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制备和应用固定化酶
（2012上海）9．酶在大规模产业化应用中的核心问题是固定化技术，而酶固定化所依据的基本原理在于酶具有
A．热稳定性 B．催化高效性 C．催化特异性 D．可反复使用性
【答案】D
【解析】固定化酶指通过物理或化学的方法，将水溶性酶与非水溶性载体结合，既能与反应物接触又能与产物分离，与直接使用酶相比，除催化效率高、特异性强外，还可反复使用酶；酶的热稳定性一般都不强。故D正确。
【试题点评】本题考查了固定化酶与直接使用酶的区别及酶的特性，重点在于理解两者的区别，找出固定化酶依据的基本原理，难度中等。
（2012江苏）17.下列关于酶和固定化酵母细胞的研究与应用的叙述，错误
．．的是（）
A.从酶的固定方式看，吸附法比化学结合法对酶活性影响小
B. 作为消化酶使用时，蛋白酶制剂以口服方式给药
C. 尿糖试纸含有固定化的葡萄糖酶和过氧化氢酶，可以反复使用
D.将海藻酸钠凝胶珠用无菌水冲洗，目的是洗去CaCl2和杂菌
【答案】C
【解析】化学结合法可能影响酶的活性部位而影响反应效果，而吸附法是物理方法不影响酶的分子结构，A正确；消化酶在消化道内起作用，B正确；尿糖试纸由于使用后不能将反应物和酶分开，而不能再次使用，C错；固定化酵母细胞在凝胶珠中，用无菌水冲洗可洗去CaCl2和表面的杂菌，D正确【试题点评】本题考查酶的应用，涉及固定化酶中的原理、操作和应用等知识。属于了解层次。
（2011上海）38．通过酶工程可将联苯水解酶用于生产实践。酶工程通常包括酶的生产、＿＿＿＿＿＿＿、酶的固定化和酶的应用等方面。酶固定化的好处是＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿。【答案】酶的分离纯化便于重复利用能连续进行反应
（2010山东）34. 【生物—生物技术实践】生物柴油是一种可再生的清洁能源，其应用在一定程度上能够减缓人类对化石燃料的消耗，科学家发现，在微生物M产生的脂肪酶作用下，植物油与甲醇反应能够合成生物柴油（如下图）。
用于生产生物柴油的植物油不易发挥，宜选用_____、_____方法从油料作物中提取。
（2）筛选产脂肪酶的微生物M时，选择培养基中的添加的植物油为微生物生长提供____，培养基灭菌采用的最适方法是____法。
（3）测定培养液中微生物数量，可选用_____法直接计数；从微生物M分离提取的脂肪酶通常需要检测______，以确定其应用价值；为降低生物柴油生产技术，可利用______技术使脂肪酶能够重复使用。（4）若需克隆脂肪酶基因，可利用耐热DNA聚合酶催化的_____技术。
【答案】（1）压榨；萃取（注：两空顺序无先后）
（2）碳源高压蒸汽灭菌
（3）显微镜直接计数酶活性（或酶活力）固定化酶（或固定化细胞）
（4）PCR（或多聚链式反应，聚合酶链式反应）
【命题立意】本题综合考查多种生物技术
【解题思路】（1）因为植物油不挥发，所以不适合采用蒸馏法提取，应用压榨法或萃取法提取。（2）植物油中不含矿物质元素，只为微生物提供碳源。培养基适合用高压蒸汽灭菌发进行灭菌。（3）测定微生物的数量，可以用显微镜直接计数。分离出的脂肪酶要对其活性进行检测，以确定其实用价值。可以利用酶固定技术重复使用脂肪酶。（4）利用PCR技术可以扩增基因。
（2010江苏）25．右图1表示制备固定化酵母细胞的
有关操作，图2是利用固定化酵母细胞进行酒精发酵
的示意图．下列叙述正确的是
A．刚溶化的海藻酸钠应迅速与活化的酵母菌混合制
备混合液
CaCl溶液，其作用是使海藻酸
B．图1中X溶液为
2
钠形成凝胶珠
C．图2发酵过程中搅拌的目的是为了使培养液与酵
母菌充分接触
D．图1中制备的凝胶珠用蒸馏水洗涤后再转移到图
2装置中
【答案】BCD
【解析】本题考查了固定化细胞技术的操作过程。熔化的海藻酸钠应冷却后与活化的酵母细胞混合，A项错误；图1中氯化钙溶液可使海藻酸钠形成凝胶珠，B项正确；图2中要进行搅拌以使培养液与细胞充分接触，C项正确；图1中制备的凝胶珠要以过洗涤再移到图2装置中，D项正确。
（2009江苏）3．下列关于固定化酶和固定化细胞的叙述，正确的是 A．固定化细胞技术在多步连续催化反应方面优势明显
B．固定化酶的应用中，要控制好pH、温度和溶解氧C．利用固定化酶降解水体中有机磷农药，需提供适宜的营养条件 D．利用固定化酵母细胞进行发酵，糖类的作用只是作为反应底物【答案】A
(2007山东)34．（8分）【生物—生物技术实践】
乙醇等“绿色能源”的开发备受世界关注。利用玉米秸杆生产燃料酒精的大致流程为：
（1）玉米秸杆经预处理后，应该选用酶进行水解，使之转化为发酵所需的葡萄糖。
（2）从以下哪些微生物中可以提取上述酶？（多选）
A．酿制果醋的醋酸菌 B.生长在腐木上的霉菌
C．制作酸奶的乳酸菌 D.生产味精的谷氨酸棒状杆菌
（3）若从土壤中分离产生这种酶的微生物，所需要的培养基为（按功能分），培养基中的碳源为。
（4）从生物体提取出的酶首先要检测，以便更好地将酶用于生产实践。在生产糖液的过程中，为了使酶能够被反复利用，可采用技术。
（5）发酵阶段需要的菌种是，在产生酒精时要控制的必要条件是。
【答案】（8分）（1）纤维素（酶）（2）B、E （3）选择培养基纤维素
（4）酶的活性（活力）固定化细胞（固定化酶）
（5）酵母菌无氧（密闭、密封）
