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培养基的配制实验报告总结1. 引言嘿，大家好！今天咱们要聊聊那个听上去就像是科学家在做魔法的“培养基配制实验”。
这玩意儿其实没那么复杂，反倒像是在厨房里调配新口味的食材。
不过，这回咱们不是给自己做美食，而是给细菌和细胞提供一个“家”，让它们在里面快乐地成长。
相信我，看到它们在培养基里欢快地生长，简直就像看见自家植物茁壮成长一样，心里美滋滋的。
2. 培养基的概念2.1 什么是培养基？培养基简单来说就是一种“营养餐”，提供给微生物、细胞等生物体所需的营养成分。
就像你每天需要吃饭喝水，细菌也需要这些东西才能在实验室里“茁壮成长”。
培养基通常会包含水、碳源、氮源，还有维生素和矿物质，让它们能尽情“聚会”。
2.2 为什么要配制培养基？配制培养基的目的可谓是“事半功倍”。
想要研究细菌的生活习性，必须先把它们放在一个舒适的环境里，不然怎么能观察到它们的真实状态呢？而且，不同的细菌需求也各不相同，咱们得“因材施教”，给它们量身定做的培养基才行。
这就好比给孩子们挑选合适的书籍，才能激发他们的兴趣。
3. 实验步骤3.1 准备工作首先，咱们得准备好一些工具，就像厨房里的锅碗瓢盆。
这包括量筒、试管、烧杯和培养皿等等。
还有各种试剂，比如琼脂、葡萄糖和氮源。
这些都得齐全，别在关键时刻“掉链子”，不然就得从头再来。
3.2 配制过程接下来，咱们就要进入“调料”环节。
先把适量的琼脂粉和水混合，慢慢加热至溶解，别急，慢工出细活。
等到琼脂完全融化后，咱们就可以加入碳源和氮源，搅拌均匀。
这个过程就像是在给一锅汤调味，得尝尝味道如何，适合我们的“客人”吗？等到这些成分都搞定后，就把培养基倒入消过毒的培养皿里，放凉。
别着急，凉快了再用，不然就像热汤一样，细菌一进去就“烫”得不行，何谈生长呢？等它冷却后，咱们就可以进行接种实验，观察这些“小家伙”在培养基里的表现。
4. 实验观察与结果4.1 生长情况终于到了最期待的时刻！几天后打开培养皿，哇塞，细菌简直是开了“聚会”，一片热闹的景象。
一、实验目的1. 掌握平板培养基的制备方法及原理。
2. 了解培养基在微生物实验中的应用。
3. 学习并掌握无菌操作技术。
二、实验原理平板培养基是一种用于微生物培养的固体培养基，其主要成分包括琼脂、营养物质、水等。
琼脂是一种从海藻中提取的胶状物质，具有良好的凝胶性，可在高温下溶解，冷却后形成固体。
在制备平板培养基时，需将琼脂溶解于水中，加入营养物质，调节pH值，最后进行灭菌处理。
三、实验材料1. 琼脂：2g2. 营养物质：牛肉膏、蛋白胨、葡萄糖等（根据实验需要选择）3. 水：100ml4. pH试纸5. 灭菌锅、三角瓶、烧杯、玻璃棒、量筒、天平、无菌操作台、无菌操作工具、无菌培养基平板等四、实验步骤1. 称取琼脂2g，加入100ml水中，用玻璃棒搅拌至琼脂完全溶解。
2. 称取牛肉膏、蛋白胨、葡萄糖等营养物质，根据实验需要加入适量的量。
3. 将溶解后的琼脂溶液加热煮沸，同时不断搅拌，防止琼脂沉淀。
4. 使用pH试纸检测琼脂溶液的pH值，根据实验需要调节pH值至适宜范围。
5. 将调节好的琼脂溶液倒入无菌培养基平板中，轻轻摇匀，使琼脂均匀分布。
6. 将培养基平板放入灭菌锅中，进行高压蒸汽灭菌，压力为0.1MPa，时间为20分钟。
7. 灭菌完成后，取出培养基平板，待其冷却至室温。
8. 将冷却至室温的培养基平板放入无菌操作台中，用无菌操作工具进行平板划线接种。
9. 将接种后的平板倒置，放入培养箱中，根据实验需要调整培养温度和时间。
五、实验结果通过平板培养基的制备，成功得到了无菌、均一的固体培养基。
在适宜的培养条件下，平板上会出现不同形态的菌落，可用于微生物的分离、鉴定和培养。
六、实验讨论1. 在制备平板培养基时，应注意无菌操作，防止杂菌污染。
2. 琼脂的质量对平板培养基的质量有很大影响，应选择优质琼脂。
3. 在调节培养基pH值时，应根据实验需要选择合适的pH范围。
4. 平板培养基的灭菌方法为高压蒸汽灭菌，压力和时间应根据实验需要调整。
基础培养基的制备实验报告(共10篇) 培养基的制备与灭菌实验报告(详细)一、实验题目：培养基的制备与灭菌二、实验目的：1、明确培养基的配置原则，掌握配置方法。
2、了解灭菌的原理，学习掌握灭菌器的使用方法。
三、实验器材：1、药品：牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、水、琼脂。
2、仪器：三角瓶、培养皿、试管、线绳、棉花、烧杯、报纸、移液管、试管架、铁针、量筒。
四、实验原理：1、培养基的制备包括一下几种成分：（1）水分：主要成分。
（2）N源：包括无机氮和有机氮。
（3）C源：主要是含碳有机物、碳氢化合物等。
（4）无机盐：如NaCl、KH2PO4等。
微量元素：Cu、K、Mg、S、P、Zn。
有些还需要添加“生长因子”，通常是维生素类、某些氨基酸或核酸等。
2、培养基配置的原则根据不同的培养对象及培养目的，选用不同的培养基，但有机物总量不得超过15%，盐类一般不超过1%。
培养基有以下分类：按成分：天然培养基、合成培养基、半合成培养基按状态：固体培养基、半固体培养基、液体培养基按用途：基础培养基、营养培养基、鉴别培养基、选择培养基培养基配好后应立即灭菌，防止营养物质中的微生物富集。
3、灭菌：用理化手段杀灭一切微生物的营养体，包括芽孢和孢子，在实验中应对所有仪器、操作场所、药品及培养基灭菌或消毒。
（1）高压蒸汽灭菌：将物品放入封闭的加压灭菌器，加热使灭菌锅套间的水沸腾产生蒸汽，将冷空气排尽，压力上升，使水沸点变高，导致菌体蛋白质变性，一般0.1MPa、121℃、15~30min 可以彻底灭菌，本次实验灭菌20min。
若是含糖培养基，110℃、30min。
（2）干热灭菌：微生物细胞内蛋白质因高温而凝固变性。
因高温，所以含水量小，不利于蛋白质受热变性，所以温度高，时间长。
（3）紫外灭菌：诱导胸腺嘧啶二聚体形成抑制DNA复制。
（4）过滤除菌：实验室中用微孔滤膜（孔径一般为0.22μm）。
除病菌需更小。
五、实验步骤：1、牛肉膏蛋白胨培养基的制备依次准确称取0.5g牛肉粉、1.0g蛋白胨、0.5gNaCl放入烧杯，加入100mL水，用玻璃棒搅匀溶解，移入三角瓶，并加入1.5g琼脂。
培养基的制备与灭菌实验报告培养基的制备与灭菌实验报告引言：在微生物学研究中，培养基是不可或缺的工具。
培养基的制备和灭菌是保证实验结果准确性和可重复性的重要步骤。
本实验旨在探究培养基的制备方法和灭菌技术的应用。
一、培养基的制备1.1 选择合适的培养基成分培养基的成分根据微生物的需求而定。
常见的培养基成分包括碳源、氮源、无机盐、生长因子等。
在制备培养基时，需根据所研究的微生物特性选择合适的成分。
1.2 制备培养基的步骤制备培养基的步骤主要包括称量、溶解、调pH、加热消毒和装瓶。
首先，按照配方称取所需成分，并逐一溶解于适量的蒸馏水中。
随后，根据微生物的需求，调节溶液的pH值。
最后，将溶液装入试管或培养皿中，并加热消毒。
二、灭菌技术的应用2.1 灭菌的目的灭菌是指将培养基、培养器具和实验室环境中的微生物杀灭或去除的过程。
灭菌的目的是为了避免外来微生物的污染，确保实验结果的准确性。
2.2 常用的灭菌方法常用的灭菌方法包括高温灭菌、化学灭菌和紫外线灭菌。
高温灭菌是指将培养基或器具在高温条件下进行加热消毒，常用的方法有烘箱灭菌和压力灭菌。
化学灭菌则是通过使用化学物质如酒精、乙醛等来杀灭微生物。
紫外线灭菌则是利用紫外线的辐射杀灭微生物。
2.3 实验中的灭菌操作在实验中，常用的灭菌操作包括培养基灭菌、器具灭菌和工作台灭菌。
培养基灭菌是将制备好的培养基加热消毒，以杀灭其中的微生物。
器具灭菌则是通过高温、化学物质或紫外线对实验器具进行消毒。
工作台灭菌则是通过紫外线辐射对实验台面进行灭菌处理。
结论：培养基的制备和灭菌是微生物学研究中的重要环节。
正确的培养基制备和灭菌操作可以确保实验结果的准确性和可重复性。
通过本实验，我们学习了培养基的制备方法和常用的灭菌技术，为今后的微生物实验打下了基础。
参考文献：[1] 陈晓玲, 赵莉, 邱晓红, 等. 基础微生物学实验教程[M]. 2版. 北京: 高等教育出版社, 2017.[2] 郭燕妮, 张晓红. 微生物学实验指导[M]. 北京: 高等教育出版社, 2019.。
一、实验目的1. 熟悉培养基的制备方法及原理。
2. 掌握培养基灭菌的基本操作。
3. 了解培养基在微生物培养中的应用。
二、实验原理培养基是微生物生长繁殖的营养基础，其制备方法及质量直接影响微生物的生长和实验结果。
本实验主要制备牛肉膏蛋白胨培养基，该培养基含有微生物生长所需的各种营养物质，适用于多种微生物的培养。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：牛肉膏、蛋白胨、琼脂、葡萄糖、蒸馏水、pH试纸、无菌水、高压蒸汽灭菌器、三角瓶、烧杯、玻璃棒、天平等。
2. 实验仪器：高压蒸汽灭菌器、三角瓶、烧杯、玻璃棒、天平、无菌操作台等。
四、实验步骤1. 配制培养基（1）称取牛肉膏、蛋白胨、葡萄糖、琼脂等试剂，按比例加入蒸馏水。
（2）将混合液加热溶解，用pH试纸检测pH值，调整至7.0-7.2。
（3）将溶解后的培养基倒入三角瓶中，分装至每瓶100mL。
2. 灭菌（1）将分装好的培养基放入高压蒸汽灭菌器中，设定灭菌参数：121℃，15分钟。
（2）待压力升至所需值后，开始计时，灭菌完成后关闭电源，自然冷却至室温。
3. 冷却与倒平板（1）将灭菌后的培养基取出，待其冷却至50-55℃。
（2）将冷却后的培养基倒入无菌平板中，用玻璃棒搅拌均匀。
（3）待培养基凝固后，用无菌镊子取出平板，标记并放置于培养箱中。
4. 接种与培养（1）将待分离的微生物接种于平板上，采用平板划线法或稀释涂布法。
（2）将接种后的平板放入培养箱中，根据微生物生长特点调整培养温度和时间。
五、实验结果与分析1. 成功制备了牛肉膏蛋白胨培养基，符合实验要求。
2. 培养基灭菌效果良好，未发现污染现象。
3. 在培养过程中，观察到微生物生长旺盛，说明培养基质量合格。
六、实验总结1. 通过本次实验，掌握了培养基的制备方法及原理，了解了培养基在微生物培养中的应用。
2. 熟悉了培养基灭菌的基本操作，提高了无菌操作技能。
3. 通过实验，了解了不同微生物对培养基的需求，为今后的实验研究奠定了基础。
琼脂平板培养基实验报告一、实验目的本次实验的目的是掌握琼脂平板培养基的制备方法，并通过使用琼脂平板培养基来观察和分离不同菌落。
二、实验原理琼脂平板培养基是一种常用的微生物学实验室培养基，其主要成分为琼脂和营养物质。
琼脂是一种从海藻中提取出来的胶状物质，可以在高温下溶解，在冷却后形成固体。
在制备琼脂平板培养基时，需要将琼脂与适量的营养物质混合后加热至完全溶解，然后冷却至适宜温度并倒入培养皿中凝固。
三、实验步骤1. 准备所需材料：琼脂、适量的营养物质（如肉汤、酵母提取物等）、试管、移液器、烧杯、玻璃棒等。
2. 在试管中加入适量的营养物质，并用移液器将其吸入。
3. 将试管加入水浴中加热至完全溶解。
4. 将琼脂加入烧杯中，并加入适量的水。
5. 将烧杯加入水浴中加热至琼脂完全溶解。
6. 将步骤4和步骤5中的溶液混合均匀，并用玻璃棒搅拌至无颗粒物质。
7. 将混合后的溶液冷却至适宜温度（通常为50℃左右）。
8. 将培养皿倾斜45度，用移液器将混合好的琼脂平板培养基倒入培养皿中，约倒满1/3即可。
9. 等待琼脂平板培养基凝固后，将培养皿竖立并保存在冰箱内备用。
四、实验结果在使用琼脂平板培养基进行微生物分离时，可以观察到不同形态、大小、颜色等特征的菌落。
通过对这些菌落进行进一步分析和检测，可以确定其种类和数量。
五、实验注意事项1. 在制备琼脂平板培养基时需要注意材料的净化和消毒，以避免细菌污染。
2. 在加热溶液时需要注意温度，避免过高或过低导致琼脂不完全溶解或过度凝固。
3. 在混合琼脂和营养物质时需要充分搅拌，以确保混合均匀。
4. 在倒入培养皿中时需要注意倾斜角度，以避免气泡和不均匀厚度的出现。
六、实验总结通过本次实验，我们掌握了琼脂平板培养基的制备方法，并了解了其在微生物学研究中的重要作用。
在今后的实验中，我们将继续运用琼脂平板培养基来观察和分离不同菌落，并进一步深入研究微生物的生命活动和特性。
一、实验目的1. 理解液体培养基的配制原理和方法。
2. 掌握液体培养基的配制步骤和注意事项。
3. 熟悉液体培养基的灭菌方法。
二、实验原理液体培养基是一种供微生物生长繁殖的营养物质混合物，主要由碳源、氮源、无机盐、生长因子和水等组成。
根据微生物的种类和实验目的，可以配制不同类型的液体培养基。
本实验以LB液体培养基为例，介绍液体培养基的配制过程。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：（1）胰蛋白胨：25g（2）酵母提取物：5g（3）氯化钠：5g（4）蒸馏水：1000mL（5）pH试纸（6）高压蒸汽灭菌锅2. 实验仪器：（1）分析天平（2）烧杯（3）玻璃棒（4）量筒（5）三角瓶（6）棉塞四、实验步骤1. 称量：准确称取25g胰蛋白胨、5g酵母提取物和5g氯化钠。
2. 溶解：将称取好的原料放入烧杯中，加入约500mL蒸馏水，用玻璃棒搅拌至完全溶解。
3. 定容：将溶解好的培养基转移至三角瓶中，用蒸馏水定容至1000mL。
4. 调pH：用pH试纸检测培养基的pH值，若pH值不在6.8-7.2之间，可用1M的HCl或NaOH溶液进行调节。
5. 灭菌：将配制好的培养基分装到灭菌瓶中，用棉塞塞紧，放入高压蒸汽灭菌锅中，121℃灭菌15min。
6. 冷却：待培养基冷却至室温，即可使用。
五、实验结果与分析1. 实验结果：本实验成功配制了LB液体培养基，培养基颜色呈淡黄色，透明度良好。
2. 结果分析：（1）称量准确是保证培养基质量的关键，本实验称量误差控制在±0.1g以内。
（2）溶解过程中，玻璃棒搅拌可防止原料沉淀，确保培养基均匀。
（3）定容过程中，需注意量筒的读数，避免定容过量或不足。
（4）调节pH值时，应遵循“宁酸勿碱”的原则，避免过度调节。
（5）灭菌过程中，高压蒸汽灭菌锅的压力和温度对灭菌效果有重要影响，本实验灭菌效果良好。
六、实验总结通过本次实验，我们掌握了液体培养基的配制原理、方法和步骤，了解了液体培养基的灭菌过程。
培养基的制备与灭菌实验报告一、实验目的本实验旨在掌握培养基的制备方法和灭菌技术，为后续的微生物培养提供保障。
二、实验原理1. 培养基的制备方法：（1）选用适当的基质：如蛋白胨、肉汤、蔗糖等；（2）添加必需元素：如氮源、碳源、矿物质盐等；（3）调节pH值：使其接近微生物生长最适pH值；（4）加入琼脂：使液态培养基凝固成固态培养基。
2. 灭菌技术：灭菌是指将微生物及其孢子全部杀灭或去除，以保证培养基无菌。
常用的灭菌方法有高温灭菌法和化学药剂灭菌法。
三、实验材料和设备材料：蛋白胨、肉汤、琼脂、氧化钠等。
设备：量筒、天平、自动移液器、恒温水浴器等。
四、实验步骤1. 制备液态培养基：（1）称取所需的蛋白胨和肉汤，按比例混合加入适量的蒸馏水中，搅拌均匀；（2）调节pH值至7.0-7.2，若pH值过高可加入适量的氧化钠溶液；（3）将制好的液态培养基分装到不锈钢培养皿中，每个培养皿约20ml；（4）将分装好的液态培养基在恒温水浴器中加热至沸腾，持续煮沸10分钟。
2. 制备固态培养基：（1）按照液态培养基制备方法制备好液态培养基；（2）将琼脂加入到液态培养基中，搅拌均匀；（3）将制好的固态培养基分装到无菌试管或无菌平板中；（4）在恒温水浴器中加热至琼脂完全溶解。
3. 灭菌：将制备好的液态和固态培养基放入高压灭菌锅中进行灭菌处理，温度和时间根据不同材料和设备而定。
五、实验结果经过灭菌处理后，制备好的液态和固态培养基均无菌，可以用于微生物培养。
六、实验注意事项1. 实验过程中要严格遵守无菌操作规范，以保证培养基无菌。
2. 制备液态培养基时，要注意加入必需元素的比例和pH值的调节。
3. 制备固态培养基时，要注意琼脂的加入量和溶解度。
4. 灭菌处理时，要根据实验材料和设备选择合适的灭菌方法和时间。
5. 实验结束后，要对实验器材进行消毒处理。
七、实验结论本实验通过制备液态和固态培养基以及灭菌处理等操作，掌握了培养基制备和灭菌技术。
一、实验目的1. 掌握培养基的制备原理和方法。
2. 了解不同类型培养基的配制过程和用途。
3. 掌握高压蒸汽灭菌的操作步骤。
4. 体验无菌操作技术，确保实验结果的准确性。
二、实验原理培养基是人工配制的供微生物生长繁殖和合成代谢产物所需要的营养物质的混合物。
根据微生物的营养需求和实验目的，培养基可以含有碳源、氮源、无机盐、生长因素和水等成分。
不同类型的培养基适用于培养不同的微生物。
三、实验材料1. 培养基原料：牛肉膏、蛋白胨、琼脂、葡萄糖、酵母提取物、氯化钠等。
2. 器材：三角瓶、烧杯、量筒、玻璃棒、pH试纸、高压蒸汽灭菌锅、无菌操作台等。
四、实验步骤1. 培养基配制1.1 称取牛肉膏、蛋白胨、葡萄糖、酵母提取物、氯化钠等原料，按照一定比例溶解于去离子水中。
1.2 将溶解后的溶液转移至三角瓶中，用玻璃棒搅拌均匀。
1.3 调整培养基的pH值至适宜范围（一般为7.0-7.6）。
1.4 将三角瓶置于高压蒸汽灭菌锅中，进行高压蒸汽灭菌，温度为121℃，压力为0.1MPa，时间为15分钟。
1.5 灭菌后，将培养基冷却至室温。
2. 平板制备2.1 将灭菌后的培养基倒入平板模具中，使其均匀分布。
2.2 将平板模具置于室温下冷却凝固。
2.3 将平板翻转，放置于无菌操作台上。
3. 无菌操作3.1 在无菌操作台中，用无菌接种环取适量菌种，接种于平板培养基上。
3.2 用无菌接种环在平板培养基上划线，形成菌落。
3.3 将接种好的平板置于适宜的温度和湿度条件下培养。
五、实验结果1. 通过高压蒸汽灭菌，制备的培养基均无菌，可用于微生物培养。
2. 在适宜的温度和湿度条件下培养，平板培养基上出现单菌落。
六、实验讨论1. 培养基的制备是微生物实验的基础，掌握培养基的制备原理和方法对于微生物实验的成功至关重要。
2. 高压蒸汽灭菌是保证培养基无菌的关键步骤，操作过程中要注意密封、压力和时间等因素。
3. 无菌操作是微生物实验的重要环节，要严格按照无菌操作规范进行。
培养基的配制实验报告实验名称：培养基的配制实验报告实验目的：掌握微生物培养基的配制方法及影响因素，加深对微生物生长和培养的认识。
实验原理：微生物的生长和培养需要用到适宜的培养基。
培养基的成分和配制方法不同会对微生物生长和培养产生影响。
本实验选用普通营养琼脂培养基为例，以掌握培养基制备的基本方法和技术操作。
实验材料：普通营养琼脂培养基粉末、培养基配制器具（烧杯、量筒、过滤器、移液器等）、革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌。
实验步骤：1. 称取所需的琼脂粉末，按照要求的比例加入适量的蒸馏水中，溶解均匀。
2. 用不锈钢网过滤琼脂溶液，去除颗粒和杂质，减小后续培养的干扰。
3. 将琼脂溶液分装至烧杯中，加热至溶解，然后用自由落滴法测定琼脂的pH值。
4. 加入所需的营养成分，如碳源、氮源、矿物质等，调节培养基的成分。
同时，根据需求在培养基中加入相应抗生素或生长因子。
5. 将培养基配制至预定体积，混合均匀后用带滤芯的移液器过滤。
6. 将培养基分装至耐热培养皿中，约1/3满，放入高压灭菌锅中高压灭杀15-20分钟。
7. 取出被高压灭菌的培养皿，放置至室温下自然冷却或以水冷却。
8. 在无菌条件下将预先生长的细菌转移到已灭菌的琼脂培养基中，然后在适宜的环境下进行培养观察。
实验结果和分析：本实验制备的普通营养琼脂培养基满足生长条件，多种菌种都能够成功生长。
制备过程中，各个步骤都需要精确、细致地操作，如琼脂的过滤、配制和自由落滴pH值的测定、高压灭菌等。
这些步骤的误差可能会导致培养基的成分产生变化，进而影响培养效果。
结论：微生物的培养需要适宜的培养基，不同生物和实验需求需要不同的配方和配制方法。
掌握基础的培养基配制技术，能够快速、精准地制备适宜的培养基。
这对于微生物研究和应用有着重要的意义。
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篇一：培养基的制备与灭菌实验报告 陕西师范大学远程教育学院 生物学实验报告 报告题目培养基的制备与灭菌 姓 名 刘 伟 学 号 专 业 生 物 科 学 批次/层次 指导教师 学习中心 培养基的制备与灭菌 一、目的要求 1. 掌握微生物实验室常用玻璃器皿的清洗及包扎方法。 2. 掌握培养基的配置原则和方法。 3. 掌握高压蒸汽灭菌的操作方法和注意事项。 二、基本原理 牛肉膏蛋白胨培养基： 是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，有时又称为普通培养基。由于这种培养基中含有一般细胞生长繁殖所需要的最基本的营养物质，所以可供细菌生长繁殖之用。 文档来源为:从网络收集整理.word版本可编辑.欢迎下载支持. 高压蒸汽灭菌： 主要是通过升温使蛋白质变性从而达到杀死微生物的效果。将灭菌的物品放在一个密闭和加压的灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅内水沸腾而产生蒸汽。待蒸汽将锅内冷空气从排气阀中趋尽，关闭排气阀继续加热。此时蒸汽不溢出，压力增大，沸点升高，获得高于100℃的温度导致菌体蛋白凝固变性，而达到灭菌的目的。 三、实验材料 1. 药品：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂、1mol/L的NaOH和HCl溶液。 2. 仪器及玻璃器皿：天平、高压蒸汽灭菌锅、移液管、试管、烧杯、量筒、三 角瓶、培养皿、玻璃漏斗等。 3. 其他物品：药匙、称量纸、pH试纸、记号笔、棉花等。 四、操作步骤 （一）玻璃器皿的洗涤和包装 1．玻璃器皿的洗涤 玻璃器皿在使用前必须洗刷干净。将三角瓶、试管、培养皿、量筒等浸入含有洗涤剂的水中．用毛刷刷洗，然后用自来水及蒸馏水冲净。移液管先用含有洗涤剂的水浸泡，再文档来源为:从网络收集整理.word版本可编辑.欢迎下载支持. 用自来水及蒸馏水冲洗。洗刷干净的玻璃器皿置于烘箱中烘干后备用。 2．灭菌前玻璃器皿的包装 （1） 培养皿的包扎：培养皿由一盖一底组成一套，可用报纸将几套培养皿包 成一包，或者将几套培养皿直接置于特制的铁皮圆筒内，加盖灭菌。包装后的培养皿须经灭菌之后才能使用。 （2） 移液管的包扎：在移液管的上端塞入一小段棉花(勿用脱脂棉)，它的作 用是避免外界及口中杂菌进入管内，并防止菌液等吸入口中。塞入此小段棉花应距管口约0.5cm左右，棉花自身长度约1~1.5cm。塞棉花时．可用一外围拉直的曲别针、将少许棉花塞入管口内。棉花要塞得松紧适宜，吹时以能通气而又不使棉花滑下为准。 先将报纸裁成宽约5cm左右的长纸条，然后将已塞好棉花的移液管尖端 放在长条报纸的一端，约成45℃角，折叠纸条包住尖端，用左手握住移液管身，有手将移液管压紧．在桌面上向前搓转，以螺旋式包扎起来。上端剩余纸条，折叠打结，准备灭菌。 （二）液体及固体培养基的配制过程 文档来源为:从网络收集整理.word版本可编辑.欢迎下载支持. 1．液体培养基配制 （1）称量（假定配制1000ml培养基） 按培养基配方比例依次准确地称取3.0g牛肉膏、10.0 g蛋白胨、5.0gNaCl放入烧杯（或1000ml刻度搪瓷杯）中．牛肉膏常用玻棒挑取，放在小烧杯或表面皿中称量，用热水溶化后倒入烧杯。 （2）溶化 在上述烧杯中先加入少于所需要的水量（如约700ml），用玻棒搅匀，然后，在石棉网上加热使其溶解，将药品完全溶解后，补充水到所需的总体积（1000ml）；如果配制固体培养基时，将称好的琼脂放人已溶的药品中，再加热溶化，最后补足所损失的水分。 （3）调pH 调pH：一般用pH试纸测定培养基的pH。用剪刀剪出一小段pH试纸，然后用镊子夹取此段pH试纸，在培养基中蘸一下，观看其pH范围，如培养基偏酸或偏碱时，可用1mol/L NaoH或1mol/L HCl溶液进行调节。调节pH时，应逐滴加入NaOH或HCI溶液，防止局部过酸或过碱，破坏培养基中成分。边加边搅拌，并不时用pH试纸测试，直至pH达7.4-7.6。反之，用1mol／LHCl进行调节。 2．固体培养基的配制 文档来源为:从网络收集整理.word版本可编辑.欢迎下载支持. 配制固体培养基时，应将已配好的液体培养基加热煮沸，再将称好的琼脂(1.5~2％)加 入，并用玻棒不断搅拌，以免糊底烧焦。继续加热至琼脂全部融化，最后补足因蒸发而失去水分。 （三）培养基的分装 根据不同需要，可将已配好培养基分装入试管或三角瓶内，分装时注意不要使培养基沾污管口或瓶口，造成污染。如操作不小心，培养基沾污管口或瓶口时，可用镊子夹一小块脱脂棉，擦去管口或瓶口的培养基，并将脱脂棉弃去。 1．试管的分装 取一个玻璃漏斗，装在铁架上，漏斗下连一根橡皮管，橡皮管下端再与另一玻璃管相接，橡皮管的中部加一弹簧夹。分装时，用左手拿住空试管中部，并将漏斗下的玻璃管嘴插入试管内，以右手拇指及食指开放弹簧夹，中指及无名指夹佐玻璃管嘴，使培养基直接流入试管内。装入试管培养基的量视试管大小及需要而定，若所用试管大小为15×150 mm时，液体培养基可分装至试管高度1／4左有为宜；如分装固体或半固体培养基时，在琼脂完全融化后，应趁热分装于试管中。用于制作斜面的固体培养基的分装量为管高1／5(约3—4mI)，半固体培养基分装量为管高的1／3为宜。 2．三角瓶的分装 文档来源为:从网络收集整理.word版本可编辑.欢迎下载支持. 用于振荡培养微生物时，可在250 m1 用于制作 平板培养基用时，可在250 m1三角瓶中加入150ml 粉(按2％计算)，灭菌时瓶中琼脂粉同时被融化。 （四）棉塞的制作及试管、三角瓶的包扎 为了培养好气性微生物，需提供优良通气条件，同时为防止杂菌污染，则必须对通入试管或三角瓶内空气预先进行过滤除菌。通常方法是在试管及三角瓶口加上棉花塞等。 1．试管棉塞的制作 制棉塞时，应选用大小、厚薄适中的普通棉花一块，铺展于左手拇指和食指扣成的团孔上，用右手食指将棉花从中央压入团孔中制成棉塞．然后直接压入试管或三角瓶口。也可借用玻璃棒塞入，也可用折叠卷塞法制作棉塞。 制作的棉塞应紧贴管壁，不留缝隙，以防外界微生物沿缝隙侵入，棉塞不宜过紧或过松，塞好后以手提棉塞，试管不下落为准。棉塞的2／3在试管内，1／3在试管外。目前也有采用硅胶塞代替棉塞直接盖在试管口上。 将装好培养基并塞好棉塞或硅胶塞的试管捆成一捆，外面包上一层牛皮纸。用记号笔注明培养基名称及配制日期，灭菌待用。 2．三角瓶棉塞制作 文档来源为:从网络收集整理.word版本可编辑.欢迎下载支持. 通常在棉塞外包上一层纱布，再塞在瓶口上。有时为了进行液体振荡培养加大通气量，则可用8层纱布代替棉塞包在瓶口上，目前也有采用硅胶塞直接盖在瓶口上。 在装好培养基并塞好棉塞或包扎八层纱布或盖好硅胶塞的三角瓶口上，再包上一层牛皮纸并用线绳捆好，灭菌待用。 （五）培养基的灭菌 将上述培养基以0.103MPa，l21℃，20min高压蒸气灭菌。 灭菌过程： 1. 加水：首先将内层锅取出，再向外层锅内加入适量的水，使水面没过加热蛇 管，与三角搁架相平为宜。切勿忘记检查水位，加水量过少，灭菌锅会发生烧干引起炸裂事故。 2. 装料：放回内层锅，并装入待灭菌的物品。注意不要装得太挤，以免妨碍蒸 汽流通而影响灭菌效果。装有培养基的容器放置时要防止液体溢出，三角瓶与试管口端均不要与桶壁接触，以免冷凝水淋湿包扎的纸而透入棉塞。 3. 加盖：将盖上与排气孔相连的排气软管插入内层锅的排气槽内，摆正锅盖， 文档来源为:从网络收集整理.word版本可编辑.欢迎下载支持. 对齐螺口，然后以对称方式同时旋紧相对的两个螺栓，使螺栓松紧一致，勿使漏气，并打开排气阀。 4. 排气：打开电源加热灭菌锅，将水煮沸，使锅内的冷空气和水蒸汽一起从排 气孔中排出。一般认为当排出的气流很强并有嘘声时，表明锅内的空气已排尽，沸腾后约需5分钟。 5. 升压：冷空气完全排尽后，关闭排气阀，继续加热，锅内压力开始上升。 6. 保压：当压力表指针达到所需压力时，控制电源，开始计时并维持压力至所 需的时间。如本实验中采用0.1Mpa，121.5℃，20分钟灭菌。 灭菌的主要因素是温度而不是压力，因此锅内的冷空气必须完全排尽后，才能关闭排气阀，维持所需压力。 7. 降压：达到灭菌所需的时间后，切断电源，让灭菌锅温度自然下降，当压力 表的压力降至“0”后，方可打开排气阀，排尽余下的蒸汽，旋松螺栓，打开锅盖，取出灭菌物品，倒掉锅内剩水。压力一定要降到“0”后，才能打开排气阀，开盖取物。否则就会因锅内压力突然下降，使容器内的培养基或 试剂由于内外压力不平衡而冲出容器口，造成瓶口被污文档来源为:从网络收集整理.word版本可编辑.欢迎下载支持. 染，甚至灼伤操作者。 （六）斜面和平板的制作 1．斜面的制作 将已灭菌装有琼脂培养基的试管，趁热置于木棒或玻棒上，使成适当斜度，凝固后即成斜面。斜面长度不超过试管长度l／2为宜。如制作半团体或固体深层培养基时，灭菌后则应垂直放置至凝固。 2．平板的制作 将装在三角瓶或试管中已灭菌的琼脂培养基融化后，待冷至50℃左右倾入无菌培养皿中。温度过高时，皿盖上的冷凝水太多；温度低于50℃，培养基易于凝固而无法制作平板。 平板的制作应在火旁进行，左手拿培养皿，右手拿三角瓶的底部或试管，左手同时用小指和手掌将棉塞打开，灼烧瓶口，用左手大拇指将培养皿盖打开一缝，至瓶口正好伸入，倾入10~15mL培养基，迅速盖好皿盖，置于桌上，轻轻旋转平皿，使培养基均匀分布于整个平皿中，冷凝后即成平板。 （七）培养基的灭菌检查 灭菌后的培养基，一般需进行无菌检查。最好取出1~2管(瓶)，置于37℃温箱中培养1~2天，确定无菌后方可使用。 篇二：《培养基的制备与消毒灭菌》 实验报告 《培养基的制备与消毒灭菌》 实验报告
