一、T-DNA的加工及转移
Vir基因操纵子系统被活化后，在农杆菌中可测到单链TDNA（ss T-DNA，亦称T链或正链），T链的形成取决于 VirD1及VirD2两种蛋白，这些蛋白一起决定内切酶活性， 在边界重复序列的特定位点形成切口，产生单链断裂。因 为T链的合成是从右边界至左边界，即5′→3′，若右边界缺 失，则T链的合成便无法开始，故目前认为T-DNA是以T链 形式向植物细胞转移的，而不是双链的T-DNA分子。左边 界作为DNA合成起始点的效率比右边界低，这并不是因为 左、右边界的核苷酸序列有什么不同，而是因为在右边界 的右边约17bp的超驱动序列，它可使T链的形成大大增加， 故 被 称 作 为 “ 转 化 增 强 子 （ transfer enhancer 或 overdrive），除去增强子序列导致菌株致病力消失。T链 的形成过程如图8-1示出。
左边界（TL）缺失突变仍能致瘤,但右边界（TR）缺失则不再能
致瘤,这里几乎完全没有T-DNA的转移,这说明右边界(TR)在T-DNA 转移中的重要性。
3. T-DNA上的编码基因及功能
T-DNA的转录有下述共同点：
①T-DNA的两条链都是有意义链,即都能被转录。
②T-DNA上每个基因都有各自的启动子。
第二节 根癌农杆菌Ti质粒的结构与功能
一、Ti质粒的遗传特性、结构及功能 二、T-DNA的基因结构与功能 三、Vir区操纵子的基因结构与功能
一、Ti质粒的遗传特性、结构及功能
1. Ti质粒的遗传特性及类型
Ti质粒是根癌农杆菌染色体外的遗传 物质，为双股共价闭合的环状DNA分子， 其分子量为95～156×106D, 约有200kb组 成。
3. VirG操纵子的诱导表达及功能
VirG操纵子小于VirA，只有1.0kb，同样是单基因 结构，只能编码一条多肽，被称为VirG蛋白，即DNA结 合活化蛋白（DNA-binding activator protein）。它的C 端已知有DNA结合活性。它的N未端部分具有磷酸化的 酸性结构。当磷酸化的A蛋白将其磷酸基转到VirG蛋白 （30kD）保守的天冬氨酸盐残基上时，使VirG蛋白活化。 活化的VirG蛋白可能以二体或多体形式结合到Vir区启动 子的特定区域，从而成为其它Vir基因转录的激活因子， 打开VirB、C、D、E、H等几个基因。并己证明，VirA或 VirG突变后会减弱或完全失去对其它Vir位点活化的诱导。 VirA及VirG的这种调控作用被称为双因子调控体系（two 一component regu1atory system）。
