常用核酸提取技术介绍复习课件.ppt

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04Biblioteka 正确取样部位确保咽拭子采集的部位准确， 避免取样过浅或过深。
避免交叉感染
采样进程中要确保每人一换咽 拭子，避免交叉感染。
采样力度适中
采样时力度要适中，避免因力 度过大造成不适或破坏。
做好个人防护
采样人员需佩戴口罩、手套等 个人防护用品，确保自身安全
。
采样后的处理流程
样本保存
将采集的样本放入专用试管中 ，密封保存，避免污染。
环境消毒措施
采样环境清洁
在采样前，应对采样环境进行清洁，去除表面的污垢和细菌。
采样工具消毒
每次采样后，必须对采样工具进行消毒，可以使用酒精棉片或紫 外线消毒器。
环境空气消毒
在采样进程中，可以使用空气消毒器或紫外线灯对环境空气进行 消毒。
安全防护意识的培养
加强培训
定期对采样人员进行安全防护培训，提高他们的安全意识和操作 技能。
及时送检
尽快将样本送至实验室进行检 测，确保检测结果的准确性。
废弃物处理
对使用过的咽拭子、手套等一 次性用品进行无害化处理。
清洁消毒
采样结束后，对采样现场进行 全面清洁消毒，确保环境安全
。
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核酸采样的质量控 制
采样的质量标准
样本采集的及时性
确保在规定时间内完成采样，避 免时间过长导致样本质量降落。
核糖体RNA（rRNA）
参与蛋白质合成的场所，与mRNA和tRNA共同组成翻译系统。
核酸采样的基本原理
核酸采样主要是采集生物样本中的DNA或RNA。 通过特定的采样方法和技术，确保采集的核酸样本具有代表性、准确性和可靠性。
核酸采样是进行基因检测、遗传疾病诊断、生物信息学研究等的重要条件和基础。

三、核酸的鉴定与保存
2、纯度鉴定 ⑴ 紫 外 分 光 光 度 法 ： 该 法 主 要 通 过 A260 与 A280
的比值来判定有无蛋白质的污染，比值升 高与
降低均提示不纯。 在TE缓冲液中，纯DNA的A260/A280
纯RN第A25的页/共A12562页0/A280比值为
三、核酸的鉴定与保存
1. DNA或RNA的定量 OD260相当于 50μg/ml双链DNA 40μg/ml单链DNA（或RNA） 20μg/ml寡核苷酸
三、核酸的鉴定与保存
• 完整或降解很少的总RNA电泳图谱中，三条带 荧光强度积分应呈特定的比值，沉降系数大的 核酸区带，电泳迁移低，荧光强度积分高；反 之，分子量小，电泳迁移率高，荧光强度积分 低。
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三、核酸的鉴定与保存
• 一般而言，28S（23S）RNA的荧光强度约为 18S（16S）RNA的2倍，否则提示有RNA的降 解。若 在点样孔附近有着色条带，则说明存在DNA 的污染。
75%的乙醇洗涤去除
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三、核酸的鉴定与保存
（一）核酸的鉴定 （二）核酸的保存
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三、核酸的鉴定与保存
（一）核酸的鉴定 1、浓度鉴定 2、纯度鉴定 3、完整性鉴定
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三、核酸的鉴定与保存
1、浓度鉴定 ⑴ 紫外分光光度法：该法是基于核酸分子 中的碱基具有共轭双键结构因而可以吸 收 紫外线，其最大吸收波长为260nm。
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第五章 核酸的分离纯化
核酸分离纯化的原则 一、 保持核酸一级结构的完整性 二 、尽可能提高核酸制品的纯度
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提取DNA总的原则

在不同浓度电解质中溶解度有明显差别
0.14M
2. 核酸与蛋白质的分离 DN
氯仿-异丙醇
P
极小
1M 大两倍
3. 核酸的沉淀
RN P
相当大 变化不大
目录
实验原理 （二）核酸的鉴定 1. 核酸的水解
RNA和DNA均可被硫酸水解生成含氮碱 （嘌呤碱与嘧啶碱）、戊糖（RNA中的核糖 与DNA中的脱氧核糖）和磷酸。
CH3
2H2O
核糖
HO
OH
3，5-二羟甲苯
HO
C O
CH3
O OH
H3C 绿色化合物
目录
2. 成分的鉴定
实验原理
（3）脱氧核糖的鉴定原理
CHO
CHO
CH2 浓H2SO4 CH2
CHOH
CH2
CHOH H2O C O
CH2OH
CH2OH
脱氧核糖
ω —羟基—γ —酮基戊醛
NH
二苯胺
蓝色化合物
目录
2. 成分的鉴定
目录
实验操作
2．分离提取 将上述肝匀浆全部倾入一支10ml刻度离心
管中，再用0.14M NaCl溶液分两次将研钵中 肝匀浆洗入离心管中，使离心管内总量不超过 5ml。用玻璃棒充分搅匀，放置10min ，离心 （3500r/min）5min。溶液分为两层。
目录
实验操作
2．分离提取 用滴管吸取上清液于另一离心管中，用于进一
目录
实验操作
2．分离提取 分别在上清液中加入1.5～2倍体积的冰冷
的95%乙醇。在分离提取DNA时，要边加边 用玻璃棒搅拌，此时纤维状的DNA缠绕在玻 璃棒上。当分离提取RNA时，轻轻搅拌，出现 乳白色絮状沉淀。分别离心（3500r/min） 5min，弃去上层乙醇液，沉淀为RNA或DNA

特异性探针和引物设计
针对不同病毒或病原体设计特异性探针和引物，降低交叉反应和误 检率。
缩短检测时间与降低成本
快速检测方法
通过优化实验流程和缩短扩增时间，实现快速核酸检测，满足紧急 需求。
简化操作流程
减少实验步骤和所需试剂，降低实验成本和操作难度，便于基层医 疗机构应用。
自动化与智能化
采用自动化核酸检测设备和智能分析软件，提高检测效率，降低人工 成本。
样本采集
采集方式
采集注意事项
通过鼻咽拭子、咽拭子、血液等方式 采集样本。
采集时应避免手部直接接触样本，以 免污染样本。
采集部位
采集样本的部位应选择在病毒含量较 高的区域，如鼻咽部、支气管等。
样本处理
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样本保存
采集后的样本应保存在低 温、干燥、避光的环境中 ，以保持其活性。
样本运输
样本应尽快送往实验室进 行检测，运输过程中应保 持低温、密封，避免污染 。
实时荧光定量PCR检测
检测原理
实时荧光定量PCR检测基于DNA 双链复制原理，通过荧光染料标 记的DNA探针，实时监测PCR过
程中的荧光信号变化。
检测步骤
实时荧光定量PCR检测包括变性、 退火、延伸等步骤，每个步骤都需 要控制温度和时间，以保证检测的 准确性。
检测仪器
实时荧光定量PCR检测需要使用特 定的仪器，如荧光定量PCR仪，进 行自动化检测。
按照相关规定妥善处理实验废弃物，防止环境污 染。
实验操作规范与安全防护
操作规程
制定详细的实验操作规程，确保实验操作规范、准确。
个人防护
实验人员应穿戴个人防护装备，如实验服、口罩、手套等，确保自 身安全。

2Байду номын сангаас21/3/26
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QIAGEN 核酸提取仪
BioRobot 3000可选功能
REAL,QQ,PCR,QPT,DTS,DyeEx Qiaamp DNA Blood 48 NTA Series:
Ni-NTA Superflow 96 Purification Ni-NTA Magnetic Beads Immunoassay Ni-NTA Magnetic Beads Interaction Assay Ni-NTA Magnetic Beads
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QIAGEN 核酸提取仪
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满足分子诊断所需核酸标准的、自动纯化操作过程
满意的得率和可信的结果
自动的样品跟踪和过程控制系统（条形码扫描）
可同时进行96样品，且有很好的可重复性
一次性枪头可安全处理有传染性的样品
配套的高质量试剂
简单易学的软件操作系统
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High capacity robotic arm system for storage and handling of microlplates
The BioRobot Twister II robotic arm allows integration of external instruments with BioRobot 8000 workstations and provides fast plate handling and transfer of labware for molecular biology applications. It can be integrated with a wide variety of instruments, including the BioRobot 8000 and BioRobot RapidPlate workstations,