免疫组织化学技术

三、组织包埋和切片
（一）石蜡包埋切片 （二）恒冷箱切片
（一）石蜡包埋切片 （二）恒冷箱切片： 防冰晶 1、骤冻 2、10〜30%蔗糖溶液
异戊烷
干冰
组织块
冰冻切片包埋模具配 套O.C.T包埋剂使用
免疫组织化学染色程序
以ABC法为例
ABC
生物素 化二抗
一抗
组织抗原
染色程序:
组织采用石蜡切
片或恒冷箱切片, 片厚5～10 m 或者10 ～ 15 m 。

细胞爬片制作



将处理好的盖玻片放入接种了细胞的培养 瓶或六孔板内。 待细胞生长达到60％以上后取出玻片。 用4%的多聚甲醛固定2h以上。 可加甘油封存置于零下20度保存。
细胞涂片制作




离心将细胞收集出来，用预冷的 PBS洗2－3遍，最后用PBS将细胞 重悬。 吸取30－50ul（可根据细胞量调整） 滴至处理过的载玻片上，然后涂抹 均匀。 待稍微风干以后加4％多聚甲醛溶液 覆盖细胞，固定2－4小时。 在细胞上加一层甘油放-20℃保存。
常用酶类标记物

辣根过氧化物酶（horseradish peroxidase, HRP） H2O2和DAB（diaminobenzidine, 二氨基联苯胺） 为其常用底物，产物为稳定的棕黄色沉淀

碱性磷酸酶（alkaline phosphatase, AP）：BCIP
(5-bromo-4-chloro-3-indolyl-phosphate，5-溴-4-氯-3-吲哚-磷酸盐) 和 NBT（Nitro-Blue-Tetrazolium，四唑氮蓝）是AP的常用底物组合， 其中，NBT作为氧化剂, BCIP作为AP底物。

03 免疫组织化学染色技术的 操作流程
样本的收集与处理
01Βιβλιοθήκη 0203样本类型
免疫组织化学染色技术可 应用于各种组织样本，如 石蜡切片、冰冻切片、细 胞涂片和组织块等。
样本处理
在染色前，需要对样本进 行适当的固定、脱水、包 埋和切片等处理，以确保 抗原的完整性和活性。
样本标记
在切片过程中，需对组织 进行标记，以便后续的定 位和观察。
04 免疫组织化学染色技术的 优化与改进
抗体选择与优化
总结词
抗体选择是免疫组织化学染色技术的关键步骤，直接影响到染色结果的特异性和敏感性。
详细描述
在选择抗体时，应考虑抗体的来源和生产过程，以确保其质量和可靠性。同时，应选择针对目标抗原具有高亲和 力的抗体，以提高染色结果的特异性。此外，可通过实验验证抗体的最佳工作浓度，以实现最佳的染色效果。
染色结果的检测与评估
染色结果的检测与评估是免疫组织化学染色技术的最后步 骤，也是最为关键的一步。检测方法包括显微镜观察、图 像分析等。评估染色结果时，需要综合考虑染色强度、阳 性细胞的数量和分布等因素，以得出准确的结论。
染色结果的检测与评估对于病理诊断、肿瘤研究等领域具 有重要意义。通过免疫组织化学染色技术，可以检测组织 中特定蛋白质的表达情况，从而为疾病的诊断和治疗提供 有力支持。
抗原修复与阻断
抗原修复
通过加热或化学方法使抗原从组织中 暴露出来，以便抗体能够与其结合。
阻断
为了防止非特异性染色，需要用阻断 剂对组织进行阻断，以消除内源性过 氧化物酶和生物素等物质的干扰。
抗体孵育与洗涤
抗体选择
根据研究目的选择特异性抗体，确保其能够与目 标抗原特异性结合。
抗体孵育

免疫组织化学技术（immunohistochemistry）由于免疫组织化学技术具有特异性强、灵敏度高及能将形态研究与功能、代谢研究有机地结合在一起的显著特点，所以，这门新技术从一诞生起就显示出了强大的生命力和广阔的应用前景。

此方法经不断改进和发展已日趋成熟，应用范围逐渐扩大。

目前已有近十种技术方法及几百种标记抗体，技术方法逐步规范化，标记抗体逐步商品化，现今它已被广泛地应用于生物学和医学研究的许多领域，取得了令人瞩目的成就。

一、 免疫组织化学技术的原理和应用范围（一） 免疫组织化学技术的基本原理免疫组织化学技术是用显色剂标记的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应，对相应抗原进行定性、定位、定量测定的一项技术。

即先将组织或细胞中的某些化学物质提取出来，以其作为抗原或半抗原去免疫小鼠等实验动物，制备特异性抗体，再用这种抗体（第一抗体）作为抗原去免疫动物制备第二抗体，并用某种酶（常用辣根过氧化物酶）或生物素等处理后再与前述抗原成分结合，将抗原放大，由于抗体与抗原结合后形成的免疫复合物是无色的，因此，还必须借助于组织化学方法将抗原抗体反应部位显示出来（常用显色剂DAB显示为棕黄色颗粒）。

通过抗原抗体反应及呈色反应，显示细胞或组织中的化学成分，在显微镜下可清晰看见细胞内发生的抗原抗体反应产物，从而能够在细胞或组织原位确定某些化学成分的分布、含量。

组织或细胞中凡是能作抗原或半抗原的物质，如蛋白质、多肽、氨基酸、多糖、磷脂、受体、酶、激素、核酸及病原体等都可用相应的特异性抗体进行检测。

免疫学的基本原理决定了免疫组织化学技术具有高度特异性，因此，免疫组织化学技术从理论上讲也是组织细胞中抗原的特定显示，如角蛋白（keratin）显示上皮成分，LCA显示淋巴细胞成分。

只有当组织细胞中存在交叉抗原时才会出现交叉反应。

ABC法或SP法的出现，使抗体稀释上千倍、上万倍甚至上亿倍仍可在组织细胞中与抗原结合，所以免疫组织化学技术又具有敏感性高的特点。

❖多克隆抗体：多株B细胞针对多个抗 原决定簇产生的抗体
❖单克隆抗体：针对某一抗原决定簇， 由单株淋巴细胞（克隆）所产生的 抗体
多克隆抗体与单多克隆抗体及其产生
多克隆抗体的产生
❖ 以纯化的抗原免疫动物而获得，实际上是针对多个抗原决定 簇的多个抗体组成，检测范围广。在病理诊断 中，有利划归 肿瘤的基本类型。
酶标亲和素
在AB复合物中，酶是标记 在生物素上，而后与亲和素 合成复合物。在标记的亲和 素-生物素方法中是将辣根 过氧化酶直接标记在亲和素 上，辣根过氧化酶与亲和素 间有极强的结合力，因此 LSAB法比ABC法更敏感
多聚物载体
1、 核心是一种柔韧的多聚物，它能结合一抗和酶分 子，起到载体的作用
2、 一步法多聚物载体试剂是多聚物结合特异性一抗 和辣根过氧化酶，二步法多聚物载体试剂是一种能 与二抗相联结的由HRP标记的多聚物
显示系统
辣根过氧化酶的免疫组化染色的反应过程: HRP + H2O2 →HRP·H2O2 →有色分子终末产
物+ HRP DAB（电子供体） HRP：酶 H2O2：底物 HRP·H2O2：酶·底物复合物
显示系统
免疫过氧化酶染色的多种方法中，其主要的不同点 在于显色系统的差异： ❖ 间接酶标法：利用标记于桥联抗体的酶 ❖ PAP法： 利用PAP复合物 ❖ ABC法： 利用AB复合物 ❖ LSAB法: 利用直接标记于亲和素的酶 ❖ EPOS一步法及EnVision二步法：多聚物载体
标记抗体
1、在抗体上用化学方法联接某种标记物，目的是使抗原抗体 的结合能用肉眼观察到
2、标记物种类：荧光素：异硫氰酸荧光素或罗丹明 酶：辣根过氧化酶，碱性磷酸酶 金属离子：胶体金颗粒
3、标记的方法：化学性结合将降低抗体效价及标记物的活性， 从而使染色敏感性降低

通过染色技术可以确定病毒在组织中的分布和定位，有助于诊断 病毒感染和评估病情。
病毒载量评估
染色技术可以定量检测组织中病毒的数量，有助于评估病毒复制 活跃程度和治疗效果。
鉴别诊断
染色技术可以与其他感染性病变进行鉴别诊断，有助于确定病因 和治疗方案。
自身免疫性疾病诊断
自身抗体检测
通过染色技术可以检测组织中自身抗体的存在， 有助于诊断自身免疫性疾病。
炎症反应评估
染色技术可以反映组织炎症反应的程度和范围， 有助于判断病情进展和治疗效果。
鉴别诊断
染色技术可以与其他非自身免疫性疾病进行鉴别 诊断，有助于确定病因和治疗方案。
药物靶点筛选
药物作用机制研究
染色技术可以用于研究药物的作用机制和靶点，有助于发现新的治 疗方法和药物。
药物筛选
染色技术可以用于筛选具有潜在治疗作用的候选药物，有助于降低 药物研发成本和时间。
床常用指标。
病毒检测案例
总结词
免疫组织化学染色技术可用于病毒的快速检测和鉴定， 具有高灵敏度和特异性。
详细描述
在病毒检测中，该技术常用于检测病毒抗原或抗体，以 确定病毒的存在和感染程度。例如，在COVID-19诊断 中，通过免疫组织化学染色技术检测病毒抗原，有助于 快速确诊和防控疫情。
自身免疫性疾病诊断案例
未来展望
随着蛋白质组学、基因组学等领域的快速发展，免疫组织 化学染色技术将继续发挥重要作用，并有望在临床诊断、 药物研发等领域取得更多突破。
02
免疫组织化学染色技术的基本步 骤
样本准备
样本类型
组织样本、细胞样本等，要求新鲜、无菌、无杂质。
样本处理
清洗、切割、固定等，确保样本的稳定性和染色效果。

➢ 电镜原位杂交技术，能够在超微水平上精确定出基 因位点
免疫胶体铁细胞化学染色 法
胶体铁是一种阳离子胶体，将抗体分子标记上胶体铁，通 过普鲁蓝反应呈色，胶体铁颗粒有一定大小，还具有一 定电子密度，可用在电镜和光镜水平的抗原定位研究。
酶免疫电镜技术
酶免疫电镜技术是利用酶的高效率的催化作用对其底物 的反应形成不同的电子密度，借助于电子显微镜观察 ，证明酶的存在，从而对抗原进行定位。
LSCM 应用广泛
细胞器研究-籍特异性荧光探 针。图像清晰，可动态观察 活细胞
罗丹明123染细胞线粒体
鬼笔环肽染涡虫纲扁虫肌动蛋白丝
肿瘤细胞间通讯研究
检测人类癌细胞表皮生长因子
Y
Y
Z
Z
X
X
焦平面（水平面或xy切面）及沿光轴（垂直平面或xz切面）光学切面模式图
分层扫描、光学切片
细胞测量
细胞“CT”片
四、链霉亲合素-生物素法 (LSAB）
链霉亲合素(Streptavidin SA)是从链霉菌培养物提取的一种纯 蛋白，不含糖基，有4个生 物素结合位点，并且具有高度的亲 和力，其功能类似亲合素。
利用生物素结合的二抗与酶标记的链霉亲合素蛋白就组合成酶标链霉亲合 素-生物素方法
第五节 免疫电镜技术
一、免疫标记电镜技术的原理
原理：是以游离的亲合素作为桥联剂，利用亲合素的多价性，将检
测反应体系中抗原、生物素化抗体复合物与标记生物素联结起来 ，达到检测反应分子的目的。 由于生物素化抗体分子上连有多个 生物素，因此，最终形成的抗原-生物素化抗体-亲合素-酶标生物 素复合物可积聚大量的酶分子；加入相应酶作用底物后，即会产 生强烈的酶促反应，从而提高检测的灵敏度。
藤黄微球菌 绿色-活菌 红色-死菌 酶免疫组织化学技术的应用

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双桥PAP法原理
• 该法是PAP法的改良法，通过两次连接桥 抗体和PAP，在抗原抗体复合物上结合比 PAP法更多的酶分子，形成Ag-Ab1-Ab2PAP-Ab2-PAP复合物，最后通过PAP复合 物中的HRP催化底物显色。
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双桥PAP法技术要点
• （1）、（2）、（3）、（4）和（5）同 PAP法。
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PAP法的原理
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PAP法技术要点
• （1）、（2）、（3）和（4）同间接法。 • （5）加PAP复合物，温育，使形成Ag-
Ab1-Ab2-PAP复合物，洗涤. • （6）加底物，光镜下观察显色结果。
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PAP法的方法评价
• PAP法未经化学交联，故避免了抗体和酶活性 的降低，并省去酶标记抗体需纯化的繁琐过程。 PAP是由2个抗酶抗体和3个过氧化物酶分子组 成的复合物，稳定性好，酶分子不易在染色冲 洗过程中脱落。PAP中不存在游离的免疫球蛋 白，不易产生非特异性染色，因而特异性、敏 感性和重复性良好，比直接染色法、间接染色 法和酶桥法更敏感。缺点是PAP复合物制备过 程较复杂。
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免疫组化技术要点
• 标本的制作 • 抗体的选择 • 温育 • 改善标本的透过性 • 设立对照试验 • 免疫组化的结果判断
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标本的制作
• 标本的类型
1.组织切片：①冷冻切片；②石蜡切片 2.印片 3.涂片
• 标本的固定 • 标本的保存 • 酶消化处理
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设立对照试验
• （6）加Ab2，温育，形成Ag-Ab1-Ab2PAP-Ab2复合物，洗涤。

免疫组织化学（Immunohistochemistry，简称IHC）和免疫荧光染色（Immunofluorescence，简称IF）是两种常用的免疫细胞化学技术，用于在组织切片或细胞涂片上检测特定蛋白质或抗原的存在和分布。

这两种技术都依赖于抗体与抗原之间的特异性结合反应。

免疫组织化学是一种使用酶标记抗体来检测抗原的方法。

在这个过程中，首先将组织切片与特定的初级抗体（针对目标抗原的抗体）孵育，然后洗涤以去除未结合的抗体。

接下来，将切片与带有酶标记的次级抗体（针对初级抗体的抗体）孵育。

再次洗涤后，加入酶的底物，它会在酶的作用下产生颜色沉淀，使得抗原的位置在显微镜下可见。

常用的酶包括过氧化物酶和碱性磷酸酶。

这种方法的优点是可以产生永久性的记录，因为颜色沉淀是稳定的。

免疫荧光染色则涉及使用荧光染料标记的抗体来检测抗原。

在这个过程中，初级抗体和次级抗体都带有荧光标记。

当这些抗体与抗原结合时，它们发出的荧光可以在荧光显微镜下观察到。

这种方法的优点是可以同时使用多种颜色的荧光染料来检测多个不同的抗原，而且荧光信号通常比免疫组织化学的颜色反应更强。

两种技术都有其应用范围。

免疫组织化学常用于病理学诊断，因为它可以用于存档的组织样本，并且结果可以用常规显微镜观察。

而免疫荧光染色则更适合于研究目的，特别是在活细胞成像和多标记实验中，因为它可以提供更丰富的信息和更高的灵敏度。

总之，免疫组织化学和免疫荧光染色都是强大的工具，它们使得科学家能够在细胞和组织水平上可视化蛋白质的表达和定位。

选择哪种技术取决于实验的具体需求和可用的设备。

临床医学检验临床免疫：免疫组织化学技术考试题库真题1、单选免疫组织化学技术中，对固定剂的要求不包括（）A.能快速固定抗原B.能防止抗原物质扩散C.固定后的抗原能被抗体识别D.具有氧化活性E.固定后不影（江南博哥）响抗原抗体反应正确答案：D2、单项选择题生物素－亲和素系统的特点不包括（）A.灵敏度高B.特异性好C.适用广泛D.稳定性高E.无需活化正确答案：E3、单选免疫标记电镜技术获得成功的关键是（）A.对细胞超微结构完好保存B.保持被检细胞或其亚细胞结构的抗原在原位C.保持其抗原性不受损失D.选择的免疫试剂能顺利穿透组织细胞结构与抗原结合E.以上叙述都正确正确答案：E4、单选斑点ELISA与常规ELISA比较不同之处在于（）A.二者实验原理不同B.二者所用固相载体不同C.二者所用酶不同D.二者所用酶标抗体不同E.以上都不对正确答案：B5、单选免疫组化技术中非特异性染色的特点不包括（）A.细胞和细胞间质均匀染色B.染色无特定部位C.染色具有结构性D.某一片均匀着色E.无分布规律正确答案：C6、单选用直接免疫荧光法检测T细胞上CD4抗原，荧光素应标记在（）A.CD4抗原上B.CD4单克隆抗体上C.固相载体上D.抗人Ig抗体上E.某种动物红细胞上正确答案：B7、单选石蜡包埋材料用酶处理的目的（）A.防止出现假阳性B.增大抗原的保存量C.裸露抗原的决定簇D.分解蛋白质E.消化石蜡表面正确答案：C8、单选免疫组化技术中固定标本的目的不包括（）A.使细胞内蛋白质固定B.终止细胞内酶反应C.防止细胞自溶D.去除干扰抗原抗体反应的类脂E.促进组织细胞中抗原的释放正确答案：E9、单选下列关于酶免疫组织化学技术的叙述中错误的是（）A.敏感性比免疫荧光标记技术高B.可用普通光学显微镜观察结果C.不能用电子显微镜观察结果D.便于对组织细胞微结构作分析E.染色标本可长期保存正确答案：C10、单选石蜡切片的优点不包括（）A.切片薄有连续性B.可长期保存C.防止抗原损失D.用于回顾性研究E.观察组织细胞结构的理想方法正确答案：C11、单选下列关于组织取材说法错误的是（）A.取材部位必须是主要病变区B.活检钳的刃口必须锋利，以免组织受挤压C.可选病灶区与正常组织交界区以外的区域D.必要时取远距病灶区的正常组织做对照E.组织标本可取活组织检查标本正确答案：C12、单选用免疫荧光技术直接法检测组织中的抗原，应将荧光素标记（）A.抗原B.相应抗体C.抗免疫球蛋白杭体D.抗原－抗体复合物E.抗C抗体正确答案：B13、单选荧光抗体保存3～4年，应选择（）A.小量分装、4℃B.瓶分装、4℃C.瓶分装、－10℃D.小量分装、－20℃E.瓶分装、－20℃正确答案：D14、单选下列不符合荧光免疫技术直接法的描述是（）A.荧光抗体直接加于标本上B.常用于抗核抗体的检测C.每检查一种抗原需制备特异的荧光抗体D.灵敏度偏低E.特异性高，非特异荧光染色因素少正确答案：B参考解析：荧光免疫技术直接法检查抗原时，是用已知特异性抗体与荧光素结合，制成荧光特异性抗体，直接与细胞或组织中相应抗原结合，在荧光显微镜下即可见抗原存在部位呈现特异性荧光。

常用免疫组织化学染色方法免疫组织化学染色是通过将抗原与抗体结合来检测组织中特定蛋白质的染色方法。

它是现代生物医学中常用的一种技术，可以用于研究分子生物学、细胞生物学、病理学等领域。

以下是一些常用的免疫组织化学染色方法介绍：1. 免疫组化染色(Immunohistochemistry, IHC)：免疫组化染色是免疫组织化学中最常用的方法之一、其基本原理是使用一种与目标抗原特异性结合的抗体，将抗原与抗体结合，然后通过染色方法将表达该抗原的细胞或组织可视化。

常用的染色剂包括多聚酶、酶标、荧光素和放射性同位素。

IHC可以用于检测细胞表面抗原、细胞器中的抗原以及胞内蛋白质的定位。

2. 免疫荧光染色(Immunofluorescence, IF)：免疫荧光染色利用荧光标记的抗体来检测特定抗原。

它可以提供高度特异性和灵敏度的探测，可以用于研究蛋白质的亚细胞定位、蛋白质相互作用等。

利用该方法可以用于检测多种类型的标记（单标记、双标记、复合标记等），从而实现多重染色或共定位染色。

3. 免疫电镜染色(Immunoelectron microscopy, IEM)：免疫电镜染色是一种将金粒标记的抗体用于电子显微镜下观察并定位特定抗原的方法。

通过将金粒结合到抗原-抗体复合物上，可以在电子显微镜下清晰地观察到抗原的位置和分布。

这种方法具有高分辨率和高特异性的优点，广泛应用于超微结构的研究。

4. 免疫酶标染色(Immunoenzyme staining, IES)：免疫酶标染色是使用酶作为标记物，通过化学反应将抗原与酶标记的抗体结合，从而显示出特定抗原的位置和分布。

常用的标记物包括辣根过氧化物酶(HRP)、碱性磷酸酶(ALP)等。

在检测抗原时，标记物可以与染色底物产生反应生成可见色素，形成染色，以显示抗原的位置和分布。

5. 免疫组织化学原位杂交(Immunohistochemical in situ hybridization, IHC-IS)：免疫组化原位杂交技术是一种结合了原位杂交和免疫组化技术的方法。

免疫组织化学检验技术一、免疫组织化学检验技术简介免疫组织化学检验技术（Immunohistochemistry，IHC）是一种常用的实验技术，它利用抗原-抗体的特异性结合反应，检测组织或细胞中的蛋白质、多肽、激素等生物活性物质。

该技术可用于疾病的诊断、病理学研究、药物靶点筛选等多个领域。

二、免疫组织化学检验技术的基本原理免疫组织化学检验技术的核心是抗原-抗体的特异性结合反应。

这种反应基于抗体和抗原的互补性，即抗体分子中的抗原结合部位能够与抗原分子中的互补部位结合。

在免疫组织化学检验中，将组织或细胞固定在载玻片上，然后加入特异性抗体，通过孵育反应，抗体与组织或细胞中的抗原结合。

随后加入显色剂进行显色反应，根据显色情况判断是否存在相应的抗原。

三、免疫组织化学检验技术的应用例子1.肿瘤诊断：免疫组织化学检验技术可用于肿瘤诊断，通过检测肿瘤组织中的特异性抗原，如癌胚抗原、糖类抗原等，有助于确定肿瘤的性质和分化程度。

例如，乳腺癌患者的肿瘤细胞可能表达ER、PR、HER2等基因蛋白，通过检测这些蛋白的表达情况，有助于指导治疗和判断预后。

2.感染性疾病诊断：免疫组织化学检验技术也可用于感染性疾病的诊断，例如检测病毒抗原、细菌抗原等，有助于确定感染的病原体种类。

例如，在流感病毒感染中，通过检测病毒核蛋白抗原，有助于确诊病毒感染。

3.药物靶点筛选：免疫组织化学检验技术还可用于药物靶点筛选，通过检测目标蛋白在组织或细胞中的表达情况，筛选出可能的药物作用靶点。

例如，在寻找治疗肿瘤的新药时，可利用免疫组织化学技术检测肿瘤细胞中的各种蛋白表达情况，筛选出可能的药物作用靶点。

四、免疫组织化学检验技术的优缺点1.优点：具有高特异性、高灵敏度、操作简便、易于定量等优点。

同时，免疫组织化学检验技术可以用于检测组织或细胞中的蛋白质、多肽、激素等生物活性物质，有助于深入探讨疾病的发病机制和病理过程。

2.缺点：可能会出现非特异性染色和交叉反应，影响结果的准确性。

免疫组织化学与免疫荧光技术是现代免疫学中不可或缺的技术。

这些技术无论在实验室还是临床应用中都具有重要的意义。

本文将详细介绍免疫组织化学和免疫荧光技术。

一、免疫组织化学免疫组织化学是通过免疫染色技术来检测组织中特定的蛋白质。

这种技术是以抗体和免疫反应的基本原理为基础的。

其原理是识别特定抗原与其结合的抗体。

免疫组织化学在检测肿瘤中常被广泛应用，具有诊断和分型作用。

例如，在乳腺癌中常用到人类表皮生长因子受体2（HER2）的免疫组织化学诊断。

通过使用HER2单克隆抗体来检测HER2蛋白质，可以帮助医生确定病人的治疗方案。

另一个例子是在诊断食管癌时，免疫组织化学可以检测局部淋巴结中是否存在HER2的阳性表达，以协助决定术前的治疗方案。

二、免疫荧光技术免疫荧光技术是一种通过利用荧光染料来检测特定蛋白质的技术。

该技术同样以抗体和免疫反应的基本原理为基础。

免疫荧光技术被广泛应用于微生物、细胞和组织的检测中。

免疫荧光技术可以检测甲型流感病毒、腺病毒等病毒的感染，同时也可以对肺炎支原体等细菌进行检测。

在医学检测中，免疫荧光技术在快速确诊上具有优势。

此外，免疫荧光技术也被广泛用于检测自身免疫疾病，如系统性红斑狼疮（SLE）、肌无力等疾病。

在SLE的治疗中，抗核抗体“ANA”是常用的诊断标志物，免疫荧光技术能够检测出ANF。

通过免疫荧光技术来检测ANF，可以帮助医生对SLE患者进行诊断。

总结免疫组织化学和免疫荧光技术是现代免疫学中不可或缺的技术。

这些技术可以帮助医生进行生物分子的检测，并为患者的治疗提供准确的诊断。

在这个时代，免疫学将会成为一个重要的领域，并在未来发挥越来越重要的作用。

通过更加深入的研究和使用，我们可以更好地理解免疫系统，并开发出更多免疫学技术，为疾病的早期诊断和治疗提供支持。

复


染
根据所用的底物溶液而选择复染液
DAB 有色终末产物不溶于酒精和有机溶剂， 可用醇性染料复染、脱水，有机溶剂透明和封 固。复染过程：a、漂洗切片以除去未反应的 底物；b、Harris苏木素复染；c、流水洗涤； d、1%盐酸酒精分化；e、流水冲洗，温水蓝 化；f、梯度酒精脱水；g、二甲苯透明；h、 中性树胶封固。
显色物标记的抗体检测组织或细胞内的抗 原，用于疾病的诊断或研究。
新鲜组织的冻存 新鲜组织离体后应及时冻存，如需送至其他 实验室冻存可先置于4℃生理盐水中，但时 间不宜超2～6过小时。制备冻块的原则是 低温及速冻。速冻的目的是使抗原迅速固定 和防止冰晶形成，冰晶形成将破坏细胞结构。 低温速冻的方法有：丙酮–干冰法、液氮法。
10%中性缓冲福尔马林液

40%甲醛10ml，0.01mol/L pH7.4的 PBS90ml
影响固定的因素

固定时间 固定时间过短将影响抗原的固定 和细胞形态，过长能引起抗原遮盖或抗原 变性，因而要选择一合适的固定时间。

固定温度 一般固定剂的固定作用随温度升 高而加强，固定的温度以室温最为常用。



冰冻切片 石蜡切片
免疫组织化学染色



内源性酶和内源性生物素的阻断 内源性过氧化物酶主要见于红细胞的血红 蛋白，中性粒细胞内的髓过氧化物酶及单 核细胞，嗜酸性细胞和组织内的过氧化物 酶。 阻断剂：3% H2O2–甲醇液，10～15分 钟
内源性碱性磷酸酶
内源性碱性磷酸酶主要见于中性粒细胞和内
热诱导的抗原修复应注意的问题：

热处理后应注意自然冷却。 热处理液不要让其煮干。 不要任何抗原的检测都使用该方法。 一批抗原的检测其温度和时间一定保持一致。 形态学结构的改变：一般经高温修复后胞浆无明显的破 坏，而对细胞核的影响较大，会出现核破裂，苏木素淡 染等现象。而经酶水解的切片，其细胞浆破坏要视消化 时间而异，但核的破坏较轻。

免疫组织化学酶标法
免疫组织化学酶标法是一种常用的免疫组织化学技术，用于检测
组织或细胞中的特定蛋白质或抗原。

该方法利用酶标记的抗体与组织
或细胞中的抗原结合，然后通过酶促反应产生可检测的信号。

免疫组织化学酶标法的基本步骤包括：
1. 组织或细胞的制备：将组织或细胞固定在载玻片上，并进行切
片或细胞涂片。

2. 抗原的暴露：通过抗原修复或抗原暴露技术，使抗原在组织或
细胞中暴露出来。

3. 抗体孵育：将酶标记的特异性抗体与组织或细胞孵育，使抗体
与抗原结合。

4. 信号检测：通过酶促反应产生可检测的信号，例如颜色变化或
荧光信号。

5. 结果分析：通过显微镜观察组织或细胞中的信号分布和强度，
进行结果分析。

免疫组织化学酶标法具有高灵敏度、高特异性和高重复性等优点，广泛应用于生物医学研究、诊断和治疗等领域。

免疫组织化学染色免疫组织化学染色（IHC）是一种在组织学检查中使用的技术，通过使用适当的抗体，可以在细胞和组织的切片中检测特定的抗原分子。

因此，IHC 已成为临床病理学和分子生物学中最常用的技术之一。

本文将更深入地介绍 IHC 的原理和过程，并探讨其在医学研究和临床实践中的应用。

1. IHC的原理IHC是通过抗体对靶分子的特异性识别来实现其在组织中的检测的。

IHC 技术需要在切片中实现以下几个步骤:1）在组织切片中暴露特定的抗原2）使用专门的一抗体与抗原靶标结合3）使用与一抗体结合的二抗体，在组织切片中产生荧光信号4）用显微镜观察和分析荧光信号这些步骤是在组织化学方法的基础上开发的。

和化学染色技术不同的是，IHC 不使用化学剂来产生颜色，而是使用特定的荧光剂和相应的光学仪器来检测抗原。

2. IHC的应用IHC技术被广泛应用于病理学中，可用于进行肿瘤诊断和疗效判断。

由于IHC可检测多种分子标记，在病理学上广泛应用，尤其是对于那些无法通过组织学或直接检测技术得到明确诊断的疾病。

除了在癌症诊断中的应用，IHC还被广泛应用于基因科学和生物技术领域。

IHC技术也可用于检测序列变异，并通过组织对不同的基因表达型进行上调或下调检测。

IHC还可以用于评估药物的靶向治疗作用，因为它可以确定药物的分子靶标是否在肿瘤组织中被表达或过度表达。

3. IHC的优缺点虽然IHC技术在医学研究和临床实践中具有许多优点，但在使用时也需要注意到一些问题。

在选择一抗体和二抗体时需要特别谨慎，因为错误的选择可能会导致技术上无效或结果不准确。

另外，IHC技术还需要相对专业的仪器和高昂的成本，大大增加了检测费用。

此外，IHC技术也需要对样本的抗原表达模式和抗原种类有一定的了解，以选择适当的抗体和配对规格。

然而，总体来说，在复杂和多样性的细胞和组织样本中，IHC技术仍然是一种准确和高效的检测方法。

结论总之，免疫组织化学染色是一种强大而有效的技术，可用于检测细胞和组织中特定的抗原分子。

免疫组织化学的定义
免疫组织化学，简称免疫组化，是病理诊断中的一种检测方法。

它应用免疫学的基本原理，即抗原抗体反应，通过化学反应使标记抗体的显色剂显色，来确定组织细胞内的抗原，并对这些抗原进行定位、定性及相对定量的研究。

免疫组织化学技术具有特异性强、灵敏度高、定位准确等优点，被广泛应用于临床病理诊断、法医学鉴定以及生物学和医学基础研究等领域。

在病理诊断中，免疫组织化学技术主要用于协助疾病的诊断和鉴别诊断。

例如，对于肺癌，通过免疫组化可以检测到癌细胞是否表达某些特定的肿瘤标志物，从而帮助医生判断肺癌的类型和恶性程度。

同时，免疫组化技术还可以用于判断肿瘤的来源，例如通过检测癌细胞表面的某些糖蛋白或糖脂来鉴别肿瘤是来自消化系统还是泌尿系统。

在法医学鉴定中，免疫组织化学技术常用于检测生物样本中的毒品、药物等物质，以协助司法机关进行犯罪调查和审判。

此外，免疫组织化学技术还被广泛应用于生物学和医学基础研究中，例如研究细胞生长、发育、分化等过程中的基因表达和调控机制，以及研究肿瘤发生、发展过程中的基因变异和信号转导机制等。

总之，免疫组织化学技术在医学领域中发挥着重要作用，为疾病诊断和治疗提供了重要的依据和支持。