L A B新生儿溶血病检测
操作规程D
文件管理序列号：[K8UY-K9IO69-O6M243-OL889-F88688]
新生儿溶血病检测操作规程1原理
新生儿溶血病一般特指母婴血型不合而引起的胎儿或新生儿免疫性溶血性疾病（HDN），可由多种原因引起。临床常见的是ABO、Rh等血型系统。胎儿和新生儿红细胞被来自母亲的IgG抗体所包被，并在婴儿的网状内皮系统内受到免疫性破坏。
2试剂和材料
2.1母亲血样3-5ml，患儿抗凝血3-5ml
2.2抗人球蛋白试剂（包括广谱、IgG、C3）、2-Me应用液、抗-A、抗-
B、抗-D、抗-
C、抗-c、抗-E血清试剂
2.35%A1、B、O型标准红细胞悬液
3方法
主要以三项试验为主①患儿直接抗人球蛋白试验②患儿游离抗体试验③吸收放散试验
3.1ABO新生儿溶血病检测
ABO新生儿溶血病主要是由于胎儿红细胞A或B抗原与来自母体的抗A或抗B抗体反应的结果。以母亲为O型，胎儿为A型或B型的发病率为最高。
3.1.1母、子（父）红细胞ABO血型鉴定（参照ABO血型鉴定）
3.1.2子红细胞试验
3.1.2.1子红细胞直接抗人球蛋白试验
RBC生理盐水洗3遍，配成5%RBC悬液，取小试管加1滴2-5%子RBC，加多特异性抗球蛋白1滴，混匀离心看结果。
3.1.2.2子红细胞抗体放散试验：取经盐水洗涤的患儿压积RBC0.5-1ml,加等量盐水于试管中，56℃水浴，不断振摇10分钟，然后置于56℃温水离心管内，立即以1300g离心5分钟，吸取上清液备用。取3只试管,标记Ac、Bc、Oc，将放散液分为3份分别加入3个小试管中，分别加2-5%A、B、O细胞1滴，37℃水浴1小时（加PEG缩短至5分钟），取出后用生理盐水洗涤3遍，倒尽盐水，各加抗多特异性抗球蛋白1-2滴，混匀离心看结果。
3.1.2.3子血清中游中游离抗体检查
取3支小试管标明Ac、Bc、Oc，每管加患儿血清2-4滴，分别加入2-5%A、B、O指示红细胞盐水悬液1滴，混匀后离心，看结果。如有凝集，说明有相应盐水抗体，不凝集将试管放入37℃水浴1小时（加PEG5分钟）后，用生理盐水洗3遍，吸尽盐水后，每管加多特异性抗球蛋白1滴，离心看结果。
3.1.2.4母血清作产前检测
血清中IgG抗A抗B效价测定及血清抗体筛选。详见产前检测。
3.2Rh新生儿溶血病检测
Rh血型系统的HDN是由于母婴Rh血型不合造成的，母亲的Rh免疫抗体作用于胎儿及婴儿，引起贫血和高胆红素血症，以D抗原不合为最多见，一般母亲曾有输血或妊娠史。
3.2.1母、子、父作ABO、Rh血型鉴定（参照ABO血型鉴定及Rh血型鉴定）。母亲一般为Rh阴性，患儿为Rh阳性。
3.2.2子红细胞试验
3.2.2.1子红细胞直接抗人球蛋白试验（同）。
3.2.2.2子红细胞抗体释放试验：直抗阳性者做此试验。用三氯甲烷/三氯乙烯放散法，洗涤压积红细胞后，加等量盐水或AB型血清，再加2体积三氯甲烷/三氯乙烯等量混合液，用玻璃纸压住管口，颠倒混合1分钟，以3000~5000转/分离心3~5分钟，吸取上层樱红色液体放入另一试管，并将此含放散液试管置37℃水浴5~10分钟，除尽三氯甲烷/三氯乙烯，用标准细胞鉴定抗体，方法同热放散抗体法。
3.2.2.3子血清游离抗体检测（同）。
3.2.2.4母血清ABO以外抗体检测：用配组细胞及丈夫或子细胞与母血清在盐水中看是否有凝集，再做酶法或抗人球法，阳性者作抗体鉴定及测抗体效价。
4结果判定
4.1ABOHDN结果判定
根据患儿三项试验结果按下表作结果判断：
母亲为O型，子为A型或B型，子红细胞直抗阳性或（和）游离抗体阳性，母亲IgG抗体抗A或抗B效价高者可疑为ABO新生儿溶血病。
4.2RhHDN结果判定
母亲为Rh阴性、子为Rh阳性，子红细胞直抗阳性及抗体释放试验阳性即可判定为Rh血型HDN，游离抗体试验有时可表现为阴性。3项试验均阴性则可否定为Rh血型HDN。其他血型HDN可根据检测结果直接报。5支持性文件
《全国临床检验技术操作规程》
6相关表单
WXXZ/QR/1202-035-D0《血型研究室试验记录》
WXXZ/QR/LAB1401-001-D0《检验报告单》
