分子生物学 第八章

第八章重组DNA技术一、选择单选1、下列哪项不属于生物工程？A. PCR技术B.重组DNA技术C.蛋白质工程D.酶工程E.细胞工程2、重组DNA技术中所用的限制酶是哪类？A.Ⅰ型限制酶B.Ⅱ型限制酶C.Ⅲ型限制酶D.Ⅳ型限制酶E.Ⅴ型限制酶3、可以利用蓝白筛选法筛选用pUC转化的重组DNA克隆，是因为pUC包含以下哪种元件？A.复制起点B. amp RC.acZ'D.多克隆位点MCSE.调节基因lacI4、关于λ噬菌体，以下叙述错误的是A.基因组DNA的部分序列并非溶原性生长所必需B.基因组DNA感染大肠杆菌后形成闭环结构C.在溶原性生长时进行滚环复制D.复制时形成多联体结构E.其转化的细菌经过培养形成噬菌斑5、pBR322质粒包含两个抗性基因：氨苄青霉素抗性基因和四环素抗性基因，据此可以利用哪种方法筛选重组DNA克隆？A.α互补B. PCRC.插入失活D.核酸分子杂交E.蓝白筛选6、制备重组DNA首先要制备目的DNA，要保证目的DNA的量和纯度能满足重组要求。

常用的制备方法不包括A.PCR扩增B.从组织细胞分离基因组DNAC.化学合成D.逆转录合成cDNAE.限制酶截取7、第一种应用于临床的重组蛋白是A.基因工程疫苗B.基因工程抗体C.激素D. 生长因子E.细胞因子8、在重组DNA技术中，目的DNA与载体在体外连接的过程称为DNA的体外重组。

体外重组的方法不包括：A.加人工接头连接B.加同聚物尾连接C.互补黏端连接D.连接E.平移连接9、重组DNA的宿主细胞有原核细胞和真核细胞。

用于制备基因文库的宿主细胞主要是A.哺乳动物细胞B.大肠杆菌C.酵母D.枯草杆菌E.昆虫细胞10、哪种方法要求宿主细胞必须是感受态细胞？A.CaCl2法B.病毒感染法C.脂质体载体法D.显微注射法E.穿刺法11、蓝白筛选属于筛选重组DNA克隆方法的哪种？A.PCR分析B.插入失活分析C.核酸分子杂交分析D.酶切分析E.免疫分析12、重组DNA技术领域常用的质粒DNA是A. T病毒基因组DNA的一部分B. 细菌染色体外的独立遗传单位C. 细菌染色体DNA的一部分D. 真核细胞染色体外的独立遗传单位E. 真核细胞染色体DNA的一部分13、某限制性内切核酸酶切割5’…GGGGGG▼AATTCC…3’序列后产生A. 5’突出末端B. 5’或3’突出末端C. 5’及3’突出末端D. 3’突出末端E. 平末端14、“克隆”某一目的DNA的过程不包括A. 重组DNA分子导人受体细胞B. 外源基因与载体的拼接C. 基因载体的选择与构建D. 筛选并无性繁殖含重组分子的受体细胞E. 表达目的基因编码的蛋白质15、关于基因文库及其构建，以下叙述错误的是A.基因文库包括基因组文库和cDNA文库B.构建基因组文库常用的克隆载体是λ噬菌体、粘粒和酵母人工染色体系统C.目前构建的cDNA文库可以包含一种生物基因组所含的全部编码序列D.真核生物cDNA文库中的目的基因可以在原核细胞内表达活性产物E.构建cDNA文库要用到逆转录酶多选：1、用目的DNA和质粒制备重组DNA，下列哪些工具酶是必需的？A.DNA聚合酶B.核酸酶C.连接酶D.限制酶E.修饰酶2、影响限制酶切割效率的因素有那些？A.底物纯度B.底物甲基化程度C.底物结构D.反应温度E.反应体系组成3、哪些因素会降低限制酶的特异性?A.高浓度限制酶B.高浓度甘油C.低离子强度D.用Mn2+取代Mg2+E.高pH值4、限制酶的应用非常广泛，包括:A.DNA重组B.质粒改造C. DNA杂交D.探针制备E.基因定位5、关于重组DNA技术使用的DNA 连接酶A.用以将目的DNA与载体共价连接成重组DNAB.包括大肠杆菌DNA连接酶和T4 DNA连接酶C.大肠杆菌DNA连接酶需要NAD，而T4 DNA连接酶需要ATPD.大肠杆菌DNA连接酶用于连接切口或互补黏端E.T4 DNA连接酶用于连接互补黏端或平端6、重组DNA技术常用的DNA聚合酶有A.DNA聚合酶ⅠB. Klenow片段C. Taq DNA聚合酶D. 逆转录酶E. T4 DNA聚合酶7、载体分为克隆载体和表达载体两类。

分子生物学（全套课件557P）简介分子生物学是研究生物分子结构、功能和相互作用的学科。

它涉及到核酸、蛋白质和其他生物分子的研究，以及它们在细胞和生物体中的功能。

本文档是一套全面的分子生物学课件，共有557页。

本课件旨在帮助读者系统地了解分子生物学的各个方面，包括基本的分子生物学原理、实验技术、研究方法以及应用等。

目录1.第一章：分子生物学概述2.第二章：DNA结构与功能3.第三章：RNA结构与功能4.第四章：蛋白质结构与功能5.第五章：基因表达调控6.第六章：基因突变与遗传变异7.第七章：分子生物学实验技术8.第八章：分子生物学研究方法9.第九章：分子生物学的应用领域第一章：分子生物学概述1.1 什么是分子生物学分子生物学是研究生物体内分子的结构、功能以及相互作用的学科。

它涉及到DNA、RNA、蛋白质等生物分子的研究，以及它们在细胞和生物体中的功能。

1.2 分子生物学的历史与发展分子生物学起源于20世纪50年代，当时发现DNA是物质遗传信息的携带者后，科学家们开始研究DNA的结构和功能，从而奠定了现代分子生物学的基础。

1.3 分子生物学的重要性分子生物学的研究对于了解生命的本质和机理至关重要。

它不仅有助于解释遗传现象，还可以揭示细胞的结构、功能和调控机制，甚至为疾病的诊断和治疗提供理论基础。

2.1 DNA的组成与结构DNA是由基因序列组成的生物分子，它由核苷酸组成。

本节将介绍DNA的基本结构、双螺旋结构和碱基对的配对方式。

2.2 DNA复制与遗传信息传递DNA复制是细胞分裂过程中最重要的事件之一，它确保了遗传信息的传递和稳定性。

本节将介绍DNA复制的过程和机制。

2.3 DNA修复与突变DNA在生物体内容易受到各种外界因素的损伤，因此细胞拥有多种修复机制来修复DNA损伤。

本节将介绍DNA修复的方式和维护基因组稳定性的重要性。

3.1 RNA的种类与功能RNA是DNA转录的产物，它在细胞内发挥着多种功能，包括mRNA的编码信息传递、tRNA的氨基酸运载和rRNA的构建核糖体等。

第八章分子生物学常用技术的原理及其应用及人类基因组学测试题一、名词解释1．分子杂交2．Southern blotting3．Northern blotting4．Western blotting5．dot blotting6．DNA芯片技术7．PCR8．功能性克隆9．转基因技术二、填空题1．Southern blotting用于研究、Northern blotting用于研究，Western blotting用于研究。

2．PCR的基本反应步骤包括、和三步。

3. 在PCR反应体系中，除了DNA模板外，还需加入、、和。

4．Sange法测序的基本步骤包括、、和。

5．目前克隆致病相关基因的主要策略有、、。

6．血友病第Ⅷ因子基因的首次克隆成功所采用的克隆策略是，而DMD致病基因的克隆所采用的克隆策略是。

三、选择题A型题1. 经电泳分离后将RNA转移到硝酸纤维素(NC)膜上的技术是：A．Southern blotting B．Northern blottingC．Western blotting D．dot blottingE．in situ hybridization2. 不经电泳分离直接将样品点在NC膜上的技术是A．Southern blotting B．Northern blottingC．Western blotting D．Dot blottingE．in situ hybridization3. 经电泳分离后将蛋白质转移到NC膜上的技术是A．Southern blotting B.Northern blottingC．Western blotting D．dot blottingE．in situ hybridization4. 经电泳后将DNA转移至NC膜上的技术是A．Southern blotting B．Northern blottingC．Western blotting D．Eastern blottingE．in situ hybridization5. PCR的特点不包括A．时间短，只需数小时 B．扩增产物量大C. 只需微量模板 D．用途非常广泛E. 底物必须标记6．用于PCR的DNA聚合酶必须A．耐热 B．耐高压 C. 耐酸 D．耐碱 E. 耐低温7．PCR反应过程中，模板DNA变性所需温度一般是A．95 °C B．85 °C C．75 °C D．65 °C E．55 °C 8．PCR反应过程中，退火温度一般是A．72 °C B．85 °C C．75 °C D．65 °C E．55 °C 9. PCR反应过程中，引物延伸所需温度一般是A．95 °C B. 82 °C C．72 °C D．62 °C E．55 °C 10．PCR反应体系不包括A. 模板DNA B．TaqDNA聚合酶C. 上、下游特异性引物A、B D．ddNTPE．含Mg2+的缓冲液11．PCR的循环次数一般为A．5～10次 B．10～15次 C．15～20次D．20～25次 E．25～30次12．PCR反应体系与双脱氧末端终止法测序体系不同的是缺少A．模板 B．引物 C. DNA聚合酶D．ddNTP E．缓冲液13．Sanger法测序不需要A．Klenow小片段 B．引物 C. dNTPD．标记dNTP E．ddNTP14．Sanger法测序的基本步骤不包括A．标记模板 B．模板一引物杂交 C．电泳D．引物的延长与合成阻断 E．放射自显影直读图15．Sanger法测序的四个反应体系中应分别加入不同的A．模板 B．引物 C标记dNTPD．DNA聚合酶 E. ddNTP16．人类基因组计划的主要研究内容不包括A．遗传图分析 B．物理图分析 C．转录图分析D. 序列图分析 E．蛋白质功能分析17．1996年，英国科学家克隆的Dolly羊所采用的技术是A．转基因技术 B．核转移技术 C．基因剔除技术D．肽核酸技术 E. 反义核酸技术18．Maxam—Gilbert法与Sanger法测序的共同点是均需A. 引物 B．Klenow大片段 C. ddNTPD. 化学裂解试剂 E．电泳后放射自显影读图19．Sanger法测序所得直读图像中，由终点至始点所读序列为A．待测DNA5¢到3¢的碱基序列B．待测DNA3¢到5¢的碱基序列C．待测DNA互补链3¢到5¢的碱基序列D．待测DNA互补链5¢到3¢的碱基序列E．引物5¢到3¢的碱基序列20．PCR实验的特异性主要取决于：A．DNA聚合酶的种类 B. 反应体系中模板DNA的量C．引物序列的结沟和长度 D．四种dNTP的浓度E. 循环周期的次数21．基因剔除(knock out)的方法主要被用来研究A．基因的结构 B．基因的功能 C. 基因的表达D．基因的调控 E．基因的突变22. 反义核酸作用主要是A．封闭DNA B．封闭RNA C．降解DNAD．降解DNA E．封闭核糖体的功能23．有关Sanger法测序的叙述，不正确的是A．只需标记一种dNTPB. 一般应去除DNA聚合酶I的5¢到3¢外切酶活性C．与dNTP相比阻断剂应尽可能的多D．反应时间不必太长E. 应采用超薄高压电泳B型题(1—5)A．Northern blotting B．dot blotting C．Western blottingD. Southern blottingE. in situ hybridizanon1.．用限制性内切酶酶切后进行电泳分离，再将DNA转移到NC膜上杂交的技术是2．电泳分离后将RNA转移至NC膜上杂交的技术是3．电泳分离后将蛋白质转移至NC膜上，与标记蛋白杂交的技术是4．不经电泳直接将样品点在NC膜上杂交的技术是5. 在组织切片上直接与探针杂交的技术是(6—8)A．95°C B．85 °C C．72°C D．65°C E．55°C 6．PCR变性温度一般是7．PCR退火温度一般是8．PCR引物延伸温度一般是(9—12)A．Taq DNA聚合酶 B. 反转录酶 C．K1cnow大片段 D．末端核苷酸转移酶 E．Klenow小片段9．同聚物加尾连接需要10．PCR需要11．Sanger法测序需要12．由mRNA合成cDNA需要X型题1.PCR反应体系中含有A．特异性引物 B．Klenow大片段 C.dNTPD．ddNTP E．35S-a-dATP2. PCR技术的反应步骤包括：A．退火 B. 复性 C. 变性 D．引物延伸E．引物终止3．DNA链末端合成终止法反应体系中含有A．引物 B．dNTP C．ddNTPD．35S-a-dATP E．TaqDNA聚合酶4．DNA链末端合成终止法反应体系中不含有A．模板 B．TaqDNA聚合酶 C．ddNTPD．化学裂解试剂 E．35S-a-dATP5．PCR技术可以用于A．病原微生物的微量检测 B．突变基因的筛选C. 法医学鉴定 D．DNA序列分析E．克隆目的基因6．克隆致病相关基因的策略包括A．定位克隆 B．非定位候选克隆 C．功能克隆D．定位候选克隆 E．随机克隆四、问答题1．何谓PCR?简述其基本原理、反应体系和主要步骤。

第八章分子生物学研究方法上自测题1.（单选题）识别并切割特异DNA序列的酶是A. 非限制性核酸外切酶B. 限制性核酸内切酶C. 限制性核酸外切酶D. 非限制性核酸内切酶您的答案：2.（单选题）普通琼脂糖凝胶电泳分离DNA片段的上限是A. 30 kbB. 40 kbC. 50 kbD. 60 kb您的答案：3.（单选题）Sau3A酶切产生的DNA片段可插入到（）消化的λ噬菌体载体上A. EcoRⅠB. Hind ⅢC. BamHⅠD. SmaⅠ您的答案：4.（单选题）筛选基因文库不使用A. 核酸杂交法B. PCR筛选法C. 正负筛选法D. 免疫筛选法您的答案：5.（单选题）由于一些大肠杆菌细胞会切除带有5'-甲基胞嘧啶的外源DNA，所以实验中常选用（）菌株以防止cDNA被降解A. mrr- tonA-B. mcrA- mcrB-C. mrr- mutS-D. mrr- malA-您的答案：6.（单选题）在RFLP作图中，1 cM（厘摩）相当于重组率A. 1%B. 2%C. 5%D. 10%您的答案：7.（单选题）RAM PAGE技术使用山梨醇和海藻糖的目的是A. 提高酶的热稳定性B. 提高酶的催化性C. 提高酶的高效性D. 提高酶的专一性您的答案：8.（多选题）可改造成基因工程载体的有A. 质粒B. 噬菌体C. 哺乳动物的病毒D. 逆转录病毒DNA您的答案：9.（多选题）关于pUC质粒载体，描述正确的是A. 有大肠杆菌β-半乳糖酶基因lacZ启动子B. 有原核复制起点（ori）C. 有编码β-半乳糖苷酶全长的DNA序列D. 有氨苄青霉素抗性基因（Ampr）您的答案：10.（多选题）引物设计时应注意A. 长度一般为18~27 bpB. GC含量控制在40%~60%C. Tm值在60℃为宜D. 3'端可加外切核酸酶的识别位点您的答案：11.（多选题）在构建文库时，通常采用哪些策略提高文库的代表性A. 用机械切割法随机断裂DNA，增加克隆的随机性B. 用限制性内切核酸酶切割随机断裂DNA，增加克隆的随机性C. 减少文库重组克隆的数目，以提高文库构建的准确性D. 增加文库重组克隆的数目，以提高覆盖基因组的倍数您的答案：12.（多选题）可用于基因组文库构建的载体包括A. λ噬菌体载体B. 细菌人工染色体（BAC）C. P1源人工染色体（PAC）D. 酵母人工染色体（YAC）您的答案：13.（多选题）基因的图位克隆法需要A. 通过染色体步移技术将位于这两个标记之间的基因片段分离并克隆出来B. 通过建遗传连锁图，将目的基因定位到某个染色体的特定位C. 通过对相同生态型个体的大量限制性内切酶和杂交探针分析，找出与目的基因距离最近的分子标记D. 确定紧密连锁的RFLP或RAPD分子标记您的答案：14.（多选题）固相化pH梯度技术的优点是A. 提高了双向电泳的分辨率B. 避免了载体两性电介质向阴极漂移C. 大大提高了双向凝胶电泳结果的可重复性D. 减少了蛋白质上样量您的答案：15.（判断题）提取动物细胞的DNA，加入CATB溶解细胞膜。