血细胞分析仪原理一

血细胞分析仪

血细胞分析仪

血细胞分析仪是医院临床检验应用非常广泛的仪器之一，随着近几年计算机技术的日新月异的发展，血细胞分析的技术也从三分群转向五分群，从二维空间进而转向三维空间，而且我们也注意到现代血细胞分析仪的五分类技术许多采用了和当今非常先进的流式细胞仪相同的技术，如散射光检测技术、鞘流技术、激光技术等等。本文重点就五分群血细胞分析仪器的检测方法及其应用加以阐述。

检测方法

1．体积、电导、激光散射法（VCS）

这是Beckman－Coulter公司生产的血细胞分析仪所采用的经典分析方法，它集三种物理学检测技术于一体，在细胞处于自然原始的状态下对其进行多参数分析。该方法也称为体积、电导、激光散射血细胞分析法。此技术采用在标本中首先加入红细胞溶血剂溶解掉红细胞，然后加入稳定剂来中和红细胞溶解剂的作用，使白细胞表面、胞浆和细胞体积保持稳定不变。然后应用鞘流技术将细胞推进到流动细胞计数池（Flowcell）中，接受仪器VCS三种技术的检测。

V代表体积（Volume）测量法，是采用经典的库尔特专利技术，用低频电流准确分析细胞体积。体积是区分白细胞亚群的一个重要的参数，它可有效区分体积大小差异显著的淋巴细胞和单核细胞。

C代表高频电导性（Conductivity），采用高频电磁探针原理测量细胞内部结构间的差异，也是该公司的专利技术。细胞膜对高频电流具有传导性，当电流通过细胞时，细胞核的化学组份可使电流的传导性产生变化，其变化量可以反映出细胞内含物的信息。该参数可用来区分体积相近而内部性质不同的细胞群体，如淋巴细胞和嗜碱性粒细胞，由于它们的细胞核特性不同而在传导性参数上有所区别。

S代表激光散射（Scatter）测量技术，采用氦氖激光源发出的单色激光扫描每个细胞，收集细胞在10°～70°角度内出现的散射光 (MALS)信号。该激光束可穿透细胞，探测细胞内核分叶状况和胞浆中的颗粒情况，提供有关细胞颗粒性的信息，可以区分出颗粒特性不同的细胞群体。例如细胞内颗粒粗的要比颗粒细的散射光更强，因此可以用于区分粒细胞中的嗜中性、嗜酸性和嗜碱性三种细胞。 2. 电阻抗、射频与细胞化学联合检测技术

血细胞分析仪50年的发展历史和展望

中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院检验科张时民

1590 年荷兰人米德尔堡和詹森设计制造了最原始的显微镜（图1），1610 年伽利略使用望远镜观察小的物体并将其放大，后来被列文霍克改进成为原始的显微镜。1658 年意大利人马尔皮基应用最原始的显微镜首先观察到了红细胞，他是第一个见到红细胞的人，开始进行红细胞计数则是200 年后的事情了。而设计并生产出第一台血细胞计数仪则又过了近100 年。

自从发明了显微镜以后，人们从微观世界中了解和观察到了血液的组成，并根据他们的特点分别将它们称为红细胞和白细胞和血小板。在以后的研究中，人们发现许多疾病的发生和发展与血液中的细胞数量之间存在一定的关系。依据对疾病诊断的需求，人们开始寻求对血液中细胞的数量进行计数。1852 年就有人开始设计对红细胞的计数办法，1855 年发明了用于计数血细胞的计数板， 目前仍然使用的改良Neubauer 计数板就是应用最为广泛和持续时间最为长久的经典一种，虽然各种类型的血细胞计数仪已在广泛使用，但血细胞计数板法仍然是最为可靠和最为经典的计数技术，它不仅适用于血细胞计数， 还可用于其他细胞、动物血细胞、微小粒子及需要在显微镜下计数的各种样品，因此计数板仍然是检验工作者应该掌握的基本技能，是不应该忘记和放弃的手段。

随着对血细胞计数和分析需求的不断增加，对血细胞计数的方法进行改进，实现自动化、高速度、准确性、标准化和智能化的要求也越来越高，现代的血液细胞分析技术与50 年前的发明虽然有着本质上的相同或相似，但已经有了显著的飞跃。作者力图通过有限的资料对细胞计数和分析技术的发展进程进行回顾，并对最新的进展进行介绍和展望，期望对关注这一领域和从事血细胞分析工作的同行有所帮助。

一、血细胞计数仪的发展历史

谈到血细胞计数仪的发展史，在这个领域首开先河的人是1912 年出生在美国阿肯色州一个小城的人Wallance H. Coulter （图2a，b），他年青时对电子学非常感兴趣，最初是一位广播电台的电器工程师，后来做过X光机的销售员和维修工程师，在亚洲许多国家包括我国的上海工作过。1948 年他在芝加哥一家公司工作时，在一间地下室建立了自己的实验室，开始秘密的从事自己的实验，这项实验导致了一个重大的发明，他发现了微小粒子通过特殊的小孔时可产生电阻变化这一现象，并根据这种电阻变化特点将其应用于微小粒子的粒度测量和计数上。科技界为表彰他的发明，将其称为库尔特原理（Coulter principle ）。根据这个原理，Coulter 先生将其引入到血液细胞计数上，在1953 年获得美国发明专利，同年和他的兄弟约瑟夫（Joseph ）开创了自己的公司，并成功的设计和制造出了可以计数血细胞的专用仪器，然后开始了在这一领域的商业运作。这种仪器看起来非常原始和简单，好象一个示波器另加一些管道、电极和瓶瓶罐罐（ 图3） 。它的计数原理是根据血细胞的不良导电性和产生电阻抗原理来计数血液中的细胞，也就是电阻式血细胞计数原理，这种原理现在已经成为血细胞计数和分析中最为经典的原理。

DIRUI迪瑞

BF-6700 全自动无分类血细胞分析仪操作规程

一、 开机程序

1.1开机前的检查、准备

（1）试剂：检查稀释液、溶血剂是否充足，有无过期；试剂管路是否弯折，连接是否可靠。（2）废液桶：废液桶是否有足够的空间盛装废液，如废液桶满，应及时倒掉并清理。

（3）打印机：检查打印机是否正确安装，打印纸是否充足。

（4）供电电源：检查电源线是否正确连接。

（5）连接：检查分析仪与计算机主机之间通讯电缆是否正确连接；外置条码扫描仪的电缆线是否与计算机连接就绪。

1.2开机

（1）打开分析仪右侧的电源开关，电源指示灯亮。

（2）打开电脑电源后启动分析仪软件。输入用户名和密码，登录软件。（初始用户名为Admin，初始密码为1。）

（3）自检过程结束后，系统进入操作界面。

二、 校准

分析仪提供三种校准方式：人工校准、校准物校准和新鲜血校准。

2.1人工校准

在“人工校准”界面直接更改校准系数，点击“保存”键。

2.2校准物校准与新鲜血校准

在校准物校准和新鲜血校准中，所有与校准相关的数学计算都由分析仪自动完成，同一次校准物校准测试需用同一批号的校准物，测试3—5次，建议5次。新鲜血校准测试需3—5各样本，每个样本测5次。校准后得到的校准系数自动保存在“人工校准”界面。

校准物校准步骤：

在校准物校准界面点击【开始计数】键后，封闭进样器仓门自动打开，将校准物放置在封闭进样器3号位上，关闭进样仓门，按分析仪前面板右侧的计数键进行测试，测试结构自动保存，测试5次后点击【保存】键，校准系数自动存入“人工校准”界面的“校准系数”中。 新鲜血校准的操作步骤与上述相同。

三、 质控程序

每天开机后要先进行质控测试。

3.1质控设置

在“质控”的设置界面下，设置质控品信息。

3.2质控测试

在“质控计数”界面进行质控测试。点击【开始计数】键后，封闭进样器仓门自动打开，将质控品放置在1号位上，关闭进样仓门，按分析仪前面板右侧计数键进行质控测试。可在“质控图”及“质控列表”中查询质控结果。

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产品名称 全自动五分类血液分析仪

产品参数 • 检测参数：≥32个

• 直方图：≥4个

• 散点图：≥9个

• 检测速度：≥100样本/小时

• 检测光源：采用半导体激光，具有启动快、成本低、寿命长、消耗功率小的优点

• 检测通道：具有白细胞分类通道、白细胞/嗜碱性细胞/有核红细胞通道、红细胞/血小板通道、血红蛋白通道

• 有核红细胞检测功能：具有核红细胞检测功能，并能自动进行对白细胞细胞计数的校正

• 白细胞计数：

• 采用激光流式原理及核酸荧光染色技术，使白细胞计数免受难溶红细胞、巨大血小板、血小板簇及细胞碎片等的干扰

• 标配NRBC计数，自动校准每个样本的白细胞总数

• 白细胞分类：采用激光光源，流式原理加细胞核酸荧光染色技术进行

• 低值白细胞检测：当遇到低值白细胞样本时，仪器可自动或人工选择转换到低值白细胞检测模式，使白细胞检测颗粒数比普通检测模式增加3至5倍，结果准确、可靠。

• 血小板计数：使用DC方法进行血小板的计数

• 体液检测功能：

• 体液检测速度：≥40样本/小时

• 可以对脑脊液、胸水、腹水、关节腔积液等体液进行红细胞和白细胞计数

• 可以对体液中的白细胞分类

• 具有通过高荧光体液细胞参数对肿瘤细胞进行提示功能

• 体液白细胞线性0-10,000x103/L、红细胞线性0-5,000,000x106/L

• 血红蛋白检测：血红蛋白测定试剂需符合环保要求，不含有毒氰化物

• 进样模式：≥4个，全自动进样、手动闭盖进样、手工开盖进样和末稍血预稀释

• 样本用血量：

• 全自动进样模式时用血量≤88微升

• 开盖模式时用血量≤88微升

• 末梢血预稀释模式用血量≤20微升

• 检测模式：≥2个

• 自动进样架装载量：≥100样本

• 数据储存：≥100000个结果（含散点图、直方图），并可提供原厂中文数据管理软件，使数据（含散点图、直方图）的存贮量无限制

• 质控品、校准品：定期提供原厂配套的在中国CFDA注册的高、中、低值全套质控品和校正品。可单独提供体液质控品。