锥形瓶的瓶封上保鲜膜，并在膜上扎些小孔，然后在微波炉中加热熔化琼脂糖。
加热过程中，当溶液沸腾后，请戴上防热手套。
小心摇动锥形瓶。
使琼脂糖充分均匀熔化。
此操作重复数次，直至琼脂糖完全熔化。
必须注意，在微波炉中加热时间不宜过长，每次当溶液起泡沸腾时停止加热，否则会引起溶液过热暴沸，造成琼脂糖凝胶浓度不准，也会损坏微波炉。
熔化琼脂糖时，必须保证琼脂糖充分完全熔化，否则，会造成电泳图像模糊不清。
5.使溶液冷却至60℃左右，如需要可在此时加入溴乙锭溶液(终浓度0.5 µg/ml)。
并充分混匀。
注：溴乙锭是一种致癌物质。
使用含有溴乙锭的溶液时，请戴好手套。
6.将琼脂糖溶液倒入制胶模中，然后在适当位置处插上梳子。
凝胶厚度一般在3~5 min之间。
7.在室温下使胶凝固(大约30 min~1 h)，然后放置于电泳槽中进行电泳。
注：凝胶不立即使用时，请用保鲜膜将凝胶包好后在4℃下保存，一般可保存2~5天。
琼脂糖凝胶浓度与线形DNA的最佳分辨X围6× Loading Buffer(DNA电泳用)组份浓度配制量500 ml配制方法 1.称量下列试剂，置于500 ml烧杯中。
2.向烧杯中加入约200 ml的去离子水后，加热搅拌充分溶解。
3.加入180 ml的甘油(Glycerol)后，使用2 N NaOH调节pH值至7.0。
4.用去离子水定容至500 ml后，室温保存。
10 × Loadlng Buffer(RNA电泳用)组份浓度配制置10 ml配制方法 1.称量下列试剂，置于10 ml离心管中。
2.向离心管中加入约4 ml的DEPC处理水后，充分搅拌溶解。
3.加入5 ml的甘油(Glycerol)后，充分混匀。
4.用DEPC处理水定容至10 ml后，室温保存。
四、核酸、蛋白质杂交用相关试剂、缓冲液的配制方法20×SSC组份浓度 3.0 M NaCl，0.3 MNa3citrate·2H2O(柠檬酸钠)配制量 1 L配制方法 1.称量下列试剂，置于l L烧杯中。
2.向烧杯中加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。
3滴加14 N HCl，调节pH值至7.0后，加去离子水将溶液定容至1 L。
4.高温高压灭菌后，室温保存。
20×SSPE Buffer组份浓度 3.0 M NaCl，0.2 M NaH2PO4，0.02 M EDTA配制量 1.L配制方法 1.称量下列试剂，置于l L烧杯中。
2.向烧杯中加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。
3.加NaOH 调节pH 值至7.4(约6.5 ml 的10 N NaOH)。
4.加去离子水将溶液定容至l L 。
5.高温高压灭菌后，室温保存。
50 X Denhardt’S 溶液 组份浓度配制量 500 ml配制方法 1.称量下列试剂，置于500 ml 烧杯中。
2.加去离子水约400 ml ，充分搅拌溶解3.加去离子水将溶液定容至500 ml 。
4.用0.45µm 滤膜过滤后，分装成每份25 ml 。
5.-20℃保存。
0.5 M磷酸盐Buffer组份浓度0.5 M Na2HPO4。
配制量l L配制方法 1.称量134 g Na2HPO4·7H2O置于l L烧杯中。
2.加入约800 ml的去离子水充分搅拌溶解。
3.加入85%的H3PO4(浓磷酸)调节溶液pH值至7.2。
4.加去离子水定容至1 L。
5.高温高压灭菌后，室温保存。
Salmon DNA (鲑鱼精DNA)组份浓度10 mg/ml Salmon DNA配制量约100 ml配制方法 1.称取鲑鱼精DNA 2 g置于500 ml烧杯中，加入约200 ml的TE Buffer。
2用磁力搅拌器室温搅拌2~4h，溶解后加入4 ml的5 M NaCl，使其终浓度为0.1 M。
3.用苯酚和苯酚/氯仿各抽提1次。
4.回收水相溶液后，使用17号皮下注射针头快速吸打溶液约20次，以切断DNA。
5.加入2倍体积的预冷乙醇进行乙醇沉淀。
6.离心回收DNA后，溶解于100 ml的去离子水中。
测定溶液的OD260值。
7.计算溶液的DNA浓度后，稀释DNA溶液至10 mg/ml。
8.煮沸10min后，分装成小份(1 ml/份)。
-20℃保存。
9.使用前在沸水浴中加热5min后，迅速冰浴冷却。
DNA变性缓冲液组份浓度 1.5 M NaCl，0.5 M NaOH配制量 1 L配制方法 1.称量下列试剂，置于l L烧杯中。
2.向烧杯中加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。
3.加去离子水将溶液定容至l L后，室温保存。
预杂交液/杂交液(DNA杂交用)组份浓度Array配制置100 ml配制方法 1.称量下列试剂，置于200 ml 烧杯中。
2.充分混匀后，使用0.45µm 滤膜滤去杂质后使用。
预杂交液/杂交液(RNA 杂交用) 组份浓度配制量 100 mL配制方法 1.称量下列试剂，置于200 ml 烧杯中。
2.充分混匀后，使用0.45µm滤膜滤去杂质后使用。
膜转移缓冲液(Western杂交用)组份浓度39 mM Glycine，48 mM Tris，0.037%(W/V)SDS，20%(V/V)甲醇配制量 1 L配制方法 1.称量下列试剂，置于l L烧杯中。
2.向烧杯中加入约600 ml的去离子水，充分搅拌溶解。
3.加去离子水将溶液定溶至800 ml后，加入200 ml的甲醇。
4.室温保存。
TBST Buffer(Western杂交膜清洗液)组份浓度20 mM Tris-HCl，150 mM NaCl，0.05%(V/V)Tween 20配制量 1 L配制方法 1.称量下列试剂，置于l L烧杯中。
2.向烧杯中加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。
3.加入0.5 ml Tween 20后充分混匀。
4.加去离子水将溶液定容至l L后，4℃保存。
封闭缓冲液(Western杂交用)组份浓度5%(W/V)脱脂奶粉/TBST Buffer配制量100 ml配制方法 1.称5 g脱脂奶粉加入到100 mlTBST Buffer中，充分搅拌溶解。
2.4℃保存待用(本封闭液应该现配现用)。
五、实验室常用培养基的配制方法Ampicillin(氨卡青霉素)(100 mg/ml)组份浓度100 mg/ml Ampicillin配制量50 ml配制方法 1.称量5 g Ampicillin置于50 ml离心管中。
2.加入40 ml灭菌水，充分混合溶解后，定容至50 ml。
3.用0.22 µm过滤膜过滤除菌。
4.小份分装(1 ml/份)后，-20℃保存。
IPTG(异丙基-β-D-硫代半乳糖苷)(24 mg/ml)组份浓度24 mg/mL IPTG配制量50 mL配制方法 1.称1.2 g IPTG置于50 ml离心管中。
2.加入40 ml灭菌水，充分混合溶解后，定容至50 ml。
3.用0 22 µm过滤膜过滤除菌。
4小份分装(1 ml，份)后，-20℃保存。
X-Gal (20 mg/ml)组份浓度20 mg/ml X-Gal配制量50 ml配制方法 1.称量l g X-Gal置于50 ml离心管中。
2.加入40 ml DMF(二甲基甲酰胺)，充分混合溶解后，定容至50 ml。
3.小份分装(1 ml/份)后，-20℃避光保存。
LB培养基组份浓度1%(W/V)Tryptone(胰蛋白胨)，0.5%(W/V)Yeast Extract(酵母提取物)，1%(W/V)NaCl配制量 1 L配制方法 1.称取下列试剂，置于l L烧杯中。
2.加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。
3.滴加5 N NaOH(约0.2 m1)，调节pH值至7.0。
4.加去离子水将培养基定容至1 L。
5高温高压灭菌后，4。
C保存。
LB/Amp培养基组份浓度配制量 1 L配制方法 1.称取下列试剂，置于l L烧杯中。
2.加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。
3.滴加5 N NaOH(约0.2 mL)。
调节pH值至7.0。
4.加去离子水将培养基定容至1 L 。
5.高温高压灭菌后，冷却至室温。
6.加入1 ml Ampicillin(100 mg/ml)后均匀混合。
7.4℃保存。
TB 培养基组份浓度配制量 1.L配制方法 1.配制磷酸盐缓；中液(0.17 M KH 2PO4，0.72 M K 2HPO 4)100 ml 。
溶解2.31 g KH 2PO 4和l2.54 g K 2HPO 4于90 ml 的去离子水中，搅拌溶解 后，加去离子水定容至100 ml ，高温高压灭菌。
