细胞培养皿、板

动物细胞培养主要仪器（一）（一）提供细胞培养环境的仪器 l.CO2 指能精密控制并提供恒温、恒湿、洁净、恒定CO2浓度的仪器，利用该仪器可用法培养皿、多孔板（(6-96孔板）、培养方瓶等举行细胞培养。

按照容积大小，有60-190L 台式，也有上下堆叠落地式。

按照通气情况，普通通CO2和空气，也有3气（CO2、N2和空气）或4气（CO2、NZ2、O2和空气）培养箱。

按照控温类型，区别为水套式和蔼套式两种。

2．细胞工厂在CO2培养箱中，应用特定的培养容器举行细胞大量培养。

3．滚瓶培养 (1)滚瓶培养箱放置于CO2培养箱中用法，有驱动滚瓶滚动的机械装置，可以应用滚瓶举行细胞大量培养。

(2)滚瓶培养架在CO2浓度、温度、湿度可控的洁净间内用法，有驱动滚瓶滚动的机械装置，可以应用滚瓶举行细胞大量培养。

4．生物反应器生物反应器，也称动物细胞罐，应具有良好的无菌控制，通过特地的控制器组件举行细胞大量培养，普通需要4气（CO2、N2、O2和空气）培养，可分批次培养和延续培养形式。

需要配置特地的补料瓶。

培养工艺复杂，仪器设备的造价往往很高，通常用于讨论、中试和生产。

按照罐体容量和培养容量（培养容量往往比罐体容量小）区分大小。

普通在讨论试验室用法的生物反应器的罐体体积常在30L以下，用于生物制品制备的生物反应器体积达到500L 以上。

罐体可以是钢化玻璃、陶瓷，也可以是不锈钢或钦合金或铁。

（二）用于换液操作的仪器 1．微量移液器微量移液器是常用的无菌操作移液用仪器，有单通道、8通道和12通道等规格。

频繁的种类如下：(1)50-200μl单道微量移液器，配套200μl无菌塑料吸嘴用法。

(2)50-300μl8道微量移液器，配套300μ1无菌塑料吸嘴用法。

(3)500-5000μ1微量移液器，配套5000μ1无菌塑料吸嘴用法。

(4)电动大量移液器，协作无菌长丝滴管、无菌刻度移液管用法，移液速度可调。

（三）镜检与显微影像记录仪器 1．倒置显微镜和倒置荧光显微镜与正置显微镜（一般显微镜）的主要区分在于，倒置显微镜是载物台在光源下方，或者说物镜在载物台下方的显微镜，使得物镜镜第1页共2页。

细胞培养工作流程细胞培养指的是将体外细胞放入适宜的培养基中，通过人工控制环境提供养分、温度、湿度和气氛等条件，使细胞能够在体外生长和繁殖的过程。

它是现代生物科学研究的重要手段之一、下面是细胞培养的基本工作流程：1.选择细胞系：根据研究目的，选择合适的细胞系进行培养。

常用的细胞系包括动物细胞系（如人类细胞系、小鼠细胞系）和植物细胞系（如拟南芥细胞系、水稻细胞系）等。

2.培养皿处理：将培养皿（常用的有细胞培养板、细胞培养瓶等）进行反应器瓶内蒸气温度消毒，消毒完后平行设置以备用。

3.准备培养基：根据细胞系的要求，配制适合的培养基。

培养基可以分为基本培养基和特殊培养基两种。

基本培养基是常规使用的培养基，包含至少4个组分：基础培养液（如DMEM、RPMI1640等）、热灭菌的胎牛血清、青霉素-链霉素溶液和培养液调节剂。

特殊培养基则根据细胞系的需要，添加特定的因子和配方，以满足特殊细胞的生长和繁殖要求。

4. 细胞接种：将细胞接入培养皿中。

首先需要将细胞接种得到的细胞进行计数，根据细胞密度和细胞系特性合理的安排接种密度。

常规的细胞接种密度为1×10^5 到5×10^5个细胞/ml。

然后将培养基加入培养皿中。

5.培养条件控制：将培养皿放入恒温培养箱中，保持适宜的环境条件。

常见的条件有：温度通常为37℃，CO2浓度通常为5%，相对湿度约95%。

这样可以提供适宜的温度、气氛和湿度，保证细胞正常生长和繁殖。

6.细胞观察和维护：每天对细胞进行观察、记录和维护。

观察细胞的形态、增殖情况和污染情况等。

细胞一般分为贴壁生长和悬浮生长两种，贴壁细胞需要定期更换培养基，悬浮细胞则需要掌握细胞的密度从而进行传代。

7.细胞传代：当细胞密度到达一定程度（通常为80-90%）时，需要进行细胞传代，以维持细胞的生长和繁殖。

传代的方法包括机械切割、酶解等。

细胞传代的时机和方法由细胞的适应性和特性决定。

8.细胞冻存：为了保证细胞库的保存和维持，需要进行细胞的冻存。

标准培养皿规格
一、直径大小
标准培养皿的直径大小通常有90mm、150mm、220mm等规格。

其中，90mm的培养皿是最常用的规格，适用于一般细菌培养、细胞培养等实验。

二、深度
培养皿的深度一般在20-30mm之间。

较浅的培养皿有助于减少菌落扩散和温度波动，适用于需要较高温度的培养实验。

较深的培养皿则可以容纳更多的培养基和细胞，适用于需要长时间培养或需要更多营养的培养实验。

三、材质
标准培养皿通常由玻璃或塑料制成。

玻璃培养皿具有高度的透明性和耐热性，能够承受高温灭菌过程，且不影响培养基和细胞的性质。

塑料培养皿则具有轻便、不易碎等优点，但长期使用可能会影响细胞的生长和形态。

四、盖子设计
标准培养皿通常配有盖子，以保持培养基的水分和无菌状态。

盖子的设计有多种形式，常见的有平板盖、凸盖等。

盖子上一般会有透气孔，以防止容器内形成真空，影响细胞的生长。

五、容量
标准培养皿的容量通常根据其直径大小和深度而定，一般在10-50mL之间。

容量的选择应根据实验需求来确定，以保证培养基和细胞的充足营养供应。

六、孔数及分布
一些特殊设计的培养皿具有多个孔洞，可以同时培养多个样品。

孔数及分布应根据实验需求进行选择，以提高实验效率。

常见的多孔培养皿有6孔、12孔、24孔、48孔等规格。

七、边缘形状
培养皿的边缘形状通常为直边或坡边两种形式。

直边培养皿的边缘与底部垂直，具有较高的稳定性。

坡边培养皿的边缘与底部呈一定角度，可以更好地容纳培养基和细胞，防止菌落扩散。

常用培养皿规格
常用的培养皿规格有直径为35mm、60mm、70mm、90mm、100mm、110mm、120mm、150mm等规格。

培养皿是一种用于微生物或细胞培养的实验室器皿，由一个平面圆盘状的底和一个盖组成，一般用玻璃或塑料制成。

培养皿是一种用于微生物或细胞培养的实验室器皿，由一个平面圆盘状的底和一个盖组成，一般用玻璃或塑料制成。

扩展资料：
培养皿材质基本上分为两类，主要为塑料和玻璃的，玻璃的可以用于植物材料、微生物培养和动物细胞的贴壁培养也可能用到。

塑料的可能是聚乙烯材料的，有一次性的和多次使用的，适合实验室接种、划线、分离细菌的操作，可以用于植物材料的培养。

培养皿最初由在德国生物学家罗伯特·科赫手下工作的
细菌学家朱利斯·理查德·佩特里于1887年设计，故又称为“佩特里皿”。

培养皿质地脆弱、易碎，故在清洗及拿放时应小心谨慎、轻拿轻放。

使用完毕的培养皿最好及时清洗干净，存放在安全、固定的位置，防止损坏、摔坏。

培养皿材质基本上分为两类，主要为塑料和玻璃的，玻璃的可以用于植物材料、微生物培养和动物细胞的贴壁培养也可能用到。

塑料的可能是聚乙烯材料的，有一次性的和多次使用的，适合实验室接种、划线、分离细菌的操作，可以用于植物材料的培养。

培养皿的分类
1、根据培养皿用途的不同可分为细胞培养皿和细菌培养皿。

2、根据分隔的不同可分为2分隔培养皿、3分隔培养皿等。

细胞培养实验步骤细胞培养是一种常用的实验技术，用于研究和培养人类及动物细胞以及微生物细胞，以便进行细胞生物学、免疫学、生物药剂学等领域的研究。

下面是细胞培养的一般步骤，供参考：1.预备培养物品：包括培养基、生长因子、惰性气体（例如二氧化碳、乙烷等）等。

2.消毒操作：将培养器皿、培养板、培养液等较小的物品放入70%乙醇中浸泡，或用高温高压灭菌。

3.培养基配制：根据需要的培养细胞类型选择相应的基础培养基（例如DMEM、RPMI-1640等），根据实验要求添加适当的补充物质（如胎牛血清、抗生素等），调节pH值。

4.细胞分离和传代：a）将需要培养的细胞从体内或体外取出；b）用消化酶（如胰蛋白酶）或化学脱附剂（如牛血清白蛋白）处理细胞；c）通过离心等操作，去除胶原颗粒、纤维素等杂质；d）将细胞悬浮于培养基中，数量适量；e）将细胞装入培养皿中，加入适量的培养基。

5.细胞观察：使用显微镜观察细胞的生长状态、数量、形态特征等。

6.细胞培养环境控制：a）保持恒定的温度：多数细胞培养在37℃下进行；b）提供合适的湿度：使用培养器内的水槽或加入水来增加湿度；c）提供适度的无菌环境：在洁净工作台或无菌箱内进行，注意操作无菌技术，避免细菌等污染细胞。

7.细胞培养的传代：细胞的生长速度快，细胞排列紧密，细胞密度太高会使细胞分泌代谢产物过多，阻碍细胞增殖，因此需要定期传代。

传代前要先将细胞分散（用胰蛋白酶或牛胰酶等处理），将培养皿中的细胞悬液分装到新的培养皿内。

8.细胞培养的净化：细胞培养过程中，细胞环境容易被菌落污染，因此需要进行细胞净化。

方法有：检测培养液的菌落数目，观察培养皿内是否有细菌、真菌等的生长，如发现污染现象，立即停止使用被污染的培养皿和培养液。

9.细胞培养的冻存：细胞培养过程中，保留一部分细胞进行冻存，以备后续的实验使用。

常用方法是将细胞悬液和DMSO混合后，存放在液氮中保存。

以上是细胞培养的一般步骤。

但不同类型的细胞具有不同的培养要求，实验者还需根据实际情况进行具体调整和处理。

cc50实验流程
1. 实验准备:
- 配制所需的各种浓度的试剂溶液。

- 准备好细胞培养皿或板,并在无菌条件下铺设细胞。

2. 细胞接种与培养:
- 选择适当的细胞株,按照一定的细胞密度接种到培养皿或板中。

- 在37°C,5%CO2的培养箱内培养一段时间,待细胞贴壁并呈对数生长期。

3. 加入试剂:
- 根据预先设定的浓度梯度,分别将不同浓度的试剂加入到不同孔或皿中。

- 设置对照组,包括阴性对照(只加培养基)和阳性对照(加入已知毒性物质)。

4. 细胞培养与观察:
- 将加有试剂的细胞置于培养箱中继续培养一定时间(通常24-72小时)。

- 在预定时间点,使用显微镜或其他方法观察并记录细胞的存活情况。

5. 数据分析:
- 统计并绘制不同浓度下的细胞存活率曲线。

- 根据细胞存活率50%时对应的浓度值(CC50),评估试剂对细胞的细
胞毒性。

6. 结果分析与讨论:
- 比较不同试剂的CC50值,分析其对细胞毒性的差异。

- 结合其他实验数据,探讨试剂的作用机制和潜在应用。

- 讨论实验过程中可能存在的误差和局限性。

实验注意事项:
- 操作时保持无菌,避免污染。

- 设置合理的对照组和浓度梯度。

- 尽量使用对数生长期细胞,细胞状态对结果有影响。

- 重复实验,确保数据的可靠性。