12小麦成熟胚愈伤组织诱导

小麦转录因子基因TaWRKY18在烟草和小麦中的遗传转化1 引言小麦作为世界上重要的粮食作物,其进行基因工程改良一直倍受关注。

自1993年Chan TM[1]利用农杆菌转化水稻获得转基因植株以来,农杆菌介导的转化方法在禾本科作物上的研究迅速展开,玉米和水稻已经建立相对完善的转化体系[2,3], 直到1997 年,Cheng M等[4]才报道了利用农杆菌介导法获得gus(β-2葡萄糖苷酸酶)基因的转基因植株。

随后,农杆菌介导小麦遗传转化在许多实验室取得了成功。

Xia GM等[5] 1999年获得农杆菌介导的nptⅡ基因的小麦当代转化植株。

本试验是在小麦成熟胚组织培养研究的基础上,以小麦成熟胚愈伤组织为受体,对农杆菌介导的小麦遗传转化的主要因子,如外植体预培养时间、共培养时间、抗生素( Kan)筛选压、头抱霉素浓度、接种菌液浓度和侵染时间等进行优化,以提高小麦遗传转化效率,为小麦的基因工程遗传改良育种奠定基础。

烟草易于进行组织培养和基因转化,易得到再生的转化植株,是典型的基因工程模式植物。

而本生烟草更具有生长速度快、生命周期短的优点[6]。

植物遗传转化(genetic transformation) 是指利用重组DNA 技术、细胞组织培养技术或种质系统转化等技术,将外源基因导入植物细胞或组织,获得转基因植物的技术[7]。

植物基因工程研究起于本世纪八十年代中期。

自其诞生至今，如何将这项技术应用于小麦、水稻、玉米等农作物的遗传改良研究便始终是人们努力的重要目标之一。

要实现这一目标，首先要建立一套高效、可靠、重复性好的基因转化体系。

而在植物基因转化系统研究方面，禾谷类相对于其他单、双子叶植物而言，具有起步晚、困难大的特点，而小麦相对于其他禾谷类如水稻、玉米等又进一步表现出其滞后性和困难性。

通常产生转基因植物的方法有两类，一类是借助于原生质体的直接转化法如PEG发法、电激法、脂质体法等，另一类是农杆菌介导的植物细胞、组织、器官直至完整支柱的基因转化方法。

1.5倍行距，空1行2018届 分类号:单位代码:104521.5倍行距，空2行1.5倍行距，空1行毕业论文1.5倍行距，空1行 不同浓度的2,4-D 对小麦胚性愈伤组织的诱导（小三号宋体、加粗、居中，英文用Time New Roman,不超过36个字。

只要中文题目。

）1.5倍行距，空3行姓 名 刘妍学 号 201308910240 年 级2013级 专 业 生物科学 系 （院）生命科学学院 指导教师从此页开始，所有页边距如下设置：页边距上：2.54 cm ，页边距下2.54 cm ，页边距左3.17 cm ，页边距右3.17 cm此处1.5倍行距，空3行2018年4月XX 日（中文形式，数字用times 格式，宋体，四号，居中，单月单日前，不加数字“0”，数字与中文间无空格）四号楷体GB-2312、加粗,居中，栏目线长度保持一致 数字用Time NewRoman ，小四，斜体，加粗；“届”字用宋体，加粗，斜体，小四 分类号（宋体，小四）、单位代码（宋体，小四），分类号和单位代码后，半角条件下用冒号，其余信息，数字用Times New Roman ，小四；文字用宋体，小四；英文用大写，Times New Roman ，小四。

注意对齐。

封面页不要带页码、页眉和页脚。

封面页后不要带附加页，例如，再附加一份题目页。

此处不要有“附件”两字此处1.5倍行距，空1行中文题目（居中）（小三号宋体、加粗、居中，英文用Time New Roman,不超过36个字。

）1.5倍行距，空2行英文题目（居中）（小三号宋体、加粗、居中，英文用Time New Roman,不超过36个字。

）1.5倍行距，空4行姓名XXXXXX专业 XXXXXXXX指导教师XXXXXX1.5倍行距，空4行临沂大学二〇一四年四月无页码四号楷体GB-2312、加粗,居中，栏目线长度保持一致（“摘要”二字与顶端要1.5倍行距下空2行，此页顶端不加页眉及页眉线）摘要（小三号黑体、居中，“摘要”两字间空一格）（“摘要”标题下要1.5倍被行距下空两行再写中文摘要内容。

小麦组织培养研究进展摘要:小麦组织培养是利用基因工程改良小麦品种的重要基础和保证。

对不同小麦外植体 (幼胚、幼穗、成熟胚、幼叶、根、小孢子、花药、原生质体等)组织培养研究现状进行了综述。

关键词：小麦，外植体，组织培养Abstract :Wheat tissue culture is the foundation and assurance of improving wheat by plant gene engineering. different wheat explants, such as immature embryo, inflorescence, mature embryo, young leaf, root, microspore,anther, protoplast,were cultured to obtain regenerative plants, the advances of study on which were summarized in this paper.Keywords: Wheat ，Explant，Tissue culture;1. 前言小麦是世界上分布范围和栽培面积最广，总产量最多的粮食作物，在我国种植面积仅次于水稻，是我国人民的主要粮食作物之一。

随着生物技术的发展，运用基因工程进行小麦品种改良越来越受到国内外育种家的重视，并已成为世界各国作物遗传育种优先研究的课题之一。

而外源基因通过基因工程技术向小麦的转移要求建立高效的离体培养系统，这种系统必须对广范围的基因型而言是快速、可靠和适用的。

因此，小麦高效组织培养系统的建立仍是许多研究者关注的科学问题之一。

2. 小麦组织培养研究现状幼胚组织培养自1978 年Shimada成功地通过小麦幼胚培养获得再生植株以来，幼胚被共认为是小麦组织培养最有效、最理想的外植体来源之一。

在小麦幼胚培养中，如何确定胚龄是一个令人困惑的问题，首先是如何确定胚龄的衡量标准问题，一些学者选用“一定长度”或“直径”的胚作为衡量胚龄的标准。

玉米自交系成熟胚再生体系的建立王延鹏甘肃农业大学农学院，兰州（730070）E-mail：wypfff@摘要：试验选取优良玉米自交系K12、昌7-2、137、87-1、478、郑58、综3、178的成熟胚作为外植体，以MS为基本培养基，通过调节培养基中2，4-D浓度和BAP浓度，观察玉米成熟胚愈伤组织的诱导情况，对影响玉米成熟胚愈伤组织的若干因素进行研究，以建立较好的再生体系，为下一步的遗传工程操作奠定基础。

实验结果表明，玉米愈伤组织的诱导因基因型的不同有明显的差异，K12诱导率最高达95%，而郑58、综3、178、137诱导率均为0。

因此，基因型是影响玉米愈伤组织诱导和培养的一个重要因素。

当2，4-D和BAP 浓度分别为6mg/L和0.001mg/L时成熟胚愈伤组织诱导率最高达95%，由此可见，玉米成熟胚愈伤组织的诱导率受2，4-D和BAP的影响较大。

关键词：玉米；成熟胚；愈伤组织玉米是世界第三大粮食作物，种植面积仅次于水稻和小麦，是主要的粮食和饲料作物，也是制药﹑淀粉﹑糖精和酒精工业的重要原料，在国民生产中占有重要地位。

随着全世界人口的增长以及畜牧业和工业的发展，发展玉米产业具有十分重要的意义。

然而，随着栽培条件的改善，种植密度的增加，大斑病、丝黑穗病等玉米病害成为我国春玉米产区的主要病害，而小斑病等成为夏玉米产区的主要病害，严重影响我国玉米生产的产量和品质。

为了生产发展的需要，高产、优质、多抗性是玉米育种工作的基本要求。

采用常规育种周期长，耗时费力，远远不能满足生产发展的需要，更重要的是由于少数自交系长时间﹑大面积的使用导致了玉米抗性资源的极度匮乏，极大的限制了传统方法在玉米抗病育种中的成效。

近年来，遗传转化技术在玉米育种中取得一定的成果，为玉米育种工作创造了一条新的途径。

然而，建立良好的受体系统是玉米遗传转化的一个重要前提，关系到提供适宜转化的受体材料以及转化后的细胞能否再生为正常植株等问题。

生长素类：主要功能是促进细胞伸长生长和细胞分裂，诱导愈伤组织形成，促进生根。

配合一定的细胞分裂素，可诱导不定芽的分化、侧芽的萌发于生长。

吲哚乙酸（IAA），萘乙酸（NAA），2,4二氯苯氧乙酸（2,4-D）等。

作用强弱：2，4-D>NAA>IBA>IAA.生长素通常用量为0.1--10mg/L。

生长素类如2，4-D和IAA可延缓多酚合成，减轻褐变发生。

2，4-D可以促进愈伤组织的增殖。

2，4-D，NAA，IAA可诱导细胞开始分裂，它们可使细胞的呼吸作用加强，消耗氧气的量明显增加，多聚核糖体的不断增加，蛋白质合成加快，与分裂有关的酶活性大大加强。

2，4-D是诱导愈伤组织最有效的物质。

2，4-D是诱导多种植物体细胞胚发生的重要激素。

2，4-D对有些品种的诱导率和分化率有提高的效果。

2，4-D对于许多作物花粉的启动、分裂、形成愈伤组织和胚状体起着决定性的作用。

随着浓度提高，花粉愈伤组织出现频率有增高的趋势，2，4-D对启动分裂和愈伤的增殖往往有刺激作用，但对分化却有抑制作用，在诱导单倍体愈伤分化时，应及时降低或去除2，4-D。

2，4-D在诱导花粉粒转向孢子体发育的过程中起主导作用。

2，4-D有利于薄壁细胞的生长，在植物细胞悬浮培养中，常加入适宜浓度的2，4-D。

2，4-D对原生质体愈伤组织的分化有抑制作用，但对愈伤组织的维持和旺盛生长有促进作用。

相对高浓度的IAA有利于细胞增殖和根的分化。

BA和IAA或NAA配合时，发生茎芽，但改变为Zt与2，4-D的组合时就不发生。

生长素类可抑制芽的分化。

生长素浓度高时，可使愈伤组织块变松脆；降低或除去生长素，愈伤组织可以转变为坚实的小块。

IAA在胚性细胞诱导中的作用可能与它迅速激活基因表达有关，其诱导的mRNA合成具有专一性，调控生长素的受体、载体、控制生长素合成和代谢的酶以及直接影响生长的酶的合成。

通常高浓度的生长素和低浓度的激动素有利于愈伤组织的诱导和增殖。