当前位置：文档之家 › 酶法提取灵芝多糖的工艺研究

酶法提取灵芝多糖的工艺研究

  • 格式：pdf
  • 大小：178.30 KB
  • 文档页数：4

下载文档原格式

  / 4

合集下载

超声波法和超声波酶法提取灵芝多糖的条件研究_郑静

超声波法和超声波酶法提取灵芝多糖的条件研究_郑静

食用菌学报 © 2006. 13(1) :48～ 52
文章编号 :1005 - 9873(2006)01 - 0048 - 05
超声波法和超声波酶法提取灵芝多糖的条件研究
郑 静 , 常 滔* , 林 英 , 程 晖 (农业部北方农作物病害免疫重点开放实验室 ;沈阳农业大学植保学院 , 沈阳 110161)
C 酶量 D 时间
B pH
C Quantity of cellulase (%)1)
D T ime (m in)
1
45 6. 0 1. 5 10
2
50 6. 5 2. 0
15
3
55 7. 0 2. 5
20
1)Ex pr essed as a pe rcentag e relativ e to the amo unt o f
图 3 温度对多糖提取率和多 糖含量的影响 Fig. 3 Effect of treatment temperature on polysaccharide extrac-
tion rates and the polysaccharide contenHale Waihona Puke of crude extract
2. 2 超声波法最佳提取条件的确定 正交试验结果见表 3 。极差 R 分析表明 , 三 因素影响多糖提取率的主次关 系依次是提取温 度(C) >提取时间(A)>料液比(B)。 为了进一
表 1 超声波法正交试验因素和水平 Table 1 Factors and levels in the orthogonal test of the
ultrasound extraction method
水平 Level
A 时间
纤维素酶提取灵芝多糖的单因素研究

纤维素酶提取灵芝多糖的单因素研究


振荡摇匀 ， 加人 ６ ． ０ ｍ ｌ 的浓硫酸 ． 迅速振摇混匀 ． 于室温放置 ３ ０ ｍ ｉ ｎ 后
４ ９ ０ ｎ ｍ处测 Ａ。
２ ． ２ ． ２ ． ４ 灵芝 总糖量计算 根据标 准曲线计算 出样品液 中总糖的浓度后按下式计算总糖量 灵芝 总糖量＝ 浓度 ｘ 体积ｘ 稀释倍数 ２ ． ２ － ３ 多糖提取率 的计算 方法
【 摘 要】 利用纤维素酶从灵芝子实体中提取灵芝多糖， 通过单因素实验研究酶量、 酶解时间、 料液比、 酶解温度对灵芝多糖提取率的影响。
实验 结果表 明： 纤维素酶能 够显著提 高灵芝 多糖的提取率 ， 提取的最佳工艺条件为酶量 ２ ． ０ ％ 酶解 时间 ９ ０ ｍ ｉ ｎ ， 料 液比 １ ： ３ ０ ， 温度 ５ ０ ￣ Ｃ 。
，
【 关键词 】 灵芝 多糖 ； 提取 ； 纤维素酶 。 引言
灵芝为多孔菌科真菌赤芝或紫芝的干燥子实体 ． 素有 “ 仙 草” 之美 誉ｆ １ ＿ 。古今药理与临床研究均证明 ． 灵芝有防病治病延年益寿之功效 而灵芝多糖是灵 芝的主要活性成 分 ， 具有免疫 调节 、 抗肿 瘤、 抗氧化 、 抗辐射 、 抗衰老 以及 活血化瘀等 广泛的药理 活性 ． 因此灵 芝多糖也 是 目前灵芝研究的一个热点 灵芝多糖存在 于子实体 的细胞壁 内壁 ． 而子实体结构 紧密 ． 在提 取过程 中传质阻力 比较大 ， 且灵 芝多糖相对分 子量很大 ． 仅 靠单纯 的 扩散原理的传统提取方法的提取效率较低 。 而酶法是一种通过酶解破 坏细胞 结构来 强化有 效成分 的传质 过程 ． 能最 大限度 提取中药有效成 分的方法 ， 越来越 受到重视 。故本 试验选取灵芝 作为酶法 提取的对 象， 试 图破坏灵芝 的细胞壁结构 ． 来提高灵芝多糖提取效率 ． 对于实际 应用有 着现实的意 义
灵芝多糖实验报告

灵芝多糖实验报告

一、实验目的本研究旨在通过实验方法提取和鉴定灵芝中的多糖成分，探究灵芝多糖的提取工艺，并对提取得到的灵芝多糖进行初步的生物活性分析。

二、实验材料与仪器1. 实验材料：- 灵芝子实体（赤芝或紫芝）- 乙醇、水、硫酸、蒽酮等化学试剂- 蒸馏水、无水乙醇、丙酮等溶剂- 蛋白酶、DNase等酶类- 小鼠、细胞等实验动物和细胞系2. 实验仪器：- 电子天平- 超声波清洗器- 烘箱- 离心机- 恒温水浴锅- 分光光度计- 高效液相色谱仪- 荧光显微镜等三、实验方法1. 灵芝多糖的提取：- 将灵芝子实体洗净、晾干，粉碎成粉末。

- 采用乙醇提取法，将灵芝粉末与95%乙醇按一定比例混合，在超声波清洗器中提取2小时。

- 将提取液过滤，滤液在烘箱中浓缩至一定浓度。

- 将浓缩液用无水乙醇沉淀，离心分离，收集沉淀物。

2. 灵芝多糖的鉴定：- 采用硫酸-蒽酮法对提取得到的沉淀物进行含量测定。

- 采用高效液相色谱法对提取得到的灵芝多糖进行结构分析。

3. 灵芝多糖的生物活性分析：- 采用小鼠腹腔巨细胞吞噬实验，检测灵芝多糖的免疫调节活性。

- 采用细胞实验，检测灵芝多糖对肿瘤细胞的抑制作用。

四、实验结果1. 灵芝多糖的提取：- 采用乙醇提取法，从灵芝子实体中提取得到多糖含量为10%左右。

2. 灵芝多糖的鉴定：- 硫酸-蒽酮法检测结果显示，提取得到的灵芝多糖含量较高。

- 高效液相色谱法分析结果显示，提取得到的灵芝多糖主要由葡萄糖、阿拉伯糖、木糖、岩藻糖、鼠李糖、半乳糖等单糖组成。

3. 灵芝多糖的生物活性分析：- 小鼠腹腔巨细胞吞噬实验结果显示，灵芝多糖能够显著提高小鼠腹腔巨细胞的吞噬功能。

- 细胞实验结果显示，灵芝多糖对肿瘤细胞具有抑制作用。

五、实验讨论1. 灵芝多糖的提取工艺：- 本实验采用乙醇提取法，结果表明该方法能够有效地提取灵芝中的多糖成分。

- 在实验过程中，提取溶剂的浓度、提取时间、料液比等因素对提取率有显著影响，需要进一步优化。

Box-Behnken法优化超声辅助酶法提取灵芝多糖的工艺研究

Box-Behnken法优化超声辅助酶法提取灵芝多糖的工艺研究

Box-Behnken法优化超声辅助酶法提取灵芝多糖的工艺研究郑丹婷苑子涵崔佳燕蔡思敏韩伟（华东理工大学中药现代化工程中心，上海200237）摘要：以总多糖得率为指标，采用超声辅助纤维素酶法提取灵芝子实体粉末中的多糖类化合物。

在单因素试验的基础上，利用Box-Behnken中心组合法对灵芝多糖的提取条件进行了优化，得到最优提取工艺条件：超声提取时间28min、料液比1:36、酶解时间68min，在此条件下，灵芝多糖的得率为7.57%。

关键词：灵芝多糖；超声提取；纤维素酶；Box-Behnken法0引言灵芝（Ganoderma Lucidum Karst），又称“林中灵”，是孔菌科真菌灵芝的子实体[1]。

2015年版《中国药典》收录有赤芝与紫芝两个品种。

作为具有数千年药用历史的中国传统药材，灵芝具有很高的药用价值。

现代药理学研究也证实，其具有调节免疫、抗肿瘤、抗病毒、抗氧化、保肝、提高耐缺氧能力等功效[2]。

灵芝多糖（Ganoderma Lucidum Polysaccharide）是多孔菌科灵芝属真菌菌丝体的次生代谢产物，存在于灵芝属真菌的菌丝体和子实体中，具有清除体内自由基、提高机体免疫力、降血糖[3]等功效，被认为是灵芝扶正固本的根本[4]。

灵芝多糖存在于灵芝子实体的细胞壁内壁，而子实体结构致密，在提取过程中的传质阻力比较大，且灵芝多糖的相对分子量很大，传统的提取方法主要依靠的是扩散原理[5]，因此提取效率较低。

超声提取法是一种利用超声波的空化作用、机械作用和热效应等加速细胞内有效物质的释放、扩散和溶解，以此显著提高提取效率的提取方法[6]。

酶法提取是一种利用酶解作用，破坏细胞壁结构，以强化胞内有效成分扩散至胞外的传质过程，从而能够最大限度地提高中药有效成分得率的方法。

本文以总多糖得率为指标，采用超声辅助纤维素酶法提取灵芝中的多糖类化合物，在单因素试验的基础上，利用Box-Behnken中心组合法（以下简称Box-Behnken法）对提取工艺进行优化，以期为灵芝多糖的工业化生产提供参考。

复合酶提取灵芝多糖工艺及其抗氧化能力研究

复合酶提取灵芝多糖工艺及其抗氧化能力研究

复合酶提取灵芝多糖工艺及其抗氧化能力研究张天笑;刘红兵;张文竹;李春霞;管华诗【期刊名称】《安徽农业科学》【年(卷),期】2011(039)008【摘要】[目的]获得复合酶提取灵芝多糖的最佳工艺,探讨灵芝多糖的体外抗氧化能力.[方法]以多糖提取率为指标,在单因素试验的基础上,采用正交试验对复合酶用量配比、酶解条件进行优化;采用清除1,1-二苯基苦基苯肼(DPPH)自由基模型评价灵芝多糖的体外抗氧化能力.[结果]复合酶提取优于单酶提取,酶用量最佳配比为纤维素酶1.5%、木瓜蛋白酶0.8%、菠萝蛋白酶3.5%(质量分数,相对于底物浓度);最佳酶解条件为pH 5.5,温度50℃、酶解时间为100 min.复合酶提取的灵芝多糖具有良好的清除DPPH自由基作用,其清除能力优于水提灵芝多糖(P<0.01),且在浓度0.8～4.8 mg/ml范围内,其对DPPH自由基的清除率随浓度增大而增大.[结论]该研究为灵芝多糖的开发提供了科学依据.【总页数】3页(P4496-4498)【作者】张天笑;刘红兵;张文竹;李春霞;管华诗【作者单位】中国海洋大学医药学院,山东青岛,266003;中国海洋大学医药学院,山东青岛,266003;中国海洋大学医药学院,山东青岛,266003;中国海洋大学医药学院,山东青岛,266003;中国海洋大学医药学院,山东青岛,266003【正文语种】中文【中图分类】O636.1【相关文献】1.灵芝多糖的复合酶法提取工艺优化 [J], 丁霄霄; 李凤伟; 商曰玲; 王笃军; 王杰; 卜雯丽; 余晓红2.灵芝多糖提取工艺研究进展 [J], 宁娜;韩建军;杨广安;郁建生3.灵芝多糖提取及纯化工艺研究 [J], 李康强;蔡鸿飞;杨阳;张琴;张圳;毛禹康;许文东4.复合酶法提取蛹虫草类胡萝卜素工艺优化及其抗氧化能力测定 [J], 周翔宇;樊桂灵;邓扬龙;李玉锋5.复合酶法提取灵芝多糖工艺优化及果冻饮料开发 [J], 孙德鹏;徐瀚然;韩春姬;汪庭瑞;李官浩;牟柏德因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

酶法在中药提取中的应用和进展

酶法在中药提取中的应用和进展

酶法在中药提取中的应用和进展
华 东 理 工 大 学
中药现代化工程中心 韩 伟
酶法在中药提取中的应用和进 展
概 述 酶法提取的原理 酶法提取的优点 酶法提取的工艺 酶法在中药提取中的应用 酶法提取灵芝多糖的研究 展 望
一 概
述
中药所含的成分十分复杂，既有有效成分， 中药所含的成分十分复杂，既有有效成分，又有无效成 分和有毒成分。 分和有毒成分。 为了提高中药的治疗效果，降低毒副作用， 为了提高中药的治疗效果，降低毒副作用，选用合理的 提取工艺是非常重要的。传统提取方法( 如煎煮法、 提取工艺是非常重要的 。 传统提取方法 ( 如煎煮法 、 回 流法、浸渍法、渗漉法等) 在提取中药有效成分方面， 流法 、 浸渍法 、 渗漉法等 ) 在提取中药有效成分方面 ， 存在着损失大、周期长、工序多、提取率不高等缺点。 存在着损失大、周期长、工序多、提取率不高等缺点。 20世纪 年代中期以后 20世纪90年代中期以后，我国陆续有研究报道将酶用于 世纪90年代中期以后， 中药提取，并且取得较好的效果。酶法为中药提取提供 中药提取，并且取得较好的效果。酶法为中药提取提供 了一种新的途径，具有较大的应用前景。 了一种新的途径，具有较大的应用前景。
4.2 酶法提取的影响因素和优化
酶法提取的工艺条件及其优化： 酶法提取的工艺条件及其优化：
酶是一类生物催化剂 反应的pH值 温度、酶的浓度、 酶是一类生物催化剂，反应的pH值、温度、酶的浓度、 生物催化剂， 配比和作用时间、 配比和作用时间、 激活剂和抑制剂等都会对酶的活性 产生影响，从而影响整个提取过程。 产生影响，从而影响整个提取过程。 根据实验来对酶反应的工艺条件进行优化 根据实验来对酶反应的工艺条件进行优化 ， 确定各参 优化， 数的最佳值。 数的最佳值。
灵芝多糖的研究及其提取工艺

灵芝多糖的研究及其提取工艺

灵芝多糖提取工艺1、灵芝多糖简介灵芝多糖是一种从灵芝孢子粉或灵芝中提取的物质。

不溶于高浓度的酒精 , 微溶于低浓度的酒精及冷水 , 在热水中能全部溶解。

目前已分离到的有200多种，其中大部分为β–葡聚糖，少数为α–葡聚糖，多糖链由三股单糖链构成，是一种螺旋状立体构形物，其立体构形和DNA、RNA相似，螺旋层之间主要以氢键固定，分子量从数百到数十万，除一小部分小分子多糖外，大多不溶于高浓度酒精，在热水中溶解，大多存在于灵芝细胞内壁。

灵芝多糖都存在于灵芝的细胞壁内壁。

灵芝多糖中除含有葡萄糖外 , 大多还含有阿拉伯糖、木糖、半乳糖、岩藻糖、甘露糖、鼠李糖等单糖 , 但含量较少。

单糖间糖苷键连接有1,3、 1,4 和 1, 6 数种。

大多为β型结构 , 少数为α- 型结构。

α-型多糖没有药理活性 ( 药效 ) 。

多数多糖链有分枝 , 部分多糖链含有小分子肤链。

多糖链分枝密度高或含有肤链的其药理活性也高。

灵芝多糖在水溶液中多糖链一般由三股糖链组成 , 在 o. 1 摩 / 升氢氧化纳溶液中时多糖链的三股糖链离解为单股单糖链。

多糖的药理活性与单糖间糖苷键的结合形式有关。

单糖间以β- 1 , 3 、 1, 6 或β-1,4 、 1, 6-糖苷键连接是有效的即具有药理活性 , 而纯β_-1 ,4- 糖背键连接的则没有药理活性。

此外 , 多糖的药理活性还与其立体构形有关 , 若螺旋形立体结构被破坏 , 其活性则大大下降。

淀粉、纤维素、糊精也是多糖 , 但其构形与灵芝多糖 ( 或其他真菌多糖 ) 不同。

淀粉、纤维素等多糖没有螺旋形立体结构 , 单糖间的连接全是β- 1,4-连接。

纤维素是β-型多糖 , 淀粉、糊精是α-型多糖。

由于其构形不同 , 所以淀粉、糊精、纤维素都没有药理活性。

灵芝多糖是灵芝的最有效成分之一 ,已分离到的灵芝多糖有 200 多种 , 其中有数十种的结构已被搞清 , 分子量已被测定。

现知灵芝多糖有广泛的药理活性，能提高机体免疫力，提高机体耐缺氧能力，消除自由基，抑制肿瘤、抗辐射，提高肝脏、骨髓、血液合成DNA、RNA、蛋白质能力，延长寿命，灵芝多糖还具有刺激宿主非特异性抗性、免疫特异反应以及抑制移植肿瘤生理活性的特性。

超声波酶法提取灵芝多糖的研究

超声波酶法提取灵芝多糖的研究

超声波酶法提取灵芝多糖的研究吕京宁浙江大学材料与化学工程学院 高分子化工研究所摘要：灵芝古称瑞草,在我国作为药物有2000多年的历史。

临床和药理研究表明,灵芝具有多种生理活性与药理作用。

而灵芝多糖则是其最主要的有效成分,尤其它还具有抗肿瘤的活性功能。

灵芝多糖的常规提取方法已有报道,这些方法不仅费时,而且收率很低。

目前,超声技术已广泛应用于中药有效成分的提取,本文介绍了采用超声波酶法方法提取灵芝多糖的原理、工艺条件以及应用，与普 通方法相比，该法具有水解效率高，产品质量好等特点，同时还能缩短提取周期，并使反应条件更加温和。

关键词：灵芝多糖 提取 超声波酶法 纯化0 引言多糖因其具有多种生物活性已越来越硬起人们的重视，近年来，对真菌多糖的研究进展很快，灵芝多 糖作为一类非特异性免疫增强剂，具有抗血栓、抗肿瘤、抗辐射、抗氧化、免疫调节、保肝、降压等作用， 因此在医药领域中具有很高的开发应用前景。

目前分离到的灵芝多糖达200种之多，大部分为β型葡聚糖， 分子量从数千到数万不等，不溶于高浓度乙醇，可在热水中溶解。

但提取灵芝多糖的传统工艺，生产周期 长，工艺复杂，从而增大了生产成本，并受资源来源的影响，使生产和临床应用受到限制。

因此如何有效 提取和分离纯化灵芝多糖是目前工作的重点 [1] 。

现代生物技术已广泛应用于许多领域，迄今为之，一批发酵工程产物已由实验室走向工业化生产，此 过程中，分离提纯技术起到了关键作用。

随着科学技术的发展，超临界萃取、超声波、微波、超滤、凝胶 电泳分离、新型吸附剂层析分离、真空冷冻干燥提取分离等技术，已经应用到中药及其天然植物研究及生 产领域中。

天然植物药用成分大多为细胞内产物，提取时多需进行细胞破碎，而现有的机械和化学方法有 时难于取得理想的破碎效果。

本研究表明，利用超声波产生的强烈振动、超高的速度、强烈的空化效应、 搅拌作用等，可加速药物有效成分进入溶剂 [2,3] ，具有提高得率，缩短提取时间，节约溶剂，有利于保护 有效成分等优点，此技术在中药有效成分提取、分离与制备工艺中已广泛应用 [4,5] 。

酶法提取灵芝多糖的工艺研究

酶法提取灵芝多糖的工艺研究

Key words: enzymatic method; extraction; Ganoderma lucidum; polysaccharide
灵芝(Ganoderma lucidum)是我国医学宝库中的 一味珍贵中药，含有多种有效药用成分，其中灵 芝多糖是一种非特异性免疫刺激剂，具有强化人 体免疫功能、抗肿瘤、抗衰老及清除自由基等生 理功能[1-3]。灵芝多糖的提取方法有水提法[4]、碱提 法、醇提法和酶提法等[5-7]，其中酶提法是利用酶 对细胞结构的破坏作用，使存在于细胞内部的多 糖释放出来，从而提高了多糖的得率。本文采用 纤维素酶、果胶酶和植物蛋白水解酶对灵芝进行 水解作用，研究灵芝多糖的最佳提取工艺，并探
2.2 酶法提取灵芝多糖的效应
2.2.1 酶浓度对多糖提取的影响 控制纤维素酶、
果胶酶和植物蛋白水解酶 pH 为 4.5、4.5 和 5.0，
酶 解 时 间 80 min， 温 度 50 ℃ ， 酶 浓 度 分 别 为
0.1%、0.5%、1.0%、2.0%、4.0%。酶浓度对提取
多糖含量的影响结果见图 1。
200
180
160
140
120
100
80
纤维素酶
60
果胶酶
40
植物蛋白水解酶
20
0
15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 70
温度/℃ 图 3 酶解温度对灵芝多糖提取的影响
从图 3 可以看出，纤维素酶和植物蛋白水解 酶酶解温度为 55 ℃时，多糖含量最高，分别为 192.56 mg/100 mL 和 169.87 mg/100 mL，因此选择 纤维素酶和植物蛋白水解酶最适反应温度为 55 ℃； 果胶酶酶解温度为 40 ℃时，多糖含量最高，为 163.56 mg/100 mL，因此选择果胶酶最适反应温度 为 40 ℃。 2.2.4 pH 对多糖提取的影响 控制纤维素酶酶浓 度 0.5%，时间 80 min，温度 55 ℃时， pH 值选择 3.5、 4.0、 5.0、 6.0； 果 胶 酶 和 植 物 蛋 白 水 解 酶 酶 浓度分别为 0.5%、1.0%，时间分别为 80、60 min， 温 度 分 别 为 40、 55 ℃ 时 ， pH 值 选 择 3.5、 4.5、 5.5、6.5。pH 对提取多糖含量的影响结果见图 4。
食用菌多糖酶法提取工艺研究进展

食用菌多糖酶法提取工艺研究进展

食用菌多糖酶法提取工艺研究进展摘要阐述食用菌多糖的生物活性，基于单一酶法与复合酶法介绍食用菌多糖酶法提取工艺的研究概况，以期为食用菌多糖酶法提取的开发应用提供参考。

关键词食用菌多糖；酶法；提取工艺食用菌富含多糖物质，如杂多糖、甘露聚糖、葡聚糖、糖蛋白和多糖肽，具有极大的应用价值。

现介绍食用菌多糖的生物活性及提取工艺，以供参考。

1 食用菌多糖的生物活性研究表明，食用菌多糖被称为“生物应答效应物”，是一种能增强人体免疫功能的生物活性物质[1]，其主要作用于机体的免疫系统，具有增强免疫力、抗氧化、抗病毒、降血压、降血脂等功效，在食品及保健品行业中有着广阔的应用前景。

食用菌多糖生物活性与其结构有密切联系。

主要体现在以下5个方面：一是连接在β-D-葡聚糖骨架上的一些基团如聚羟基、聚醛基、羧甲基、乙酰基、硫酸基等对食用菌多糖的生物活性有显著作用。

二是食用菌活性多糖具有共同的结构，主要由几丁质和β-（1，3）-D-葡聚糖构成，具有抗肿瘤的作用，如香菇多糖、灵芝多糖等。

三是食用菌多糖的活性取决于分支度、分子量的大小，影响其生物活性。

四是食用菌多糖的缔合、胶束结构、憎水键以及多糖分子的绕曲度等高级结构都对其活性产生影响。

五是食用菌多糖的活性与其溶解度也有重要关系。

2 食用菌多糖的酶解提取工艺研究食用菌组成结构多样，除多糖外还含有蛋白质、纤维素、半纤维素和果胶等物质，这些物质的存在会影响多糖的浸出。

因此，在多糖提取过程中适当加入酶，利用酶对细胞结构的破坏作用，使存在于细胞内部的多糖得到充分的释放，不仅提高了溶出率，也为后续的精制创造了有利条件。

酶是一种普通蛋白质分子，其在生物反应过程中扮演着高效催化剂的角色，能够帮助一个化学反应过程快速有效地发生，同时本身又是可降解的，如：果胶酶（Pectinase）、纤维素酶（Cellulase）、枯草芽孢杆菌中性蛋白酶、木瓜蛋白酶（Papain）、菠萝蛋白酶（Bromelain）、胃蛋白酶（Pepsin）等。

灵芝多糖提取

灵芝多糖提取


灵芝多糖提取工艺
赤灵芝 离心分离 除蛋白 收集沉淀
预处理
传统水提
收集上清液
Seavage法
透析 乙醇沉淀 离心
冷冻干燥 灵芝多糖
多糖的提取
（1）原料的处理 灵芝中的多糖存在于细胞壁中，粉碎处理子实体多糖得率大。较细的颗粒有利于多糖的浸出，但给后面的分离过滤造 成困难，使粗多糖溶液大量流失，造成多糖得率不高。 （2）原料的复水 加水浸泡，使粉末充分吸水膨胀，便于多糖的浸出，减少蒸煮的时间。 （3）多糖的浸提 从灵芝中提取多糖的提取剂有酸液、碱液、酶及热水。不同提取液多糖得率差异较大，如用酸处理降低了多糖的含量 ；用碱处理使多糖量增加，但寡糖含量则相对减少，且提取后液体需中和，程序繁琐；水提取成本低，方便实用，因此 在实验中用水作提取剂。将复水的浆体里加入水，沸水蒸煮使菌多糖被充分浸提出来，然后冷却，将浸提液离心。1）离 心与脱色 （4）将蒸煮离心，然后加热浓缩， H202加热脱色。 （5）除蛋白 灵芝子实体蛋白质含量较高，不除去蛋白质，导致粗多糖含量升高，产生偏差，所以在醇析之前，必须除去蛋白质。 将脱色液用Sevage圈法除去蛋白质。 （6）多糖的醇析和干燥 萃取液中加入乙醇，使多糖与乙醇生成水不溶性化合物，离心，用丙酮漂洗沉淀，除去其中的脂类和色素，然后干燥 。
谢谢观看
纤维素柱层析优缺点
这种方法实质上与分步沉淀法相反, 可称其 为分步溶解法。其理论塔板数较高, 所以流 出液的纯度高。
但该法的缺点是流速慢, 纯化周期长, 特别 是对于粘度较大的酸性多糖, 更显得流速过 慢。
多糖纯度鉴定
超离心 高压电泳 凝胶层析 HPLC 法
水提醇沉法的优缺点
除蛋白
采用醇沉或其它溶剂沉淀得到的粗多糖中 常含有较多的蛋白质, 需要除蛋白。

灵芝多糖提取工艺研究进展

第20期宁娜，等:灵芝多糖提取工艺研究进展-63•灵芝多糖提取工艺研究进展宁娜02,3，韩建军7,杨广安7,郁建生013（0铜仁职业技术学院药学院，贵州铜仁554300； 2.民族中兽药分离纯化技术国家地方联合工程研究中心，贵州铜仁554300；3.铜仁职业技术学院中兽药国家民委重点开放实验室，贵州铜仁554300）摘要:灵芝含有多糖、萜类、核苷酸等成分，其中多糖类成分含量较高，具有广泛的药理活性。

灵芝多糖具有降血糖、抗癌、抗氧化等多种活性。

本文对灵芝多糖的提取技术进行了综述,为灵芝的进一步开发利提供依据。

关键词：灵芝;多糖;提取工艺；进展中图分类号:TQ452.7文献标识码:A文章编号：138-921X（2929）29-0066-97ReseercO Praoresu on Extraction Technologyof Polysucchaades fram Ganoderma luciOumNing NcO0,Han Jianjun,h ang Guangan,0u Jiansheng10((.Department oZ Pharmacy,Tongren Vocahonai and Technical College,Tongren554300,China；.Nahonct and Locct Engineering Research Centro for Separa/on and Purification Ethnic Chinese VeteOnara HerUs,Tongren554300,China；3.Key Open LaPomWm oZ TrabiUonai Chinese VeteOnara MeVicinc,Tongren Voca/onai and Technical College,Tongren554300,China)Abstraci:Ganoberma lucidum is rich in a variety of chemical ingrehients,inclubing polysaccharides,(eruencs,nucleo/dcs,etc.Among these ingrehients,the content oZ polysaccharides is higher,which has widely pharmacoloyicai activity-This paper revieweh poCsaccharidcs from Ganoberma lucidum which provideh the basis for beUer development and utilization oZ Ganoberma lucidum.Key words:Ganoberma lucidum；poCsaccharidcs:extraction Wchnoloay,proyress灵芝为多孔菌科植物赤芝Ganoberma lucidum（Leyss.ex Fr.1Karst或紫芝Ganoberma pnenso Zhao,Xu et Zhang的干燥子实体。

灵芝多糖的复合酶法提取工艺优化

江苏 盐城 224051冤
摘 要院以灵芝子实体为原料袁采用复合酶法渊 纤维素酶尧半纤维素酶尧木瓜蛋白酶冤 提取灵芝多糖袁并分析工艺条件对 多糖提取率的影响遥在正交试验确定复合酶比例的基础上袁采用响应面法对复合酶法提取灵芝多糖的提取条件进行 了优化袁得到最优工艺条件遥研究结果表明袁复合酶比例为院纤维素酶 3.5 % 尧半 纤维素 酶 4.0 % 尧木 瓜蛋 白酶 3.0 % 曰最佳酶解提取条件为院酶解处理 pH 值尧温度和时间分别为 5.70尧50 益和 81 m in袁在此条件下灵芝多糖的提取 率为 3.73 % 遥 关键词院灵芝多糖曰复合酶曰提取率曰响应面法曰工艺优化
灵 芝渊 G anoderm a Lucidum 冤 袁 又 名 赤 芝 尧 红 芝 尧 丹 芝尧瑞草等袁是担子菌纲尧多孔菌科尧灵芝属渊 G anoder原 m a冤 真菌袁常用其子实体袁是一种药用真菌ห้องสมุดไป่ตู้1]遥 灵芝在我 国有上千年的药用历史袁富含灵芝多糖尧三萜尧甾醇尧蛋 白质尧不饱和脂肪酸尧维生素尧矿质元素等多种生物活 性物质和营养物质遥 其中袁灵芝多糖是灵芝的主要活
引文格式院 丁霄霄袁李凤伟袁商曰玲袁等.灵芝多糖的复合酶法提取工艺优化[J].食品研究与开发袁2020袁 41渊 5冤 院34-39袁53 D IN G X iaoxiao袁 LI Fengwei袁 SH A N G Y ueling袁 etal.O ptim ization ofE xtraction Technology ofG anoderm a lucidum Polysac原 charide by E nzym e Com plex[J].Food R esearch and D evelopm ent袁2020袁41渊 5冤 院34-39袁53

灵芝多糖快速提取工艺

正交实验法优化灵芝多糖快速提取工艺目的: 对灵芝多糖的快速提取工艺方法进行了优化，为工业化生产提供可靠的实验数据和理论依据。

方法: 采用正交试验设计提取方法，氧化酶反应比色法测定多糖含量。

结果最佳提取工艺为A3B2C3。

影响因素的大小依次为：脉冲数、料液比、电场强度。

此法提取的灵芝中多糖含量为0.416% ，得膏率达6.23%。

结论: 本提取工艺可行，经济、省时、回收率高。

灵芝提取物含有灵芝多糖、三萜类、蛋白质、微量元素、氨基酸等成分。

多糖能强化人体的免疫系统，是灵芝治疗各种疾病的主要成分[1]。

灵芝多糖是灵芝中最有效的成分之一。

因此，也特别受到医药科技工作者的重视，研究报道也最多。

现知灵芝多糖有广泛的药理活性，能提高机体免疫力、提高机体耐缺氧能力、消除自由基、抑制肿瘤、抗辐射、延长寿命等。

灵芝多糖的提取方法多为加热浸提或超声提取等，费时、费力，耗能较大。

本试验以灵芝多糖和浸膏得率为指标，采用正交试验法优化高频电场提取工艺，具有快速、节能、低温提取等特点。

1 仪器与试药1.1 仪器LDT-100/4-25.2型中药高压脉冲电场提取装置（长春华迪生物科技开发有限公司）；OSB-2000旋转蒸发器（日本东京理化株式会社）；电子天平ALC-210.4（Sartorius group）；DZKW-D恒温数显水浴锅（河北黄骅市航天仪器厂）；101-3C型烘箱（上海实验仪器厂）；754型紫外可见分光光度计（山东高密彩虹分析仪器有限公司）1.2 试药灵芝购于吉林市，经中国农业科学院特产研究所常维春研究员鉴定为赤芝；所用试剂均为分析纯。

2 方法与结果2.1 正交实验2.1.1 因素水平设计从安全性和灵芝多糖的特性考虑，采用水为提取溶剂；由于是连续流动进样提取，不需考虑提取温度、提取时间和提取次数的影响；又因为流速与脉冲数成相关，所以影110响提取的因素主要有：电场强度、脉冲数、料液比。

采用L9(34)正交表优化提取条件，重点考察上述3个因素，以浸膏得率和灵芝多糖为考察指标，见表1。

灵芝多糖提取工艺研究

Advances in Microbiology 微生物前沿, 2018, 7(1), 26-37Published Online March 2018 in Hans. /journal/ambhttps:///10.12677/amb.2018.71004Extraction Process of Ganoderma lucidumPolysaccharidesYuantao Yin, Qingzhi Yao*College of Life Science, Inner Mongolia Agriculture University, Huhhot Inner MongoliaReceived: Mar. 5th, 2018; accepted: Mar. 16th, 2018; published: Mar. 23rd, 2018AbstractIn this paper, the optimum extraction process of two kinds of Ganoderma lucidum polysaccharide was studied, and the content of two kinds of Ganoderma lucidum polysaccharide was compared. The hot water extraction method is used to study the conditions of extracting polysaccharides from Ganoderma lucidum. With taking the polysaccharide yield as the evaluation index, the single factor test and L18(35) orthogonal test are used to examine the effect of the extraction ratio, pH value, extraction tem-perature, ethanol concentration and extraction time on the yield of Ganoderma lucidum polysaccha-rides. The optimum processing conditions for Ganoderma lucidum polysaccharides extraction with hot water are determined as that of extraction ratio 1:40, pH 7.5, extraction temperature 90˚C, extraction time 1.5 h, and ethanol concentration 90%. The content of Ganoderma lucidum polysaccharide was determined by Sevage method with the removal of free protein and 3,5-Dinitrosalicylic acid (DNS).KeywordsGanoderma, Polysaccharide, Extraction, Hot Water Extraction灵芝多糖提取工艺研究殷远滔，姚庆智*内蒙古农业大学生命科学学院，内蒙古呼和浩特收稿日期：2018年3月5日；录用日期：2018年3月16日；发布日期：2018年3月23日摘要本文主要研究了两种灵芝多糖的最佳提取工艺，比较两种灵芝多糖含量的不同。

灵芝多糖微波辅助提取工艺及其模型的研究

ｍ ｉｒ ｗ ａ ｅ ｘｔ ａ ｔｏ ｃ ｏ ｖ ｅ ｒ ｃ ｉ ｎ ｈａ ｓ ｖｅ ａ ｒ ｍ ａ ｋａ ｅ ｄ ａ ｔ ｇ ｓ ｄ ｅ ｒｌ ｅ ｒ ｂｌ ａ ｖ ｎ ａ ｅ ｗ ｉｈ ｈｏ ｔ ｒ ｘ ｒ ｃ ｉ ｔｍ ｅ， ｌ ｓ ｔ ｓ ｒ ｅ ｅ ｔ ａ ｔｏｎ ｉ ｅｓ ｓ ｌ ｎｔａ ｉ ｈｅ ｘ ｒ ｃ ｉ ｎ ｒ ｔ ． ｏ ｖｅ ｎｄ ｈ ｇ ｒｅ ｔ ａ ｔｏ ａ ｅ
ｆ ｏ Ｇａｎ ｄｅ ｍ ａ ｌ ｃ ｄｕ ｒ ｍ ａ ｒ ｕ ｉ ｍ ｎ ｔ ｏ ｅ ａ ｄ ｉｓｍ ｄ ｌ
ＨＵ ｉ ｇ Ｌ ｎ ，Ｈ Ｅ Ｊｎ ｚ ｅ ｉ—ｈ ，ＬＩ Ｂ ｎ ～ ｉ ＵＮ ｉｌｎ Ｎ ｉ ｇｙ ，Ｓ Ｐｅ—ｏ ｇ
（ ｏｌ ｅＯ ｉｌｇ ｎ ｎ ｉ ｎ ｎ ａ Ｅ ｇｎ ｅｉｇ ｈ ｊ ｎ ｉｅｓ ｙ ｏ ｅ ｈ ｏｏ ｙ Ｃ ｌ ｇ ｆ ｏｏ ｙａ ｄＥ ｖｒ ｍｅ ｔ ｌ ｎ ｉ ｅｒｎ ，Ｚ ｅ ａ ｇ Ｕｎｖ ｒ ｉ ｆＴ ｃ ｎ ｌｇ ，Ｈａ ｇ ｈ ｕ ３ ０ １ ，Ｃ ｉａ ｅ Ｂ ｏ ｉ ｔ ｎ ｚ ｏ １ ０ ４ ｈｎ ）
文 献标 识 码 ： Ａ
文 章 编 号 ：０ ６４ ０ （ ０ １０ — １ ００ １ ０ —３ ３ ２ １ ） ２０ ４ －６
Ｏｐ ｉ ｉ ａ ｉ ｎ ｏ ｉ ｒ ｗａ ｅ ｅ ｔ ａ ｔｏ ｅ ｈ ｉ ｓ ｏ ｌ ｓ ｃ ｈａ ｉ ｅ ｔｍ ｚ ｔｏ ｆｍ ｃ ｏ ｖ ｘ ｒ ｃ ｉ ｎ ｔｃ ｎ ｃ ｆｐＯ ｙ ａ ｃ ｒ ｄ ｓ
胡 灵 。 晋 浙 。 炳 谊 ， 培 龙 何 林 孙
（ 江工 业 大 学 生 物 与 环 境 工程 学 院 ， 江 杭 州 ３０ ３ ） 浙 浙 １０ ２
摘 要 ： 用微 波 辅 助 技 术 提 取 灵 芝 多糖 ， 用 响 应 面 分 析 法 （ Ｍ ） 化 提 取 灵 芝 多 糖 工 艺．以提 取 利 采 ＲＳ 优
  1. 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
  2. 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
  3. 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。

·218·
2009 年 第 34 卷 第 6 期
食品科技
FOOD SCIENCE AND TECHNOLOGY
提取物与应用
pH4.5，酶浓度 0.5%，时间 80 min 时，酶解温度
选择 20、30、40、50、60 ℃。酶解温度对提取多
糖含量的影响结果见图 3。
多糖含量/(mg/100 mL)
2 结果与分析
2.1 醇沉法提取灵芝发酵液中多糖 共进行 4 次重复性实验，测定灵芝发酵液中
多糖含量，结果见表 1。
表 1 醇沉法提取灵芝发酵液中多糖的含量
样品
多糖/(mg/ 100 mL)
Ⅰ 150.23
Ⅱ
Ⅲ
Ⅳ 平均
149.18 155.19 154.23 152.21
从表 1 可以看出，醇沉法提取灵芝发酵液中 多糖的含量平均为 152.21 mg/100 mL。
纤维素酶 194.33 198.76 199.39
197.49
果胶酶 169.86 162.45 165.19
165.83
植物蛋白水 解酶
174.23
177.18 179.19
176.87
2.3 酶法与乙醇沉淀法提取灵芝多糖的比较
将同一摇瓶中灵芝发酵液三等分，1/3 发酵液
用纤维素酶法水解，1/3 用醇沉法提取，1/3 用纤 维素酶法加乙醇沉淀法提取多糖，结果见图 5。
多糖含量/(mg/100 mL)
200
180
160
140
120
100
80
纤维素酶
60
果胶酶
40 20
植物蛋白 水解
0
3 3.5 4 4. 5 5 5.5 6 6.5 7
pH 值
图 4 pH 对灵 pH 为 5.0 时 多糖含量最高，为 198.76 mg/100 mL，因此选择 纤维素酶最适 pH 为 5.0；果胶酶和植物蛋白水解 酶pH 为 4.5 时多糖含量最高，分别为 165.72 mg/100 mL 和 173.45 mg/100 mL，因此选择果胶酶和植物 蛋白水解酶最适 pH 为 4.5。 2.2.5 重复性实验
lucidum in this paper. The technic conditions of polysaccharide extraction were researched. The results showed that the optimum polysaccharide extraction conditions using cellulase was as follows: the amount of cellulase was 0.5% , hydrolysis time was 80 min, hydrolysis temperature was 55 ℃ , pH was 5.0, the polysaccharide content was 196.50 mg/100 mL. Using cellulase and alcohol-extraction method to extract polysaccharides and the amount of extraction was 211.21 mg/100 mL. The extraction rate was raised highly.
(Food Institute of Technology, Xuzhou Institute of Technology, Xuzhou 221008)
Abstract: Alcohol method and enzymatic method were used to extract polysaccharide from Ganoderma
维素酶提取多糖的最佳条件是：加酶量 0.5%，酶解时间 80 min，酶解温度 55 ℃，pH5.0，多糖
含量为 196.50 mg/100 mL。采用纤维素酶加乙醇沉淀法提取，多糖含量为 211.21 mg/100 mL。灵
芝多糖的提取率显著提高。
关键词： 酶法；提取；灵芝；多糖
中图分类号： TQ 929+2
200
180
160
140
120
100
80
纤维素酶
60
果胶酶
40
植物蛋白水解酶
20
0
15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 70
温度/℃ 图 3 酶解温度对灵芝多糖提取的影响
从图 3 可以看出，纤维素酶和植物蛋白水解 酶酶解温度为 55 ℃时，多糖含量最高，分别为 192.56 mg/100 mL 和 169.87 mg/100 mL，因此选择 纤维素酶和植物蛋白水解酶最适反应温度为 55 ℃； 果胶酶酶解温度为 40 ℃时，多糖含量最高，为 163.56 mg/100 mL，因此选择果胶酶最适反应温度 为 40 ℃。 2.2.4 pH 对多糖提取的影响 控制纤维素酶酶浓 度 0.5%，时间 80 min，温度 55 ℃时， pH 值选择 3.5、 4.0、 5.0、 6.0； 果 胶 酶 和 植 物 蛋 白 水 解 酶 酶 浓度分别为 0.5%、1.0%，时间分别为 80、60 min， 温 度 分 别 为 40、 55 ℃ 时 ， pH 值 选 择 3.5、 4.5、 5.5、6.5。pH 对提取多糖含量的影响结果见图 4。
Key words: enzymatic method; extraction; Ganoderma lucidum; polysaccharide
灵芝(Ganoderma lucidum)是我国医学宝库中的 一味珍贵中药，含有多种有效药用成分，其中灵 芝多糖是一种非特异性免疫刺激剂，具有强化人 体免疫功能、抗肿瘤、抗衰老及清除自由基等生 理功能[1-3]。灵芝多糖的提取方法有水提法[4]、碱提 法、醇提法和酶提法等[5-7]，其中酶提法是利用酶 对细胞结构的破坏作用，使存在于细胞内部的多 糖释放出来，从而提高了多糖的得率。本文采用 纤维素酶、果胶酶和植物蛋白水解酶对灵芝进行 水解作用，研究灵芝多糖的最佳提取工艺，并探
讨酶法加乙醇沉淀法提取灵芝多糖的效果，并进 行多糖提取方法的评价，为今后充分利用灵芝资 源提供技术支撑。
1 材料与方法
1.1 材料、 试剂与仪器 赤芝：徐州市铜山县食用菌科技开发服务中
心；原料：玉米粉、黄豆粉、马铃薯。 纤维素酶：(10 万 U/g)、果胶酶：(1.8 万 U/g)：天津
市诺奥科技发展有限公司；植物蛋白水解酶：6 万 U/
200
多糖含量/(mg/100 mL)
150
100
纤维素酶
果胶酶
50
植物蛋白水解酶
0 0 20 40 60 80 100 120 140 时间/min 图 2 酶解时间对灵芝多糖提取的影响
从图 2 可以看出，纤维素酶和果胶酶酶解时 间为 80 min 时 ，多糖 含 量 最 高 ， 分 别 为 182.05 mg/100 mL 和 158.76 mg/100 mL，因此选择纤维素 酶和果胶酶最适反应时间为 80 min；植物蛋白水 解酶酶解时间为 60 min 时，多 糖含量最高 ，为 164.89 mg/100 mL，因此选择植物蛋白水解酶最适 反应时间为 60 min。 2.2.3 酶解温度对多糖提取的影响 控制纤维素 酶和植物蛋白水解酶 pH 分别为 4.5、5.0，酶浓度 分别 0.5%、0.1%，时间分别为 80、60 min 时，酶 解 温 度 选 择 25、 35、 45、 55、 65 ℃ ； 果 胶 酶
文献标志码： A
文章编号： 1005-9989(2009)06-0217-03
Extraction of polysaccharide in Ganoderma Lucidum by enzymatic method
DONG Yu-wei, MIAO Jing-zhi, CAO Ze-hong, GAO Ming-xia, LV Zhao-qi*
2.2 酶法提取灵芝多糖的效应
2.2.1 酶浓度对多糖提取的影响 控制纤维素酶、
果胶酶和植物蛋白水解酶 pH 为 4.5、4.5 和 5.0，
酶 解 时 间 80 min， 温 度 50 ℃ ， 酶 浓 度 分 别 为
0.1%、0.5%、1.0%、2.0%、4.0%。酶浓度对提取
多糖含量的影响结果见图 1。
2009 年 第 34 卷 第 6 期
食品科技
FOOD SCIENCE AND TECHNOLOGY
提取物与应用
酶法提取灵芝多糖的工艺研究
董玉玮， 苗敬芝， 曹泽虹， 高明侠， 吕兆启 * (徐州工程学院食品工程学院，徐州 221008)
摘要： 采用酶法加乙醇沉淀法提取灵芝多糖，研究了酶法提取多糖的工艺条件。结果表明：纤
收稿日期： 2008-10-24
＊ 通讯作者
基金项目： 江苏省高校自然科学基础研究面上项目(07 KJD550202)。
作者简介： 董玉玮(1980—)，男，江苏徐州人，讲师，研究方向为食品生物技术。
·217·
提取物与应用
食品科技
FOOD SCIENCE AND TECHNOLOGY
2009 年 第 34 卷 第 6 期
g，南宁海发生物酶制品厂；其余试剂：分析纯。 PDA 斜面培养基：按照 GB4789.15 配制，用
于菌种的复苏及保存；液体摇瓶培养基：黄豆粉 3%、葡萄糖 2%、酵母膏 0.5%、KH2PO4 0.15%、 MgSO4·7H2O 0.15%、VB1 少量，pH 自然。
HYG-Ⅱ回转式恒温调速摇瓶柜：上海欣蕊自 动化设备有限公司；7200 可见分光光度计：上海 龙尼科公司；PHS- 3C 精密电子酸度计：上海天 达仪器有限公司。 1.2 方法 1.2.1 菌种培养 取一小块菌种接种于斜面培养 基上，27 ℃下培养 6 d，活化 1 次。接种活化后的 菌块于 80 mL 液体培养基中，摇瓶置于 27 ℃摇床 培养，转速 120 r/min，培养 4~5 d。 1.2.2 醇沉法提取灵芝发酵液中多糖 灵芝中发 酵液多糖所占比重最多[8]，故以发酵液中多糖为提 取对象。用两层纱布过滤发酵液，将其在 80 ℃水 浴锅浓缩成原体积的 1/5 倍，冷却后加入 5 倍体积 95%乙醇，4 ℃净置 1d 后 4000 r/min 离心 10 min， 沉淀用无水乙醇洗涤 2 次，60 ℃烘箱烘干至恒质 量，沉淀干燥得胞外粗多糖。 1.2.3 酶法提取灵芝发酵液中多糖 用两层纱布 过滤发酵液，将其置于酶的最适温度的水浴锅内， 根据上清液体积称取一定量的酶，加入缓冲液， 调节最适 pH，将酶液加入已调过 pH 的上清液中， 置于该水浴锅中酶解一定时间，移入 100 ℃水浴 锅中灭酶，4000 r/min 离心 10 min，沉淀用无水乙 醇洗涤 2 次，60 ℃烘箱烘干至恒质量，沉淀干燥 得胞外粗多糖。 1.2.4 灵芝多糖含量的测定 提取液中的多糖含 量测定采用苯酚硫酸法[9]，在 490 nm 波长下测定 吸光度值，并以提取液的 A490 nm 减去空白的 A490 nm， 表示多糖的含量。