低温胁迫对细茎柱花草与TPRC2001-1柱花草抗寒生理指标的影响

第３５卷第６期V o l．３５,N o．６草㊀业㊀科㊀学P R A T A C U L T U R A LS C I E N C E１４０９Ｇ１４１５６/２０１８h t t p:∕∕c y k x．l z u．e d u．c nD O I:１０．１１８２９/j．i s s n．１００１Ｇ０６２９．２０１７Ｇ０４８２李黎,杨鹏郅,柯善文,钟天秀,陈曙,解新明．低温胁迫对细茎柱花草与T P R C２００１Ｇ１柱花草抗寒生理指标的影响．草业科学,２０１８,３５(６):１４０９Ｇ１４１５．L i L,Y a n g PZ,K eS W,Z h o n g T X,C h e nS,X i eX M．E f f e c t o f l o wt e m p e r a t u r e s t r e s s o n p h y s i o l o g i c a l i n d e x e s o f c o l d r e s i s t a n c e o f S t y l o s a n t h e s g u i a n e n s i s v a r．i n t e r m e d i a a n d S．g u i a n e n s i s T P R C２００１Ｇ１ ．P r a t a c u l t u r a l S c i e n c e,２０１８,３５(６):１４０９Ｇ１４１５．低温胁迫对细茎柱花草与T P R C２００１Ｇ１柱花草抗寒生理指标的影响李黎１,杨鹏郅１,柯善文１,钟天秀１,２,陈曙１,２,解新明１,２(１．华南农业大学林学与风景园林学院,广东广州５１０６４２;２．广东省草业工程技术研究中心,广东广州５１０６４２)摘要:为了探究柱花草的抗寒性,本研究以细茎柱花草(S t y l o s a n t h e s g u i a n e n s i s v a r．i n t e r m e d i a)和T P R C２００１Ｇ１柱花草(S．g u i a n e n s i s T P R C２００１Ｇ１ )营养期叶片为材料,分别进行时长为０(对照)㊁２４h和４８h的低温处理,然后对其相对电导率㊁丙二醛㊁脯氨酸㊁可溶性糖以及可溶性蛋白的含量等指标进行测定与分析.结果表明,两种柱花草叶片的抗寒性生理指标随着低温处理时间的增加逐步上升.低温处理后,细茎柱花草的相对电导率和丙二醛含量显著低于T P R C２００１Ｇ１柱花草(P＜０．０５),而脯氨酸㊁可溶性糖和可溶性蛋白的含量显著高于T P R C２００１Ｇ１柱花草(P＜０．０５).综合各项生理指标可得,两种柱花草的抗寒性强弱为细茎柱花草＞T P R C２００１Ｇ１柱花草.关键词:耐低温;相对电导率;丙二醛;脯氨酸;可溶性糖;可溶性蛋白中图分类号:S５４３＋．９０４;Q９４５．７８㊀㊀㊀文献标志码:A㊀㊀㊀文章编号:１００１Ｇ０６２９(２０１８)０６Ｇ１４０９Ｇ０７∗E f f e c t o f l o wt e m p e r a t u r e s t r e s s o n p h y s i o l o g i c a l i n d e x e s o f c o l d r e s i s t a n c e o fS t y l o s a n t h e s g u i a n e n s i s v a r．i n t e r m e d i a a n d S．g u i a n e n s i s T P R C２００１Ｇ１L i L i１,Y a n g P e n gＧz h i１,K eS h a nＧw e n１,Z h o n g T i a nＧx i u１,２,C h e nS h u１,２,X i eX i nＧm i n g１,２(１．C o l l e g e o fF o r e s t r y a n dL a n d s c a p eA r c h i t e c t u r e o f S o u t hC h i n aA g r i c u l t u r a lU n i v e r s i t y,G u a n g z h o u５１０６４２,G u a n g d o n g,C h i n a;２．G u a n g d o n g E n g i n e e r i n g R e s e a r c hC e n t e r f o rG r a s s l a n dS c i e n c e,G u a n g z h o u５１０６４２,G u a n g d o n g,C h i n a)A b s t r a c t:T o e x p l o r e c o l d r e s i s t a n c e o f S t y l o s a n t h e s,t h e v e g e t a t i v e l e a v e s o f S．g u i a n e n s i s v a r．i n t e r m e d i a a n d S．g u i a n e n s i s T P R C２００１Ｇ１ w e r e t r e a t e d a t４ħf o r０h,２４h,a n d４８h i n t h e p r e s e n t s t u d y．T h e n,t h e c o l d r e s i s t a n c eＧr e l a t e d p h y s i o l o g i c a l i n d e x e sw e r e m e a s u r e d i n c l u d i n g r e l a t i v ee l e c t r i c a l c o n d u c t i v i t y,m a l o n d i a l d eＧh y d e c o n t e n t,f r e e p r o l i n e,s o l u b l e s u g a r,a n d s o l u b l e p r o t e i n．T h e r e s u l t s s h o w e d t h a t S．g u i a n e n s i s v a r．i nＧt e r m e d i a h a d a l o w e r r e l a t i v e e l e c t r i c a l c o n d u c t i v i t y a n d l o w e rm a l o n d i a l d e h y d e c o n t e n t,a sw e l l a s h i g h e r f r e e p r o l i n e,s o l u b l e s u g a r,a n d s o l u b l e p r o t e i n c o n t e n tt h a n t h o s e o f T P R C２００１Ｇ１,w h i c h p r o v e st h a tt h e S．g u i a n e n s i s v a r．i n t e r m e d i a h a s s t r o n g e r c o l d r e s i s t a n c e t h a n t h a t o fT P R C２００１Ｇ１．K e y w o r d s:l o wt e m p e r a t u r e r e s i s t a n c e;r e l a t i v ee l e c t r i cc o n d u c t i v i t y;m a l o n d i a l d e h y d e;f r e e p r o l i n e;s o l u b l e s u g a r;s o l u b l e p r o t e i n∗收稿日期:２０１７Ｇ０９Ｇ２６㊀㊀接受日期:２０１７Ｇ１２Ｇ２５基金项目:国家自然科学基金(３１６０１９９０)第一作者:李黎(１９９５Ｇ),女,湖南娄底人,在读硕士生,主要从事牧草生物技术育种工作.EＧm a i l:９１３１８７６９２＠q q．c o m共同第一作者:杨鹏郅(１９９３Ｇ),男,山东淄博人,在读硕士生,主要从事牧草生物技术育种工作.EＧm a i l:７５２２２１６０６＠q q．c o m通信作者:解新明(１９６３Ｇ),男,内蒙古包头人,教授,博士,主要从事草业生物技术研究.EＧm a i l:x i e x m b s＠s c a u．e d u．c n共同通信作者:陈曙(１９８６Ｇ),男,浙江温州人,副教授,博士,主要从事草业生物技术研究.EＧm a i l:s h u c h e n＠s c a u．e d u．c n草㊀业㊀科㊀学第３５卷h t t p :∕∕c yk x ．l z u ．e d u ．c n C o r r e s p o n d i n g au t h o r :X i eX i n Ｇm i n g ㊀E Ｇm a i l :x i e x m b s ＠s c a u ．e d u ．c n ;C h e nS h u ㊀E Ｇm a i l :s h u c h e n ＠s c a u ．e d u ．c n ㊀㊀柱花草(S t y l o s a n t h e s g u i a n e n s i s )是我国热带㊁亚热带地区分布较为广泛,且具有耐干旱㊁耐酸铝㊁抗炭疽病,营养丰富㊁适口性好㊁产量高等特点的优良豆科牧草[１Ｇ２].同时柱花草也广泛应用于天然草地改良㊁果草生态建设及水土流失治理和退耕还林还草等各大领域[３].但是大部分柱花草品种不耐寒冷,对低温十分敏感,在我国南方冬季难以存活,更难以在北方得到广泛推广种植[４].细茎柱花草(S ．g u i a n e n s i s v a r ．i n t e r m e d i a )是一种多年生优良豆科牧草,是柱花草的一个变种,１９４８年从美国引入澳大利亚(G a y n d a h 和B r i a n 地区)进行栽培,我国华南地区２０世纪６０年代从澳洲引进种植,国人常将其翻译为 奥茨利 或 奥克雷 ,该变种具有较好的抗低温㊁耐酸和耐低肥等特点,在广东韶关地区可安全过冬长达４０多年[５].有研究对细茎柱花草转录组进行测序,发现低温胁迫下细茎柱花草中转录因子S g N A C １和S g N A C ２能较早地响应低温,而S gG H ３可能受其他基因的调控,在后期表达[６].刘攀道等[７]发现磷高效基因型T P R C ２００１Ｇ１的根部酸性磷酸酶活性显著高于磷低效基因细茎柱花草.细茎柱花草对低温胁迫有一定的适应能力,但对其适应低温胁迫的主要生理机制鲜有报道.因此,研究细茎柱花草抗寒性的生理机制甚为重要,可以为今后的抗寒育种工程提供重要的研究基础.植物的生长发育会受到环境因子的影响,低温是限制植物生长发育的环境因子之一.植物在受低温影响后几个小时,最多１d 即可表现出症状.低温不仅会使植物生长停滞,还会造成植物减产,严重时导致植物死亡[８].生物膜系统是冷害作用的首要作用部位[９],膜的外形和厚度一旦发生变化,膜上会产生皲裂,因而膜的透性增大,离子大量外渗,电导率上升[１０],导致代谢不平衡,合成能力降低,分解加速,最终导致细胞死亡.同时,低温胁迫下植物体内活性氧自由基积累,细胞膜脂过氧化,导致丙二醛含量上升[１１].植物在低温环境下,会通过积累相关渗透调节物质来降低㊁阻止或修复低温造成的伤害,使其仍保持正常的生理活动[１２].脯氨酸作为低温胁迫后的能源物质能有效清除活性氧,提高超氧化物歧化酶(S O D )㊁过氧化氢酶(C A T )㊁多酚氧化酶(P P O )的活性[８].可溶性糖能够增加细胞液浓度,提高细胞的保水能力,降低细胞冰点,减少胁迫对植物伤害[１３].可溶性蛋白作为亲水性较强的物质,可以束缚较多的水分,在低温下减少细胞死亡的机率,从而提高植物的抗寒能力[１３].本研究以细茎柱花草为材料,探讨叶片在低温胁迫下,相对电导率㊁丙二醛㊁游离脯氨酸㊁可溶性糖㊁可溶性蛋白等抗寒性相关的生理指标的变化,旨在检测细茎柱花草的抗寒性,以期对今后选育抗寒性强的柱花草品种提供鉴定参考.１　材料与方法１．１㊀试验材料试验对象为细茎柱花草,种植于华南农业大学草业科学系引种园(１１３ʎ２８N ;２３ʎ１２E ),对照为柱花草T P R C ２００１Ｇ１,其种子取自华南农业大学农学院根系生物学研究中心.１．２㊀试验设计在两种处于营养期的柱花草种质资源植株上剪下枝条扦插于盆中,每个品种１０盆,每盆２株,于华南农业大学草业科学系温室中正常生长.６０d 后,将其置于４ħ冷库中进行低温处理,分别于０h (低温处理前),２４h 和４８h 后取相同部位的叶片测定其相对电导率,每个处理３个重复.测定其余生理指标的叶片迅速放于液氮中至－８０ħ超低温冰箱保存备用.１．３㊀指标测定及方法参照测量相对电导率的方法[１４],用电导仪(上海雷磁新泾仪器有限公司D D S Ｇ１１A )检测溶液电导率;采用硫代巴比妥酸法[１５]测定丙二醛(m a l o n a l d e h yd e ,M D A )(F W )含量;茚三酮比色法[１６]测定脯氨酸含量(F W );蒽酮显色法[１７]测定可溶性糖的含量(F W );考马斯亮蓝比色法[１７]测定可溶性蛋白含量的(F W ).每个指标数据均３次重复.１．４㊀数据分析采用S P S S２０．０软件对所测数据进行统计分析,用平均值和标准误表示测定结果,对不同低温时间处理进行单因素方差分析,并用T u k e y 法对各测定数据进行多重比较;采用E x c e l ２００７制图.０１４１第６期李黎㊀等:低温胁迫对细茎柱花草与T P R C ２００１Ｇ１柱花草抗寒生理指标的影响h t t p :∕∕c yk x ．l z u ．e d u ．c n ２　结果与分析２．１㊀低温胁迫对细茎柱花草质膜相对透性的影响２．１．１㊀相对电导率的变化㊀细茎柱花草和T P R C ２００１Ｇ１柱花草的相对电导率随处理时间的增加而升高,且相对电导率表现为T P R C ２００１Ｇ１柱花草＞细茎柱花草(图１A ).在低温处理前,两种柱花草的相对电导率无显著差异(P ＞０．０５),处理２４h 后,两种柱花草的相对电导率开始显著上升,说明此时柱花草细胞膜开始受损,且T P R C ２００１Ｇ１柱花草的相对电导率显著高于细茎柱花草(P ＜０．０５).在低温处理４８h 下,T P R C ２００１Ｇ１柱花草的相对电导率达到了４４．５２％,显著高于细茎柱花草的２１．２３％(P ＜０．０５);同时,处理４８h 的细茎柱花草的相对电导率还显著低于低温处理后２４h 的T P R C ２００１Ｇ１柱花草的相对电导率(P ＜０．０５),说明低温处理时间越长,柱花草叶片受损伤越严重,细茎柱花草细胞膜受损程度相对T P R C ２００１Ｇ１柱花草小.２．１．２㊀丙二醛含量的变化㊀两种柱花草低温胁迫后丙二醛浓度随着低温胁迫时间的增加均表现出逐渐升高的趋势,这说明随着低温处理时间的增加,柱花草细胞膜的膜脂过氧化反应加强,造成丙二醛的过量积累(图１B ).低温处理前,细茎柱花草和T P R C ２００１Ｇ１柱花草的丙二醛含量无显著差异,分别为０．８１和０．７６μm o l g －１(P ＞０．０５).低温处理后,两种柱花草的丙二醛含量上升,在低温处理２４h 和４８h 后,细茎柱花草的丙二醛含量显著低于T P R C ２００１Ｇ１柱花草(P ＜０．０５);但处理４８h 后的细茎柱花草与处理２４h 后T P R C ２００１Ｇ１柱花草的丙二醛含量无显著差异(P ＞０．０５).以上结果说明低温导致细胞膜受到脂质过氧化损伤,且品种间受损伤程度不同;在相同低温处理条件下,相对T P R C ２００１Ｇ１柱花草而言,细茎柱花草受损伤程度较小.２．２㊀低温胁迫对细茎柱花草渗透调节物质含量的影响２．２．１㊀脯氨酸含量的变化㊀脯氨酸对逆境胁迫有一定的保护作用,它能防止细胞失水,保护大分子结构的稳定性.随着低温处理时间的延长,两种柱花草的游离脯氨酸含量持续上升(图２A ).低温处理前,细茎柱花草和T P R C ２００１Ｇ１柱花草的游离脯氨酸含量无显著差异(P ＞０．０５),含量分别为６．４０和６．７２μg g Ｇ１;处理２４h 后,两种柱花草的脯氨酸上升,且细茎柱花草的脯氨酸显著高于T P R C ２００１Ｇ１柱花草(P ＜０．０５);处理４８h 后,细茎柱花草游离脯氨酸的含量达到了处理前的４．３１倍,为２７．６１μg g －１,显著高于T P R C ２００１Ｇ１柱花草(P ＜０．０５),表明细茎柱花草能够积累更多脯氨酸以防止植物体脱水,细胞内环境稳定性较好.２．２．２㊀可溶性糖含量的变化㊀在低温胁迫下植物体内的糖含量增高,糖的积累能提高胞内溶质浓度,增强持水力,使之在低温下更难结冰[１８],降低低温胁迫对细胞的伤害.随着低温处理时间的延长,两种柱花草的可溶性糖含量持续上升(图２B ).低温处理前,细茎柱花草和T P R C ２００１Ｇ１柱花草的可溶性糖含量无显著差异(P ＞０．０５),含量分别为５．１２和４．９３m gg －１;处理后,两种柱花草的可溶性糖含量上升,图１㊀低温胁迫对细茎柱花草和T P R C ２００１Ｇ１柱花草相对电导率㊁丙二醛含量的影响F i g ．１㊀I n f l u e n c e o f l o wt e m p e r a t u r e s t r e s s o n t h e r e l a t i v e e l e c t r i c a l c o n d u c t i v i t y an d M D Ac o n t e n t o f S t y l o s a n t h e s g u i a n e n s i s v a r ．i n t e r m e d i a a n d S ．gu i a n e n s i s T P R C ２００１Ｇ１ ㊀不同小写字母表示差异显著(P ＜０．０５),下同.㊀D i f f e r e n t l o w e r c a s e l e t t e r s i n d i c a t e s i g n i f i c a n t d i f f e r e n c e s a t t h e ０．０５l e v e l ;s i m i l a r l y f o rF i g．２．１１４１草㊀业㊀科㊀学第３５卷h t t p :∕∕c yk x ．l z u ．e d u ．cn 图２㊀低温胁迫对细茎柱花草和T P R C ２００１Ｇ１柱花草脯氨酸㊁可溶性糖㊁可溶蛋白含量的影响F i g ．２㊀I n f l u e n c e o f l o wt e m p e r a t u r e s t r e s s o n t h e p r o l i n e ,s o l u b l e s u g a r a n d s o l u b l e p r o t e i n c o n t e n t o f S t y l o s a n t h e s g u i a n e n s i s v a r ．i n t e r m e d i a a n d S ．gu i a n e n s i s T P R C ２００１Ｇ１ 低温处理２４h 后,细茎柱花草的可溶性糖显著高于T P R C ２００１Ｇ１柱花草(P ＜０．０５);处理４８h 后,细茎柱花草可溶性糖含量达到了１７．６１m g g －１,显著高于T P R C ２００１Ｇ１柱花草(P ＜０．０５),表明细茎柱花草可积累更多糖来增加细胞的渗透浓度,细胞的保水能力强于T P R C ２００１Ｇ１柱花草.２．２．３㊀可溶性蛋白含量的变化㊀植物在低温胁迫下通过增加可溶性蛋白的含量来提高抗寒性.随着低温处理时间的增加,两种柱花草的可溶性蛋白含量持续上升.低温处理前,细茎柱花草和T P R C ２００１Ｇ１柱花草的可溶性蛋白含量无显著差异(P ＞０．０５),含量分为５．５４和５．８４m gg －１;处理２４h 后,两种柱花草的可溶性蛋白上升,细茎柱花草的可溶性蛋白含量显著高于T P R C ２００１Ｇ１柱花草(P ＜０．０５);处理４８h 后,细茎柱花草可溶性蛋白的含量达到了处理前的２．６７倍,显著高于T P R C ２００１Ｇ１柱花草(P ＜０．０５),表明可溶性蛋白的含量与柱花草抗寒性相关,且细茎柱花草在低温胁迫下积累更多的可溶性蛋白(图２C ).３　讨论３．１㊀质膜透性与抗寒性的关系当植物遭受低温胁迫时,植物中最先受伤害的部位是细胞膜,细胞膜破损导致胞内电解质的外渗,水分流失,外渗的电解质大小可以用相对电导率反映[１９].本研究中,低温处理后细茎柱花草与T P R C ２００１Ｇ１柱花草的相对电导率迅速增加,且两者存在明显差异,细茎柱花草的相对电导率增加较小,相对电导率的大小变化与抗寒性成负相关.董琛等[８]在研究２４份柱花草资源的抗冷性评价中发现冷处理后,相对电导率随时间的增加而增加,且在处理１d 后,不同柱花草种质间的相对电导率差异显著,５d 后种质间的差异更大,其中热引１８号柱花草㊁品１０９柱花草㊁马弓形柱花草和粤研１号柱花草电导率值低,抗冷性较强.这与本研究的结果相似,说明细茎柱花草较T P R C ２００１Ｇ１柱花草的抗寒性较强.在低温锻炼期间,植物细胞会积累过多的活性氧自由基,这些物质会引起细胞膜脂过氧化反应,而丙二醛则为该反应的终端产物[２０].对马铃薯(S o l a n u mt u b e r o s u m )抗寒性研究表明,在低温胁迫条件下,品种间丙二醛的含量差异显著,抗寒品种中丙二醛含量增加较小,且丙二醛的含量变化与抗寒性呈负相关关系[２１].本研究中,低温处理后,两种柱花草的M D A 含量随着时间的推移不断上升,且品种间差异显著.在低温处理２４和４８h 细茎柱花草的M D A 含量显著低于同处理T P R C ２００１Ｇ１柱花草的含量,表明细茎柱花草相对T P R C ２００１Ｇ１柱花草是抗寒能力较强的品种.３．２㊀渗透调节物质与耐寒性的关系脯氨酸是植物体内能有效调节渗透能力的重要物质之一[２２],它不仅能够通过增强蛋白质水合作用来提高植物的保水能力,而且还能保持细胞中酶结构的稳定性,降低细胞损伤[２３].本研究中,低温处理后的游离脯氨酸含量迅速增加,且细茎柱花草与T P R C ２００１Ｇ１柱花草存在明显差异,细茎柱花草的游离脯氨酸含２１４１第６期李黎㊀等:低温胁迫对细茎柱花草与T P R C ２００１Ｇ１柱花草抗寒生理指标的影响h t t p :∕∕c yk x ．l z u ．e d u ．c n 量增加较多.脯氨酸的大小变化与抗寒性呈正相关关系,通过脯氨酸含量测定比较１０种宿根花卉抗寒性发现,低温处理后不同品种脯氨酸含量变化的幅度不同,抗寒性强的马蔺(I r i sl a c t e a v a r ．c h i n e n s i s )㊁紫萼(H o s t av e n t r i c o s a )㊁大花飞燕草(D e l ph i n i u m g r a n Ｇd i fl o r u m )品种其脯氨酸总体的变化幅度较大[２４].这与本研究细茎柱花草表现一致,说明细茎柱花草的抗寒性较好.糖是植物生长过程中重要的调节物质[２５].在逆境中,植物会通过增加可溶性糖含量来提高自身的抵抗力.可溶性糖能调节细胞渗透压来增大细胞的保水能力,防止其遭受低温而凝固,以增强植物耐寒性[２６].前人研究表明,在低温胁迫条件下,品种间可溶性糖的含量差异显著,抗寒品种中可溶性糖含量增加较多,且可溶性糖的含量变化与抗寒性呈正相关关系[２７].在本研究中,低温处理２４和４８h 的细茎柱花草的可溶性糖含量增加较同处理的T P R C ２００１Ｇ１柱花草显著增加,表明细茎柱花草的抗寒性强于T P R C ２００１Ｇ１柱花草.可溶性蛋白是一类亲水性的㊁能束缚水分的高分子化合物,能降低因在低温下结冰而伤害致死的机率[２８].高京草等[２９]对不同抗寒性枣树品种枝条中可溶性蛋白含量的测定结果表明,抗寒性强的木枣品种可溶性蛋白含量高,抗寒性弱的晋枣品种可溶性蛋白质含量较低.本研究中也得出相同的结果,两种柱花草的可溶性蛋白含量在处理后迅速上升,品种间差异显著,T P R C ２００１Ｇ１柱花草显著低于细茎柱花草.说明细茎柱花草是抗寒性较强的柱花草品种.许多研究表明,植物的抗寒机制是一个极其复杂的生理生化的过程,涉及多种物质共同作用,单一的抗寒指标不能全面反映植物对冷胁迫的适应力[３０].植物的抗寒性评价受多种不同抗寒指标的综合影响.本研究中,综合相对电导率㊁丙二醛含量㊁脯氨酸㊁可溶性糖和可溶性蛋白各项生理指标,得到细茎柱花草的抗寒性强于T P R C ２００１Ｇ１柱花草.４　结论随着低温处理时间的增加,两个品种柱花草叶片中的相对电导率㊁丙二醛㊁脯氨酸㊁可溶性糖和可溶性蛋白含量显著增加,但两个品种各项指标的变化幅度有所不同.在４ħ低温相同时间处理条件下,细茎柱花草的各项抗寒性生理指标均优于T P R C ２００１Ｇ１柱花草,说明细茎柱花草具有较强抗寒性,可作为一种抗寒品种加以开发㊁研究和利用.参考文献R e f e r e n c e s:[１]㊀张永先,杨培权,许涛,玉永雄,黎晓峰．硅对柱花草铝毒的解毒作用．基因组学与应用生物学,２００９,２８(１):５７Ｇ６１．Z h a n g Y X ,Y a n g P Q ,X uT ,Y uY X ,L iX F ．A l Ｇd e t o x i f i c a t i o nb y S i i n S t yl o s a n t h e s ．G e n o m i c sa n d A p p l i e dB i o l o g y ,２００９,２８(１):５７Ｇ６１．(i nC h i n e s e)[２]㊀严琳玲,张龙,白昌军．低温胁迫对３种柱花草幼苗若干生理指标的影响．热带农业科学,２０１３(１):１１Ｇ１５．Y a nLL ,Z h a n g L ,B a i CJ ．E f f e c t so f l o wt e m p e r a t u r e s t r e s so n p h y s i o l o g i c a l i n d e x e so f t h r e e S t y l o s a n t h e s s e e d l i n gs ．C h i n e s e J o u r n a l o fT r o p i c a lA g r i c u l t u r e ,２０１３(１):１１Ｇ１５．(i nC h i n e s e )[３]㊀靳慧卿,米福贵,闫利军,云雅聪,冀晓婷,富海江．不同激素和外植体对柱花草愈伤组织诱导及体细胞胚的影响．中国草地学报,２０１６,３８(６):１５Ｇ２１．J i nH Q ,M i FG ,Y a nLJ ,Y u nYC ,J iXT ,F u HJ ．E f f e c t o f d i f f e r e n t h o r m o n e a n de x p l a n t so nc a l l u s i n d u c t i o na n ds o m a t i c e m b r y od i f f e r e n t i a t i o no f S t yl o s a n t h e s s p p ．C h i n e s e J o u r n a l o fG r a s s l a n d ,２０１６,３８(６):１５Ｇ２１．(i nC h i n e s e )[４]㊀杨继春,杜贵锋,彭建宗．６种热带亚热带豆科牧草抗寒性及营养品质比较．草业科学,２０１７,３４(４):７９４Ｇ８０１．Y a n g JC ,D uGF ,P e n g J Z ．C o m p a r i s o n o f c o l d r e s i s t a n c e a n dn u t r i t i o n a l q u a l i t y o f s i x t r o p i c a l a n d s u b t r o p i c a l l e gu m i n o u s f o r Ｇa g e s d u r i n g o v e r w i n t e r i n gpe r i o d ．P r a t a c u l t u r a l S c i e n c e ,２０１７,３４(４):７９４Ｇ８０１．(i nC h i n e s e )[５]㊀陈南清．奧茨利柱花草．广东畜牧兽医科技,１９８４(１):６３Ｇ６７．C h e nN Q．O x l e y S t y l o s a n t h e s ．G u a n g d o n g J o u r n a l o fA n i m a l a n dV e t e r i n a r y Sc i e n c e ,１９８４(１):６３Ｇ６７．(i nC h i n e s e )[６]㊀柯善文．细茎柱花草转录组测序及耐寒相关基因的克隆与功能研究．广州:华南农业大学博士学位论文,２０１６．K eS W．C l o n i n g a n d f u n c t i o n a l a n a l y s i s o f c o l d Ｇt o l e r a n c e g e n e s a n d t r a n s c r i p t o m e s e q u e n c i n g f o r S t yl o s a n t h e s g u i a n e n s i s v a r ．i n t e r m e d i a ．P h DT h e s i s ．G u a n g z h o u :S o u t hC h i n aA g r i c u l t u r a lU n i v e r s i t y,２０１６．３１４１草㊀业㊀科㊀学第３５卷h t t p :∕∕c yk x ．l z u ．e d u ．c n [７]㊀刘攀道,孙丽莉,陈志坚,廖红,刘国道,白昌军,田江．低磷胁迫对柱花草酸性磷酸酶活性及其组成的动态影响．热带作物学报,２０１３,３４(７):１３４０Ｇ１３４６．L i uPD ,S u nLL ,C h e nZ J ,L i a oH ,L i uGD ,B a i CJ ,T i a n J ．D y n a m i c e f f e c t s o f l o w p h o s p h o r u s s t r e s s o n a c i d p h o s ph a t a s e a c Ｇt i v i t y a n d i s o f o r m s i n S t yl o s a n t h e s ．C h i n e s e J o u r n a l o fT r o p i c a l C r o p s ,２０１３,３４(７):１３４０Ｇ１３４６．(i nC h i n e s e )[８]㊀董琛,丁西朋,王文强,白昌军,刘国道．２４份柱花草资源抗冷性评价．分子植物育种,２０１６,１４(５):１３０９Ｇ１３２０．D o n g C ,D i n g XP ,W a n g W Q ,B a i CJ ,L i uG D．E v a l u a t i o no f c o l d t o l e r a n c e a m o n g ２４S t yl o s a n t h e s v a r i e t i e s ．M o l e c u l a rP l a n t B r e e d i n g,２０１６,１４(５):１３０９Ｇ１３２０．(i nC h i n e s e )[９]㊀刘伟．两个二倍体棉种C D P K 和F A D 基因家族的全基因组鉴定与基因结构功能分析．杭州:浙江大学博士学位论文,２０１５．L i u W．G e n o m e Ｇw i d e i d e n t i f i c a t i o na n d s t r u c t u r e Ｇf u n c t i o na n a l y s i so fC D P Ka n dF A D g e n e f a m i l i e s i nt w od i p l o i dc o t t o ns pe Ｇc i e s ．P h DT h e s i s ．H a n g z h o u :Z h e j i a n g U n i v e r s i t y ,２０１５．[１０]㊀郝小琴,姚鹏鹤,高峥荣,吴子恺．低温胁迫对微胚乳超甜超高油玉米耐寒性生理生化特性的影响．作物学报,２０１４,４０(８):１４７０Ｇ１４８４．H a oXQ ,Y a oPH ,G a oZR ,W uZK．E f f e c t s o f l o wt e m p e r a t u r e s t r e s s o n t h e p h y s i o l o gi c a l a n db i o c h e m i c a l c h a r a c t e r i s t i c s o f c o l d t o l e r a n c e i nm i c r o Ｇe n d o s p e r ms u p e r s w e e t a n d s u p e r h i g ho i lm a i z e ．A c t aA g r o n o m i c aS i n i c a ,２０１４,４０(８):１４７０Ｇ１４８４．(i n C h i n e s e)[１１]㊀侯伟,孙爱花,杨福孙,周兆德,陈汇林,吴翠玲．低温弱光对西瓜幼苗光合作用和抗氧化酶活性的影响．热带作物学报,２０１５,３６(７):１２３２Ｇ１２３７．H o u W ,S u nA H ,Y a nFS ,Z h o uZD ,C h e nH L ,W uCL ．E f f e c t s o f l o wt e m p e r a t u r e a n d l o wl i g h t o n p h o t o s yn t h e s i s a n d a n Ｇt i o x i d a n t e n z y m e a c t i v i t i e s o fw a t e r m e l o n s e e d l i n g s ．C h i n e s e J o u r n a l o fT r o p i c a l C r o ps ,２０１５,３６(７):１２３２Ｇ１２３７．(i nC h i n e s e )[１２]㊀吴雪霞,朱宗文,许爽,查丁石．低温胁迫及恢复对茄子幼苗活性氧代谢和渗透调节物质含量的影响．江西农业学报,２０１６,２８(７):１７Ｇ２１．W uXX ,Z h uZ W ,X uS ,Z h aDS ．E f f e c t s o f l o wt e m p e r a t u r e s t r e s s a n d r e c o v e r y o n r e a c t i v e o x y ge nm e t a b o l i s ma n do s m o t i c a d j u s t m e n t s u b s t a n c e c o n t e n t s i ne g g p l a n t s e e d l i n g s ．A c t aA g r i c u l t u r a e J i a n gx i ,２０１６,２８(７):１７Ｇ２１．(i nC h i n e s e )[１３]㊀朱政,蒋家月,江昌俊,李雯．低温胁迫对茶树叶片S O D ㊁可溶性蛋白和可溶性糖含量的影响．安徽农业大学学报,２０１１,３８(１):２４Ｇ２６．Z h uZ ,J i a n g JY ,J i a n g CJ ,L iW．E f f e c t s o f l o wt e m p e r a t u r e s t r e s s o nS O Da c t i v i t y ,s o l u b l e p r o t e i n c o n t e n t a n d s o l u b l e s u ga r c o n t e n t i n C a m e l l i a s i n e n s i s l e a v e s ．J o u r n a l o fA n h u iA g r i c u l t u r a lU n i v e r s i t y,２０１１,３８(１):２４Ｇ２６．(i nC h i n e s e )[１４]㊀陈爱葵,韩瑞宏,李东洋,凌连莲,罗惠霞,唐上剑．植物叶片相对电导率测定方法比较研究．广东教育学院学报,２０１０,３２(５):８８Ｇ９１．C h e nA K ,H a nR H ,L i DY ,L i nLL ,L u oH X ,T a n g S J ．Ac o m p a r i s o n o f t w om e t h o d s f o r e l e c t r i c a l c o n d u c t i v i t y a b o u t pl a n t l e a v e s ．J o u r n a l o fG u a n g d o n g Ed u c a t i o n I n s t i t u te ,２０１０,３２(５):８８Ｇ９１．(i nC h i n e s e )[１５]㊀王学奎．植物生理生化实验原理和技术．北京:高等教育出版社,２００６．W a n g X K ,P r i n c i p l e sa n dT e c h n i q u e so fP l a n tP h y s i o l o g y a n dB i o c h e m i s t r y E x p e r i m e n t s ．B e i j i n g :H i gh e rE d u c a t i o nP r e s s ,２００６．(i nC h i n e s e)[１６]㊀张志良．植物生理学实验指导．北京:高等教育出版社,２００２:１２７Ｇ１２８,１５９Ｇ１６０．Z h a n g ZL ．E x p e r i m e n t a lG u i d a n c e i nP l a n tP h y s i o l o g y ．B e i j i n g :H i g h e rE d u c a t i o nP r e s s ,２００２:１２７Ｇ１２８,１５９Ｇ１６０．(i nC h i n e s e )[１７]㊀李合生．植物生理生化实验原理与技术．北京:高等教育出版社,２０００．L iH S ．P r i n c i p l e s a n dT e c h n i q u e s o f P l a n t P h y s i o l o g y a n dB i o c h e m i s t r y E x p e r i m e n t ．B e i j i n g :H i gh e rE d u c a t i o nP r e s s ,２０００．(i n C h i n e s e)[１８]㊀司剑华,卢素锦．低温胁迫对５种柽柳抗寒性生理指标的影响．中南林业科技大学学报,２０１０,３０(８):７８Ｇ８１．S i JH ,L uS J ．E f f e c t s o f l o wt e m p e r a t u r e s t r e s s o n c o l d Ｇr e s i s t a n c e p h y s i o l o g i c a l i n d e x e s o f f i v e T a m a r i x L ．i nQ i n gh a i ．J o u r n a l o fC e n t r a l S o u t hU n i v e r s i t y o fF o r e s t r y &T e c h n o l o g y,２０１０,３０(８):７８Ｇ８１．(i nC h i n e s e )[１９]㊀董万鹏,罗充,龙秀琴,胡静,李燕．低温胁迫对西番莲抗寒生理指标的影响．植物生理学报,２０１５,５１(５):７７１Ｇ７７７．D o n g W P ,L u oC ,L o n g X Q ,H u J ,L iY．E f f e c t s o f l o wt e m p e r a t u r e s t r e s s o n p h y s i o l o gi c a l i n d e x e s o f c o l d r e s i s t a n c e o f P a s Ｇs i fl o r a e d u l i s ．P l a n tP h y s i o l o g y J o u r n a l ,２０１５,５１(５):７７１Ｇ７７７．(i nC h i n e s e )４１４１第６期李黎㊀等:低温胁迫对细茎柱花草与T P R C ２００１Ｇ１柱花草抗寒生理指标的影响h t t p :∕∕c yk x ．l z u ．e d u ．c n [２０]㊀周桂英,王四清,陈卿然,许建新,王成聪．８种大花蕙兰抗寒性指标的筛选及评价．福建农林大学学报(自然科学版),２０１７,４６(１):３７Ｇ４２．Z h o uG Y ,W a n g SQ ,C h e nQ R ,X u JX ,W a n g CC ．C o l dr e s i s t a n c e i n d e x e s i d e n t i f i c a t i o na n dc o m p r e h e n s i v e e v a l u a t i o no f ８C y m b i d i u mh y b r i d i u m ．J o u r n a l o fF u j i a nA g r i c u l t u r e a n dF o r e s t r y U n i v e r s i t y (N a t u r a l S c i e n c eE d i t i o n ),２０１７,４６(１):３７Ｇ４２．(i nC h i n e s e)[２１]㊀杨慧菊,郭华春．马铃薯不同品种抗寒性综合评价．分子植物育种,２０１７,１５(２):７１６Ｇ７２４．Y a n g HJ ,G u oH C ．C o m p r e h e n s i v ee v a l u a t i o no f c o l dr e s i s t a n c eo f p o t a t ov a r i e t i e s ．M o l e c u l a rP l a n tB r e e d i n g,２０１７,１５(２):７１６Ｇ７２４．(i nC h i n e s e)[２２]㊀M o i e n i ＧK o r b e k a n d iZ ,K a r i m z a d e hG ,S h a r i f iM．C o l d Ｇi n d u c e dc h a n g e so f p r o l i n e ,m a l o n d i a l d e h y d ea n dc h l o r o p h y l l i ns p r i n g c a n o l a c u l t i v a r s ．J o u r n a l o fP l a n tP h y s i o l o g y a n dB r e e d i n g,２０１４,４(１):１Ｇ１１．[２３]㊀K o çE ,Íşl e kC ,Üs t ünAS ．E f f e c t o f c o l d o n p r o t e i n ,p r o l i n e ,p h e n o l i c c o m p o u n d s a n d c h l o r o p h y l l c o n t e n t o f t w o p e p p e r (C a p Ｇs i c u ma n n u u m L ．)v a r i e t i e s ．J o u r n a l o f S c i e n c e ,２０１０,２３(１):１Ｇ６．[２４]㊀刘志洋．游离脯氨酸含量测定法比较宿根花卉抗寒性．黑龙江农业科学,２０１６,(１１):１０２Ｇ１０５．L i uZY．C o l dr e s i s t a n c ec o m p a r i s o no f p e r e n n i a l f l o w e r sb y d e t e r m i n a t i o no f f r e e p r o l i n ec o n t e n t ．H e i l o n g j i a n g A gr i c u l t u r a l S c i e n c e s ,２０１６,(１１):１０２Ｇ１０５．(i nC h i n e s e)[２５]㊀薄晓培,王梦馨,崔林,王金和,韩宝瑜．茶树３类渗透调节物质与冬春低温相关性及其品种间的差异评价．中国农业科学,２０１６,４９(１９):３８０７Ｇ３８１７．B oXP ,W a n g M X ,C u i L ,W a n g JH ,H a nBY．E v a l u a t i o no n c o r r e l a t i o n s o f t h r e e k i n d s o f o s m o r e gu l a t i o n s u b s t a n c e s i n t e a f r e s h l e a v e sw i t h l o wt e m p e r a t u r e d u r i n g w i n t e r a n d s p r i n g r e s p e c t i v e l y a n d t h e i r d i f f e r e n c e a m o n g c u l t i v a r s ．S c i e n t i aA g r i c u l Ｇt u r aS i n i c a ,２０１６,４９(１９):３８０７Ｇ３８１７．(i nC h i n e s e)[２６]㊀申晓慧,姜成,李如来,李建东,张华,郑海燕,郭伟,孙力,冯鹏．３种紫花苜蓿与草地羊茅单㊁混播越冬期根系生理变化及抗寒性．草业科学,２０１６,３３(２):２６８Ｇ２７５．S h e nX H ,J i a n g C ,L i RL ,L i JD ,Z h a n g H ,Z h e n g H Y ,G u oW ,S u nL ,F e n g P ．T h e s t u d y o n t h e c o l d r e s i s t a n c e a n d p h y s i o l o Ｇg y c h a n ge of r o o t i nm e a d o wf e s c u e Ｇa l f a l f am i x t u r e a n dm o n o c u l t u r e i nw i n t e r ．P r a t a c u l t u r a l S c i e n c e ,２０１６,３３(２):２６８Ｇ２７５．(i n C h i n e s e)[２７]㊀H a a g e n s o nD M ,C u n n i n g h a mS M ,V o l e n e c J J ．R o o t p h y s i o l o g y o f l e s s f a l l d o r m a n t ,w i n t e r h a r d y a l f a l f a s e l e c t i o n s ．C r o p S c i Ｇe n c e s 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e x e s of d i f f e r e n t L i l i u m ．P l a n tP h y s i o l og y Jo u r n a l ,２０１４,５０(９):１４１３Ｇ１４２２．(i nC h i n e s e )(责任编辑㊀张瑾)５１４１。