乳酸菌的分离、纯化与鉴定

酸奶中乳酸菌的分离与纯化一、实验目的1.掌握分离乳酸菌的基本原理和操作技术；2.学习并掌握稀释法和微生物纯培养操作。

二、实验设备及材料培养基材料：牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、番茄汁、葡萄糖、吐温、溴甲酚绿、琼脂。

实验材料：无菌水、培养皿、电热套、高压蒸汽灭菌锅、电子分析天平、涂布棒、酒精灯、无菌试管、移液枪、无菌吸管。

三、实验原理乳酸菌指发酵糖类主要产物为乳酸的一类无芽孢、革兰氏染色阳性细菌的总称。

大多数不运动，少数以周毛运动。

菌体常排列成链。

根据细胞形态分为球状或杆状，可分为两大类，即乳酸链球菌和乳酸杆菌。

在乳酸菌培养基平板上，乳酸菌菌落大约1～3mm，圆形隆起，表面光滑，呈乳白色、灰白色或暗黄色；在产酸周围还能产生CaCO3溶解圈。

乳酸菌革兰氏染色后呈蓝色，为革兰氏阳性菌。

四、实验步骤1.乳酸菌培养基的制作配方蛋白胨 2.0g酵母膏 2.0g番茄汁40g葡萄糖 2.0g吐温0.10mL碳酸钙 3.4g溴甲酚绿0.02g琼脂2～4g水200mL①称量：按照培养基配方依次称取药品放入烧杯中。

②熔化：在烧杯中加入略少于200mL水，加热至沸腾。

依次加入药品，用玻璃棒不断搅拌，待其完全溶解后，加入琼脂，搅拌至完全熔化，最后补足所损失的水分。

③分装：将配置的乳酸菌培养基装入三角瓶中。

④加棉塞、包扎⑤灭菌：将乳酸菌培养基在压力0.11MPa，温度121℃条件下灭菌20min。

⑥无菌检查2.倒平板将乳酸菌培养基熔化，待冷却至55～60℃时，倒平板，倒好后，在室温下培养2～3d，或37℃培养24h，检查无菌落及皿盖无冷凝水后再使用。

3.制备稀释液量取酸奶10mL，放入盛有90 mL无菌水并带有玻璃珠的三角烧瓶中，震摇约20min，使酸奶与无菌水充分混合，将酸奶分散。

用一只1 mL无菌吸管从中吸取1 mL酸奶悬浊液注入盛有9 mL无菌水的试管中，吹吸三次，使充分混匀。

然后再用一支1 mL无菌吸管从此试管中吸取1 mL注入另一盛有9 mL无菌水的试管中，以此类推，制成10−3、10−4、10−5各种稀释度的酸奶稀释液。

1、分离培养基采用MRS培养基, 分离培养基中添加溴甲酚紫作为指示剂;采用稀释平板涂布法进行平板涂布分离, 挑取直径在115mm以下能使培养基中溴甲酚紫变红或变黄的单菌落, 菌落表面光滑的菌株，采用划线法进行分离纯化，获得纯种。

2、MRS 固体培养基：蛋白胨10g，肉膏10g，酵母提取物5g，柠檬酸二铵2g，乙酸钠5g，K2HPO4 2g，MnSO4·4H2O 0.25g，MgSO4·7H2O 0.58g，葡萄糖20g，吐温80 1mL，琼脂25g，水1000mL。

调pH6.2～6.4，1% CaCO3，121℃灭菌15min。

改良MRS培养基：向MRS培养基中加入1% CaCO3。

10 倍比稀释至10-10，分别吸取稀释液各0.2mL，涂布于含钙MRS 培养基平板上，37℃静置培养48h。

挑取含钙培养基上具有明显钙溶圈的菌落，划线分离纯化2~3 次，最后选择单菌落，经镜检确认为纯种3、MRS 固体培养基: 蛋白胨10g, 牛肉膏10g, 酵母提取物5g, K2HPO4 2g, 柠檬酸二铵2g, 乙酸钠5g, 葡萄糖20 g, 吐温-801mL, MgSO4 #7H2O 0.5g, MnSO4 0.25g, 琼脂25g，蒸馏水1000mL, pH6.2~ 6.4, 3%的CaCO3, 121℃灭菌20min。

稀释倾倒平板法分别接种于MRS固体培养基上，30 ℃培养24h30℃培养24h, 在MRS+3%CaCO3 固体培养基上形成明显的透明圈, 表面光滑湿润。

45、培养基MRS液体培养基(pH5. 0) , 富集培养用; 改良MRS固体培养基(pH6.8) : 在培养基成分中,加入2%的CaCO3菌种分离方法先在MRS( pH5. 0) 液体培养基中进行富集培养, 18～24h后采用改良的MRS固体培养基进行稀释平板法分离,挑取生长在平板中下层且具溶钙圈的乳白色菌落,按常规方法进行纯化,获得纯菌。

一、实验目的1、学习掌握食品中乳酸杆菌的常规分离方法并作初步的鉴别。

2、学会十倍系列稀释和倒平板的方法。

二、实验原理乳酸杆菌为厌氧和微好氧菌，革兰氏染色阳性，可以发酵葡萄糖或乳糖产生乳酸，并将培养基中的碳酸钙溶解。

有些菌如保加利亚乳杆菌在15℃时不生长，在45℃甚至50℃时生长，最适生长温度为40—43℃；而有些菌如植物乳杆菌在15℃生长，45℃时一般不生长，最适生长温度为30℃左右。

通常我们利用这些特点可作初步的鉴别。

二、实验原理三、实验材料和仪器1、酸牛奶1瓶，泡菜汁1管，9ml生理盐水5管，MRS培养基100ml，灭菌CaCO3 3克（用纸包）。

2、40℃和30℃恒温箱，振荡器，超净工作台，1ml 无菌吸管5支，培养皿6套，革兰氏染色液1套。

四、实验方法与步骤1. 将酸奶和泡菜汁分别制成10倍系列稀释液。

2. 取适当稀释度之稀释液0．5或1ml于培养皿中。

3. 以无菌操作把无菌CaCO3 加入融化了的MRS培养基中，于自来水中迅速冷却培养基至45℃左右。

轻摇使CaCO3混均，但不得产生气泡。

立即倒入培养皿中，摇匀。

4. 待培养基凝固后，倒置放于40℃和30℃恒温箱中培养（酸牛乳样品在40℃下培养；酸泡菜汁样品在30℃下培养）五、实验结果观察24或48小时后取出检查。

（1）泡菜汁样品中，菌落周围产生CaCO3圈，菌落直径为1～3mm，乳白色偶有浓色或暗黄色。

用接种环挑少许涂片。

革兰氏染色镜检为G+，菌体大小约0.9～1.2×3～8μm，单生，成对或短链。

五、实验结果观察24或48小时后取出检查。

（2）酸牛奶样品中菌落直径1～3mm，无色素，呈白色至淡灰色。

通常菌落表面粗糙，革兰氏染色镜检为G+，细胞宽2μm，细胞较长有时呈线形，幼龄培养物中单生或成对。

五、实验结果观察六、思考题1、融化后的培养基为什么要迅速冷却到50℃左右倒平板？2、培养基中加入CaCO3的目的是什么？谢谢。

蜜蜂蜜囊中乳酸菌资源的分离鉴定1. 引言蜂蜜是一种由蜜蜂从花中采集的花蜜经过加工而成的天然食品。

而在蜂巢中，蜂蛹孵化时会产生乳酸菌。

乳酸菌是一类对人体有益的微生物，具有调节肠道菌群、促进消化吸收等功能。

因此，研究蜂巢中乳酸菌资源对于开发新型功能性食品具有重要意义。

本文旨在通过分离和鉴定蜂巢中的乳酸菌资源，为进一步研究其应用提供基础数据。

2. 方法2.1 样品采集和处理从不同地区的养殖场采集新鲜的蜂巢样品，并将其放入无菌容器中。

将样品运回实验室后，在无菌条件下进行处理。

2.2 分离乳酸菌取适量的样品，在无菌条件下将其制成10倍稀释液，并进行连续稀释。

然后取适量稀释液接种于MRS琼脂培养基中，利用平板法进行分离。

2.3 纯化乳酸菌从培养基上挑选出单个菌落，通过多次传代，获得纯种乳酸菌。

将其接种于MRS液体培养基中，并在37°C恒温摇床上静置培养。

2.4 鉴定乳酸菌2.4.1 形态学特征观察取适量的培养液制成涂片，并在显微镜下观察乳酸菌的形态特征，包括细胞形状、大小和排列方式等。

2.4.2 生理生化特性检测利用常规生理生化方法对纯化的乳酸菌进行检测。

包括对气体生成、嗜热性、嗜酸性、产气和产色素等方面进行观察。

2.4.3 生物学试验采用API 50 CHL系统对乳酸菌进行生物学试验。

根据系统提供的方法和试剂，进行碳水化合物发酵、氧需求量、抗生素敏感性等方面的检测。

3. 结果与讨论3.1 分离乳酸菌经过连续稀释和平板分离，从蜂巢样品中成功分离出多个乳酸菌菌落。

3.2 鉴定乳酸菌3.2.1 形态学特征观察观察发现，乳酸菌呈短杆状或球状，大小约为0.5-2微米。

排列方式不规则。

3.2.2 生理生化特性检测乳酸菌在培养基中产生大量气泡，并且对高温和低pH值具有较好的适应能力。

在培养基上没有观察到产色素的现象。

3.2.3 生物学试验通过API 50 CHL系统检测，发现蜂巢中的乳酸菌能够利用多种碳水化合物进行发酵，并且对氧需求量较低。

发酵食品中乳酸菌的分离与鉴定乳酸菌是一类重要的微生物，在食品发酵过程中扮演着不可替代的角色。

乳酸菌不仅能够提高食品的营养价值，还具有促进肠道健康、增强免疫力等益生作用。

因此，分离和鉴定发酵食品中的乳酸菌是食品科学领域中的一项重要研究内容。

要进行乳酸菌的分离与鉴定，首先需要从发酵食品样品中分离乳酸菌。

一般而言，我们可以选择将样品通过稀释后接种于选择性培养基上，以便只有乳酸菌能够生长。

接种后，将培养基放置于适宜的温度下，培养一段时间。

乳酸菌具有较强的酸性产生能力，因此在培养过程中会形成明显的酸性环境。

可通过测量培养基的pH值来初步判断是否有乳酸菌生长。

在分离乳酸菌的培养基上，我们可能会观察到许多不同形态的菌落。

这些菌落在形状、颜色、质地等方面可能存在差异。

我们可以选择几个具有代表性的菌落进行后续的鉴定。

对于乳酸菌的鉴定，有许多方法可供选择。

一种常用的鉴定方法是形态学观察。

乳酸菌具有一些特征性的形态特征，如菌落的形状、边缘的特点、质地的柔软程度等。

此外，乳酸菌的细胞形态也具有一定的特征，如形状、大小、胞内结构等。

通过在显微镜下观察乳酸菌的形态特征，可以初步判断其种属。

除了形态学观察外，乳酸菌的生理生化特性也是鉴定的重要依据。

例如，乳酸菌通常能够在不产生气体的条件下发酵葡萄糖。

此外，乳酸菌对于一些特定的碳源、氮源等具有较强的利用能力。

通过对乳酸菌进行代谢特性的测试，可以进一步确认其种属。

分子生物学方法也为乳酸菌的鉴定提供了新的手段。

通过对乳酸菌的DNA进行提取和PCR扩增，可以得到乳酸菌的16S rRNA序列。

将这些序列与已知种属的乳酸菌进行比对，可以准确鉴定乳酸菌的种属。

在发酵食品中，常常存在多种乳酸菌同时存在的情况。

因此，对于从发酵食品中分离到的乳酸菌，进行种属鉴定是至关重要的。

只有确定了乳酸菌的种属，才能更好地利用其在食品工业中的潜力。

发酵食品中乳酸菌的分离与鉴定是一项科学而有趣的工作。

通过对乳酸菌的研究，我们可以更好地了解乳酸菌在食品发酵过程中的功能和作用，为食品工业的发展提供更多的可能性。

乳酸细菌分类鉴定及实验方法乳酸细菌是一类可以发酵果糖或蔗糖产生乳酸的革兰氏阳性细菌。

它们广泛存在于自然界中的土壤、水体、动物肠道、植物表面等环境中，并且在食品加工、乳制品、膳食补充剂等领域具有重要的应用价值。

分类鉴定乳酸细菌的方法主要包括传统分离鉴定和分子生物学方法，而实验方法主要包括培养、生理生化鉴定和分子鉴定等。

1.传统分离鉴定传统分离鉴定是通过培养、生理生化特性的观察和细菌形态学特征的分析来进行分类鉴定的方法。

一般的步骤包括：1.2分离：采用适当的培养基，如MRS培养基等，在适当条件下进行分离培养。

可以采用不同的稀释度和培养温度来增加分离率和适应性。

1.3纯化：从培养出的菌落中选择纯净的菌落进行纯化。

1.4形态学观察：观察细菌的形态学特征，如菌落形态、细胞形态、孢子形态等。

1.5生理生化特性鉴定：通过生理生化实验，如氧需氧性、产气、产酸、碱性产蛋白酶等特性的鉴定来进一步确定细菌的分类。

1.6比较分析：将鉴定结果与已知的乳酸菌进行比较分析，以确定菌株的分类。

2.分子生物学方法分子生物学方法是一种快速、准确的分类鉴定方法，可以通过检测细菌的DNA序列来进行鉴定。

常用的分子生物学方法包括PCR、16SrRNA测序和随机扩增多态性DNA(RAPD)等。

2.1PCR：PCR是通过扩增细菌DNA的特定区域来进行鉴定的方法。

首先，从培养的细菌中提取DNA。

然后，使用特定引物扩增目标区域的DNA，并通过凝胶电泳分析PCR产物的大小。

比较PCR产物的片段大小和带型模式，可以确定乳酸菌的分类。

2.216SrRNA测序：细菌的16SrRNA序列是一个高度保守的基因序列，可以用来进行细菌分类鉴定。

通过提取DNA，扩增16SrRNA基因片段，并进行测序，然后将测序结果与已知的乳酸菌序列比对，可以确定细菌的分类。

2.3RAPD：RAPD是一种无须事先了解目标序列的技术，它利用随机引物扩增细菌DNA的多态位点，通过凝胶电泳分析不同样品间的DNA带型模式，来进行菌株分类。

乳酸细菌分离鉴定实验方法1. 引言乳酸细菌是一类广泛存在于自然界中的细菌，具有产酸、发酵等特性。

它们在食品行业、农业、医药等领域起着重要作用。

乳酸细菌的分离和鉴定是开展与其相关研究的前提，本文将介绍乳酸细菌分离鉴定的实验方法。

2. 实验材料•乳酸发酵样本（如发酵米饭、酸奶等）•培养基（如MRS培养基）•罗丹明B染色液•麦芽糊精琼脂培养基3. 实验步骤3.1 分离乳酸细菌1.将乳酸发酵样本取1 mL加入10 mL生理盐水中，并进行搅拌均匀。

2.连续稀释梯度：取1 mL悬浮液加入9 mL生理盐水中，得到10-1的稀释液。

重复以上步骤，分别得到10-2、10-3、10-4的稀释液。

3.取少量10^-3的稀释液在无菌工作台上平均涂布于MRS培养基上。

4.使用无菌的三角铁将MRS培养基表面的细菌均匀划开，使得每个细菌分离单元上只有一种细菌。

5.将培养皿倒置放入恒温培养箱中，在37摄氏度下静置24至48小时。

3.2 鉴定乳酸细菌1.观察培养基上的菌落情况，通过形态特征初步判断乳酸细菌。

2.选择培养良好的单独菌落，采用罗丹明B染色法进行初步鉴定。

–取适量的培养菌落，加入1滴罗丹明B染色液，静置5分钟。

–在显微镜下观察染色后的细菌形态，乳酸细菌通常为革兰氏阳性菌（呈现红色染色）。

3.选择阳性菌落上悬浮液进行传代培养。

–取适量的菌落悬浮液，加入新的MRS培养基中，静置24至48小时。

4.进行进一步的鉴定。

–利用麦芽糊精琼脂培养基，通过观察菌落特征鉴定乳酸细菌的种类。

4. 结果分析与讨论通过上述方法，我们可以成功地分离和鉴定乳酸细菌。

乳酸细菌的分离是通过连续稀释梯度和培养基平板法实现的。

鉴定乳酸细菌主要基于其形态特征和罗丹明B染色结果。

进一步通过传代培养和麦芽糊精琼脂培养基来鉴定乳酸细菌的种类。

然而，需要注意的是，乳酸细菌有多个物种，每个物种的生理特性可能有所不同。

因此，在进行鉴定时应结合其他实验方法，如生理生化测试、基因测序等，以进一步明确鉴定结果。

实验十一酸奶中乳酸菌的分离纯化一、实验目的学习从新鲜酸乳中进行乳酸菌的分离纯化的方法，并进一步了解乳酸菌的生长特性。

二、实验材料和用具嗜热乳酸链球菌（Streptococcus thermophilus）、保加利亚乳酸杆菌（Lactobacillus casei），乳酸菌种也可以从市场销售的各种新鲜酸乳或酸乳饮料中分离。

BCG牛乳培养基、乳酸菌培养基（CMRS）、脱脂乳粉、高压蒸汽灭菌锅、超净工作台、培养箱、酸乳瓶（200 - 280mL）、培养皿、试管、300mL三角瓶。

三、操作步骤1.分离：取市售新鲜酸乳液稀释至10-5，取其中的10-4 10-5 2个稀释度的稀释液各0.1-0. 2mL，分别接入BCG牛乳培养基琼脂平板上，用无菌涂布器依次涂布；或者直接灌注法分离，置40℃培养48h，如出现圆形稍扁平的黄色菌落及其周围培养基变为黄色者初步定为乳酸菌。

2.鉴别选取乳酸菌典型菌落转至脱脂乳试管中，40℃培养8-24h，若牛乳出现凝固，无气泡，呈酸性，涂片镜检细胞杆状或链球状（两种形状的菌种均分别选入），革兰氏染色呈阳性，则可将其连续传代4-6次，最终选择出在3-6h能凝固的牛乳管，作菌种待用。

四、注意事项采用BCG牛乳培养基琼脂平板筛选乳酸菌时，注意挑取典型特征的黄色菌落，结合镜检观察，有利高效分离筛选乳酸菌。

BCG牛乳培养基（A）溶液：脱脂乳粉100g，水500Ml，加入1.6%溴甲酚绿（B. C. G）乙醇溶液1mL，80℃灭菌20min。

（B）溶液：酵母膏10g，水500mL，琼脂20g，pH 6.8，121℃湿热灭菌20min。

以无菌操作趁热将（A)、（B）溶液混合均匀后倒平板。

乳酸菌培养基（CMRS）蛋白胨5g；牛肉膏 5 g ；酵母浸膏 2.5 g ；乳糖7.5 g；土温80 0.5ml；磷酸氢二钾1g ；乙酸钠 2.5g ；柠檬酸二铵1g ；七水硫酸镁0.1g ；四水硫酸锰0.1g ；番茄汁50ml；琼脂条9g；加入500ml蒸馏水中加热溶解，调pH值为6.8，115℃，灭菌15分钟。

杂交构树青贮中优势乳酸菌的分离鉴定及其应用引言：杂交构树青贮是一种在养殖业中广泛应用的饲料制备技术，其主要原理是将杂交构树切碎后发酵，以增加饲料的养分价值。

乳酸菌是在青贮过程中起主导作用的微生物，通过发酵作用可以将葡萄糖转化为乳酸。

本文旨在分离鉴定杂交构树青贮中的优势乳酸菌，并探讨其在饲料制备过程中的应用。

一、杂交构树青贮中的乳酸菌优势菌种的分离鉴定方法1.采样：在合适的时间和条件下，从杂交构树青贮材料中随机采集样品，避免外界污染。

2.培养基的选择：选择适合乳酸菌生长的培养基，如MRS培养基。

加入适当的抗生素可以抑制其他细菌的生长。

3.分离：将样品均匀涂布在已经灭菌的固体培养基上，经过一定时间后形成形状单一的菌落。

4.空斑验证：从培养基中挑选出部分乳酸菌菌落进行纯化培养并进一步验证其纯度。

5.形态学和生理生化特性的鉴定：通过显微镜观察菌落的形态特征和革兰氏染色等方法进行初步鉴定。

6.分子生物学鉴定：通过基因测序、PCR等方法进行乳酸菌的分子鉴定，如16SrRNA基因序列分析等。

二、杂交构树青贮中优势乳酸菌的应用1.饲料添加剂：通过选取优势乳酸菌菌株，将其应用于饲料制备过程中，可以改善杂交构树青贮的质量。

乳酸菌的发酵作用可以提高饲料的酸度，抑制有害菌的生长，延长青贮材料的保存期限。

2.益生菌制剂：优势乳酸菌菌株可以作为益生菌制剂的原料，用于畜禽的饲料添加。

益生菌制剂可以帮助调节动物的肠道微生态平衡，增强消化吸收功能，提高动物的免疫力。

3.发酵剂：优势乳酸菌菌株可用于饲料和酒精酒类等行业的发酵剂。

其发酵产物可以改善产品的质量，提高产品的营养价值。

4.生物制剂：优势乳酸菌菌株可以用于制备生物制剂，如保健品、乳制品等。

乳酸菌制剂可以促进人体的消化和吸收功能，改善肠道健康，增强免疫力。

结论：通过对杂交构树青贮中的优势乳酸菌进行分离鉴定，并对其在饲料制备过程中的应用进行了探讨。

优势乳酸菌的分离鉴定是为了选取菌株应用于饲料制备过程中，其应用可以改善饲料的质量，提高动物的消化吸收能力，增强动物的免疫力。

为0.725、0.694、0.712，对照柠檬酸和乳酸的Rr 值分别为0.483、0.731，证明其三菌株都有乳酸，均为产乳酸菌株:2.形态学鉴定。

在MRS 培养基上分别涂上已经经过分纯操作的菌种，在38°C 的环境中培养24小时，然后观察其特征情况，进行试剂染色处理，运用油镜进行观察：观察 结果为：1号菌株在培养基上的菌落形态为突起，0.5到1 毫米的菌落直径，呈圆形、光滑和灰白色，在革兰氏染色 上呈阳性，具有厌氧兼性，且生长物浑浊，豆状或球状的 菌体，0.8到1.2um 的直径，列为短链或单个2号和1号的不同之处是菌体直径不同，菌体为圆端直杆状，0.9到 1.2L U T 1的直径，且排列为成对或单个3号菌落中间突起且为深色，菌体粗短杆状，0.9到1.2画的直径，从形态学特 征角度分析可知，1号有肠膜明串珠菌形态学特征，2号有 植物乳酸杆菌特征，3号有短乳杆菌特征：3. 生理特性鉴定和生化鉴定。

在培养基中引入1%的对应菌液，每隔4小时吸取菌液，进行梯度性稀释，结合结果 将生理特性明显的1号、2号和3号菌株再培养2-3小时，以 培养时间为横坐标、菌落总数为纵坐标，绘制生长曲线， 明确培养时间和温度等情况对乳酸菌的影响（图1 ) 生化特性鉴定的试验方法有很多，如明胶液化试验、硝酸盐还 原试验等，根据试验需要有序进行试验即可C 寸》O C 寸》c 丨O ，《 N V O Q时阐(h >图1:三种菌株生长曲线经这两种鉴定结果反馈，1号最佳生长温度在2 5 °C - 30°C , 2号和3号最佳生长温度为30°C -35°C ,都为乳酸菌， 结合其生化特性鉴定情况，确定1号菌株为肠膜明串珠菌，2号菌株为短乳杆菌，3号菌株为植物乳酸杆菌.7!作者简介：杨家玉（1999.7.5-),女，河北盐山县， 本科；研究方向：食品。

■文I 杨家玉青岛工学院菜是经过乳酸发酵而形成的蔬菜制品，其增进食欲 的功效是因为含有乳酸菌。

《抗真菌特性乳酸菌的筛选鉴定及在酸奶防腐中的应用》篇一一、引言近年来，随着人们对食品安全的关注度不断提高，寻找具有天然防腐特性的食品添加剂已成为食品工业研究的热点。

乳酸菌作为一种常见的益生菌，除了具有调节肠道菌群平衡、促进消化等作用外，还具有显著的抗真菌特性。

本文旨在筛选具有抗真菌特性的乳酸菌，对其进行鉴定，并探讨其在酸奶防腐中的应用。

二、材料与方法1. 材料（1）样品来源：从不同发酵食品中采集乳酸菌样品。

（2）培养基：MRS培养基、抗真菌培养基等。

（3）实验仪器：恒温摇床、显微镜、PCR仪等。

2. 方法（1）乳酸菌的分离与纯化：采用梯度稀释法分离乳酸菌，并利用划线法进行纯化。

（2）抗真菌特性筛选：将筛选出的乳酸菌与常见真菌进行共培养，观察其抗真菌效果。

（3）乳酸菌鉴定：利用分子生物学技术，如16S rRNA基因序列分析等，对筛选出的乳酸菌进行鉴定。

（4）酸奶制备及防腐实验：将鉴定后的乳酸菌添加到酸奶中，观察其防腐效果。

三、实验结果1. 抗真菌特性乳酸菌的筛选与鉴定通过共培养法，我们从样品中筛选出具有抗真菌特性的乳酸菌。

经过分子生物学鉴定，确定其种类及特性。

结果表明，筛选出的乳酸菌对多种常见真菌具有显著的抑制作用。

2. 酸奶制备及防腐实验将鉴定后的乳酸菌添加到酸奶中，观察其防腐效果。

实验结果表明，添加了抗真菌特性乳酸菌的酸奶在储存过程中，其菌落总数和霉菌污染率均显著低于未添加乳酸菌的对照组。

这说明抗真菌特性乳酸菌在酸奶中具有良好的防腐效果。

四、讨论1. 抗真菌特性乳酸菌的筛选与鉴定本研究通过共培养法成功筛选出具有抗真菌特性的乳酸菌，并利用分子生物学技术进行了鉴定。

这为进一步研究乳酸菌的抗真菌机制及其应用提供了基础。

此外，这些抗真菌特性乳酸菌的发现也为开发新型天然防腐剂提供了新的思路。

2. 酸奶防腐应用将抗真菌特性乳酸菌添加到酸奶中，可以有效降低酸奶在储存过程中的菌落总数和霉菌污染率，提高酸奶的品质和安全性。

乳酸菌的分离、纯化与鉴定第一部分：乳酸菌的分离、纯化一、实验器材:1.实验药品新鲜乳酸饮料（市售）、脱脂奶粉、蔗糖、1.6%溴甲酚绿乙醇溶液(溴甲酚绿、无水乙醇)、酵母膏、琼脂、革兰氏染液（结晶紫染液、卢戈氏碘液、95%乙醇、沙黄）、75%乙醇、香柏油、1mol/L NaOH、1mol/L HCl、碳酸钙；0.4gNaOH固体、4.2ml浓HCL(分析纯) 、20gCaCO3固体、酵母膏20g 、琼脂30g香柏油、脱脂奶粉100g 、蔗糖10g；2.仪器与设备高压蒸汽灭菌锅、光学显微镜、培养箱、pH 试纸、酸乳瓶、培养皿（φ9或φ12）、试管、300ml三角瓶（带玻珠）、移液管、天平、500ml锥形瓶、250ml锥形瓶、250ml烧杯。

二、实验步骤：1.培养基配制（BCG牛乳培养基）：（A）溶液：取脱脂乳粉100g，水500ml，加入1.6%溴甲酚氯乙醇溶液1ml，混合均匀后分装入三角瓶于高压蒸汽灭菌锅80℃灭菌20 min；（1.6%溴甲苯酚绿（BCG）乙醇溶液用1.6g溴甲酚绿加入20ml无水乙醇中，再加水至100ml制成）（B）溶液：酵母膏10g，水500ml，CaCO3 10g，琼脂20g，加热溶解，用精密pH试纸调节pH到6.8，分装入三角瓶后在103kPa 121℃高压蒸汽灭菌20Min。

以无菌操作趁热将(A)(B)溶液均匀混合。

2.药品配制2.1 结晶紫：结晶紫乙醇饱和液（结晶紫2g溶于20ml 95%乙醇中）20ml，1%草酸氨水溶液80ml。

将两液混匀，放置24小时后过滤即可。

2.2 卢哥氏碘液：碘1g，碘化钾2g，蒸馏水300ml。

先将碘化钾溶于少量蒸馏水中，然后加入碘使之完全溶解，再加入蒸馏水300ml即成。

2.3 蕃红溶液：番红2.5g，95%乙醇100ml，溶解后存于密闭的棕色瓶中。

用时取20ml与80ml蒸馏水混匀即可。

2.4 0.1%的吕氏美蓝染液：A液：美蓝0.3g，95%乙醇300ml；B液：0.01% KOH 100ml。

传统腌腊肉制品中乳酸菌的分离与鉴定刘书亮　敖　灵　李燮昕　詹　莉四川农业大学食品科学系Π农产品加工与贮藏工程省级重点实验室四川雅安　625014 摘要　从12个传统腌腊肉制品中分离得到52株乳酸菌,通过形态学初步鉴定,选出具有代表性的12株乳酸菌进行生化鉴定,初步确定L31、L94、L S76、L S81、L S101为戊糖乳杆菌(Lactobacillus pentosus),L S51为食品乳杆菌(L.alimentarius),L S14为干酪乳杆菌(L.casei),L S21、L S33为弯曲乳杆菌(L.curvatus), L S41为清酒乳杆菌(L.sake),L22、L S92为乳酸球菌,其它未能鉴定种类。

关键词　发酵香肠　腊肉　乳酸菌　分离　鉴定Isolation and identification of lactobacillusfrom traditional cured meat products Abstract　52strains of lactobacillus were isolated and identified from12sam ples of traditional cured meat products. On the basis of morphological observation and biochemical identification,twelve typical strains were identified res pectively as Lactobacillus pentosus(L31,L94,L S76,L S81and L S101),L.alimentarius(L S51),L.casei(L S14),L.cur2 vatus(L S21and L S33),L.sake(L S41),while the rest named L22and L S92were failed to identify.K ey w ords　fermented sausage;cured meat;lactobacillus;isolation;identification 金华火腿、宣威火腿以及民间传统发酵型肉制品等是中国传统肉制品的杰出代表。

学院：漓江学院年级专业：09生物技术组员：吴汉川200913007005杨隆荷200913007006李翠200913007007王志远200913007008乳酸菌的分离及初步鉴定一、实验目的1了解和掌握放线菌的菌种特性和分离方法2初步掌握军中筛选方法设计3掌握平菌种的选育二、实验原理乳酸菌是指以糖为原料，属于真细菌纲真细菌目中的乳酸细菌科。

乳酸细菌科根据细胞呈球状或呈杆状，又分成乳酸杆菌族和链球菌族。

在BCG 牛乳培养基琼脂平板上，乳酸菌菌落大约1-3 mm，圆形隆起，表面光的溶滑或稍粗糙，呈乳白色、灰白色或暗黄色；在产酸菌落周围还能产生CaCO3解圈。

乳酸菌革兰氏染色呈阳性，涂片镜检细胞杆状或链球状。

乳酸杆菌呈杆状，成单杆、双杆或长丝状；乳酸杆菌，呈球状，成对或短链或长链状。

乳酸菌革兰氏染色后呈蓝紫色。

平板涂布法平板涂布法是将样品经稀释之后，其中的微生物充分分散成单个细胞，取一定量的稀释液接种到平板上，经过培养，由每个单个细胞生长繁殖而形成肉眼可见的菌落，即一个但菌落代表原样品中的一个单细胞。

生理盐水：称取9g氯化钠，溶解在少量蒸馏水中，稀释到1000毫升。

四、实验器材与试剂含乳酸菌的酸奶、结晶紫、卢哥氏碘液、95%乙醇、蕃红溶液、灭菌CaCO3粉末、NaCl；BCG牛乳培养基：(A)溶液：脱脂乳粉100g，水500mL，加入1.6%溴甲酚绿(B.C.G)乙醇溶液1mL，80℃灭菌20min。

(B)溶液：酵母膏10g，水500mL，琼脂20g, pH6.8, 121℃湿热灭菌20min。

以无菌操作趁热将(A)、(B)溶液混合均匀后倒平板。

1000ml烧瓶一个, 无菌培养皿9个, 500ml容量三角瓶2个，25ml无菌移液管1只，20ml无菌试管7只，1ml无菌移液管6只，培养基分装器一个，玻棒2根, 无菌涂布器3只，酒精灯一盏，接种环一个，天平，牛角匙，漏斗，漏斗架，载玻片，盖玻片，pH试纸若干，液体石蜡，棉塞，吸管，牛皮纸，线绳、标签等。

酸奶菌种的分离及鉴定乳酸菌是指一群通过发酵糖类，产生大量乳酸的细菌总称。

乳酸从形态上可分为球菌和杆菌，并且均为革兰氏染色阳性、在缺少氧气的环境中生长良好的兼性厌氧性或厌氧性细菌。

目前，对乳酸菌的应用研究，着重于食品（如发酵乳制品、发酵肉制品和泡菜）和医药工业等人类生活密切相关的领域。

目前市售的各种酸奶制品中, 作为发酵剂的乳酸菌, 通常为保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌这两株菌。

用嗜热链球菌和保加利亚乳酸杆菌混合培养发酵的乳酸饮品能补充人体肠道内的有益菌，维持肠道的微生态平衡，且含有易于吸收的营养素，具有抑制腐败菌、提高消化率、防癌及预防一些传染病等功效，并能为食品提供芳香风味，使食品拥有良好的质地。

保加利亚乳杆菌（L.Bulgarius）:长杆形，直径1-3mm左右,能产生大量的乳酸。

酸碱度方面,为耐酸或嗜酸性,因低 pH能防止一些微生物的生长;温度方面,为嗜温至少许嗜热,最适生长温度在37-45℃之间,对低温非常敏感。

嗜热链球菌（S.thermophilus）：卵圆形，直径0.7－0.9微米，呈对或链状排列，无运动性。

为健康人肠道正常菌群，可在人体肠道中生长、繁殖。

可直接补充人体正常生理细菌，调整肠道菌群平衡，抑制并清除肠道中对人具有潜在危害的细菌。

本研究对市售主要品牌酸奶中（河南花花乳业生产的酸奶）乳酸菌进行了分离鉴定，并进一步探讨制备酸奶条件（温度、时间等），以达到最佳的天然酸奶质量效果。

一、实验内容（1）乳酸菌的分离纯化1．无菌操作倒平板、十倍稀释、划线分离，恒温培养2．菌落观察与镜检3．筛选生产用菌株（2）优化酸奶制作条件1．制备发酵液2．不同条件下，接种发酵菌剂并发酵生产3．观察发酵情况4．品尝发酵产品，进行质量评价5．记录结果二、实验器材1）菌种：新鲜乳酸饮料（标记只含有保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌）2）试剂：脱脂奶粉、蔗糖、1.6%溴甲酚绿乙醇溶液(溴甲酚绿、无水乙醇)、酵母膏、琼脂、革兰氏染液（结晶紫染液、卢戈氏碘液、95%乙醇、沙黄）、75%乙醇、香柏油、1mol/L NaOH、1mol/L HCl、碳酸钙；0.4gNaOH固体、4.2ml浓HCL(分析纯) 、20gCaCO3固体、酵母膏20g 、琼脂30g香柏油、脱脂奶粉100g 、蔗糖10g；3）仪器：高压蒸汽灭菌锅、恒压干热灭菌箱、超净工作台、光学显微镜、培养箱、pH 试纸、酸乳瓶、培养皿（φ9或φ12）、试管、300ml三角瓶（带玻珠）、移液管、天平、牛角匙、电炉、量筒、漏斗、漏斗架、玻璃棒、棉塞、吸管、线绳、标签、500ml锥形瓶、250ml锥形瓶、250ml烧杯、酒精灯、石棉网、接种针（环）、擦镜纸四、实验方法4.1乳酸菌的分离纯化4.1.1分离(1)配制BCG牛乳培养基，分装三角瓶，包扎，灭菌备用。