高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒分离鉴定及其体外传代遗传变异分析
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作者简介孙自力(1970—),男,专科,助理兽医师,从事畜牧、兽医、养殖技术推广工作。
收稿日期2023-04-13疑似猪繁殖与呼吸综合征案例浅析孙自力(砀山县畜牧兽医水产服务中心,安徽宿州235300)摘要猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratorysyndrome ,PRRS )是由猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV )引起的,又称“猪蓝耳病”,是一种高度传染性疾病。
1987年,在美国初次被发现,后续发展至全世界生猪养殖业,给世界养猪业造成巨大的经济损失。
我国于1996年第一次报道该病,2006年曾大规模暴发“猪无名高热”疫情,给我国养殖行业带来巨大损失,“猪蓝耳病”又分为高致病性蓝耳病和经典蓝耳病,农业农村部重视该病的传播预防,将高致病性猪蓝耳病列为一类动物疫病,经典猪蓝耳列为二级动物疫病。
该文从猪繁殖与呼吸综合征发病原因、发病特点、临床症状、检验方法、其他疫病鉴别诊断、预防措施等方面进行分析阐述,以期更好了解猪繁殖与呼吸综合征,为宿州市生猪养殖场对该病的预防带来帮助。
关键词猪繁殖与呼吸综合征;猪蓝耳病;疫病;预防中图分类号F321.1文献标识码A文章编号1007-7731(2023)18-0030-05近年来,我国畜牧业快速发展,宿州市畜牧业的发展都呈现出良好的态势,特别是生猪养殖产业发展受到广大养殖户的追捧[1-3]。
猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratorysyndrome ,PRRS )是高度接触性传染病,极易流行,并只在猪中进行传播[4-6],大白、长白、杜洛克、大约克等品种的不同年龄段的公猪、母猪均可被感染,但妊娠母猪和1月龄以内的仔猪最容易感染[7-9]。
不同年龄段、不同性别生猪感染上该病后症状不同,一般母猪感染后容易导致早产、流产、死胎、弱仔;公猪感染后精液品质下降,初生猪仔感染后死亡率升高,其他年龄猪则带来不同的呼吸系统疾病[10-12]。
猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)PRRS,又称猪繁殖与呼吸综合征,猪蓝耳病,猪流行性流产----呼吸综合征,是近年来发现的一种病毒性传染病,给养猪业造成很大的经济损失。
本病主要引起母猪繁殖障碍,仔猪肺炎和断奶前后仔猪的死亡率增高,自1987年在美国,1990年在欧洲被发现后传播蔓延速度十分惊人,病毒分离和血清检查表明,PRRS现已传遍世界主要养猪国家。
1995年,我国在北京郊区首次暴发了PRRS,1996年以来,国内一些单位进行的流行病学和血清学调查证明,我国大部分省市都已有此病,且血清阳性率都很高,但呈地方性流行特征。
特别是2002年大有全国一片蓝的趋势。
针对PRRS的现状,各国都已引起高度重视,近年来在流行病学,免疫学及致病机理,实验室诊断技术,综合防制等方面开展了大量的调查研究工作,PRRS的诊断与防制尤其成为当前兽医研究的一个热点。
(--)病原PRRSV为一有囊膜的病毒,直径50---65nm,表面相对平滑,立方形核衣壳,核心直径25—35nm。
PRRSV对热敏感,这种敏感性提示用于病毒分离的血清和组织样品应保存在-20C下或4C条件下,以保护样品的感染性,用脂溶剂氯仿和乙醚处理以后,PRRSV失去活性。
北美和欧洲PRRSV分离株虽然不能凝集进行实验的各种红细胞,但最近的研究发现,部分毒株及用去污剂预处理的毒株可以表现出对一定动物红细胞的凝集性。
PRRSV具有严格的宿主特异性,最初是用猪肺泡巨噬细胞(PAM)及其它组织的巨噬细胞进行病毒的分离与鉴定的,在体外培养中,PRRSV可以在猪肺泡巨噬细胞(PAM)和非洲绿猴肾细胞(vero)及其衍生的细胞系如MARC—145,CL——2621中生长。
在肺泡巨噬细胞的培养物种加入PRRSV抗体后,可使病毒的复制增强,同样在病毒中加入PRRSV抗体后,其在妊娠期胎儿体内的复制也大为增强,这种现象称为抗体依赖性增强作用(ADE)其原因可能是病毒与抗体形成免疫复合物后借助细胞表面Fc受体与PAM结合,从而促进了病毒进入细胞。
经典的猪繁殖与呼吸综合征是什么
病原特点:猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV),核酸为RNA,粒子直径60~70nm,20面体对称,具囊膜,对乙醚、氯仿敏感,仅可在猪肺泡巨噬细胞培养物上生长并产生CPE变化。
分为欧洲原型病毒(LV)的A群和美国原型病毒ATCCVR-2332株的B群,两者血清学反应仅有很少交叉反应。
攻毒后7d可查及抗N抗体。
流行情况:PRRS1987年首次发生于美国,1990年见于德国,1991年见于比利时、荷兰、英国、苏格兰和法国,,现已遍及世界各养猪国家。
流行病学及发病机理:猪是唯一感染PRRS并出现临床症状的动物。
感染猪可经鼻分泌物、粪便、精液排毒,这是主要传染源。
传播迅速,主要经呼吸道感染,也可经胎盘垂直传播。
主要侵害繁殖母猪和仔猪,妊娠中后期的母猪和胎儿最易感,育肥猪发病温和;哺乳仔猪发病率11%~54%,感染仔猪死亡率可高达75%,死胎率7%~66%,断奶仔猪和育肥猪发病率1%~2%,妊娠后期流产率3%~80%,不受胎或不孕为10%~50%,病毒在巨噬细胞内复制,并破坏其结构,,引起广泛性的血管炎和其他组织破坏,导致脾广泛性坏死和淋巴结肿大,免疫器官严重损伤,最终死于心衰、肺衰、免疫机能丧失。
临床症状:成年猪厌食、呼吸困难、发烧、末梢发绀(1%~5%),仔猪断奶前或断奶后死亡、肺炎,母猪产前1周发生流产、早产、死产、重新发情、后肢麻痹可持续数月。
死胎率和哺乳仔猪死亡率极高,
免疫抑制。
诊断:荷兰的方法是:20%以上的胎猪死产;8%以上的母猪流产;断奶前有26%以上的仔猪死亡。
符合以上任意2条者,即可诊断之。
病毒分离确诊。
猪繁殖与呼吸综合征概述吴甜1,段永杰1,2*(1.新民金泰扬翔农牧有限责任公司110000;2.华中农业大学动物科技学院农业动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室430070)摘要:猪繁殖与呼吸综合征作为一种高接触性呼吸道传染疾病,传播速度快,传播途径广,发病率高,死亡率高,该病目前没有有效的治疗方法,一旦发病,不管对个体养殖户还是规模化养殖场,都将造成不小的经济损失。
因此,本文阐述了猪繁殖与呼吸综合征的发病特点,预防及诊治方法,为该疾病的防控提供参考依据。
关键词:猪繁殖与呼吸综合征;发病特点;预防;诊治猪繁殖与呼吸综合征(PRRS),又名猪蓝耳病,是一种高接触性呼吸道传染疾病。
本病主要由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)所引发,从而造成母猪繁殖障碍、耳朵发紫,仔猪呼吸困难、高死亡率等症状,病猪和带毒猪为其主要传染源。
该病于1987年首次在美国暴发,之后相继出现在荷兰、西班牙、日本、菲律宾等国家直至蔓延至全世界,1995年,我国北京地区首次暴发PRRS,随即蔓延至华北、华东等地区,给养殖业带来不小的损失与打击。
在此期间,临床兽医人员以及养殖从业者等一直在致力找到控制该病的方法,但目前为止,该病仍以预防为主[1]。
1猪繁殖与呼吸综合征病原猪繁殖与呼吸综合征病原是猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV),属动脉炎病毒属,该病毒为单链RNA,只能在极少的几种细胞上复制、增殖,使细胞病变,如猪肺泡巨噬细胞。
本病毒对温度较敏感,在外界环境中的生存能力相对较弱。
一般在37℃,可存活3~24h,在56℃条件下,只能保存6~20min病毒即丧失活性,其可被氯仿、聚乙二醇辛基苯基醚等脂溶剂或去污剂灭活[2]。
该病毒根据毒株类型的不同可分为经典PRRSV和高致病性PRRSV。
2猪繁殖与呼吸综合征发病特点经典PRRSV病程通常3~4周,最长6~12周,主要表现为病猪精神抑郁、母猪流产、仔猪呼吸道症状,不同品种、年龄的猪均能受到感染,尤其是妊娠母猪和1月龄以内的仔猪。
猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒引起的一种猪繁殖和呼吸障碍的传染性疾病。
母猪表现为流产、早产、死产、木乃伊胎及弱仔等。
仔猪和育肥猪则表现为呼吸困难。
仔猪发病率和死亡率很高,对养猪业构成了重大危害。
1临床症状妊娠后期母猪突然出现发热(可高达40℃以上),精神沉郁,嗜睡,食欲减退,呼吸困难,有些母猪发生流产、产死胎、木乃伊胎和弱仔。
仔猪临床症状明显,早产的仔猪当天或几天内死亡。
初生仔猪发热,喜扎堆,拉稀,多呼吸困难,呈腹式呼吸。
断奶仔猪主要表现呼吸困难、咳嗽、厌食,耳部及腹下皮肤发红,严重的耳尖发绀,病猪消瘦、贫血,最后死亡。
耐过的仔猪表现生长停滞,成为僵猪。
发病仔猪死亡率较高,达80%以上。
2病理变化剖检典型死亡病猪,主要表现为血液稀薄呈水样,淋巴结出血,肺脏水肿、充血、出血,有坏死灶,主要表现为间质性肺炎;肾肿大,有小出血点;肝脏肿大呈黄褐色;肠粘膜出血,肠系膜淋巴结水肿;部分在喉头、心外膜、膀胱粘膜有点状出血。
流产胎儿及弱仔剖检,可见头部、皮下水肿,胸腔内积有大量清亮液体。
根据上述症状和剖检变化初步诊断为猪繁殖与呼吸综合征。
为了进一步确诊,又进行了下列实验室检查。
3实验室诊断 3.1分子生物学诊断我们采用RT~PCR 的诊断方法:取PRRS病料(肺、淋巴结)组织研磨:应用TRIZOL细胞裂解液,按常规方法提取RNA;用下游引物进行反转录;用反转录产物cDNA进行PCR扩增(上游引物5′GCGGATCCATGCGATCTAACAAC3′;下游引物5′AGCGCGAGTCAGGCTAGGGAGGA3′),PCR反应条件为:94℃预变性3min,94℃变性1min,53℃退火1min,72℃延伸1min,30个循环后,72℃再延伸10min。
反应结束后,取PCR产物5μL在1%的琼脂糖凝胶中进行电泳。
结果扩增出大小为417bp左右的目的片段,与预期扩增417bp大小的片段相符。
猪繁殖与呼吸综合征病毒检测1 范围本标准规定了猪繁殖与呼吸综合征病毒RT-LAMP检测原理、试剂和仪器设备、检测程序和结果判定。
本标准适用于猪临床样品(肺脏、脾脏和血清)和细胞培养物中猪繁殖与呼吸综合征病毒的检测;同时适用于猪繁殖与呼吸综合征病毒经典型、高致病性、类NADC30型三种基因亚型的分型检测。
2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。
凡是注日期的引用文件,仅所注日期的版本适用于本文件。
凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改版)适用于本文件。
GB 19489 实验室生物安全通用要求GB/T 27401 实验室质量控制规范动物检疫。
NY/T 541 兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范SN/T1193 基因检验实验室技术要求3 缩略语PRRSV: porcine reproductive and respiratory syndrome virus,猪繁殖与呼吸综合征病毒LAMP:loop-mediated isothermal amplification, 环介导的恒温扩增RT-LAMP:Reverse transcription, loop-mediated isothermal amplification,反转录环介导的恒温扩增。
4 原理猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)主要引起猪繁殖与呼吸综合征(俗称蓝耳病)。
该病毒有美洲型和欧洲型两个血清型。
美洲型又有多个基因亚型。
我国流行的美洲型PRRSV主要有传统型、高致病性和类NADC30型毒株,其主要区别存在于病毒的Nsp2基因。
环介导的恒温扩增(LAMP)是一种体外恒温核酸扩增技术,用于快速检测DNA。
RT-LAMP是一种逆转录LAMP,用于检测RNA。
本标准RT-LAMP,根据PRRSV开放阅读框架7(ORF7)基因序列、ORF1a(非结构蛋白Nsp2)基因序列设计4组引物,建立4种RT-LAMP检测方法(即LAMP1、LAMP2、LAMP3和LAMP4),其中LAMP1的特异性引物识别ORF7基因,LAMP2、LAMP3和LAMP4的特异性引物识别Nsp2基因。