动物科学细胞实验报告

细胞生物学实验报告——PEG诱导动物细胞融合

1 山东大学细胞生物学实验报告 聚乙二醇（PEG）法诱导的动物细胞融合实验 2012/9/11 实验目的： 了解细胞融合技术的发展过程和主要方法的基本原理，用聚乙二醇(PEG)化学诱导法进行鸡血红细胞的融合实验，掌握实验的基本操作，观察鸡血红细胞融合的不同时期。 实验原理： 1. 细胞融合的概念 两个或两个以上的细胞或原生质体在自然或人为诱导的情况下细胞质膜相互融合，细胞质相互混合成为一个整体杂合细胞的现象被称为细胞融合。细胞融合可以发生在同种细胞之间也可以在不同物种间实现。 2. 细胞人工融合的主要方法及基本原理 细胞体外融合的主要方法分为病毒诱导，化学诱导和物理诱导。1953年，M. Kuroya在临床中第一次分离到仙台病毒（HVJ）[1]。1958年，日本学者Okada发现仙台病毒（HVJ）能诱导动物细胞融合[2]，其基本原理是仙台病毒的衣壳上有细胞表面受体的结合位点，可以诱导不同细胞凝集，最终使不同细胞的细胞膜相互融合。 1974年，加拿大学者高国楠发明了细胞的聚乙二醇（Polyethyleneglycol，PEG）化学融合法，由于该方法对实验条件要求极低，试剂易得，操作简单，成为应用最广泛的细胞融合方法。化学诱导细胞融合的基本原理是PEG等化学物质能够诱导细胞膜磷脂分子的极性基团发生结构重排，相互接触的细胞在细胞膜恢复过程中借助磷脂分子的亲和作用和表面张力实现融合。比之于仙台病毒诱导法，PEG诱导法的效率提高了几百倍。 80年代，科学家发明了细胞电融合法[4, 5]

，电融合法将细胞融合的产率提高到了50%-80%。电融合法的建立是基于细胞膜表面带电荷的性质。当在细胞悬液周围加入特定方向的电场时，细胞表面会发生极化现象，相邻的细胞将吸附在一起。这时突然提高电场强度，细胞间彼此接触的细胞膜会被击穿，细胞膜修复时受到磷脂分子间的亲和作用和细胞膜表面张力的作用将会发生融合。

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观察动物细胞与植物细胞实验教学与反思　

金华市青看中学（３２１０００）　滕晨　

在这一实验的准备过程中，我按照初一科学实验活动册　

的要求，准备好实验药品、仪器，买好新鲜的洋葱，牙签和　

卷纸，先配好０．０１％亚甲基蓝溶液和０．９％的生理盐水、红墨　

水，分别倒入到４８个细口试剂瓶中，贴上标签。为了维持日　

腔上皮细胞的正常形态，便于观察，必须首先滴一滴生理盐　

水。而亚甲基蓝是给人体口腔上皮细胞染色用的，在实际的　实验操作过程中，往往有些学生就疏忽了这一点导致实验的　

失败，原因是忘记在观察动物细胞之前要滴一滴生理盐水或　

在观察洋葱表皮细胞时滴一滴清水。除了准备好以上的实验　

仪器之外，还有要用到显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、滴　

管、刀片、洋葱表皮永久装片、烧杯、清水。　

在这个实验中，一般老师都会先复习一下显微镜的结构　

及功能、显微镜的操作步骤，即安放、对光、放片、调焦和　观察。有些学生在不熟悉操作的情况下，在对光这一环节就　

会出现问题，如在对光时不使用大光圈或显微镜的反光镜不　

对准光源，不清楚在光线亮时要使用平面镜，而光线暗时使　

用凹面镜，这个时候，学生便开始手忙脚乱了，然后问老师　

为什么没看到一个清晰明亮的视野，我一一指出问题的所在　

并回答。在放片这一环节，也有一部分同学不知道要把载玻　

片放在压片夹下先固定好然后再观察，这些都是容易出错的　

操作。在用低倍镜转换成高倍镜时，有些学生不清楚应该这　时应使用细准焦螺旋而不是粗准焦螺旋，否则就看不到物像　

了。在观察时，很多学生会忘记画出观察到的物像。边观察　

边记录有助于提高学生的实验效率。下面我就将两个实验的　

步骤简单地介绍一下。　

一、观察洋葱表皮细胞的实验步骤　

１．用干净的纱布将载玻片擦拭干净，在干净的载玻片上　

滴一滴清水。这一步骤是成功实验的开头，而事实上往往一　部分学生是很容易遗忘的。所以当实验失败时，纠其原因，　

才发现自己在一开始就忘记在载玻片上滴一滴清水。清水可　

姓名 董朔晖 系年级 生命科学院2011级 学号 201100230164

科目 细胞生物学实验 实验题目 动物细胞融合 日期 2012.03.01

实验二：动物细胞融合

一、实验目的

1、了解动物细胞融合的常用方法。

2、学习化学融合的基本操作过程。

3、观察动物细胞融和过程中细胞的行为和变化。

二、实验用品

1、材料

鸡血红细胞

2、试剂

50%PEG、Hank’s溶液（pH7.4）、Alsever’s细胞保存液0.85%氯化钠溶液。

3、器材

普通光学显微镜、离心机、量筒、载玻片、盖玻片离心管、废液缸等。

三、实验原理

细胞融合是指在自发或者诱导条件下，两个或两个以上细胞合并为双核或者多核细胞的过程。目前人们已经发现有很多方法可以诱导细胞融合，包括病毒诱导融合、化学诱导融和和电激诱导融合。

1、病毒诱导融和

仙台病毒、牛痘病毒、新城鸡瘟病毒和疱疹病毒等可以介导细胞的融时也可介导细胞与细胞的融合。用紫外线灭活后，这些病毒即可 姓名 董朔晖 系年级 生命科学院2011级 学号 201100230164

科目 细胞生物学实验 实验题目 动物细胞融合 日期2012.03.01

诱导细胞发生融合。

2、化学诱导融合

很多化学试剂能够诱导细胞融合，如聚乙二醇(PEG)、二甲基亚砜、山梨醇、甘油、溶血性卵磷脂、磷脂酰丝氨酸等。这些物质能够改变细胞膜脂质分子的排列，在去除这些物质之后，细胞膜趋向于恢复原有的有序结构。在恢复过程中想接触的细胞由于接口处脂质双分子层的相互亲和与表面张力，细胞膜融合，胞质流通，发生融合。化学诱导方法，操作方便，诱导融合的概率比较高，效果稳定，适用于动、植物细胞，但对细胞具有一定的毒性。PEG是广泛使用的化学融合剂。

3、电激诱导融合

包括电诱导、激光诱导等。其中，电诱导是先使细胞在电场中极化成为偶极子，沿电力线排布成串，再利用高强度、短时程的电脉冲击破细胞膜，细胞膜的脂质分子发生重排，由于表面张力的作用，两细胞发生融合。电诱导方法具有融合过程易控制、融合概率高、无毒性、作用机制明确、可重复性高等优点。

细胞生物学实验报告

细胞冻存

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一、实验原理

在低于-70℃的超低温条件下，由机体内部的生化反应极其缓慢，甚至终止，因此采用适当的方法将生物材料降至超低温条件，即可使生命活动固定在某一阶段而不衰老死亡。当以适当的方法将冻存的生物体恢复至常温时，其内部的生化反应可恢复正常。

冷冻保存就是将体外培养物悬浮在加有或不加冷冻保存液的溶液中，以一定的冷冻速率降至零下某一温度，并在此温度下对其进行长期保存的过程。 水在低于零度的条件下→结冰→细胞死亡。如向培养液加入保护剂，可使冰点降低。在缓慢的冻结条件下，能使细胞内水份在冻结前透出细胞。贮存在－130℃以下的低温中能减少冰晶的形成。

目前常用的保护剂为二甲亚砜（DMSO）和甘油，它们对细胞无毒性，分子量小，溶解度大，易穿透细胞。最适冷冻速度：不同细胞的最适冷冻速度不同。标准冷冻的开始速度为－1至－2℃/min，当温度低于－25℃时，可加速，到－80℃时可直接加入液氮中（－196℃）。复苏细胞时则直接将细胞的冻存管放到40℃热水中迅速解冻。

二、实验目的

1、掌握无菌操作技术。

2、.掌握细胞冻存的一般方法与步骤。

3、掌握培养细胞的消化方法。

4、了解在倒置相差显微镜下观察培养细胞的形态和生长状况。

三、实验仪器、材料、试剂及用品

1、仪器：超净工作台、CO2培养箱、倒置相差显微镜

2、材料：人宫颈癌HeLa 细胞

3、试剂：胰酶、DMEM培养基、血清、DMSO、抗生素