用VitaFast Vitamin试剂盒检测饲料中维生素的含量

饲料中常用维生素的检测及鉴别何绮霞【摘要】维生素是动物机体维持生命活动、生产必须的营养成分,是饲料的重要组分。

因此,对饲料厂来说,快速鉴别维生素及掌握正确检测方法十分关键。

为此,本刊特邀广东省农科院何绮霞高级药师就《饲料中维生素的检测方法及真假鉴别》为题,综述了脂溶性、水溶性维生素的鉴别、检测方法,本刊将在第6、第7期刊登,敬请关注。

【期刊名称】《广东饲料》【年(卷),期】2012(000)006【总页数】2页(P41-42)【关键词】水溶性维生素;快速鉴别;饲料厂;检测;广东省农科院;生命活动;动物机体;营养成分【作者】何绮霞【作者单位】广东省农科院农产品质量安全与标准研究中心,广州510620【正文语种】中文【中图分类】S816.32维生素是饲料中的重要组成部分，是一组化学结构不同，生理作用和营养功能各异的化学物。

动物对维生素的需要量极微，但其生理、营养作用显著。

所以在饲料中是否加入维生素、加入的量是否准确，对动物的生长、发育和养殖企业获得的经济效益都会受到很大的影响。

《饲料添加剂品种目录》列出的维生素有32种，分为两类：一类是脂溶性维生素，包括维生素A、维生素D3、维生素E、维生素K3；另一类是水溶性维生素，包括B族维生素和维生素C等。

维生素的测定方法包括高效液相色谱法、分光光度法、荧光光度法。

而高效液相色谱法是目前使用最多、比较理想的维生素分析方法，它具有分离效果好、灵敏度高、特异性强等特点，特别对于预混合饲料和配合饲料中的维生素，含量低，干扰成分多的情况下，只能用高效液相色谱法进行鉴别及含量分析。

本文主要介绍了维生素预混合饲料或配合饲料中维生素的鉴别及含量分析方法，以提供给广大饲料生产和养殖企业作为参考。

1 脂溶性维生素的鉴别、检测方法1.1 维生素A的鉴别及含量测定方法单体的维生素A肉眼看为淡褐色或灰黄色颗粒。

1.1.1预混合饲料中维生素A的鉴别方法。

取试样2～3g，加氯仿10mL，充分研磨，静置片刻后取少许上清液于点滴板上，加入1滴三氯化锑试液，即呈蓝色。

2020年第07期维生素作为饲料中的重要组成部分，是一组化学结构不同、生理作用和营养功能各异的化学物。

因此，在饲料中是否加入维生素、维生素含量是否达标、对动物的生长发育会产生很大影响。

本文从饲料中常用维生素的检测方法入手，提出不同维生素的不同检测方式，旨在进一步精确维生素的用量标准，提高养殖企业的经济效益，促进动物的生长发育。

1不同维生素检测措施首先选取试样2～3g ，添加氯仿10mL 并进行充分研磨，随后过滤或静置，取少许绿叶或上清液于小试管，向小试管内滴加乙酸肝6滴，进行充分摇匀，沿管壁两滴硫酸。

完成后仔细观察液面的变化，若含有V D3，则在硫酸与液面接触时试液应立即显蓝色，随着时间的流逝逐渐转为紫红色。

在操作过程中，注意硫酸与样品容易接触时立即显现蓝色，通常情况下不会看到有黄变红的变化。

同时必须要将样品充分研磨，大多数商品V D3都是包膜微粒，必须进行充分研磨才能促使VD3释放出来。

在添加硫酸时最好不要摇匀，而是选择让其沿着试管壁缓缓接触液面，并观察硫酸与液面接触时那一刹那的颜色变化，若添加硫酸时对其进行晃动则很可能错过反应现象。

高效液相色谱发可以检测V K3，并辨别V K3的真伪，这一方法主要是用于配合饲料配合饲料，复合预混合饲料和维生素预混合饲料。

进行V K3的测定时用高效液相色谱测定，V K3经反相C18柱得到分离，检测器在一定波长下进行检测，外表法计算。

在测量时要尤其强调在维生素预混合饲料、复合预混合饲料、浓缩饲料、配合饲料中V K3所含有的量都不相同，样品的取样量、三氯甲烷体积、提取液稀释倍数都不相同，要特别注意换算。

V B2微溶于水溶于水中，呈现出强烈的黄绿色荧光，在稀释液中其荧光强度与核黄素浓度呈正比。

而待测样品大多为非单一成分，多数较为复杂，其中存在许多干扰物质，且难以消除，会对实验结果的准确性造成影响，为将这一问题切实解决，需要引入新型且高效的处理操作方法以及仪器检测措施，例如改变检测技术，促使同步荧光固定波长差法的应用，准确测定功能性食品中的V B2含量，这一方法简便快捷，散射光影响小，适合于测定混合物。

饲料添加剂维生素C的检验操作规程Feed additive Vitaminc(ascorbic acid)[质量标准依据] GB7303－2006分子式：C6H8O6分子量：176.13（按1999年国际相对原子质量）1外观和性状本品为白色或类白色结晶性粉末，无臭、味酸，久置色渐变微黄，水溶液显酸性反应。

本品在水中易溶，在乙醇中略溶，在氯仿或乙醚中不溶。

2项目和指标3试验方法3.1鉴别3.1.1试剂和溶液硝酸银：0.1mol/L溶液。

称取硝酸银1.7g，用水溶解并稀释至100ml；2，6-二氯靛酚钠：1g/L溶液。

3.1.2方法3.1.2.1称取样品0.2g，加水10ml溶解后，取溶液5ml，加硝酸银溶液0.5ml，即发生银的黑色沉淀。

3.1.2.2称取样品0.2g ，加水10ml 溶解后，取溶液5ml ，加2，6-二氯靛酚钠溶液1滴至3滴，试液的颜色即消失。

4维生素C 含量测定：4.1试剂和溶液冰乙酸：6％溶液。

取冰乙酸6ml ，加水稀释至100ml ； 淀粉指示液（5g/L ）：取0.5g 可溶性淀粉到200ml 烧杯中，加水5ml 湿润，加95ml 沸水搅拌，煮沸冷却备用（现用现配）。

碘标准溶液：0.1mol/L 。

按GB/T 601配制和标定。

4.2测定方法称取本品0.2g （准确至0.0002g ），加新沸过的冷水100ml 与冰乙酸溶液10ml 使溶解，加淀粉指示液1ml ，立即用碘标准溶液（0.1mol/L ）滴定，至溶液显蓝色并30秒不褪。

5结果计算：维生素C （C 6H 8O 6）含量X 1以质量分数（%）表示，按式（1）计算：%100008806.0%11⨯⨯⨯=G F V X 式中：V －为样品消耗碘滴标准液的体积，ml ；F －碘滴定液浓度的校正系数；0.008806─滴定度（1ml 的0.1mol/L 碘标准液相当于0.008806的C 6H 8O 6）G －样品重，g 。

食物中的维生素含量测定实验维生素是维持人体正常生理功能的重要有机物质，缺乏维生素会引发各种健康问题。

因此，准确地测定食物中的维生素含量对于我们了解其营养价值以及合理膳食非常重要。

本篇文章将介绍一种常用的方法——高效液相色谱法（HPLC）来测定食物中的维生素含量。

一、实验介绍在开始实验之前，我们需要准备一些实验器材和试剂。

具体列表如下：1. 高效液相色谱仪：用于分离和检测维生素。

2. 四氯化钛（TiCl4）：用于提取样品中的维生素。

3. 醋酸乙酯：用于提取样品中的维生素。

4. 维生素标准品：用于制备浓度不同的标准曲线。

5. 色谱柱：用于分离维生素。

6. 注射器：用于装载样品和标准品。

二、实验步骤1. 标准曲线的制备a. 准备一系列不同浓度的维生素标准品溶液。

b. 将每种浓度的标准品溶液以等体积的方式进样到高效液相色谱仪中。

c. 记录每种维生素峰的面积，并绘制标准曲线。

2. 样品的制备a. 将待测食物样品称取一定量。

b. 使用四氯化钛和醋酸乙酯提取样品中的维生素。

c. 过滤提取的液体并将其转移到注射器中。

3. 样品的测试a. 将样品注入高效液相色谱仪中。

b. 使用标准曲线计算样品中各种维生素的含量。

三、结果分析通过实验测定，我们可以得到不同食物样品中各种维生素的含量。

根据这些结果，我们可以评估食物的营养价值，并根据个人需求合理安排膳食。

例如，如果某种食物富含维生素C，那么可以适当增加摄入量以满足身体对维生素C的需求。

此外，通过对不同食物维生素含量的测定，我们也可以比较不同食物之间的营养差异，从而选择更加丰富多样化的膳食，确保获得全面的营养。

四、实验注意事项在进行食物中维生素含量测定实验时，我们需要注意以下几点：1. 确保所有实验器材和试剂的洁净，并严格按照实验步骤和使用说明进行操作。

2. 仔细称取样品和标准品，以确保实验结果的准确性和可靠性。

3. 避免样品的长时间暴露于光线和高温环境中，以防止维生素的降解。

复合预混合饲料中维生素b族的测定复合预混合饲料是一种常见的饲料形式，其中包含多种营养成分，包括维生素B族。

维生素B族是一组水溶性维生素，对动物的生长发育和代谢具有重要的作用。

因此，准确测定复合预混合饲料中维生素B族的含量对于保障动物的营养需要和健康发育至关重要。

维生素B族是一组包括维生素B1、维生素B2、维生素B6、维生素B12等多种维生素的总称。

这些维生素在动物体内参与多种代谢过程，如蛋白质代谢、糖代谢、脂肪代谢等。

缺乏维生素B族会导致多种疾病，如神经系统疾病、贫血等。

因此，合理补充维生素B族对于动物的健康发育至关重要。

复合预混合饲料是一种包含多种营养成分的饲料形式，其中包括多种维生素和矿物质。

为了保证饲料中维生素B族的含量符合营养需求，需要对饲料中维生素B族的含量进行准确测定。

目前，常用的测定方法包括生物学法、化学法和光谱法等。

生物学法是一种通过观察动物对维生素B族的反应来测定维生素B族含量的方法。

这种方法具有灵敏度高、准确度高等优点，但需要较长的时间和较高的成本。

化学法是一种通过化学反应来测定维生素B族含量的方法。

这种方法具有操作简单、成本低等优点，但存在一定的误差。

光谱法是一种通过测量样品对特定波长的光的吸收来测定维生素B族含量的方法。

这种方法具有速度快、精度高等优点，但需要先进行样品前处理，且受到样品的干扰。

在实际应用中，应根据具体情况选择合适的测定方法。

例如，对于大规模生产的饲料，可以选择化学法或光谱法进行测定，以保证测定速度和成本的合理性；而对于特殊要求的饲料，如高品质的饲料或用于特殊动物的饲料，可以选择生物学法进行测定，以保证测定的准确性。

总之，复合预混合饲料中维生素B族的含量对于动物的营养需求和健康发育具有重要的作用。

在实际应用中，应根据具体情况选择合适的测定方法，以保证饲料中维生素B族含量的准确性和合理性。

饲料中维生素A的测定方法解析作者：谈暠媛鲁小翠来源：《湖北畜牧兽医》2014年第12期摘要：针对饲料中维生素A含量的检测方法-HPLC进行了详细的解析，对各个步骤应该注意的事项进行了归纳总结，为饲料中维生素A的含量检测提供参考意见。

关键词：维生素A；皂化法；高效液相色谱中图分类号：S816.2 文献标识码：B 文章编号：1007-273X（2014）12-0062-01维生素是动物所需的五大营养素之一。

其中维生素A的主要营养作用有：维生素A是视紫红质（感光色素）的重要组成成分，维持正常视觉功能；维生素A可保护上皮组织，防止上皮细胞萎缩、角化，保护呼吸道、消化道、生殖泌尿器官黏膜，利于公畜精子生成；增强动物免疫力，促进骨骼发育。

维生素A的化学名是视黄醇，呈淡黄色油状物，易氧化，遇光易变质。

在饲料中的维生素A是通过附着在一定载体上以视黄醇乙酸酯或视黄醇棕榈酸酯的形式添加进去的[1，2]。

1 方法解析目前检测饲料中维生素A的含量主要是分为皂化法[3]和直接提取法。

直接提取法主要适用于维生素预混料，定量限较高。

皂化法一般适用于维生素A含量较低的配合料、浓缩料及复合预混料。

针对GB/T 17817-2010 《饲料中维生素A的测定高效液相色谱法》中第一法皂化提取法提出几点见解。

皂化法分为以下几个步骤：皂化—提取—水洗至中性—浓缩—过膜—供高效液相色谱法检测。

1.1 皂化皂化是指在碱性环境下，油脂被水解生成羧酸盐和醇的反应。

由于维生素A在酸性环境下不稳定，在碱性环境下稳定，易氧化，耐热性好。

所以维生素A的皂化步骤是在碱性环境下，加入抗氧化剂抗坏血酸，在沸水浴上回流30 min，将维生素A提取出来，将其他成分转化成可溶于水的成分。

需注意的是：①L-抗坏血酸乙醇溶液易氧化，所以最好临用新配；②在回流过程中需不时振荡皂化瓶，防止试样粘附瓶壁，导致皂化不充分；③皂化结束时用5 mL 无水乙醇和5 mL水自冷凝水顶端冲洗其内部，将附在冷凝管内壁上的蒸汽水滴冲洗下去。

36 食品安全导刊 2011年10月刊AnAlysis & test 分析与检测□ 左程丽 李端 拜发分析系统销售（北京）有限公司维生素的检测现状及国际标准检测方法维生素是各种生物生长和代谢所必需的，无处不在的营养卫士。

维生素帮助身体中的酶起催化作用，是我们每个人的健康要素。

人体一旦缺乏维生素，机体代谢会失去平衡，免疫力会下降，各种疾病就会趁虚而入，产生维生素缺乏症。

维生素检测背景市场上，食品添加剂像药品一样被标注上“剂量”。

一般的添加食品有婴儿配方食品、谷类产品和果汁，可以为日常饮食添加更多营养成分。

食品中添加的维生素必须进行严格控制，维生素在添加进食品之前就应通过检测，如果储存后再使用，则应重新检测。

European Directive 2002/46 EC制定了一系列关于食品添加剂标识及检测添加过维生素的食品中标注的维生素含量的法规。

我国国家标准GB5413-2010对婴幼儿配方食品与乳品中维生素含量也有明确的规定，标准中涉及的方法有微生物法及高效液相色谱法。

维生素传统测定方法大多步骤繁琐，检测周期长，操作费时，其中一些方法受干扰因素影响大，灵敏度较低，而在实际工作中往往要求测定结果准确、测定周期短、经济合算，这就导致对维生素快速分析方法的需求越来越迫切。

为此，德国拜发公司将继续秉承其研发宗旨，致力于追求简便、快速、准确的维生素分析检测方法。

维生素检测方法国际及国内维生素检测方法主要为微生物法及H P LC法，德国拜发R-Biopharm公司根据国际现行方法研发的配套检测产品能够使检测方法更简单省时，检测结果更准确可靠。

1.传统经典方法——微生物法微生物法根据维生素为细菌生长所必需的原理,以细菌繁殖程度或代谢产物定量该维生素含量，适用于检测多种衍生物的总和。

国家标准GB5413中检测维生素B 12、烟酸和烟酰胺、叶酸、泛酸、生物素及肌醇测定第一法(仲裁法) 均为等同采用AOAC的方法——微生物法。

高效液相色谱法检测饲料中维生素a的方法步骤高效液相色谱法（HPLC）是一种常用的分析方法，适用于维生素A等化合物的检测。

下面是使用HPLC法检测饲料中维生素A的方法步骤：1. 样品准备：将饲料样品取出一定量，加入适量的有机溶剂进行提取。

常用的有机溶剂有甲醇、乙醇等。

提取条件可根据实际需要进行优化，如提取时间、提取剂量等。

2. 过滤样品：使用0.45μm的微孔膜过滤器将提取液过滤，以去除杂质和固体颗粒，得到清晰的样品溶液。

3. 样品进样：将过滤后的样品溶液注入到高效液相色谱仪系统的进样器中。

进样器可选用自动进样器，可以提高分析效率和减少人为误差。

4. 色谱柱选择：选择适合维生素A分析的色谱柱，常用的色谱柱有反相色谱柱、正相色谱柱等。

反相色谱柱常用的填料材料有C18、C8等。

5. 色谱条件设置：设置适宜的流动相体系，常用的流动相为甲醇/水。

可根据实际需要优化流动相的组成和流速，以提高分离和检测效果。

6. 检测条件设置：设置适宜的检测波长，维生素A在紫外光区域有较好的吸收峰。

常用的检测波长为325nm。

7. 样品分离：通过色谱柱将样品中的维生素A与其他组分分离。

根据色谱柱和流动相的选择，可以调整梯度洗脱等条件，以提高分离效果。

8. 维生素A定量：根据标准曲线，通过峰面积和浓度的线性关系，计算饲料样品中维生素A的含量。

标准曲线可通过一系列已知浓度的维生素A标准溶液进行建立。

9. 数据处理：对得到的色谱图进行峰识别和集成，计算得到维生素A的含量。

可以使用色谱软件进行自动数据处理和结果输出。

以上就是使用高效液相色谱法检测饲料中维生素A的方法步骤。

HPLC法具有灵敏度高、分析时间短、准确度高等优点，可用于快速、精确地确定饲料中维生素A的含量，为饲料生产质量控制提供科学依据。

分析与检测Oct 2018 CHINA FOOD SAFETY 29现行的饲料中维生素A 、维生素D 3、维生素E（以下简称“VA、VD 3、VE”）的检测方法均为液相色谱法，其中VA 的检测方法为GB/T 17817-2010，定量限为1000IU/kg；VD 3检测方法为GB/T 17818-2010，定量限为500IU/kg；VE 的检测方法为GB/T 17812-2008，定量限为1IU/kg。

饲料原料中VA、VD 3、VE 含量在方法的定量限之下时，上述方法无法准确检出它们的含量。

虽然饲料原料中VA、VD 3、VE 的含量很低，但由于饲料原料的添加比例很大，因此饲料中VA、VD 3、VE 的总量十分很可观，故研究适用于饲料中VA、VD 3、VE 低含量的检测方法是一件十分有价值的工作。

1 研究内容1.1 优化前处理方法1.1.1 皂化反应溶液需先离心：皂化反应后的样液转移至离心管中，离心取上清液转移至分液漏斗中，防止样品残渣堵塞分液漏斗。

1.1.2 用石油醚代替乙醚：石油醚的提取效率和乙醚的提取效率基本相同，且因为石油醚的毒性低于乙醚，因此用石油醚代替乙醚。

1.2 考查线性相关性用甲醇溶液配置VA、VD 3、VE 工作液，其系列浓度分别为0.1IU/L、0.5IU/L、1.0IU/L、5.0IU/L、20.0IU/L、100IU/L。

相同条件下，用串联质谱检测上述曲线各点的峰面积，VA 的浓度与峰面积的相关系数为0.9998，VD 3的浓度与峰面积的相关系数为0.9999，VE 的浓度与峰面积的相关系数为0.9995。

1.3 净化小柱的选择根据VA、VD 3、VE 的性质特点，应选取吸附特性为非极性的净化小柱。

经查阅资料，选择安捷伦公司提供的Bond Elut ENN、Bond Elut LMS、Bond Elut ENV、Bond Elut PLEXA4种净化小柱。

笔者分别考察并进行了VA、VD 3、VE 过净化小柱的回收率，其中，Bond Elut PLEXA 净化小柱VA、VD 3过柱回收率达到99%，VE 过柱回收率达到93%。

配合饲料中维生素c含量的测定
随着人们生活水平的不断提高，维生素C对人体健康起着越来越重要的作用。

为了更
好地提高人们的营养状况，在饲料行业中，测定饲料中维生素C含量具有重要意义。

维生素C是一种维生素，橙色或棕褐色的白色结晶，它是一种必需的抗氧化剂，可以
在活细胞中合成胶原蛋白，增强机体抗病能力和免疫力。

同时，它还可以运载氧，增加细
胞的氧气含量，提高循环血液的灵活性，增加肠道的消化吸收能力，从而改善家禽的营养
状况。

维生素C主要存在于蔬菜、水果、肉类等中，因此，研究如何提高补充优质维生素
C以提高家禽成活率尤其重要。

测定饲料中维生素C含量的方法是对饲料进行热分解，将样品分解到二氧化碳和水中，然后将二氧化碳经过蒸发的处理，用碱溶剂(乙腈/水)浸渍，将其中沉淀在质析中。

来提
取热解样品中的维生素C。

最后，可以使用薄层层析法，在薄层层析中可以检测出维生素
C的含量。

测定饲料中维生素C含量的过程，应该首先进行样品准备，将饲料样本灰化，用热
液体研磨机进行分级，得到样品粉末，再将样本放入振荡器中，用乙腈/水溶液及特定
比例的硝酸钠精制，进行热分解，将样品分解到二氧化碳及水的混合物，再将气体放入
回流仪中进行浸渍，得到样品放入水中截留，用振荡器进行移液，再将植物提取液放入
薄层析电泳柱中进行薄层析，利用放大术，检测出维生素C的含量。

综上所述，测定饲料中维生素C含量是一个复杂的过程，其中涉及到样品的采集和分离，维生素C的提纯和测量，所需要的技术复杂，耗时耗力，取决于实验室的设备和饲料
的质量，因此，要能够有效检测出维生素C的含量，必须充分考虑实验室装备及实验技术。

维生素的测定方法
维生素的测定方法可以分为生物学法和物理化学法两种。

生物学法：
1.生物促进法：利用维生素对生物体生长和发育的促进作用，通过观察生物体的生长情况来判断维生素含量。

2.营养缺乏试验法：将生物体置于缺乏特定维生素的培养基中，观察生物体的表现，从而测定维生素的含量。

物理化学法：
1.比色法：利用维生素与某些试剂发生特定反应后形成彩色产物，通过测定产生的光吸收来定量测定维生素含量。

2.荧光法：维生素具有发荧光的性质，通过测定维生素发出的荧光强度来定量测定维生素含量。

3.高效液相色谱法（HPLC）：利用高效液相色谱技术对维生素进行分离和定量分析。

4.气相色谱法（GC）：通过气相色谱对维生素进行分离和定量分析。

5.质谱法：利用质谱仪对维生素进行分析，可以通过质谱图谱来鉴定和定量维生素。

维生素的具体测定方法要根据维生素的性质和要求选择合适的方法进行测定。