3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)活性检测试剂盒说明书 紫外分光光度法

sdgsdgs成都分行东风浩荡合法规和法规和土壤突然图腾甘油三酯（TG）试剂盒说明书（酶法）【产品名称】中文名称：甘油三酯（TG）试剂盒（酶法）英文名称：TR IGL Y CE RI DES RE AGE N T K I T（Enzymatic method）【包装规格】60ml/盒（R-1：45ml×1, R-2：15ml×1），280ml/盒（R-1：70ml×3，R-2：70ml×1），300ml/盒（R-1：45ml×5，R-2：15ml×5），360ml/盒（R-1：90ml×3，R-2：90ml×1），400ml/盒(R-1：60ml×5，R-2：20ml×5)，2000ml/盒（R-1：500ml×3，R-2：500ml×1）。

【预期用途】本试剂用于测定人血清或血浆中甘油三酯（TG）的含量。

【检验原理】在第一反应中采用抗坏血酸氧化酶（AOD）消除抗坏血酸的影响；采用甘油激酶消去游离甘油的影响。

在第二反应中，通过甘油三酯生成的甘油与过氧化物酶（POD）作用生成醌系色素，由此可测得甘油三酯的含量。

第一反应：抗坏血酸氧化酶2抗坏血酸+ O2──────────→2脱氢抗坏血酸+ 2H2O甘油激酶游离甘油+ ATP ──────────→甘油-3-磷酸+ ADP甘油-3-磷酸氧化酶甘油-3-磷酸+ O2 ──────────→磷酸二羟丙酮+ H2O2（用过氧化氢酶消去）第二反应：脂蛋白酯酶甘油三酯+ H2O ──────────→甘油+ 脂肪酸甘油激酶甘油+ ATP ──────────→甘油-3-磷酸+ ADP甘油-3-磷酸氧化酶甘油-3-磷酸+ O2 ──────────→磷酸二羟丙酮+ H2O2P0D2H2O2 + 4-AA+TOOS + H3+O ─────→醌系色素+ 5H2OTOOS: N-Ethyl-N-（2-hydroxy-3-solfopropyl）-3-methylaniline, sodiumsalt, dihydrate 【主要组成成份】━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━试剂成份含量─────────────────────────────────R-1 抗坏血酸氧化酶≥3000U/L甘油激酶≥1000U/L甘油-3-磷酸氧化酶≥8000U/LTOOS 1.17mmol/L过氧化氢酶≥3000U/L─────────────────────────────────R-2 脂蛋白酯酶≥2000U/LPOD ≥20000U/L4-AA 2.5mmol/L━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━脂类校准血清人血清详见标示量，━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━*1. 不同批号试剂盒中的各组份，经检验符合产品性能指标的，可以互换。

谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px/GPX）活性检测试剂盒说明书微量法注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

货号:BC1195规格:100T/48S 产品简介：谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase,GSH-Px 或GPX）是机体内广泛存在的一种重要的过氧化物分解酶。

GPX 能够催化还原型谷胱甘肽（GSH）生成氧化型谷胱甘肽（GSSG），使有毒的过氧化氢还原成无毒的羟基化合物。

GPX 催化H 2O 2氧化GSH，产生GSSG，GSH 能与DTNB 生成在412nm 处有特征吸收峰的化合物，412nm 下吸光度的下降即可反应GPX 的活性。

试验中所需的仪器和试剂：可见分光光度计/酶标仪、天平、台式离心机、微量玻璃比色皿/96孔板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、EP 管。

产品内容：提取液：液体80mL×1瓶，4℃保存；试剂一：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前加入5.5mL 蒸馏水溶解；试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前加入3.3mL 蒸馏水溶解备用；试剂三：液体10μL×1支，临用前按1μL 试剂三：499μL 蒸馏水的比例稀释试剂三，4℃保存。

现用现配；试剂四：液体30mL×1瓶，4℃保存；瓶底若有结晶可50℃水浴溶解，此溶液为饱和溶液，若底部最终还有结晶，吸取上清使用即可；试剂五：液体5mL×1瓶，4℃保存；试剂六：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前加入5mL 蒸馏水溶解备用；标准品：粉剂×1支，10mg 还原型谷胱甘肽，4℃保存。

临用前加入1.62mL 蒸馏水溶解为20μmol/mL 的标准溶液备用。

操作步骤：一、粗酶液的提取：1、组织：按照组织质量（g）:提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取0.05g组织，加入1mL提取液）进行冰浴匀浆。

10000rpm，4℃离心10min，取上清置冰上待测(如上清不清澈，再离心3min)。

凋亡细胞的诱导及检测一、实验目的1、掌握培养细胞诱导凋亡的方法2、掌握凋亡细胞形态特征检测方法3、掌握基因组DNA特征及凋亡相关蛋白的检测方法4、熟悉PCR原理及技术5、熟悉凋亡相关知识、科研的基本思路二、实验内容1、培养细胞凋亡的诱导、凋亡细胞形态学、细胞增殖活力检查2、凋亡细胞的DNA ladder、caspase3活性检测3、培养细胞RNA的提取及定量、逆转录PCR4、PCR法扩增凋亡相关基因Bcl-2和Bax、琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物三、实验步骤与操作第一天（8学时）理论知识讲解：凋亡诱导方法及诱导药物剂量计算（细胞加药后诱导期间讲解）实验内容及安排：1、培养细胞的凋亡诱导（实验教材p137，p144）约需2h2、倒置相差显微镜下观察凋亡细胞的形态变化（实验教材p145）3、培养细胞的Giemsa染色、吖啶橙荧光染色、碘化丙啶（PI）/Ho.33342荧光双染检测（实验教材p146-148）4、MTT法检测细胞内琥珀酸脱氢酶活性及细胞存活率计算方法（实验教材p137）操作步骤：1）凋亡诱导：用25ml培养瓶体外培养人肿瘤细胞株（BEL-7402细胞或HepG2），2～3d传一代。

a) 实验前一天将细胞以2ⅹ104/ml接种于预先放入盖玻片的24孔板中。

在试验前2～4 h加入凋亡诱导剂大蒜素（60 mg/L），37℃、5%CO2、饱和湿度条件下继续培养，用于细胞形态观察。

设正常对照组、大蒜素诱导组。

b) 实验前一天将细胞以每孔5×104密度接种于96孔板中，在对数生长期进行分组实验：设空白组、正常对照组、大蒜素诱导组（空白组未加任何处理、正常对照组加PBS），用于MTT法测定细胞内琥珀酸脱氢酶活性。

2）凋亡细胞形态观察：体外培养的正常肝癌BEL-7402细胞为上皮形细胞，多边形，胞体丰满，核大而明显，可见多个核仁，细胞之间边界清晰，折光性好。

60 mg/L大蒜素作用2～4 h，BEL-7402细胞出现典型的细胞凋亡形态变化：细胞体积缩小，染色质浓聚边集、裂解，细胞表面凸起多个小泡。

β-葡萄糖醛酸苷酶（β-GD）活性检测试剂盒说明书可见分光光度法注意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定货号：BC1910规格：50T/48S产品内容：提取液：液体60mL×1瓶，4℃保存；试剂一：液体5mL×1瓶，4℃保存；试剂二：粉剂×1瓶，-20℃保存；临用前加入5mL蒸馏水，充分溶解待用；用不完的试剂仍-20℃保存；试剂三：液体37.5mL×1瓶，4℃保存；试剂四：1μmol/mL标准储备液10mL，4℃保存；产品说明：β-GD广泛存在于动物组织中，是一种参与肿瘤侵袭和转移过程的基质降解酶，具有水解固醇葡萄糖醛酸和酸性粘多糖等生理功能。

该酶在肝细胞中含量较高。

此外在胃癌组织中含量丰富，测定胃液β-GD活性对于研究胃癌具有重要的意义。

β-GD催化苯酚β-D-葡萄糖醛酸产生游离的酚酞，通过测定苯酚含量反应该酶活性高低。

需自备的仪器和用品：可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

操作步骤：一、样品测定的前处理按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。

8000g4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

二、测定步骤1、分光光度计预热30min以上，调节波长至540nm，蒸馏水调零。

2、样本测定（在EP管中加入下列试剂）试剂名称（μL）加样孔测定管标准管空白管试剂一100100100试剂二100100100样本501μmol/mL50蒸馏水50混匀后，37℃水浴30min试剂三750750750混匀，540nm下测定各管吸光值注意：标准管和空白管只需测一次。

三、β-GD活性计算（1）按样本鲜重计算：单位定义：每小时每g鲜重样品中催化产生1μmol酚酞的量为一个活力单位。

β-GD（μmol/h/g鲜重）=(C标准管×V1)×（A测定管-A对照管）÷（A标准管-A空白管）÷(W ×V1÷V2)÷T=2×（A测定管-A对照管）÷（A标准管-A空白管）÷W（2）按样本蛋白浓度计算：单位定义：每小时每mg组织蛋白催化产生1μmol酚酞的量为一个活力单位。

货号: QS1900 规格：50管/24样谷丙转氨酶（GPT）活性测定试剂盒说明书可见分光光度法正式测定前务必取2-3 个预期差异较大的样本做预测定测定意义：GPT（EC 2.6.1.2）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，催化氨基酸和酮酸转氨基反应，在氨基酸代谢中具有重要作用。

此外，哺乳动物肝细胞GPT活性很高，当肝细胞坏死，GPT释放到血液中，血清GPT活性显著增高。

因此，GPT被世界卫生组织推荐为肝功能损害最敏感的检测指标。

测定原理：GPT催化丙氨酸和α-酮戊二酸发生转氨基反应，生成丙酮酸和谷氨酸；加入2,4-二硝基苯肼溶液，不仅终止上述反应，而且与酮酸中的羰基加成，生成丙酮酸苯腙；苯腙在碱性条件下呈红棕色，可以在505nm读取吸光值并计算酶活力。

自备实验用品及仪器：可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

试剂的组成和配制：提取液：30mL×1瓶，4℃保存。

试剂一：液体5 mL×1瓶，4℃保存；试剂二：液体5 mL×1瓶，4℃避光保存；试剂三：液体50 mL×1瓶，4℃保存；样品测定的准备：1、细菌、细胞或组织样品的制备：细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。

8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

2、血清（浆）样品：直接检测。

测定操作表：1、分光光度计预热30min以上，调节波长至505nm，蒸馏水调零。

还原型谷胱甘肽（GSH）含量检测试剂盒说明书可见分光光度法货号：UPLC-MS-4486规格：50T/48S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。

试剂名称规格保存条件试剂一液体50mL×1瓶4℃保存试剂二液体50mL×1瓶4℃保存试剂三液体15mL×1瓶4℃保存标准品粉剂10mg×1支4℃保存溶液的配制：1、标准品：称1mg标准品用1mL蒸馏水溶解，浓度为1mg/mL。

产品说明：谷胱甘肽是由谷氨酸（Glu）、半胱氨酸（Cys）和甘氨酸（Gly）组成的天然三肽，是一种含巯基（—SH）的化合物，广泛存在于动物组织、植物组织、微生物和酵母中。

谷胱甘肽能和5,5’-二硫代-双-（2-硝基苯甲酸）（5,5’-dithiobis-2-nitrobenoic acid，DTNB）反应产生2-硝基-5-巯基苯甲酸和谷胱甘肽二硫化物（GSSG）。

2-硝基-5-巯基苯甲酸为黄色产物，在波长412nm处具有最大光吸收。

技术指标：最低检出限：2.67μg/mL线性范围：3.125-250μg/mL注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。

如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：分析天平、匀浆器/研钵、低温离心机、水浴锅、移液器、可见分光光度计、1mL玻璃比色皿。

操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）1、组织处理：新鲜组织首先用PBS冲洗2次，然后称取动物组织或者植物组织0.1g。

加入用试剂一润洗过的匀浆器中（匀浆器提前放冰上预冷）；然后加入1mL试剂一（组织/试剂一比例保持不变即可），迅速冰上充分研磨（使用液氮研磨效果更好）；8000g，4℃离心10min；取上清液放置于4℃待测，若暂时不能完成测试可放于-80℃保存（可保存10天）。

2、血液处理血浆：将收集的抗凝血于4℃，600g离心10分钟，吸取上层血浆到另一支试管中，加入等体积的试剂一, 4℃，8000g离心10分钟,将上清移入新的试管中放置于4℃待测，若暂时不能完成测试可放于-80℃保存（可保存10天）。

Gapdh基因表达
Gapdh（Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，甘油醛-3-磷酸脱氢酶）基因表达是一个重要的生物过程，涉及到细胞能量代谢、糖酵解途径的关键酶。

Gapdh在多种生物体中具有高度保守性，其在细胞内参与糖酵解过程，将葡萄糖转化为丙酮酸，并产生大量的能量。

此外，Gapdh还具有其他功能，如调控细胞凋亡、氧化应激反应、细胞周期等。

Gapdh基因表达的研究主要集中在以下几个方面：
1. 基因表达调控：研究Gapdh在不同生物体、不同组织、不同发育阶段的特异性表达，以及表达调控机制，如转录因子、microRNA 等。

2. 酶活性与糖酵解：研究Gapdh酶活性与糖酵解速率的关系，以及Gapdh在能量代谢中的作用。

3. 细胞功能与疾病：研究Gapdh在细胞功能调控中的作用，如细胞凋亡、氧化应激、细胞周期等，以及Gapdh在疾病（如肿瘤、神经退行性疾病等）中的作用及机制。

4. 作为内参基因：Gapdh作为内参基因，在基因表达研究中用于校正实验误差，提高实验结果的可靠性。

Gapdh基因表达研究不仅有助于深入了解细胞能量代谢及其调控机制，而且对于探讨其在疾病发生发展中的作用及潜在治疗策略具有重要意义。

北京索莱宝科技有限公司谷胱甘肽还原酶（GR）活性检测试剂盒说明书微量法注意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定。

货号：BC1165规格：100T/96S产品内容：试剂一：液体120mL×1瓶，4℃保存。

试剂二：液体1mL×1支，4℃保存。

试剂三：粉剂×1瓶，4℃保存。

临用前加入2.0mL蒸馏水，混匀。

产品说明：GR是广泛存在于真核和原核生物中的一种黄素蛋白氧化还原酶，GR是谷胱甘肽氧化还原循环的关键酶之一（通常昆虫中GR被TrxR取代）。

GR催化NADPH还原GSSG生成GSH，有助于维持体内GSH/GSSG比值。

GR在氧化胁迫反应中对活性氧清除起关键作用，此外GR还参与抗坏血酸－谷胱甘肽循环途径。

GR能催化NADPH还原GSSG再生GSH，同时NADPH脱氢生成NADP+；NADPH在340nm有特征吸收峰，相反NADP+在该波长无吸收峰；通过测定340nm吸光度下降速率来测定NADPH脱氢速率，从而计算GR活性。

自备仪器和用品：低温离心机、水浴锅、移液器、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板（UV板）和蒸馏水操作步骤：一、粗酶液提取：称约0.1g组织，加入1.0mL试剂一，冰上充分研磨，10000rpm4℃离心10min，取上清液，待测。

二、GR测定操作：1.分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长到340nm，蒸馏水调零。

2.试剂一置于25℃（普通物质）或者37℃（哺乳动物）中预热30min以上。

3.空白管：取微量石英比色皿或96孔板，加入10μL试剂二，20μL试剂三，170μL试剂一，于340nm 测定10s和190s吸光度，记为A空1和A空2。

第1页共3页4.测定管：取微量石英比色皿或96孔板，加入10μL试剂二，20μL试剂三，20μL上清液，150μL试剂一，于340nm测定10s和190s吸光度，记为A测1和A测2。

谷氨酰胺酶(GLS)活性检测试剂盒说明书可见分光光度法注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

货号：BC1450规格：50T/24S产品内容：提取液：液体70mL×1瓶，4℃保存；使用前37℃预热。

试剂一：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前加入10mL提取液溶解。

试剂二A：液体1mL×1支，4℃保存。

试剂二B：液体4mL×1瓶，4℃保存；临用前将试剂二A倒入试剂二B中混匀（A:B=1：4比例），或者根据样本所需，按照体积比试剂二A：试剂二B=1:4现配现用。

试剂三：液体5mL×1瓶，常温保存。

标准品：液体1mL×1支，10µmol/mL氮标准液，4℃保存；使用前37℃预热。

产品说明：GLS（EC3.5.1.2）主要存在于高等动物和某些细菌以及植物根中，催化谷氨酰胺水解成谷氨酸和氨，在氮素代谢中具有重要调控作用，尤其是调节游离氨含量和尿素代谢。

本试剂盒利用靛酚蓝比色法测定GLS催化谷氨酰胺生成的氨来计算其酶活性。

试验需自备仪器和用品：台式离心机、可见分光光度计、1mL玻璃比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和双蒸水。

操作步骤：一、粗酶液提取：1.组织：按照质量（g）：蒸馏水体积(mL)为1：5-10的比例（建议称取约0.1g，加入1mL提取液），冰上匀浆后于4℃，12000g离心15min，取上清置于冰上待测。

2.细胞：按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500-1000：1的比例（建议500万个细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3s，间隔7s，总时间3min）；然后4℃，12000g离心15min，取上清置于冰上待测。

二、测定步骤：1、分光光度计预热30min以上，调节波长至630nm，蒸馏水调零。

2、将标准溶液用提取液稀释32倍得0.3125μmol/mL的标准溶液。

3、样品测定（在EP管中加入下列试剂）试剂名称（µL）测定管对照管标准管空白管样品8080--提取液-320-400试剂一320---混匀，37℃水浴1小时--标准液--400-试剂二80808080试剂三60606060蒸馏水460460460460混匀，室温放置30min，630nm处读取吸光值A，分别记为A测定管、A对照管、A标准管、A空白管，计算ΔA=A测定管-A对照管，ΔA标准=A标准管-A空白管。

货号：QS1106 规格：50管/48样6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶（6-phosphogluconate dehydrogenase，6-PGDH）说明书紫外分光光度法注意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。

测定意义：磷酸戊糖途径途径中6-磷酸葡萄糖脱氢酶（G6PDH）和6PGDH依次催化NADPH合成，与能量的平衡、生长速率和细胞活力等密切相关。

此外，6PGDH逆境生理中具有重要作用。

测定原理：6PGDH催化6-磷酸葡萄糖酸和NADP+生成NADPH，NADPH在340 nm有特征吸收峰，而NADP+没有；通过测定340nm吸光度增加速率，计算6PGDH活性。

自备实验用品及仪器：紫外分光光度计、低温离心机、水浴锅、可调式移液枪、1mL石英比色皿和蒸馏水。

试剂组成和配制：试剂一：液体×1瓶，4℃保存。

试剂二：粉剂×1瓶，4℃避光保存。

临用前配制，加入5 mL试剂一，混匀。

试剂三：粉剂×1瓶，4℃保存。

临用前配制，加入5 mL试剂一，混匀。

粗酶液提取：1.组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂一）进行冰浴匀浆。

8000g，4℃离心10min，取上清置冰上待测。

2.细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：试剂一体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后8000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。

3.血清、培养液等液体：直接测定。

测定操作：1. 分光光度计预热30min，调节波长到340 nm，蒸馏水调零。

2. 试剂一置于25℃或者37℃水浴预热30 min。

3. 空白管：取1mL石英比色皿，依次加入100μL蒸馏水，100μL试剂二，700μL试剂一，100μL试剂三，于340nm处测定3min内吸光值变化，第10s吸光值记为A1，第190s吸光值记为A2。

光 合 关 键 酶 的 测 定 方 法一、酶液的制备取植物样品0.5g 左右放入用液氮预冷的研钵中，迅速研磨成粉末状，加入3.0ml （w/v 为1：6）预冷的100 mM Tris-H 2SO 4提取缓冲液【PH 8.2，内含7.0 mM 巯基乙醇，1.0 mM EDTA-Na （乙二胺四乙酸钠盐），5% 甘油和1% 聚乙烯吡咯烷酮（PVP ）】，混匀后在4℃下反应20min ，混合液于4℃下15000 r/min 离心15min ，取上清液备用。

二、RUBPC 活性的测定方法（参照Racker 方法并略加改动）反应混合液（总体积3.2 ml ）组成：0.1 M Tris-HCl 缓冲液 (pH 8.0)、0.1 M MgCl 2、50 mM 腺嘌呤核苷三磷酸（A TP ）、50 mM 二硫苏糖醇（DTT ）、2.0 mM NADH 、1.0 mM EDTA-Na 各0.3 ml ，200 µM NaHCO 3 0.1ml ，蒸馏水1.0ml ，3-磷酸甘油酸激酶（PGK ）/3-磷酸甘油醛脱氢酶（GAP-DH ）（15u/15u ） 0.1ml ，酶提取液0.1ml ，30℃恒温水浴预温10 min ，将反应体系摇匀倒入比色杯内，以蒸馏水为空白，于340nm 下测吸光度值E 0，最后加入9.0 mM 1，5-二磷酸核酮糖（RuBP ） 0.1ml 启动反应，立刻每隔10～15s 间隔测定光吸收的变化。

三、PEPC 活性的测定方法（施教耐等方法）反应液总体积3.1 ml ，内含1.0 ml 0.1 M Tris-H 2SO 4 (pH 9.2)，1.0 ml 酶提取缓冲液，0.1ml 10 mM MgCl 2，0.1ml 10 mM NaHCO 3，0.2 ml 40 mM 磷酸烯醇式丙酮酸（PEP ），0.3ml 1.0 mg/ml NADH ，过量的苹果酸脱氢酶（MDH ，约10.5U ）0.2 ml ，于28℃水浴预温10min ，用0.2 ml PEPC 提取液启动反应，迅速在340nm 下测吸光度的下降。

序号科研热词推荐指数序号科研热词
1鸡11细胞凋亡
2钙调蛋白结合蛋白12甲状腺肿瘤
3钙调蛋白13基因克隆
4轴突14龙眼
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6细胞凋亡16高甘油三酯并高尿酸血症
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8神经细胞18非诺贝特
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11实时荧光定量pcr111胆管肿瘤
12大鼠112肿瘤坏死因子类
13受体,肿瘤坏死因子113肿瘤坏死因子
14内参基因114甘油醛3-磷酸脱氢酶类
15一氧化氮115甘油醛-3-磷酸脱氢酶类
16vegf116果糖
17rna干扰117抗癌活性肽
18real-time118序列分析
19pcr119寡核苷酸序列分析
20gapdh基因120子叶胚
21flk-1mrna121哮喘
22e381122受体
23原核表达
24免疫印迹
25信号传导子及转录激活因子
26三磷酸甘油醛脱氢酶(gapdh)
27shrna
28sds-page
29rna干扰
303-磷酸甘油醛脱氢酶(gapdh)
313-磷酸甘油醛脱氢酶

2008年2009年

小鼠肝组织GAPDH mRNA降解与死亡时间关系武红艳;王克杰;张林;郭利伟;郭娟宁;樊爱英【摘要】目的探讨小鼠在不同的死亡方式下肝组织管家基因甘油醛-3-磷酸脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)mRNA降解与死亡时间(postmortem interval,PMI)的关系. 方法将60只NTH小鼠分别采用窒息法和断颈法处死,分别置于10℃和25℃温控系统内.利用两步法RT-PCR技术和核酸蛋白测定仪检测小鼠肝组织中GAPDH mRNA在死后0～48 h的降解情况. 结果在10℃温控系统内的小鼠死后0～48 h及25 ℃温控系统内的小鼠死后0～36 h 肝组织均可检测到GAPDH mRNA,且其扩增产物呈规律性下降趋势. 结论小鼠死亡后肝组织GAPDH mRNA降解与PMI呈负相关,可为PMI推断提供一种新的观测指标.【期刊名称】《法医学杂志》【年(卷),期】2010(026)006【总页数】3页(P425-427)【关键词】法医病理学;甘油醛-3-磷酸脱氢酶类;肝;逆转录聚合酶链反应;死亡时间;小鼠【作者】武红艳;王克杰;张林;郭利伟;郭娟宁;樊爱英【作者单位】新乡医学院,基础医学院法医学教研室,河南,新乡,453003;新乡医学院,基础医学院法医学教研室,河南,新乡,453003;新乡医学院,基础医学院法医学教研室,河南,新乡,453003;新乡医学院,基础医学院法医学教研室,河南,新乡,453003;新乡医学院,基础医学院法医学教研室,河南,新乡,453003;新乡医学院,基础医学院法医学教研室,河南,新乡,453003【正文语种】中文【中图分类】DF795.1死亡时间（postmortem interval，PMI）推断是法医病理学最为重要的研究领域之一，一直是国内外法医学界研究的重点和难点[1-2]。

本研究应用逆转录聚合酶链反应（reverse transcriptase-polymerase chain reaction，RT-PCR）技术、琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒和核酸蛋白测定仪，检测小鼠不同死亡方式及死后不同时间肝组织管家基因甘油醛-3-磷酸脱氢酶（glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH）mRNA的降解程度，旨在为PMI的推断提供一种新的、客观的观测指标。

GAPDH分子量内参WB1. 任务背景Western blotting (WB)是一种常用的蛋白质检测方法，它可以用于定性和定量分析特定蛋白质在样本中的表达水平。

在WB实验中，内参蛋白是一个重要的参考标准，用于校正样本间的差异。

GAPDH (Glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase)是一种常用的内参蛋白，其分子量是一个重要的参数。

2. GAPDH简介GAPDH是一种催化糖酵解过程中糖醛酸-3-磷酸脱氢酶的酶。

它参与糖酵解途径中糖醇磷酸化和糖醛酸脱氢的反应。

GAPDH广泛存在于细胞质和线粒体中，是一种高度保守的蛋白质。

GAPDH在细胞代谢中起着重要的作用。

它不仅参与糖酵解途径，还参与脂肪酸合成、核酸合成、蛋白质合成等多种生物学过程。

由于其丰度相对稳定，GAPDH被广泛用作WB实验的内参蛋白。

3. 分子量测定分子量是蛋白质的一个重要特征，可以通过多种方法进行测定。

在WB实验中，分子量通常通过与已知分子量的蛋白质进行比较来确定。

对于GAPDH，其分子量大约在36-40 kDa之间。

常用的测定分子量的方法有SDS-PAGE和蛋白质标记。

SDS-PAGE是一种常用的蛋白质分离方法，通过电泳将蛋白质按照分子量大小进行分离。

在SDS-PAGE中，GAPDH 可以通过与已知分子量的蛋白质标记进行比较来确定其分子量。

4. GAPDH作为内参蛋白在WB实验中，内参蛋白用于校正样本间的差异，以确保可靠的定量结果。

选择合适的内参蛋白是非常重要的，因为它应该在不同样本中稳定表达。

GAPDH是一个常用的内参蛋白，因为它在大多数细胞和组织中都以相对稳定的水平表达。

选择GAPDH作为内参蛋白有以下几个原因：1.GAPDH广泛存在于不同类型的细胞和组织中，其表达水平相对稳定。

2.GAPDH的分子量较大，不易受到蛋白质修饰的影响。

3.GAPDH在多种生物学过程中参与，其表达水平不易受到外界因素的影响。

还原型谷胱甘肽（reduced glutathione,GSH）含量测定试剂盒使用说明产品简介：GSH/GSSG是细胞内最重要的氧化还原对之一。

因此，测定细胞内GSH和GSSG含量以及GSH/GSSG比值，能够很好地反映细胞所处的氧化还原状态。

DTNB与GSH反应生成复合物，在412nm处有特征吸收峰；其吸光度变化与GSH含量成正比。

试验中所需的仪器和试剂：可见分光光度计、低温离心机、水浴锅、可调节移液器、1ml比色皿、双蒸水产品内容：试剂一×1支，充分溶解于100ml双蒸水，4℃保存试剂二×1支，充分溶解于50ml试剂一中，4℃保存试剂三×1支，充分溶解于10ml双蒸水中，4℃避光保存操作步骤：一、样品前处理：取组织约0.1g，加1ml试剂二，冰上充分研磨，8000rpm4℃离心10min，取上清。

（如上清不清澈，再离心3min）GSH测定操作：测定前将试剂一于25℃水浴20min按每100mg组织加入1000µL生理盐水的比例进行匀浆。

8000g4℃离心10分钟，取上清，置冰上待测。

对于非哺乳动物组织：按每100mg组织加入1000µL提取液的比例进行匀浆。

8000g 4℃离心10分钟，取上清，置冰上待测。

（2）血清（浆）样品：直接检测。

二、测定操作表：测定管空白管样本0.1ml/试剂一0.7ml0.7ml蒸馏水/0.1ml试剂三0.2ml0.2ml 迅速混匀，于412nm测吸光值，并记录第60s的OD值GSH含量计算：GSH标准曲线公式：y=0.0015x+0.0818（x为GSH浓度，y为吸光值）液体中GSH（µmol/L）=[（OD测定管-OD空白管）-0.0818]/0.0015×样品稀释倍数组织中GSH计算：①GSH（µmol/mg prot）=[（OD测定管-OD空白管）-0.0818]/0.0015×样品稀释倍数÷样品蛋白浓度（Cpr）②GSH（µmol/g mass）=[（OD测定管-OD空白管）-0.0818]/0.0015×样品稀释倍数÷样品质量（g）注意事项：（1）样品处理等过程均需要在冰上进行，且须在当日测定酶活力，以免影响其活力测定时，除试剂一外，其它试剂均需放置在冰上；（2）样本测定前先取1-2个样做预实验，如吸光值太高（超过标准曲线范围，即y ＞0.2时），应先用试剂二稀释到适当倍数，使得吸光值在标准曲线范围内。

GAPDH内参抗体GAPDH抗体推荐—高性价比GAPDH内参抗体的选择在Western Bloting实验中，可能存在总蛋白浓度测定不准确，或者蛋白质样品在电泳前上样时产生的样品间的操作误差；这些误差可以通过测定每个样品中实际转到膜上的内参，比如内参GAPDH的含量来进行校正。

GAPDH（甘油醛-3-磷酸脱氢酶）是参与糖酵解的一种关键酶，由4个30-40kDa的亚基组成，分子量146kDa，检测条带大约在36kDa。

GAPDH基因几乎在所有组织中都高水平表达，广泛用作Western blot蛋白质标准化的内参。

如何选择合适的GAPDH抗体？内参抗体虽然选择较多，但是也需要遵循一定的原则，并契合实际的应用要求。

首先，我们需要考虑目的蛋白的大小，我们推荐内参要与检测的目的蛋白的分子量最好相差5KD以上，因此你需要根据你目的检测蛋白的分子量来选择合适的内参，由于GAPDH的检测分子量大约在36kD，因此该内参抗体不是很适合用于检测30kD-40kD大小目标蛋白的WB实验中。

另外，不同的组织来源的样本在选择内参时还有一定的区别。

比如某些细胞中，由于组织缺氧、糖尿病等因素会导致GAPDH的表达增高，不适合做内参。

因为检测的目的蛋白分子量在50kD左右，之前的β-Tubulin不是很适合，就购买了一支Abbkine的GAPDH抗体做内参，效价确实有点惊讶，我用1:1000倍起始稀释觉得条带很浓，后来一直到1:8000稀释，同时减少了曝光时间，条带仍然很清晰。

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乳酸脱氢酶测定试剂盒说明书乳酸脱氢酶测定试剂盒(速率法)说明书【产品名称】通用名称:乳酸脱氢酶测定试剂盒(速率法)商品名称: 乳酸脱氢酶测定试剂盒(速率法)英文名称:LDH-L【包装规格】M-100462×50/2×10ml 4×50/4×10ml 1×100/1×20ml 2×100/2×20ml3×100/3×20ml 4×100/4×20ml 5×100/5×20ml 1×70/1×14ml R1/R22×70/2×14ml 3×70/3×14ml 4×70/4×14ml 5×70/5×14ml1×1000/1×200ml 1×5000/1×1000ml 1×10000/1×2000ml【预期用途】用于定量测定人血清，血浆中的乳酸脱氢酶(LDH)的活力。

乳酸脱氢酶在血清中由5种同功酶组成。

这些酶是以四聚体结构存在。

有两亚型，M-亚型主要发现在骨骼肌里，H-亚型主要发现在心肌里。

因为它们电泳时向正极移动的特性，同功酶分为LDH1, LDH2, LDH3, LDH4各LDH5。

LDH1 向正极移动最快。

亚型是:H4, H3M, H2M2, HM3和M4。

【检验原理】++LDHL-乳酸 + NAD 丙酮酸 + NADH + H ,,,,在340nm处，每分钟吸光度的增加跟样品中LDH的活力成正比。

【主要组成成份】N-甲基-D-葡萄糖胺缓冲液- --------------------------------325mmol/lL-乳酸 -----------------------------------------------------------50mmol/l氧化型辅酶I ----------------------------------------------------10.0 mmol/l【储存条件及有效期】储存在冰箱(+2? 至 +8?C) ，有效期至少一年。