临床输血检测操作规程完整
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精心整理文件类型：作业指导书文件编号：JCXRMYY -JY-015-2009文件名称：临床输血检测操作规程第01版第0次修改第1页共12页ABO 血型鉴定1AB 型及O 型和B A22.12.22.33抗A、抗B血型定型试剂（单克隆抗体）：河北医科大学生物医学工程中心，10ml/支，储存要求：2℃～8℃避光保存，主要成分：分泌抗人A 型和抗人B 型血型原单抗的杂交瘤细胞培养上清液并补加一定量小鼠腹水抗体。
0.9/%的生理盐水：江西科伦医药有限公司。
离心机，显微镜。
4、操作步骤4.1、试管法4.1.1 取洁净小试管(内径10mm×60mm)3支，分别标明抗—A、抗—B和抗—A十B，用滴管分别加抗—A、抗—B 和抗—A 十 B 分型血清各l 滴（约50 ul）于试管底部，再以滴管分别加入受检者5％红细胞盐水悬液1滴，混和。
4.1.2 另取洁净小试管(内径10mm×60mm)3 支，分别标明A、B 和O 细胞。
用533溶血类B月日2页共12页4.1.6 凝集强度判断标准4+ 红细胞凝集成一大块，血清清晰透明。
3+ 红细胞凝集成数小块，血清尚清晰。
2+ 红细胞凝块分散成许多小块，见到游离红细胞。
1+ 肉眼可见大颗粒，周围有较多游离红细胞。
±镜下可见数个红细胞凝集在一起，周围有很多游离红细胞。
MF 混合凝集外观(mixed field)是指镜下可见少数红细胞凝集，而极大多数红细胞仍呈分散分布。
- 表示阴性，镜下未见凝集，红细胞均匀分布。
4.2和抗型min5ABO抗-A+ - + A - + -- + + B + - -- - - O + + -+ + + AB - - -注：+为凝集；-为不凝集。
---------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- 编制人/修改人：校核人：审核人：批准人：批准日期：年月日实施日期：年月日文件类型：作业指导书文件编号：JCXRMYY -JY-015-20093页共126.26.36.4新的试剂进行检测工作。
6.5 试管、滴管和玻片必须清洁干燥，防止溶血。
6.6 操作方法应按规定，一般应先加血清，然后再加红细胞悬液，以便容易核实是否漏加血清。
6.7 按理IgM 抗-A 和抗-B 与相应红细胞的反应温度以4℃为最强，但为了防止冷凝集现象的干扰，一般仍在室温(20—24℃)内进行试验，37℃可使反应减弱。
6.8 离心时间不宜过长或过短，速度不宜过快或过慢，以防假阳性或假阴性结果。
6.9 观察时应注意红细胞呈特异性凝集、继发性凝固以及缗钱状排列的区别。
6.106.116.1225月日文件类型：作业指导书文件编号：JCXRMYY -JY-015-2009文件名称：临床输血检测操作规程第01版第0次修改第4页共12页7、操作性能概要7.1正反定型结果不一致的原因：7.1.1 原因：有技术性问题或红细胞和血清本身的问题，常见者有以下几种：7.1.1.1 分型血清效价太低、亲和力不强。
如抗—A血清效价不高，可将A亚型误定为O型，AB型误定为B型。
35症。
如发现ABO正反定型结果不一致，先要重复作试验1次。
严格执行操作规程，使用质量合格的试剂以及细心观察和解释试验结果，就可解决明显的问题，对一些疑难问题月必须进一步研究。
7.1.2 检查步骤：7.1.2.1 另从受检者采取l 份新鲜血液标本这样可以纠正因污染或搞错样本造成的不符合。
7.1.2.2 将红细胞洗涤数次，配成5％生理盐水细胞悬液，用抗—A、抗—B、抗—Al，抗—A十B及抗H做试验可以得到其它有用的信息。
7.1.2.3 对受检红细胞作直接抗球蛋白试验，如结果呈阳性，表示红细胞已被抗体致敏。
—I月日5页共12血％HAB分泌型的人有用。
7.1.2.7 如试验结果红细胞呈绢钱状排列，加等渗盐水l滴，混和，往往可使绢钱现象消失。
应注意不应先加盐水l 滴于受检者血清中而后和红细胞作试验，以免使血清中抗体被稀释。
7.1.2.8 如受检者为A型血而疑为有类B抗原时，可用下列方法进行鉴别：7.1.2.8.1 观察细胞与抗—A及抗—B的凝集强度，与抗—A的反应要比与抗36—B的反应强。
这种区别用玻片法作试验更为明显。
7.1.2.8.2 用受检者红细胞与自身血清作试验，血清中的抗—B不凝集自身红细胞上的类B抗原。
7.1.2.8.3 检查唾液中是否有A、B物质，如果是分泌型，可检出A物质而无B活的89全国临床检验操作规程（第3版）---------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- 编制人/修改人：校核人：审核人：批准人：批准日期：年月日实施日期：年月日文件类型：作业指导书文件编号：JCXRMYY -JY-015-2009文件名称：临床输血检测操作规程第01版第0次修改第6页共12页Rh（D）血型鉴定1、实验原理红细胞与抗D抗体发生凝集反应表明该细胞有D抗原，反之，无凝集现象表221 344.137也可以是悬浮于自身血浆或血清中的红细胞。
4.1.3 在圆形的玻片区域中混匀，前后缓慢摇晃玻片。
2分钟左右肉眼判读结果。
不要将试剂的干燥与凝集相混淆。
4.1.4 如果是阴性，需要试管法重做一遍实验。
4.2 盐水试管法4.2.1 加一滴抗D试剂于预先标记好的试管中4.2.2 再加1滴约3%—5%红细胞生理盐水悬液于试管中。
混匀。
4.2.3 离心，速度和时间可选择以下二种之一：转速1000rpm，时间一分钟1分钟或3400rpm，时间15秒。
4.2.4 检查是否溶血（溶血可能是阳性结果，或者是细菌污染），然后轻轻摇月日7页共124.3.2 再在微孔中一滴约3-5%的被检红细胞悬液，细胞悬液需事先制备于生理盐水中。
4.3.3 用机械的方法将U型板混匀。
4.3.4 用板式离心机离心：2000rpm,时间30 秒。
不同的离心机，不同的微量板所需要的离心条件有所区别，正确实验的结果需要适当的离心，使反应板产生清晰的细胞扣及透亮的上清液。
4.3.5 检测溶血情况（溶血可能是阳性结果，或者是细菌污染）。
4.3.6 结果判断：用机械震荡U型板，再悬浮细胞，根据悬浮情况来判断凝集。
阳性反应，出现红细胞凝集，而阴性反应在微孔中会出现均匀细胞悬液。
4.3.7 可用肉眼和自动化判读结果。
56抗D7、VI88.2性、RhD 阳性红细胞检查结果是否符合，以防制品污染、变质失效，而造成错误。
及时贴上开封时间标签，在效期内使用。
8.3 由于人红细胞的D抗原往往表现较弱，故必要时进行显微镜镜检，以免错判结果，特别是阴性结果时。
8.4 Rh血型鉴定应严格控制温度与时间，因Rh抗原、抗体集反应凝块比较脆弱，观察反应结果时，应轻轻侧动试管，不可用力振摇。
8.5 对于结果可疑的，必须洗涤红细胞后重新检验。
---------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- 编制人/修改人：校核人：审核人：批准人：批准日期：年月日实施日期：年月日8页共129.19.14 试剂瓶可能被细菌、外来物质或其他抗血清所污染。
9.2 假阴性反应原因分析：9.2.1 搞错抗血清每次试验时应细心核对抗血清瓶子上的标签。
9.2.2 试管中漏假抗血清在加入细胞悬液之前，必须检查试管中有无抗血清。
9.2.3 某种特定的抗血清不能和其他相应抗原的变异型起反应。
9.2.4 如某种抗血清含有主要对抗Rh 复合抗原的抗体，则可能与独立的基因产物的个别抗原不发生反应。
这在抗C血清最为常见，因为很多抗C血清含有反应性更强的抗Ce成分。
9.2.5 未遵照抗血清使用说明书做试验，如抗血清和细胞的比例以及温育的温10月日9页共121、红细胞血型抗体分子的物理特性与血清学的反应性之间有着直接的关系。
可39分为IgM和IgG球蛋白抗体IgM 为天然抗体，在盐水介质中能直接相应的红细胞，使之发生肉眼可见的凝集反应。
IgG为免疫抗体，常经妊娠或输血等免疫产生。
在盐水介质中不能凝集而只能致敏抗原的红细胞，且必须通过特定的方法使致敏红细胞发生凝集。
如牛血清白蛋白、酶、抗球蛋白、凝聚胺、凝胶（或玻璃）等方法。
2、方法待检血清需要使用多种方法进行鉴定。
一般使用盐水法、酶方法、抗球蛋白法、凝聚胺法或凝胶法检测抗体。
在检测到弱抗体时，可以利用适当增加血清的3、3.13.24、4.14.25、阳性反应：出现红细胞凝集。
表示红细胞上有相应抗体存在。
阴性反应：出现红细胞不凝集。
表示红细胞上没有相应抗体存在。
结合谱细胞反应格局，确定抗体特异性。
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4.24.355.1液15.2 各管加LIM0.8ml，混匀，静置1 分钟，各管加Promoter1 滴，混匀，3000 转/分离心15 秒，倒出上清液（残留约0.1ml），扣摇，肉眼可见明显的凝集状（如无凝集须重做），加假凝集清除液 1 滴与管底，轻摇，凝集 1 分钟内消失呈均匀混悬液，为阴性，凝集1分钟内不能被消除，即为阳性。
