南京农业大学动物繁殖学课件ch09

1.供、受体的选择
1.1 供体母畜的选择

供体应是良种，而且为性状表现优秀、具有较高 育种价值与遗传优势的个体；

供体应健康无病，膘情中等偏上，年龄以青壮年 为佳；
供体生殖机能应处在较高水平。既无难产、流产 等繁殖病史，也无子宫卵巢疾病，超排处理前应 有两个或两个以上的正常情期。

1.2 受体母畜的选择
撤除海绵栓后，孕酮的抑制作用消失，卵巢上即
有卵泡发育，通常在2-3天内发情。

为了提高排卵的效率，在孕激素处理结束的前一 天，可以给予小剂量的FSH。 此法费用低，但处理时间长。

4.胚胎的收集
4.1 冲卵液和保存液的制作

冲卵液有很多种，目前最常用的为含5%犊牛血清 的杜氏磷酸盐缓冲液（D-PBS），也可用于体外 短期保存胚胎。 保存时间长或体外培养多用M-199液。
国际间胚胎贸易非常活跃，早在1994年，
全世界仅胚胎移植牛就已超过350,000头，
其中进出口的胚胎约占总数的10%。
近年来，国际上胚胎的产量和贸易量则成
倍增长。
流动实验车（新疆）
2.发展前景
•我国胚胎移植技术已较成熟，基本技术队伍初步形成。 •农业产业结构的调整，畜牧业发展形势一片大好；

而且要从精子中重新构建一个已经灭迹了的群体，
需要级进许多世代，而通过胚胎再构建一个群体，
仅在一个世代内即可实现。

胚胎冷冻保种不仅成本低廉、方法简单，而且能避 免活畜保种因疾病、自然灾害或基因漂变造成种质 消亡的风险。
5.诱发单胎动物产双胎
性别控制
避免异性孪生不育症
6.研究手段
目前，胚胎工程技术中应用最多的是胚胎移

一般选用价格低廉、生产性能比较低的同种母畜，达到配
种年龄和体型；

要具有良好的健康状态，体型与膘情中上等，初产或经产 青壮年母畜。检疫和疫苗接种与供体相同；

应具有良好的繁殖性能，既无难产、流产等繁殖病史，也 无子宫卵巢疾病，移植胚胎前应有两个或两个以上的正常
情期，也不能与公畜同群。
2.供体的超数排卵与人工授精
枚，一头良种母牛每年能生产可用胚胎25-30枚，
移植到受体内能获得12-15头犊牛，而在自然状态 下，一头母牛平均每年只能获得一头犊牛。
JIVET技术简介
JIVET ： juvenile in vitro embryo transfer 幼畜胚胎体外生产与移植
JIVET – how is it done?
Lambs
Hormone treatment (age 4-8 weeks) Eggs aspirated
Embryos transferred
Eggs matured Eggs fertilised
激素诱导后的犊牛卵巢
•充分利用优良母畜的遗传资源(多) •缩短世代间隔，加快育种进程 （快）
2.加速育种进程
植技术，无论是转基因胚胎还是克隆等获得
的胚胎，最后都必须经胚胎移植才能获得后
代，胚胎移植是胚胎工程的最后一道“工
序”。因此，可以说它是胚胎工程技术的基
础。
胚胎移植技术与其他繁育技术的关系
胚胎移植技术在整个动物繁育新技术的体系中是一
项基础性的、关键的技术
核移植技术 胚胎分割技术 发情控制与超 数排卵技术 嵌合体技术 卵子体外成熟， 体外受精 胚 胎 移 植 干 细 胞 技 术
2.理论基础


着床前早期胚胎的游离状态；
不同个体（物种）早期胚胎发 育内环境相似； 不会发生免疫排斥

发挥优良母畜繁殖潜力。 羊每年自然繁殖：2－3只，胚胎移植：10－15只。
山羊繁殖
供体生产胚胎 受体妊娠分娩
后
代
3. 胚胎移植历史
1890年 1934年 1949年 1951年 1951年 1970年 英国第一次兔获得胚胎移植成功 绵羊 山羊 猪 牛 马
3.1 定义

利用某些外源激素人为控制并调整一群母畜发情
周期的过程,使之在预定的时间内集中发情,以便
有计划地合理组织胚胎移植所进行的同期化处理
方法,也称同步发情。
3.2 同期发情方法
缩短黄体期的前列腺素法(PG法) 延长黄体期的孕酮法
3.2.1 前列腺素处理法
PGF2α有溶解黄体的作用，从而引起发情，所 以只对卵巢上存在黄体的受体有效。 在情期第9天以后，注射PGF2α，常可在注射后 2-3天内发情(WHY?)。
a.冲卵液 b.硬膜外麻醉 c.插入子宫中的Foley管 d.子宫颈
5.胚胎的检查和评定

子宫角回收的液体较多，可以通过专用胚胎漏
斗除去多余的冲卵液，在连续变倍解剖显微镜
（实体显微镜）下进行检卵；

胚胎的质量评定：主要采用形态学方法，优质
胚胎才能用于进行胚胎冷冻或移植。
5.1 胚胎的分级标准

A级;形态完整,轮廓清晰,呈球形,分裂球大小 均匀,透明带适中；

4.2 回收过程

牛适宜于5-7日龄胚胎;

现均采用二通管非手术采卵法：用直肠把握子 宫颈法插入带有探针的二通管直至一侧子宫角 的基部，通过打气孔注入8--10ml空气,抽出探 针，通过中心管道反复注入--回收冲卵液,连续 5--6次。同样方法冲另一侧子宫角。
PBS
子宫颈
子宫角
集卵杯
卵巢
牛的非手术法回收胚胎

发情后8－12小时配种，间隔12小时再配种一次。
供体牛的超排方案

在发情周期第10、11、12、13天每头牛分别肌注 FSH 160、140、110、90 单位（共500IU)，每天 分两次注射，在第12天注射FSH的同时肌注PG，上 午2支/头，下午1支/头。

发情后供体AI或配种2-3次。
3.受体的同期发情


B级;轮廓清晰,色调和细胞密度良好；
C级;轮廓不清楚,色调发暗,结构较松散,游离 的细胞和液胞较多； D级;轮廓模糊,色调暗,结构松散,碎片细胞和 液泡很多。

5.2 不同发育阶段的正常胚胎
5.3 未受精卵或异常胚胎
5.4 正常胚胎的形态
2-cell
4-cell
8-cell
16-cell

对于不能确定发情周期的受体，可采用间隔 10-12天的两次注射法。
此方法方便可靠，但费用较高。 为何要进行两次注射？

母牛发情周期
s
第7-17天，对前列腺素（PG）有反应
3.2.2 孕激素处理法

孕酮能够抑制腺垂体释放FSH，每日肌注或口服孕
酮，或经阴道海绵栓给予孕酮或其类似物，一般
处理12-18天后，可以抑制卵泡发育。停止处理或

在胚胎移植中，供体母畜职能是生产遗传性能优秀
的胚胎，而胚胎后期发育完全可以由遗传性能一般
的代孕受体来完成。

母畜再通过促性腺激素处理后，一个发情周期中生
产的胚胎数将比自然状态多几倍到几十倍，通过胚 胎移植其繁殖力可提高几十甚至是几百倍。

以奶牛为例，按照目前的技术水平，供体母牛每隔
60d可进行超排处理一次，每次能获得可用胚胎4-5
1975年1月
1980年代
美国丹佛召开第一届国际胚胎移植学会
欧洲使用MOET 奶牛育种
二、 胚胎移植的意义
充分发挥优良母畜的繁殖潜力，扩大
良种畜群 加速育种进程 简化良种引进方法 保存品种资源 诱发单胎动物产双胎 研究手段
配子与胚胎生物工程
1.充分发挥优良母畜的繁殖 潜力，扩大良种畜群

Follicular (egg) development, hormonal
changes,
endometrial (uterine lining) changes
2.移植的时间要适宜
胚胎收集与移植的时间不能超过周期黄体的
寿命，因此，胚胎的收集时间不能超过发情
配种后第7天，最好是在发情配种后的第5-7
第九章 配子与胚胎生物工程 －胚胎移植
本章内容
胚胎移植技术概述 胚胎移植的意义 国内外发展概况 胚胎移植的基本原则 牛胚胎移植操作步骤 山羊胚胎移植概述

八 戒 飞 抵 岛 城 跨 国 娶 妻

加拿大846
头猪运抵青
岛，价值 190万美元
（2007-10-17）

成本高，时 间长，可用
2.1 超排定义

在母畜（供体）发情周期的某一时期，用外源性
的促性腺激素处理，从而促使其卵巢上较正常有 更多个卵泡同时发育，并且能够同时或准同时排 出多个具有受精能力的卵子，这一技术称为超数
排卵，筒称“超排”。
2.2 超数排卵方法

牛有PG法和CIDA法两种； 发情后9－13天开始； 常用的激素为FSH；注射方法一般是连续4d递减注 射,每天2次,间隔12小时（半衰期短）；
时间可缩短40％，生产性状的年遗传进展比 常规的人工授精提高20％左右。
如果在青年母牛或母羊中应用活体采卵和胚
胎移植技术，年遗传进展可提高30％-70％。
3.简化良种引进方法

活畜引进不仅价格高、运输不便、检疫和隔离程序 复杂，而且还存在风土驯化的问题。
胚胎移植与胚胎冷冻技术相结合后，良种的引进可 简化为冷冻胚胎的引进，不仅运输方便、检疫程序 简单、成本低廉，而且后代对引种地生态环境适应 性和抗病力增强。 目前，牛羊胚胎移植与冷冻技术已成为国际、地区 间良种遗传资源交流廉价而简便的方式。


4.保存品种资源

结合胚胎冷冻技术为可保存国家或地区间特有的家
畜品种资源，建立种质资源库提供新的技术手段，