高效石油降解菌的筛选及其降解特性

两株石油降解菌的筛选及其生长特性DOI：10.14088/jki.issn0439-8114.2016.02.016土壤是人类赖以生存的自然基础和重要资源，近年来，随着社会经济发展对石油产品需求量增加，大量的石油及其加工品在勘探、开采、运输、加工及储存的过程中进入土壤，造成土壤的石油污染日趋严重，已成为世界性的环境问题[1，2]。

石油物理化学性质特殊，进入土壤后残留时间长，在自然条件下难以降解，给受污染土壤带来一系列的危害：石油黏性强，影响土壤的通透性，使土壤盐碱化、沥青化和板结化，破坏土壤结构和功能，在长期累积过程还会导致土壤中碳氮比和碳磷比失调，引起土壤微生物群落变化，破坏土壤微生物区系，影响植物生长；石油中所含的多环芳烃具有致癌、致突变、致畸变等作用，它们能通过食物链在动植物体内逐级富集，危及人类健康和生态安全[3，4]。

鉴于以上原因，修复和治理污染土壤已经成为迫切需要研究解决的问题。

目前石油污染土壤的修复方法主要有物理方法、化学方法和生物方法，其中微生物处理技术具有经济、有效和环境友好等特点，是目前修复石油污染土壤优先考虑的技术[5，6]。

微生物修复技术是微生物通过代谢作用将石油污染物转化为稳定、无毒的以二氧化碳、水和无机物为主的降解产物。

石油的降解程度和速度取决于微生物特性、污染物的性质和环境因素，而具有强降解能力的石油降解菌是决定生物修复效率的关键因素。

因此，需要有针对性地筛选适合本地区石油污染土壤的土著高效降解菌。

新疆是中国石油主产区，存在大面积石油污染土壤亟待修复[7，8]。

基于此，本研究从新疆石油污染土壤中筛选出2株高效石油降解菌，通过形态和生理生化试验对其进行了初步鉴定，并初步研究该菌的生长特性和培养条件，以期为新疆石油污染土壤的微生物修复提供试验基础。

1 材料与方法1.1 材料1.1.1 土壤和石油样品分离菌种土壤采自新疆油田区污染程度不同的位置，采样时取地表10 cm污染土壤1.0 kg，去除杂物，装入密封袋，于4 ℃冰箱保存。

土壤中高效石油降解菌的筛选及其降解特征的研究林标声;陈雪英;江胜滔;林跃鑫【期刊名称】《福建师大福清分校学报》【年(卷),期】2010(000)002【摘要】从受石油产品污染土壤中筛选出5株石油降解菌,并通过生理生化实验对其进行了初步鉴定.石油降解能力的测定结果表明,其中KF-2、KF-4两株菌均为微球菌属(Microrococcus sp.),石油降解能力较强,其单菌落接种20天后石油降解率分别可以达到76.21%、74.82%.在对这两株菌的降解特征的进一步探究中发现:KF-2菌株在NH4NO3作为氮源的条件下石油降解率较高;而KF-4在(NH4)2SO4作为氮源的条件下石油降解率较高.环境pH为7时,KF-2、KF-4的石油降解率都最高.混合菌的试验表明,KF-2、KF-4混合菌的降解效果明显好于各单菌株接种降解效果.【总页数】6页(P11-16)【作者】林标声;陈雪英;江胜滔;林跃鑫【作者单位】龙岩学院生命科学学院,福建龙岩,364012;龙岩学院生命科学学院,福建龙岩,364012;龙岩学院生命科学学院,福建龙岩,364012;龙岩学院生命科学学院,福建龙岩,364012;福建师范大学生命科学学院,福建福州,350108【正文语种】中文【中图分类】Q93-3【相关文献】1.石油污染土壤中降解菌的分离鉴定及降解基因筛选 [J], 秦薇;梁玉婷;刘勇俊;刘雨佳;赵远2.石油污染土壤中降解菌的分离鉴定及降解基因筛选 [J], 秦薇;梁玉婷;刘勇俊;刘雨佳;赵远;3.石油污染土壤中石油降解菌的筛选及降解特性研究 [J], 汤小萌;马超;熊元林4.石油污染土壤中苯降解菌的筛选及降解特性研究 [J], 姚治华;王红旗;刘敬奇;张小啸5.高效石油降解菌的筛选及石油污染土壤生物修复特性的研究 [J], 徐金兰;黄廷林;唐智新;肖洲强因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

2020年02月Bi 、Ni 、Fe 、Mn 、Ca 、Mg 、Al 、Cu 、Pt 、Pd 标准溶液0、0.50、1.00、5.00、10.00ml 于100ml 容量瓶中，分别加入10ml 王水，用去离子水定容至刻度摇匀以备用；此系列混合标准溶液为0、0.5、1、5、10µg/ml （个别含量高的元素可准备为50µg/ml 的高标）。

（3）样品的测定。

将上述保留的分金溶液及洗液蒸发至近干，用王水加热溶解，冷至室温定容至刻度线，混匀静置待测。

采用电感耦合等离子体发射光谱仪（ICP-OES ）在相应的波长下测定铋、铅、铜、铁、砷、蹄、镍、镉、猛、钙、镁、铝、铂、钯的浓度，仪器需优化消除干扰以获得最大的灵敏度，使谱线强度和浓度成线性关系。

将所有元素的测定值减去空白值相加来计算分金溶液和洗液中的总杂质含量。

3结果3.1金银合粒中存在的杂质元素根据铜精矿元素情况，其中主要金属元素含有铜、铁、钙、镁、铝、铋、铅、砷、蹄、镍、镉、猛、铂、钯等14种元素，通过火试金分离富集得到的金银合粒除去了大多数杂质元素，其主要成分为金银，其余杂质成分含有少量的铅、铋、钙，部分样品含有少量的铂、钯[1]。

本文列举了几种有代表性的铜精矿分析各元素含量可知6类样品金银合粒中铜、铁、砷、蹄、镍、锰、镉、镁、铝的含量均＜0.2ug,其含量基本忽略不计，而所有铜精矿金银合粒中均含有铅、铋、钙这三种元素，含量随品位高低有波动，有2类铜精矿金银合粒中测出少量的铂、钯。

3.2方法精密度和样品回收率试验金银合粒中存在的杂质元素主要是铅、铋、钙、铂、钯，选择铜精矿样品，经火试金富集、分金酸溶解后按所选仪器最佳工作条件测定，考察方法的精密度和样品加标回收率（n=8）如见表2。

表2部分元素精密度和加标回收率元素Pb Bi Ca平均值/ug 30.2063.253.75RSD/%3.582.695.25加入量/ug 20.0050.003.00回收总量/ug49.90110.906.90回收率%99.40%97.92%102.22%3.3杂质元素对银品位影响准确测定各类铜精矿金银合粒中的杂质元素总含量，分析换算成品位的影响情况，通过统计数据得知大部分铜精矿金银合粒中杂质品位占比在0.5~4.5%，随着银品位升高杂质占比减少。

原油降解菌JL21的筛选与降解性能分析作者：宫勋来源：《石油知识》 2017年第2期摘要：菌株JL21与Gordonia amicalis（序列号：KM113029）菌亲缘关系最近，同源性达99%，与构建系统发育树的结果一致。

因此，菌株JL21在分类学地位上初步确定为友善戈登氏菌Gordonia amicalis JL21。

随着2015年新环保法的公布，石油污染的有效处理已经成为国内外研究的重中之重。

微生物处理技术作为既经济高效又环保的方法，受到国内外研究人员的青睐。

本文着重探讨了石油降解菌的筛选与降解性能的测定。

关键词：原油；降解菌；表面活性剂1 实验材料和方法1.1 采样地点及原油来源分离、筛选、降解实验所用的原油及土壤样品均来自中国石油天然气股份有限公司吉林油田分公司。

1.2 培养基无机盐培养基（MSM）：Na2HPO4·2H2O 8.5 g、KH2PO4 3.0 g、NaCl 0.5 g、NH4Cl 1.0 g、MgSO4·7H2O 0.5g、CaCl2 14.7 mg、CuSO4 0.4 mg、KI 1.0 mg、MnSO4·H2O4.0 mg、ZnSO4·7H2O 4.0 mg、H3BO3 5.0 mg、Na2MoO4·2H2O 1.6 mg、FeCl3·6H2O 2.0 mg，蒸馏水1 L。

pH7.0-7.2、121 ℃灭菌20 min。

原油降解培养基：在MSM培养基中添加0.5%的灭菌原油。

油平板：将原油溶于石油醚（原油终浓度为10%）中，滤纸剪成直径85 mm，置90 mm培养皿中，加2 mL 10%原油溶液，待石油醚挥发后，121℃高压蒸汽灭菌20 min，取出烘干备用。

无机盐培养基灭菌后倾倒平板，将滤纸紧贴在MSM平板上后即成油平板。

富集培养基：蛋白胨 10 g、牛肉膏 5 g、NaCl 5 g、蒸馏水 1 L，pH 7. 0.血液琼脂培养基：脱纤维绵羊血 50 ml、血液营养琼脂45 g、去离子水 1L。

石油污染土中微生物的分离鉴定及降解特性石油是一种重要的能源资源，但在石油的采运、储运、加工和使用过程中，往往会发生石油泄漏和溢出等事故，导致严重的石油污染问题。

石油污染土壤是指土壤中存在一定浓度的石油物质，这些物质会对土壤中的微生物群体和生态系统造成影响。

因此，对石油污染土中的微生物进行分离鉴定及降解特性研究，对于解决石油污染问题具有重要意义。

本文通过对石油污染土中的微生物进行分离鉴定及降解特性研究，探讨石油污染土的生物修复技术，为石油污染问题的治理提供理论依据。

在石油污染土中，常见的微生物包括细菌、真菌、放线菌和蓝藻等。

根据土壤中细菌和真菌在营养需求上的差异，可以采用不同的富集培养基对其进行分离培养。

1. 细菌的分离鉴定细菌在石油污染土中是主要的降解菌，通过对细菌菌株的分离鉴定能够确定污染土中的细菌种群。

首先，可采取Dilution Plate法将不同稀释程度的土样涂布于富集培养基表面，经过一段时间后，从菌落形态及色素等方面进行初步的鉴定。

然后，可通过菌落PCR和16S rRNA基因测序技术进一步鉴定和分类。

石油污染土微生物的降解能力和降解途径，是研究石油污染土生物修复技术的基础。

根据微生物降解路径的不同，可以将石油污染物降解成不同的产物，如二氧化碳、水、甲烷、醛、酮等。

1. 细菌降解特性细菌在石油污染土中是主要的降解菌。

其中，硫氧化细菌能够利用污染土中的硫化物对石油进行降解；芳香族细菌能够通过羧化、水解等途径将石油中的芳香族化合物降解成较小的芳香族化合物。

同时，细菌在降解过程中会产生一些代谢产物，如微量元素和氨氮等，有些可以促进污染土的生化过程，有些则会对土壤环境产生不利影响。

真菌在石油污染土中也有重要的降解作用。

真菌能够分泌多种外生酶，如过氧化物酶、脱氢酶等，对石油中的烷烃和芳香族化合物进行降解。

同时，真菌具有很强的氧气吸收能力，可以加速石油中挥发性有机物的挥发，从而实现石油的清除。

三、生物修复技术在石油污染土治理中的应用生物修复技术是指利用生物学机制将有害化合物转化为无害物质的一种环境修复技术。