蛋白质和脂肪水平对脊尾白虾生长、非特异性免疫力及抗病力的影响

２０１５年７月　第５卷第４期　中国渔业质量与标准　

Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｆｉｓｈｅｒｙ　Ｑｕａｌｉｔｙ　ａｎｄ　Ｓｔａｎｄａｒｄｓ　Ｊｕ１．２０１５　

Ｖ０１．５　Ｎｏ．４　

蛋白质和脂肪水平对脊尾白虾生长、非特异性免疫力及抗病力的影响　索帅　一，李健　，李吉涛　，陈萍　，葛倩倩　，孙铭　（１．大连海洋大学，辽宁大连１１６０２３；２．中国水产科学研究院黄海水产研究所，山东青岛２６６０７１）　

摘要：为探讨不同蛋白质和脂肪水平对脊尾白虾生长、存活、血清非特异性免疫及抗白斑综合征病毒（ＷＳＳＶ）能力的　影响，采用４×３双因素实验设计（４蛋白水平：３５％、３９％、４３％、４７％，即Ｐ３５、Ｐ３９、Ｐ４３、Ｐ４７；３脂肪水平：５％、７％、　９％，即Ｆ５、Ｆ７、Ｆ９），配成１２种实验处理的配合饲料，每处理３重复，选用初重为（０．２１±０．０８）ｇ的脊尾白虾１８００尾进　行５６　ｄ的养殖实验。结果显示：（１）相对增重率、特定生长率、饵料系数和成活率显著受蛋白质和脂肪水平影响（Ｐ＜　０．０５），蛋白质水平和脂肪水平之间无明显的交互作用存在（Ｐ＞０．０５）。其中，Ｐ３９蛋白质组和Ｆ５脂肪组虾的相对增　重率较高（Ｐ＜０．０５），Ｐ４７蛋白组虾特定生长率显著低于其他蛋白组（Ｐ＜０．０５）。Ｐ３９Ｆ５处理组虾饵料系数较低（Ｐ＜　０．０５），Ｐ３９Ｆ５、Ｐ３９Ｆ７和Ｐ４３Ｆ５处理组成活率显著高于于其他组（Ｐ＜０．０５）；（２）饲料蛋白质水平对血清酚氧化酶　（ＰＯ）、溶菌酶（ＬＺＭ）和超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）活力有显著影响（Ｐ＜０．０５），饲料脂肪水平对血清ＳＯＤ和丙二醛　（ＭＤＡ）有显著影响（Ｐ＜０．０５），蛋白质水平和脂肪水平对血清ＰＯ、ＬＺＭ、ＳＯＤ和ＭＤＡ活力均无交互作用存在（Ｐ＞　０．０５）。（３）ＷＳＳＶ病毒攻毒实验表明，饲料蛋白质水平对虾体抗ＷＳＳＶ病毒能力有显著影响（Ｐ＜０．０５），Ｐ３９和Ｐ４３　蛋白组４８ｈ和７２ｈ内累积死亡率显著低于其他蛋白组（Ｐ＜０．０５）。本实验结果表明，蛋白质水平和脂肪水平分别为　３９％和５％～７％饲料可以满足脊尾白虾的生长、以及维持机体正常的非特异性免疫功能和抗病力的营养需求。［中　国渔业质量与标准，２０１５，５（４）：４０—４７］　关键词：脊尾白虾；生长；蛋白质；脂肪；非特异性免疫；抗病力　中图分类号：￥９６３．７１　文献标志码：Ａ　文章编号：２０９５—１８３３（２０１５）０４—００４０—０８　

脊尾白虾（Ｅｘｏｐａｌａｅｍｏｎ　ｃａｒｉｎｉｃａｕｄａ）属于甲壳纲　（Ｃｒｕｓｔａｃｅａ）长臂虾科（Ｐａｌａｅｍｏｎｉｄａｅ）白虾属（Ｅｘ—　ｏｐａｌａｅｍｏｎ），主要分布于中国整个大陆沿岸和朝鲜半　岛西岸的浅海水域，为中国沿海池塘单养、与其他品　种混养的重要经济虾类。其肉质细腻，味道鲜美，是　一种高蛋白、低脂肪，富含矿物质的海鲜品　Ｊ。随着　沿海滩涂的开发，养殖面积迅速扩大，脊尾白虾已成　为中国重要的经济虾类，以黄渤海产量最大，其产量　仅次于中国毛虾（Ａｃｅｔｅｓ　ｃｈｉｎｅｓ￣）和中国对虾（Ｆｅｎｎｅｒ－　ｏｐｅｎａｅｕｓ　ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ）　。　目前，脊尾白虾主要投喂天然饵料　——沙蚕、　小虾、轮虫、桡足类、藻类、有机屑等。人工配合饲料　使用很少，即便使用也多是以其他虾蟹饲料替代，　从而造成脊尾白虾在养殖过程中营养素摄人不均衡，　导致出现虾体生长迟缓、抗病力低下和肉品质降低等　问题。随着人工养殖业的兴起与集约化养殖技术的　应用，水产养殖业迅猛发展，对饲料的要求越来越高。　营养物质不仅是水产动物正常生长、发育必需的物质　基础，而且在维持机体免疫系统功能中起重要作　用　Ｊ。目前，通过营养免疫学方式提高对虾的抗应　激能力和免疫力，进而提高对虾的产量和质量已成为　人们关注的重要方向　。蛋白质和脂肪是虾类重要　两种营养素，饲料中蛋白质与脂肪水平合理科学的搭　配，对水产养殖动物尤为重要　。关于脊尾白虾　配合饲料的研究鲜有报道，曹梅等　研究发现，脊尾　白虾特定生长率在饲料中粗蛋白４５．０５％、粗脂肪　８．６７％时达到最大值，但此研究仅限从生长率一项生　长指标对其进行考察，且为单因素设计，没有考察饲　料中蛋白质和脂肪之间的交互作用，因此，进一步开　展脊尾白虾营养研究对于其配合饲料的开发具有重　要意义。　本实验通过设计不同蛋白质和脂肪水平配比，利　用脊尾白虾生长性能、血清免疫酶活力和抗白班综合　征病毒（Ｗｈｉｔｅ　Ｓｐｏｔ　ｓｙｎｄｒｏｍｅ　ｖｉｒｕｓ，ＷＳＳＶ）能力等指　

收稿日期：２０１５—０１—０６；接收日期：２０１５—３—２０　资助项目：８６３课￣（２０１２ＡＡ１０Ａ４０９）；国家虾产业技术体系（ＣＡＲＳ－４７）；公益性行业（农业）科研专ｘｊ￣（２０１１０３０３４）　

作者简介：索帅（１９８８一），男，硕士，研究方向为脊尾白虾健康养殖，ｓｕｏｓｈｕａｉ１９８８２９＠１６３．ｅｏｍ　通信作者：李健，研究员，研究方向为海水健康养殖技术，Ｌｉｊｉａｎ＠ｙｓｆｒｉ．ａｃ．ｅｎ　第４期　索帅，等：蛋白质和脂肪水平对脊尾白虾生长、非特异性免疫力及抗病力的影响　４１　标，综合探讨人工配合饲料的适宜脂肪和蛋白质水　平，以期进一步完善和补充脊尾白虾对饲料中主要营　养素的需求的基础数据，提升其抗病、促生长效果，为　其营养生理、饲料配制及今后相关研究提供科学参考。　

１材料与方法　１－１　材料　脊尾白虾购自山东省日照市脊尾白虾苗种场，为　同一批虾繁育，体重为（０．２１±０．０８）ｇ，体长为（２．３１±　０．５）ｃｍ。选择个体健壮、附肢完整、体表洁净、大小　一致的虾用于实验。　１．２实验设计　采用４×３双因子实验，设置４个蛋白水平：　３５％、３９％、４３％、４７％，分别以Ｐ３５、Ｐ３９、Ｐ４３、Ｐ４７表　示；３个脂肪水平：５％、７％、９％，分别以Ｆ５、Ｆ７、Ｆ９表　示，共计１２组。实验组依次为：Ｐ３５Ｆ５、Ｐ３５Ｆ７、　Ｐ３５Ｆ９　Ｐ３９Ｆ５　Ｐ３９Ｆ７　Ｐ３９Ｆ９　Ｐ４３Ｆ５　Ｐ４３Ｆ７　Ｐ４３Ｆ９　Ｐ４７Ｆ５、Ｐ４７Ｆ７、Ｐ４７Ｆ９。饲料配方见表１。按照饲料配　方将原料混匀，超微粉碎后，经绞肉机挤压出直径为　２　ｍｍ的颗粒饲料，６０℃烘干至恒重，粉碎过筛后，选　取直径为０．２～０．８　ｍｍ的颗粒饲料进行投喂。　

表１实验饲料配方及营养水平　Ｔａｂ．１　Ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔｓ　ａｎｄ　ｐｒｏｘｉｍａｔｅ　ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ　ｏｆ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ　ｄｉｅｔｓ　

注：ａ表示每千克维生素混合物含核黄素４５　ｍｇ；硫胺素２５　ｍｇ；维生素Ｋ３　１０　ｍｇ；肌醇８００　ｍｇ；盐酸吡哆醇２０　ｒａｇ；维生素Ｂ　０．１　ｍｇ；泛酸６０　ｒａｇ；生物素１．２０　ｍｇ；维生素Ａ　３２　ｒａｇ；维生素Ｄ　５　ｒａｇ；烟酸２００　ｍｇ；叶酸２０　ｍｇ；维生素Ｅ　１２０　ｒａｇ；次粉１８．６７　ｇ。ｂ　表示每千克矿物质混合物含碘化钾０．８　ｒａｇ；氟化钠２　ｍｇ；硫酸铁８０　ｍｇ；硫酸锌５０　ｍｇ；氯化钴５０　ｍｇ；硫酸铜１０　ｍｇ；硫酸镁　１　２００　ｍｇ；氯化钠１００　ｍｇ；磷酸二氢钙３　０００　ｒａｇ；沸石粉１５．５１ｇ。Ｃ表示总能由碳水化合物、蛋白和脂肪的能值分别为１７．５、２３．６４　和３９．５４　ｋＪ・ｇ一　计算　。　

ｌ－３饲养管理　于２０１４年６＿８月进行实验，饲养实验周期为　５６　ｄ。实验用养殖桶的规格为２００　Ｌ，每桶放养５０　尾，每个处理设３个重复，每天饱食投喂两次（０８：００　

和１８：００），按体重３％～５％进行饲料投喂，尽量保证　不过剩，每次投饵３０　ｒａｉｎ后清排泄物，用虹吸法收集　粪便，烘干后于一２０℃冰箱保存，备测。养殖用水盐　度为２９～３１，ｐＨ７．２～７．８，水温为２１～２４℃，２４　ｈ连　４２　中国渔业质量与标准　２０１５年　续充气，溶解氧含量维持在６．２　ｍｇ／Ｌ左右。　天换水１／３，每周彻底换一次水。　１．４检测指标与测定方法　１．４．１生长性能指标　

每２～３　１．６数据处理　

５６　ｄ生长实验结束后，分别从每桶随机抽取５尾　脊尾白虾，用毛巾吸干虾体表面水分，用电子天平称　其质量（精确至０．Ｏ１　ｇ）。生长指标为特定生长率　（ｓｐｅｃｉｆｉｃ　ｇｒｏｗｔｈ　ｒａｔｅ，ＳＧＲ）、相对增重率（ｗｅｉｇｈｔ　ｇａｉｎ，　ＷＧ）、饵料系数（ｆｅｅｄ　ｃｏｎｖｅｒｓｉｏｎ　ｒａｔｉｏ，ＦＣＲ）和成活率　（ｓｕｒｖｉｖａｌ　ｒａｔｅ，ＳＲ）。其计算公式见式（１）～式（４）。　ＳＧＲ（％／ｄ）＝１００×［（ｉｎ　．Ｉｎ　）］／　式（１）　ＳＲ（％）＝１００×Ｍ／Ｎ　式（２）　ＷＧ（％）＝［（　一Ｗｏ）／Ｖ／ｏ］×１００％　式（３）　ＦＣＲ＝Ｆ／／Ｗ　式（４）　式中：　实验末期虾体重（ｇ），ｗ０为实验初期虾　体重（ｇ）；ｔ为实验时间（ｄ）；Ｍ为实验末虾尾数；Ｎ为　实验初虾尾数；Ｆ／为实验周期内摄食饲料的干物质　质量（ｇ）；Ｗ为养殖周期内脊尾白虾体重增长量（ｇ）。　１．４．２血清的制备及血清免疫酶活的测定　实验结束后，每个桶随机取脊尾白虾１０尾，用干　布吸净体表水分，使用一次性无菌注射器从头胸甲插　人心区采集血液。采集好的血液经４℃、５　０００　ｒ／ｍｉｎ　离心１５　ｍｉｎ后，取上清液，于一２０　冷藏备用。　酚氧化酶（ｐｈｅｎｏｌｏｘｉｄａｓｅ，ＰＯ）活性测定：以Ｌ一　多巴为底物，采用Ａｓｈｉｄａｌ１０］的方法进行。血清溶菌　

酶（１ｙｓｏｚｙｍｅ，ＬＺＭ）活性测定：采用王雷等　的方法　进行。丙二醛（ｍａｌｏｎｄｉａｌｄｅｈｙｄｅ，ＭＤＡ）和超氧化物　歧化酶（ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ　ｄｉｓｍｕｔａｓｅ，ＳＯＤ）均采用南京建成　生物工程研究所试剂盒进行测定，以比活力（Ｕ／ｍＬ）　或浓度（ｎｍｏｌｆｍＬ）表示，操作步骤按试剂盒上说明　进行。　１．５攻毒实验　ＷＳＳＶ粗提液制备：取携带ＷＳＳＶ病毒的脊尾白　虾（黄海水产研究所病研室提供）的鳃组织，在０．９％　生理盐水中研磨，５　０００　ｒ／ｍｉｎ离心１０ｒａｉｎ，再使用　０．４５　ｍｍ的滤纸过滤上清液，即得到ＷＳＳＶ的粗提　液，一８０℃保存，备用。　感染实验：饲养实验结束后，每个重复取１５尾对　虾，每尾注射ＷＳＳＶ粗提液１５　Ｌ，继续投喂相应饲　料，记录２４、４８、７２、９６　ｈ时对虾的死亡情况，并计算　累积死亡率（ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｖｅ　ｍｏｒｔａｌｉｔｙ　ｒａｔｅ，ＡＭＲ）。　ＡＭＲ（％）＝攻毒结束时死亡虾尾数／　攻毒虾尾数×１００　式（５）　

所得实验数据采用平均值±标准差表示，采用　ＳＰＳＳ１７．０分析软件进行双因素方差分析（Ｔｗｏ—ｗａｙ　ＡＮＯＶＡ），比较组间差异显著性采用Ｄｕｎｃａｎｇ检验方　法，以Ｐ＜０．０５为显著水平。