动物解剖生理实验指导.

实验内容实验一、显微镜的使用、组织切片的显微观察实验二、犬骨骼的观察、骨骼辨认测试实验三、血液的凝固实验四、红细胞的脆性试验实验五、蛙心活动观察实验六、红细胞计数实验七、反射弧分析及脊髓反射活动观察实验八、胃肠运动观察和小肠吸收观察实验一显微镜的构造、使用和保养[实验目的]了解显微镜的基本构造，掌握显微镜的使用方法和保养方法。

[材料设备]显微镜、组织切片、擦镜纸等。

[方法步骤]（一）机械部分1、镜筒2、物镜转换器3、镜臂4、调焦器5、载物台6、镜柱7、镜座（二）光学系统部分光镜的光学系统主要包括物镜、目镜和照明装置（反光镜、聚光器和光圈等）。

1、目镜：常见的有5×、10×和15×（×表示放大倍数）的目镜，可根据不同的需要选择使用，最常使用的是10×目镜。

2、物镜：常用物镜的放大倍数有10×、40×和100×等几种。

一般将8×或10×的物镜称为低倍镜（而将5×以下的叫做放大镜）；将40×或45×的称为高倍镜；将90×或100×的称为油镜（这种镜头在使用时需浸在镜油中）。

图1-3 物镜的性能参数及工作距离C 线为盖玻片的的上表面，10⨯物镜的工作距离为7.63mm；40⨯物镜的工作距离为0.198mm；10/0.25、40/0.65、100/1.25表示镜头的放大倍数和数字孔径。

160/0.17表示镜筒长度为160mm，盖玻片厚度为0.17mm。

3、聚光器：调节光线的强弱，升高聚光器可使光线增强，反之则光线变弱。

光圈能控制进入聚光器的光束大小的可变光阑。

以调节光线的强弱。

在光圈的下方常装有滤光片框，可放置不同颜色的滤光片。

4、反光镜：反光镜有两个面，一面为平面镜，另一面为凹面镜，凹面镜有聚光作用，适于较弱光和散射光下使用，光线较强时则选用平面镜。

二、光学显微镜的使用方法（－）准备将显微镜平稳地放在身前的实验桌上，略偏左，使镜臂对着身体，镜筒向前。

（二）对光①转动转换器，使低倍镜对准通光孔，转动粗调节器，使低倍镜前端距载物台约1-2厘米的距离。

②将光圈放大；让左眼朝目镜里注视，同时用手将反光镜转向光源；调节反光镜，直至从目镜里看到一个白色明亮的圆形视野。

（三）低倍镜观察①将玻片标本放在载物台上，使待检查部分位于通光孔中心，用弹簧夹片压住载玻片两端。

②两眼从侧面注视，将物镜降至距标本约0.5厘米时停止。

③用左眼朝目镜里观察，同时转动粗调节器，缓慢上升镜筒，直到视野中出现物象，再用细调节器调节。

（四）高倍镜观察①先将低倍镜下找到所需观察的物象，把要进一步放大的部位移到视野正中央。

②转动转换器，使高倍镜到位。

调节反光镜和光圈，使光照明亮，再微微调节细调节器，直到物象清晰。

（五）显微镜复原用擦镜纸揩净目镜和物镜，用清洁纱布揩净镜体。

再转动转换器，把两个物镜偏到两旁，并将镜筒下降，然后将显微镜平稳地放入镜箱内保存。

实验二动物主要组织的显微镜识别[实验目的]掌握单层扁平上皮、单层柱状上皮、单层立方上皮、疏松结缔组织、骨骼肌、平滑肌、神经元的结构特点。

[材料设备]显微镜、单层扁平上皮、单层柱状上皮、单层立方上皮、疏松结缔组织、骨骼肌、平滑肌、神经组织切片及相关的图。

[方法步骤]1、取镜与放置移动显微镜时，要一手拿镜臂，一手托镜座，将显微镜放置在前方桌面上。

2、打开光源，上升聚光镜，开大孔径光阑。

3、观察将被检标本置于载物台上，用压片夹夹住, 旋转最低倍数物镜观察。

调节粗调焦螺旋，使载物台缓缓上升，直至物镜镜头接近标本。

这时，一边使用目镜观察，一边调节粗调焦螺旋使载物台下降，直至视野中看到物像为止。

移动载片位置，使物象处于视野的中心，此时再调节细调焦螺旋以增加物象的清晰度，可以调节聚光镜和孔径光阑，使光线强弱适中，以便于观察。

转动物镜转换器，换用高倍镜头。

用细调焦螺旋调节，换用高倍镜后，可调节聚光镜和孔径光阑以增加亮度。

观察更细微结构必需使用油镜时，则在制片上滴一滴香柏油。

油镜使用完后，要及时地用蘸有乙醚的擦镜纸把油镜镜头擦拭干净。

4.收显微镜关闭光源；下降聚光镜；关闭孔径光阑；转动物镜转换器，使之处于最低倍数物镜下。

显微镜保持清洁。

显微镜的光学部分只能用专门的擦镜纸擦拭。

按实验室的要求，做好显微镜的使用记录等。

[实验结果]1．复层上皮组织2．平滑肌3. 神经组织4. 心肌切片5. 硬骨组织6. 软骨组织实验三犬全身主要骨、关节、骨性标志的识别[实验目的]在犬骨骼标本上识别各部位骨骼及骨性标志。

[材料设备]犬骨骼标本。

[方法步骤]1．脊柱骨的组成：颈椎、胸椎、腰椎、荐椎、尾椎的形态与连结。

2．胸廓的组成：胸椎、肋骨和胸骨。

3．骨盆腔构造：背侧荐骨、侧面髋骨、后侧坐骨、腹侧耻骨组成。

4．四肢骨组成及分布：骨骼名称、形态、关节名称、关节角度。

5．骨性标志：肩胛冈、大结节、髋结节、大转子、坐骨结节。

[实验结果]绘制犬全身主要骨、关节和骨性标志的图示。

[技能考核]在标本和活体上识别主要骨、关节及骨性标志。

*骨骼辨认测试实验三血液凝固[实验目的]以血液凝固时间作为指标，了解对血液凝固影响的因素，加深对生理止血过程的理解。

[实验原理]血液凝固是一个酶的有限水解激活过程，可分为三个环节：（1）凝血酶原激活物的形成；（2）凝血酶原激活为凝血酶；（3）纤维蛋白的形成。

在此过程中有多种凝血因子和Ca离子的参与。

根据凝血过程起动时激活因子来源不同，可将血液凝固分为内源性激活途径和外源性激活途径。

内源性激活途径是指参与血液凝固的所有凝血因子在血浆中，外源性激活途径是指受损的组织中的组织因子进入血管后，与血管内的凝血因子共同作用而启动的激活过程。

[实验药品和器材]生理盐水，液状石蜡、草酸盐、柠檬酸盐、肝素（8 U/ml）。

注射器，试管6支，小烧杯2个，试管架，竹签1束(或细试管刷)，秒表。

[实验方法与步骤]1. 采血（动物不限）。

2. 准备试管。

试管1 不加任何处理（对照管）试管2 用液状石蜡润滑整个试管内表面试管3 放少许脱脂棉试管4 加草酸钾1～2 ml试管5 加柠檬酸盐1～2 ml3. 每管加入血液1-2 ml。

将多余的血盛于小烧杯中，并不断用竹签搅动直至纤维蛋白形成。

4. 记录凝血时间每个试管加血1-2 ml后，即刻开始计时，每隔壁15 s 倾斜一次，观察血液是否凝固，至血液成为凝胶状不再流动为止，记录所经历的时间。

4、5号试管加入血液后，用拇指盖住试管口将试管颠倒两次，使血液与药物混合。

5. 如果加草酸钾和柠檬酸盐的试管不出现血凝,可再向两管内分别加入0.025 mol•L-1的CaCl2溶液2～3滴,观察血液是否发生凝固?[注意事项]1. 采血的过程尽量要快，以减少计时的误差。

对比实验的采血时间要紧接着进行。

2. 判断凝血的标准要力求一致。

一般以倾斜试管达45度时，试管内血液不见流动为准。

3. 每支试管口径大小及采血量要相对一致，不可相差太大。

[实验结果]将实验结果及各种条件下的凝血时间，并进行比较、分析解释产生差异的原因。

[思考题]1.血液凝固的机制及影响血凝的外界因素？2.为什么有几管不凝？为什么有几管比对照组管凝血时间长？为什么有几管比对照管凝血时间短？实验四红细胞脆性的测定[实验目的]学习测定红细胞渗透脆性的方法，理解细胞外液渗透张力对维持细胞正常形态与功能的重要性。

[实验原理]正常红细悬浮于等渗的血浆中，若置于高渗溶液内，则红细胞会因失水而皱缩；反之，置于低渗溶液内，则水进入红细胞，使红细胞膨胀。

如环境渗透压继续下降，红细胞会因继续膨胀而破裂，释放血红蛋白，称之为溶血。

红细胞膜对低渗溶液具有一定的抵抗力，这一特征称为红细胞的渗透脆性。

红细胞膜对低渗溶液的抵抗力越大，红细胞在低渗溶液中越不容易发生溶血，即红细胞渗透脆性越小。

将血液滴入不同的低渗溶液中，可检查红细胞膜对于低渗溶液抵抗力的大小。

开始出现溶血现象的低渗溶液浓度，为该血液红细胞的最小抵抗力；出现完全溶血时的低渗溶液浓度，则为该血液红细胞的最大抵抗力。

生理学上将与血浆渗透压相等的溶液称为等渗溶液；而将能维持红细胞正常形态、大小和悬浮于其中的溶液称为等张溶液。

等渗溶液不一定是等张溶液（如1.99%的尿素溶液），但等张溶液一定是等渗溶液。

[实验药品]1%肝素，1%氯化钠溶液，2%氯化钠溶液，蒸馏水。

[仪器与器材]10 ml小试管，试管架，滴管，1 ml移液管，2 ml移液管。

[实验方法与步骤]1.溶液配制：取11个小试管，配制出11种不同浓度的氯化钠低渗溶液。

2.制备抗凝血：不同动物采血方法各有所异，但多采用末梢血，将血滴在有1%肝素（或柠檬酸盐）的表面皿上，混匀(1%肝素0.1 ml可抗10 ml血)。

3.加抗凝血：用滴管吸取抗凝血，在各试管中各加一滴，轻轻摇匀，静置0.5～1 h。

4.观察结果：根据各管中液体颜色和浑浊度的不同，判断红细胞脆性。

①未发生溶血的试管：液体下层为大量红细胞沉淀，上层为无色透明，表明无红细胞破裂。

②部分红细胞溶血的试管：液体下层为红细胞沉淀，上层出现透明淡红（淡红棕）色，表明部分红细胞已经破裂，称为不完全溶血。

③红细胞全部溶血的试管：液体完全变成透明红色，管底无红细胞沉淀，表明红细胞完全破裂，称为完全溶血。

[实验结果]报告该实验动物红细胞的最小渗透抵抗力和最大渗透抵抗力。

将全班的结果加以统计，并用平均值±标准差表示。

讨论如何通过渗透脆性特征判断机体的健康状况。

[注意事项]小试管要干燥，加抗凝血的量要一致，只加一滴。

混匀时，轻轻倾倒1～2次，减少机械震动，避免人为溶血。

抗凝剂最好为肝素，其他抗凝剂可改变溶液的渗透性。

配制不同浓度的NaCl溶液时应力求准确、无误。

NaCl溶液的浓度梯度可根据动物的实际情况适当进行调整。

[思考题]1.红细胞的形态与生理特征有何关系？2.根据结果分析血浆晶体渗透压保持相对稳定的生理学意义。

3.输液时应注意的事项。

实验五蛙心活动观察[实验目的]观察滴加乙酰胆碱、肾上腺素对心脏运动的影响。

[实验原理]心脏的特殊传导系统具有自动节律性，但各部分的自动节律性高低不同。

两栖类动物的心脏起搏点是静脉窦(哺乳动物的是窦房结)。

正常情况下，静脉窦（窦房结）的自律性最高，能自动产生节律性兴奋，并依次传到心房、房室交界区、心室，引起整个心脏兴奋和收缩，因此静脉窦（窦房结）是主导整个心脏兴奋和搏动的正常部位，被称为正常起搏点；其他部位的自律组织仅起着兴奋传导作用，故称之为潜在起搏点。

[实验材料]蛙或蟾蜍。

任氏液、1:10000肾上腺素、1：10000乙酰胆碱。

[仪器与器械]蛙板，蛙类常用手术器械一套，蛙钉，玻璃分针，秒表，滴管。