超滤管保养和使用说明
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首页>>> 技术资料超滤管使用方法和注意事项蛋白浓缩和换Buffer通常使用的超滤管,常用Millipore的Amicon-Ultra-15超滤管(MWCO10kD)。
也有其它型号的、不同体积大小和MWCO超滤管可选,视目的蛋白的分子量与浓缩前体积、浓缩目标体积而定。
可重复使用,使用一次就扔掉太浪费。
以下是个人总结的使用方法和注意事项。
1、选择合适的超滤管,主要考虑MWCO和浓缩体积,最常见的是Ultra-15(10kD)。
到底选择多大截留分子量比较合适呢?10kDa、 5kDa、还是30kDa?通常应截留分子量不应大于目的蛋白分子量的1/3,比如目的蛋白分子量为35kDa,就可以选择10kDa截留分子量的超滤管。
若目的蛋白分子量为10kD左右,则可以用截留分子量3kD的超滤管。
认真阅读使用说明书,注意超滤膜对各种化学物质的耐受程度有所不同,表格中有。
2、新买来的超滤是干燥的,使用前加入MilliQ水,水量完全过膜,冰浴或冰箱里预冷几分钟。
然后将水倒出,即可加入蛋白液,加入的多少,以不超过管顶的白线为准。
操作要轻,加入蛋白液前,超滤管需要插在冰上预冷。
3、平衡。
质量和重心二者都要达到平衡。
注意转速和加速度不可太快,否则直接损坏超滤膜。
开始离心超滤(离心机预冷至4度)。
不同离心机的转速 rpm换算成g之后,有所不同。
具体可参阅附件里的说明书。
离心机的加速度调至最低档,减小对膜的压力。
注意,一定要等离心机达到目的转速之后,方可离开离心机,否则离心机出问题时,无法第一时间处理,后果不可预测!膜与转轴的方向根据说明书调整(角转离心机的情况是膜与轴垂直)。
在实际使用中,一般转速开的比说明书里的要低,这样可以延长离心管的使用寿命。
4、当浓缩到剩下1ml时,【取50ul国产Bradford溶液,加入10ul流穿,看有没变蓝色,以此判断超滤管是否漏掉蛋白。
如果管漏了,将上层和流穿重新倒入新管中开始超滤。
本说明仅供参考超滤离心管蛋白浓缩和换Buffer 通常会使用到超滤管,有多种不同MWCO 和处理量的型号可选,视目的蛋白的分子量与浓缩前体积、浓缩目标体积而定。
超滤离心管具有快速超滤功能,能够达到较高的浓缩系数,易于从稀释液和复杂的样本组合中进行浓缩回收。
其竖式设计以及可用的滤膜表面积能提供快速的样本处理和较高的样本回收率(通常大于90%的初始溶液),并能进行多倍浓缩。
竖式设计将溶质极化之后造成的滤膜结垢降至最低,过滤装置中的物理止滤点防止过滤器旋转过度使样本干燥和造成样本的损失。
浓缩液用移液管从过滤器的样本槽中收集,而超滤出液则收集到所提供的离心管中。
该装置可在离心机中进行。
装置未经消毒,只供一次使用(但是国内众多科研院所及科研单位的老师,都在重复使用,毕竟使用一次就扔掉太浪费。
)超滤离心管储存在15-30°C 下,保质期自生产之日起3年。
整套装置包括一个盖子、一个过滤器和一个离心管,如右图所示:一、使用方法:1预清洗:超滤离心管的过滤薄膜含有微量甘油。
如果此材料干扰分析,可用缓冲液或超纯水预清洗。
如果干扰仍然存在,用0.1M NaOH 清洗,然后用缓冲液或超纯水再次清洗后甩干。
注意:Amicon®Ultra 超滤离心管中的滤膜一旦润湿后应避免重新干燥。
若在预清洗后没有立即使用该装置,则应保持滤膜湿润,直到使用该装置为止。
瑞达恒辉恒辉恒辉瑞达恒辉瑞达瑞达恒辉2.向超滤离心管加入不超过处理量的样品。
3.将盖好盖子的超滤离心管放入离心转子中。
4.适当转速离心。
(关于旋转时间,请参见图1和图2以及表1和表2)5.如要回收浓缩后的样品,在超滤离心管底部插入一个移液管,然后左右摇摆着吸取样本,以确保完全回收。
超滤液可以保存在离心管中。
二、除盐或渗滤举例:除盐、更换缓冲液或渗滤是去除含有生物分子的溶液中的盐分或溶剂的重要方法。
可以在超滤离心管中,通过浓缩样本、然后向浓缩液加入任何所需溶剂复原至样本原始体积的方式,去除盐分或更换缓冲液。
超滤管使用方法和注意事项超滤管使用方法和注意事项蛋白浓缩和换Buffer通常使用的超滤管,常用Millipore的Amicon-Ultra-15超滤管(MWCO10kD)。
也有其它型号的、不同体积大小和MWCO超滤管可选,视目的蛋白的分子量与浓缩前体积、浓缩目标体积而定。
可重复使用,使用一次就扔掉太浪费。
以下是个人总结的使用方法和注意事项。
1、选择合适的超滤管,主要考虑MWCO和浓缩体积,最常见的是Ultra-15(10kD)。
到底选择多大截留分子量比较合适呢?10kDa、5kDa、还是30kDa?通常应截留分子量不应大于目的蛋白分子量的1/3,比如目的蛋白分子量为35kDa,就可以选择10kDa截留分子量的超滤管。
若目的蛋白分子量为10kD左右,则可以用截留分子量3kD 的超滤管。
认真阅读使用说明书,注意超滤膜对各种化学物质的耐受程度有所不同,表格中有。
2、新买来的超滤是干燥的,使用前加入MilliQ水,水量完全过膜,冰浴或冰箱里预冷几分钟。
然后将水倒出,即可加入蛋白液,加入的多少,以不超过管顶的白线为准。
操作要轻,加入蛋白液前,超滤管需要插在冰上预冷。
3、平衡。
质量和重心二者都要达到平衡。
注意转速和加速度不可太快,否则直接损坏超滤膜。
开始离心超滤(离心机预冷至4度)。
不同离心机的转速 rpm 换算成g之后,有所不同。
具体可参阅附件里的说明书。
离心机的加速度调至最低档,减小对膜的压力。
注意,一定要等离心机达到目的转速之后,方可离开离心机,否则离心机出问题时,无法第一时间处理,后果不可预测!膜与转轴的方向根据说明书调整(角转离心机的情况是膜与轴垂直)。
在实际使用中,一般转速开的比说明书里的要低,这样可以延长离心管的使用寿命。
4、当浓缩到剩下1ml时,【取50ul国产Bradford溶液,加入10ul流穿,看有没变蓝色,以此判断超滤管是否漏掉蛋白。
如果管漏了,将上层和流穿重新倒入新管中开始超滤。
要精确判断是否漏管,用5mg/ml的BSA离心10min,再取流穿,跑蛋白胶或Bradford粗测】,继续加入剩下的蛋白液浓缩(在冰上操作,防止蛋白受热),直到所有浓缩液都加完为止。
超滤系统操作维护手册超滤系统操作维护手册一、安装指南1.准备工作1.1 确认超滤系统的安装位置,并确保空间充足。
1.2 确定超滤系统的进水和出水口的位置,确保其与水源和输水管道相连通。
1.3 准备所需的安装工具和材料,如扳手、螺丝刀、密封胶等。
2.超滤系统的安装2.1 将超滤系统的主机固定在安装位置,并确保其稳固。
2.2 将进水口和出水口的配管连接到水源和输水管道上。
2.3 检查管道连接处是否密封良好,如有泄漏现象需及时处理。
3.启动与停用超滤系统3.1 启动超滤系统3.1.1 确保超滤系统已正确安装并连接好电源。
3.1.2 打开进水口的阀门,让水流进入超滤系统。
3.1.3 确认进水和出水口的连接处无任何泄漏情况。
3.1.4 打开超滤系统的电源开关,启动系统运行。
3.2 停用超滤系统3.2.1 关闭超滤系统的电源开关。
3.2.2 关闭进水口的阀门,停止水流进入系统。
3.2.3 定期清洁和维护超滤系统,并做好相应记录。
二、操作指引1.超滤系统的日常操作1.1 检查水质指示器1.1.1 定期检查超滤系统的水质指示器,确保其正常工作。
1.1.2 如发现异常,及时处理或更换水质指示器。
1.2 清洗滤芯1.2.1 根据超滤系统的使用情况,定期清洗滤芯。
1.2.2 参考超滤系统的说明书,按照指导进行滤芯的清洗步骤。
1.3 更换滤芯1.3.1 根据滤芯的使用寿命,定期更换滤芯。
1.3.2 参考超滤系统的说明书,按照指导进行滤芯的更换步骤。
2.故障排除2.1 超滤系统无法启动2.1.1 检查电源是否正常连接。
2.1.2 检查进水口的阀门是否打开。
2.1.3 检查进水和出水口的连接处是否有泄漏。
2.2 水质指示器不正常2.2.1 检查水质指示器是否损坏或未正确安装。
2.2.2 如有需要,及时更换或重新安装水质指示器。
2.3 滤芯堵塞2.3.1 检查滤芯是否需要清洗或更换。
2.3.2 根据情况,进行相应的滤芯清洗或更换操作。
超滤管使用方法和注意事项1.目的:建立超滤管标准操作规程,保证该设备的操作安全、规范。
2.适用范围:适用超滤管的操作,保养及保存。
3.责任人:仪器操作人员4.步骤4.1选择合适的超滤管, 主要考虑蛋白分子量和浓缩体积。
通常应截留分子量不应大于目的蛋白分子量的1/3。
4.2预处理4.2.1新超滤管使用前加入纯水,水量完全过膜,冰浴或冰箱里预冷几分钟。
然后将水倒出,即可加入蛋白液,加入量以不超过管顶的白线为准。
操作要轻,加入蛋白液前,超滤管需要插在冰上预冷。
4.2.2使用过的超滤管先倒出内含的乙醇,然后用纯水冲洗干净。
4.3平衡质量和重心二者都要达到平衡。
注意转速和加速度不可太快,否则直接损坏超滤膜。
开始离心超滤(离心机预冷至4度)。
离心机的加速度调至最低档,减小对膜的压力。
注意,一定要等离心机达到目的转速之后,方可离开离心机。
在实际使用中,一般转速开到4000转,这样可以延长离心管的使用寿命。
4.4 检漏当第一次离心结束后取200ulBradford溶液,加入20ul流穿,看是否变成蓝色。
如果管漏了,将上层和流穿重新倒入新管中开始超滤。
4.5浓缩继续加入剩下的蛋白液浓缩(在冰上操作,防止蛋白受热),直到所有浓缩液都加完为止。
离心过程中注意是否发生蛋白沉淀,导致堵管。
若发生沉淀,要确定沉淀的具体原因,是蛋白浓度过高还是Buffer不合适;前者可用多根超滤管同时超滤,降低浓度的办法解决,后者的方法是换不同的Buffer,直到蛋白不发生沉淀为止。
4.6 取出最终蛋白浓缩液的操作在冰上操作,用黄枪头(200ul)取,轻轻顺着边缘插入枪头,轻轻吹打、混匀蛋白液,注意不要碰到超滤膜,然后吸取浓缩液,每次吸接近200ul,直到吸完。
最后加入纯水到超滤管中,没过超滤膜,防止膜失水变干。
4.7处理及保存倒出超滤管里的水,用纯水轻轻润洗几次,【若管底有可见的蛋白沉淀,可以先加入水,然后用枪头吹打,注意不要碰到膜,吹打至沉淀悬起,然后倒掉,不可用自来水猛冲】然后加入25%乙醇5.注意事项1、注意超滤膜对各种化学物质的耐受程度有所不同2、使用过程中要冰浴,防止蛋白变性。
二、离心超滤管浓缩样品2.1 浓缩样品1、要浓缩的样品含盐量必须0.3M以上,含盐量低的样品须补加到0.3MNaCl。
2、在内管(附有3KD膜)中加入500µl样品,将内管套入外管。
3、对称放置离心管,14520rpm(即14000g)离心。
(离心5min约浓缩2倍,10min约4倍,15min约6倍,20min约8倍,30min约10倍)。
4、离心结束后,将内管倒置套在另一个干净的离心管呢,3880rpm离心min收集浓缩后的样品。
或者用移液器直接吸出内管中的样品。
2.2 浓缩管使用后的处理和保存1、使用完的浓缩管,立即加入500µl含1MNaCl的缓冲液(此缓冲液与浓缩样品的缓冲液一致),8000rpm离心20min。
2、甩净内管中的盐溶液,将内管放入超纯水中浸泡1h。
3、内管加入超纯水500µl,8000rpm离心5min。
4、甩净内管中的水,加入500µl0.2MNaOH,8000rpm离心20min。
5、甩净内管中的NaOH溶液,用超纯水再8000rpm离心5min。
6、甩净内管中的水,放入含0.2-0.5‰NaN3的生理盐水中。
7、外管用自来水洗净后,用超纯水冲洗干净,晾干。
超滤管使用注意事项2012-06-06 18:12:28| 分类:默认分类| 标签:|字号大中小订阅蛋白浓缩和换Buffer通常使用的超滤管,常用Millipore的Amicon-Ultra-15超滤管(MWCO10kD)。
也有其它型号的、不同体积大小和MWCO超滤管可选,视目的蛋白的分子量与浓缩前体积、浓缩目标体积而定。
可重复使用,使用一次就扔掉太浪费。
以下是个人总结的使用方法和注意事项。
1、选择合适的超滤管,主要考虑MWCO和浓缩体积,最常见的是Ultra-15(10kD)。
到底选择多大截留分子量比较合适呢?10kDa、5kDa、还是30kDa?通常应截留分子量不应大于目的蛋白分子量的1/3,比如目的蛋白分子量为35kDa,就可以选择10kDa截留分子量的超滤管。
超滤设备安全操作及保养规程前言随着人们对水质健康和环保意识的不断提高,超滤设备已经成为一种越来越受欢迎的净水设备,其通过物理滤除水中的大分子物质和微生物,达到了极高的净水效果。
但是,如何安全操作和保养超滤设备,使其始终保持高效、健康运行,确保水质卫生,成为人们关心的问题。
本文主要介绍超滤设备的安全操作及日常保养规程,希望能为用户提供帮助,让您的超滤设备始终处于最佳状态。
安全操作规程1. 安装前的准备工作在安装超滤设备时,需事先规划好运输、站位和安装操作。
具体包括:•根据设计图纸确认安装地点和设备安装方向•根据超滤设备尺寸及厂家要求确定运输方式和车型•操作人员需持有特种设备作业证或经过相关培训后方可进行安装操作2. 安装时的注意事项在超滤设备安装过程中,需遵守以下安全操作规程:•操作人员需穿戴符合规范的安全防护装备,包括手套、眼罩、口罩等•操作人员需按照厂家提供的安装图纸进行操作,确保设备各功能单元连接正确,确保密封性•确认设备是否固定牢固,防止因地震等外力导致设备移位或倾倒•设备安装中不得进行烟火作业3. 操作时的注意事项超滤设备在长期使用中还需按照以下规程进行操作:•在加水前需确认进水管和出水管是否连接正确、阀门是否打开•未清洗的超滤设备,需排放5-10分钟的进水水流,再连接出水管后方可使用•在清洗设备时,需先关闭设备电源并排出设备中的水,按照厂家提供的清洗操作流程及方案进行清洗、消毒等操作•未经厂家许可,不得自行擅自拆卸设备或更换零部件•在异常情况下,需及时关闭设备电源并通知厂家相关技术人员进行检修处理日常保养规程超滤设备在日常使用中,还需进行以下保养维护:1. 定期清洗消毒超滤设备长期使用后,会产生水垢、污垢、细菌等问题,影响净水效果及设备寿命。
因此需要定期清洗消毒。
具体操作规程如下:•按照厂家提供的清洗操作流程及方案进行清洗、消毒等操作•定期替换消耗品,如滤芯等•清洗时需先关闭设备电源并排出设备中的水,以保证操作安全和清洗效果2. 定期检查零部件超滤设备包括投放水接口、进水管、出水管、压力表、电器元件以及盘管等零部件。
超滤系统安全操作及保养规程超滤系统是一种高效的水处理设备,能够彻底去除水中的微生物、杂质、重金属等有害物质,提供安全健康的用水环境。
然而,若没有正确的操作和保养,超滤系统也会面临一系列的问题,影响其使用寿命和水质效果。
因此,本文将介绍超滤系统的安全操作及保养规程。
超滤系统安全操作规程1.在安装和操作前,请仔细阅读设备的使用手册,并按规定进行安装和调试。
2.在操作过程中,应使用专业的工具和配件,避免使用不符合要求的设备,以免发生安全事故。
3.超滤系统应定时清洗和消毒,以保证滤芯的正常运转状态。
关闭超滤系统前,请先关闭出水阀,以便更换或清洗滤芯。
4.禁止在超滤系统运行时进行其他操作,不要随意打开或更换滤芯和滤网等配件,以免影响滤芯的使用寿命和水质效果。
5.在切断电源、更换配件和进行维护时,务必切断电源或关掉阀门,防止发生电击或漏水等意外事故。
6.若发现水流明显减小或水质恶化等异常情况,请立即停止使用并进行检测和维护。
7.经常查看设备的运转情况,发现故障及时维修和更换配件。
超滤系统保养规程1.滤芯清洗:超滤系统的滤芯应定期清洗,以保证其滤芯的运行效果。
清洗滤芯前,请先关闭进水阀,拆卸滤芯后,用水冲洗滤芯表面即可。
2.滤网清洗:超滤系统的进水口一般都配有滤网,可以有效过滤水中较大的杂质,避免对滤芯的阻塞和损伤。
滤网应定期清洗和更换。
3.消毒操作:经常使用的超滤系统应每3个月进行消毒操作,保证水质的安全和卫生。
4.定期更换滤芯:超滤系统的滤芯使用寿命一般为1-2年。
若超过使用寿命而未及时更换,可能影响滤芯的效果和使用寿命。
5.定期维护:定期对超滤系统进行维护保养,可提高设备的使用寿命,保证水质的卫生和安全。
总之,超滤系统作为一种高效的水处理设备,在使用过程中应保持安全注意事项,定期清洗和消毒,及时更换滤芯和配件,以免影响其使用寿命和水质效果。
50ml超滤管的使用方法一、引言50ml超滤管是一种常用于生物分离和富集的实验工具。
它的使用方法简单易懂,但需要注意一些细节,以确保实验的准确性和可靠性。
本文将详细介绍50ml超滤管的使用方法,帮助读者更好地掌握这一实验技术。
二、准备工作在使用50ml超滤管之前,需要进行一些准备工作:1. 确保实验室台面整洁干净,以防污染样品。
2. 检查超滤管是否完整无损。
3. 准备好所需的培养基、缓冲液等实验用品。
三、使用步骤1. 将50ml超滤管垂直放置于支架上,保持稳定。
2. 打开超滤管的盖子,将待处理的样品(如细胞悬液)倒入超滤管中。
注意不要超过超滤管的最大容量,一般为50ml。
3. 盖好超滤管的盖子,确保盖子与超滤管的接触紧密,以防样品泄漏。
4. 将超滤管放入离心机中,并设置合适的离心参数。
根据样品的离心要求,选择适当的转速和离心时间。
一般来说,低速离心(1000-2000rpm)可用于去除大分子物质,高速离心(3000-5000rpm)可用于富集目标分子。
5. 离心结束后,取出超滤管。
注意不要晃动或倾斜超滤管,以避免样品的混合。
6. 打开超滤管的盖子,将上层液体倒掉。
这些上层液体可能含有未被过滤的杂质或废弃物。
7. 关闭超滤管的盖子,将超滤管放回离心机中进行再次离心。
这样可以确保样品中的目标分子更好地被富集。
8. 离心结束后,取出超滤管,将上层液体倒掉。
重复这一步骤,直到上层液体基本清澈为止。
9. 最后,将超滤管中富集的目标分子转移到另一个容器中,即可完成50ml超滤管的使用。
四、注意事项1. 在操作过程中,要注意保持实验环境的洁净,以避免样品被污染。
2. 在离心时,要确保超滤管的盖子盖紧,以防止样品泄漏。
3. 在倒掉上层液体时,要小心谨慎,以免溅出样品或误倒。
4. 使用完毕后,要及时清洗超滤管,避免样品残留导致下次使用时的污染。
五、总结50ml超滤管是一种常用于生物分离和富集的实验工具。
通过上述步骤,我们可以轻松地使用50ml超滤管进行样品的超滤和富集。
超滤管的保养和使用方法
超滤管的作用: 1)浓缩;2)脱盐;3)换Buffer;4)具有部分纯化的效果.
1、新的超滤管可以直接使用,不需要其他处理;
2、超滤管不能高温灭菌;
3、换浓缩蛋白时超滤管的处理:
超滤管可以重复使用,用0.1M的NaOH浸泡1-2h,用水清洗,再在离心机上用相关溶液(灭菌水或PBS)清洗3次,即可用于浓缩新的蛋白;
4、平常放臵超滤管的处理:
经常使用的超滤管,在用0.1M的NaOH浸泡1-2h,用水清洗,用灭菌水浸泡,务必保持滤膜润湿,不能长菌;
5、长时间放臵超滤管的处理:
长时间不使用的超滤管,在用0.1M的NaOH浸泡1-2h,用水清洗,用20%的乙醇浸泡保存,务必保持滤膜润湿,不能长菌;
6、超滤管使用的离心转速:
离心转速一般采用4000rpm(一般建议为3000g,最大不能超过4000g)离心5-8分钟,即可将4ml样品浓缩至1ml以下至几十微升;速度过高, 目的蛋白会离下,导致目的蛋白丢失;速度过低,耗时,工效低;
7、枪头伸入超滤管中时注意事项
加蛋白液或Buffer到超滤管时,可以用蓝枪头; 但从超滤管底吸取浓缩好的目的蛋白时,必须用黄枪头;用枪头伸入超滤管中时, 必须防止碰到滤膜,以免戳破滤膜;
8、减少超滤管对蛋白的吸附损失
超滤管的滤膜能吸附蛋白, 会导致目的蛋白减少可达30%左右;为减少蛋白损失,在吸尽目的蛋白液后, 再用蛋白Buffer吹洗超滤管的管底,可以将滤膜吸附的蛋白洗下大部分而减少目的蛋白的损失;如纯化的蛋白较浓时,注意浓缩的体积不可过小; 一般无论如何离心,底部会保留有200 µl左右的蛋白液;
9、如何界定超滤管失败
在正常使用下,滤膜没有被戳破时,浓缩蛋白液中不含有蛋白或量很低(包括目的蛋白),而第一次的滤下液中含有目的蛋白,则说明滤膜失效,需要换新的超滤管.
备注:
不同MWCO的离心转速要求不同。
当然转速越大,时间越长,透过就越多.
而且速度也和料液性质有关,一般只能根据你的蛋白溶液进行试验,看flux是多少,而且随着透过体积增加,flux会逐渐降低.
以使其达到想要的浓缩倍数.sartorius的离心管保证有最小体积不会滤干, 具体要看不同的厂家.
离心条件说明书上应该有推荐值,一般至少要3000g以上, 注意控制过程中的温度以保证蛋白活性.
可以反复用几次,次数多了就不行了,管和膜都可能会破.
不用的时候,20% EtOH保存以免长菌。