冰冻切片免疫荧光染色步骤
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冰冻切片免疫荧光染色步骤:
(1)冰冻切片取出,室温放置使其干燥后,用冷丙酮于4℃固定10分钟。(2)切片用0.01MPBS清洗后加入1.2%双氧水作用30分钟,以除去非特异染色。
(3)0.01M PBS清洗,3次×10分钟。
(4)0.3%Triton X-100作用30分钟。
(5)加入以抗体稀释液(含1%BSA的0.01M PBS,pH7.4)稀释至工作浓度的一抗,4℃过夜。
(6)0.01M PBS清洗,3次×10分钟。
(7)加入荧光抗体TRITC-IgG(1:100)或FITC-IgG(1:100),室温孵育2小时。
(8)0.01M PBS清洗,3次×10分钟。
(9)缓冲甘油封片,荧光显微镜下观察。
对照组:采用空白对照:除用0.01MK PBS代替一抗外,其余程序与实验组相同。
载玻片处理步骤:
(1)硫酸浸泡过夜。
(2)自来水冲洗干净后双蒸水冲洗3遍。
(3)晾干后在0.1%明胶中快速浸泡后取出。
室温晾干或37℃烤干备用。