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致羔羊腹泻大肠杆菌分离培养、药敏试验及鉴定
摘要:为了确定引起该羊场羔羊腹泻的致病菌,通过分离培养和细菌鉴定确定致病菌为大肠杆菌,药敏试验结果表明米诺环素、氨曲南、头孢噻肟、头孢吡肟、头孢他啶和头孢西叮对该菌的抑制和杀灭效果最好。
关键字:羔羊;大肠杆菌;分离培养;药敏实验
2016年9月,新疆沙湾县某羊场发生以羔羊腹泻为主要症状的急性传染性疾病。对发病死亡1小时内的羊采样2只,共采10个样(肺、肝、脾、肺淋巴和肠淋巴各2份)送研究室。通过分离培养、药敏试验和细菌鉴定等实验,确定为大肠杆菌感染。
1 材料与方法
(1)实验材料。细菌分离培养工具一套、vitek2 compact全自动微生化鉴定系统(法国梅里埃公司制造);病死羊肺、肝、脾、肺淋巴和肠淋巴采样各2份;普通营养琼脂培养基购自生工生物工程(上海)股份有限公司,液体培养基和血琼脂平板培养基为实验室自制,革兰氏染色液购自珠海贝索生物技术有限公司,药敏片为杭州滨和微生物试剂有限公司2016年8月20日生产的35瓶装常用新药敏纸片。
(2)实验方法。无菌条件下采样分别培养于装有液体琼脂培养基的试管里,接种于绵阳血液平板上,做好记录,最后把试管和血平板放入37℃培养箱培养18小时;无菌条件下选择实验中有明显变化的试管(肝脏2、肺淋巴1、肠淋巴1、淋巴1),使用移液管抽取60uL分散滴入血琼脂平板上,用消毒棉签涂满平板表面,待平面稍干,用镊子取出药敏片对应编号贴在平板表面相应位置。重复以上操作,最后把平板放入37℃培养箱中培养18小时;细菌鉴定使用仪器为vitek2 compact全自动微生物鉴定系统。无菌操作下挑取试验中(肝脏2、肺淋巴1、肠淋巴1、淋巴1)血平板上培养的菌落移入比色管(先做好登记)中,用移液枪混匀后比色,调节比色度在0.5~0.63之间,插入革兰氏阴性菌鉴定卡(通过涂片观察检测为革兰氏阴性杆菌),然后按照细菌鉴定仪的操作进行操作。