微藻工厂化培养经验分享(附单胞藻的培养配方)

格式：doc
大小：153.00 KB
文档页数：10

下载文档原格式

【智慧水产】水产养殖中微藻的培养方法

【智慧水产】水产养殖中微藻的培养方法点击蓝字智慧中农即可关注您现在关注的是一个只做推广，不做广告的微信平台----智慧中农在水产养殖过程中，浮游植物（以下称微藻，即人们平常所指的水的颜色的主要组成部分）是鱼、虾、蟹、贝类等的直接或间接饵料；微藻能够降解养殖水域中氨氮等有毒物质，维持微生态平衡，促使鱼、虾、蟹、贝类等达到生态防病的目的等等。

所以要想水产养殖生态、高效、无公害，微藻能够起到非常重要的作用。

根据施肥品种、接种方式、养殖需要的不同，将繁殖微藻的方式分为以下几种。

一、使用不同的肥料繁殖微藻1．使用肥料的种类目前在水产养殖中，经常使用肥料繁殖微藻，肥料的品种有有机肥、无机肥、最新研制的复合肥料等。

（1）有机肥经常使用的有机肥有粪肥、绿肥、混合堆肥等。

有机肥肥效持久，但有机耗氧量多，条件致病微生物含量高，使用之前必须进行发酵腐熟。

要繁殖微藻一般要施足基肥，然后根据水质肥瘦、养殖生物的生长活动、天气情况等进行追肥。

①粪肥：将动物粪便充分发酵腐熟，根据养殖需要在育苗或放养苗种前15天，将一定量的发酵粪便堆放在池的四角，或将发酵粪便滤掉残渣后，用其汁液泼洒。

②绿肥：根据养殖的需要在育苗或放养动物苗种前15天，将一定量的无毒、无刺激、易腐烂的新鲜嫩草堆放在池的四角，全部浸没在水中，用泥土等压紧。

③混合堆肥：在发酵池里，将嫩草与动物粪便交替层层堆叠，层与层之间洒堆肥量10%～15％的生石灰，用土密封。

以其发酵汁液作为基肥或追肥。

（2）无机肥品种有氮肥、磷肥、钙肥等。

氮肥为硫酸氨、氯化氨、尿素等：磷肥为过磷酸钙、磷酸二氢钠等；钙肥为生石灰等；还有含有铁、锰、锌、铜、鈷等多种微量元素的复合肥等。

在海洋微藻的封闭或半封闭培养期间，还经常使用硅肥（硅酸钠等）、铁肥（柠檬酸铁等）。

2．肥料的使用在水产养殖中，肥料有时单一使用，但大部分时间是几种肥料搭配使用，以有机肥料和无机肥料相互搭配使用比较多见，有机肥多作为基肥使用，无机肥多作为追肥使用；池塘里多使用有机肥，在水产动物育苗期间，繁殖微藻多使用无机肥等。

贝类育苗单胞藻培养技术

2013.6饲料与添加剂辽东学院农学院罗永成贝类育苗单胞藻培养技术随着贝类人工育苗技术的发展，单胞藻饵料的培育已成为育苗过程中的关键技术。

在贝类人工育苗过程中，需要培养大量的优质单胞藻作为幼体贝的饵料。

单胞藻培养的好坏，直接影响育苗的成败。

一、一级培养（保种室）1．培养设施为在贝类人工育苗季节保存高纯度的优质藻种，育苗厂应具备专用的保种室，其面积大小依据规模而定。

保种室四面用玻璃窗采光，并加装人工光源，以备阴雨天光线不足时使用。

若是透明玻璃钢瓦屋顶的保种室，则在夏季高温时，会因光线太强和室温过高而抑制单胞藻生长，甚至“烫死”单胞藻，因此屋顶应设遮光设施。

室内应配有温度计，保种常用5000毫升三角烧瓶，用煮沸过滤海水。

保种室应储备以下用品，酒精棉、脱脂棉、筛绢网（300目）、显微镜、滤纸等器材，另在保种室旁配置专门的配药房，面积根据实际情况而定，保持配药房整洁干净。

2．培养条件保种时每天需摇瓶3～4次，防止菌膜产生。

培养架上安装日光灯做光源，以备自然光不足时补充，强光照射用白窗帘遮光。

保种室的温度应控制在单胞藻的适温范围内，一般在北方应具备升温设施，使硅藻保持在16～18℃，金藻保持在20～22℃。

3．培养方法和步骤培养容器内外先用稀H C剂清洗，再用淡水冲洗。

用300目的筛绢网把脱脂棉包裹在内过滤海水，然后用淡水冲去瓶外的生海水，放在电炉上加热消毒，海水煮沸后停5分钟至水泡消失，然后再加热煮沸，至水泡消失。

这样对细菌和原生动物的杀灭比较彻底，冷却备用。

4.营养盐金藻、硅藻营养盐配方：分别配制甲液和乙液，然后按比例进行混合后使用。

甲液配方：三氯化铁6克、氯化锰1.5克、硼酸150克、钠盐220克、硝酸钠500克、硫酸二氢钠200克、微量金属溶液5毫升、蒸馏水5000毫升；乙液配方（微量金属溶液）：氯化锌4克、氯化钴3克、钼酸铵1.5克、硫酸铜1.5克、蒸馏水200毫升。

将消毒冷却后的甲液与乙液按100∶1的比例混合，如果培育金藻每1000毫升营养液需加入维生素B 1（0.1克/支）和维生素B 12（0.5毫克/支）各一支。

藻类生物学实验

进行微藻培养时，可根据培养藻类对营养的要求，选用合适的配方，在消毒水中按配方加入各种营养物质配成。所加肥料应保持清洁，某些不清洁肥料必须消毒，预防敌害生物通过肥料污染。
绿藻培养液配方：
①海洋三号扁藻培养液（海洋研究所，1960）：
NaNO3
0.1g
2Na3C6H5O7﹒ 11H2O 0.02g
1、实验材料：海带、裙带菜、紫菜、小球藻、球等鞭金藻等,选4种藻 2、实验仪器：紫外分光光度计(208实验室) 3、实验器材：研钵（每组一套）、15ml离心管（每组4支-依藻种类定）、
15ml刻度试管（每组4支）、0.45m的滤膜（每组3个），抽滤装置，离心机（或用20ml针管和滤膜器） 4、试剂：丙酮（分析纯）、MgCO3
碘液，常用的配方是：将6克的碘化钾溶于20毫升水中，待完全溶解后加入4克碘，摇荡，待碘完全溶解后，加入80毫升蒸馏水，贮存在棕色试剂瓶内。）
（3）计数板与盖玻片洗净擦干――盖好盖玻片――摇荡藻液――吸取藻液（干的微吸管）――迅速加样――1分钟后低倍镜下计数－计数任何对角两大格（加盖玻片后每一大格即形成一个体积为0.1立方毫米的空间），然后取其平均值。每个样品须重复计数两次。
三、实验步骤
3、分离：镜检待分离的藻液，调藻液浓度为5-6个藻细胞为宜，在已灭菌的载玻片上滴加6滴消毒培养液，另取一载玻片滴一滴稀释的待分离藻液，在显微镜下用微吸管吸取所需的藻细胞，放在第一滴消毒水中，清洗，再用微吸管吸取所需的藻细胞放在备有培养液的试管中。
4、将装有藻细胞的试管置于适宜的条件下培养。
三、实验步骤
1、抽滤：减压过滤5ml的藻类培养液到玻璃纤维滤片上，约加0.1g MgCO3 细粉，使均匀覆盖于薄膜上，倒入水样抽滤，注意避免高温、强光及压力

单细胞藻类饵料培育方法

培养池经５Ｏ ‰ 的高浓度漂白粉池
层藻液，按１０％～２０％比例接入到新的培
养器具中，加入营养盐，进行充气培养。每隔５天左右，培养袋（桶）内藻液浓度又达到了最大，又可以进行袋接袋或桶接通的扩大培养，扩大可以按１０％比例
般控制在５０００～８０００１ｘ之间，温度过低
时要打开空调恒温设备。
（３）做好镜检和观察
为了保证藻种纯度，必须不定时的
也可以称为一级培养，是从大中专
一
２６一
紫致富指南２０１５ — ２０
又称为三级培养。这一阶段是进行
置，且地势要求略高。常用器具有装苗用的尼龙袋、白塑料桶、聚乙烯塑料袋等有
一
大规模生产的培养过程，用来满足幼体摄食需要。一般要在育苗生产开始前一星期左右培养好
１．培养设施可以用２￣２０ｍ３之间，池内铺上白色
三、保种培养
污染。进入保种室要有专用的工作服和鞋子，对手、鞋子，及其它操作用具都要严格冲洗消毒。摇动藻液时，动作要轻柔，不要摇到瓶子外，对不同藻种的操作要重新消毒，防止交叉污染。
（２）调节光照和温度
在阴雨天用人工光源补充光照，一
又称为二级培养。中继培养即要把
做好镜检工作，如发现污染严重的
藻种逐渐扩大培养，又要向生产性培养

细胞藻类培养

严格防止污染：
因为：藻种培养在室内，培养容器为玻璃瓶。防止污染条件较好。
只要藻种级没有敌害生物污染，扩大培养到水池，生产周期短，就是发生污染敌害生物还需要一段生长、繁殖时间才能达到一定数量，所以影响不大。
（六）防治敌害生物的措施
首ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ接种的藻种最好取自指数生长期。
接种量大，从培养开始培养藻液在培养液中即占数量上的绝对优势。
01
02
②保持培养藻液的生长优势和数量优势
01
在培养过程中，严格防止污染是重要的，但从目前单细胞藻类的培养水平看，绝对防止敌害生物污染是不可能的，
02
要根本的解决这个问题，就必须不断的补充新的“纯”藻种来取代在长期培养过程中已经受污染的藻种，这才可能使培养较好的顺利进行。
③做好藻种的分离、培养和供应工作
第二章单细胞藻类培养
第二章单细胞藻类培养
一、单细胞藻类的种类与生物特性（一）单细胞藻类培养的种类常用的饵料微藻主要有：牟氏角毛藻：虾、蟹、海参、海胆的幼体；三角褐指藻：虾、蟹、海参、海胆的幼体、种贝；中肋骨条藻：虾、蟹幼体；底栖舟形藻：鲍、海参、海胆、埋栖贝类、舔食螺类的附着幼体；底栖卵形藻：同上；等鞭金藻：贝、虾、蟹、海参、海胆的幼体；亚心形四片藻：轮虫、卤虫、种贝及虾的后期幼体；海水小球藻：同上；钝顶螺旋藻：虾、蟹幼体及配合饲料的添加剂；
水样采回后，进行显微镜检查，如果发现有需要分离的藻种，而这种藻种的数量较多时，可立即进行分离，若数量少，必须先经过预备培养，待数量增多后再分离。
二、藻种的分离
（二）预备培养
1、容器：通常采用三角烧瓶。 2、培养液：各种藻类的培养液存在差异。土壤抽出液Ⅰ:取土壤1kg，加纯水1000ml，煮沸60min，在暗处放置2d，过滤，以滤液600ml加纯水400ml。土壤抽出液Ⅱ：取土壤1kg，加纯水1000ml，再加入NaOH2-3g，煮沸120min，冷却后过滤，滤液直接使用。土壤抽出液Ⅲ：取土壤1kg，加纯水2000ml，煮沸煎浓，把上部泥浆倾入烧瓶中澄清，静置一昼夜后，次日吸取上清液，再煮沸煎浓。第三天在如法煎浓，最后倾入三角烧瓶中，加棉花塞，煎浓，直至得到1000ml的深褐色的土壤抽出液。每次使用后，煮沸灭菌保存。

单细胞藻类培养技术

实用技术—生物饵料责任编辑李振龙单细胞藻中含有大量的多聚不饱和脂肪酸（PUFAs）、EPA和DHA，而且多数的单细胞藻具有生长繁殖快、环境适应力强、培养周期短等特点。

可实现在人工控制条件下大量培养获得高产的目的，是鱼、虾、贝类等海产品的理想鲜活饵料，藻类培养质量的好坏将直接影响海产品育苗的成败，因此单细胞藻类的培养技术是育苗成功的基础和关键技术。

随着人工育苗技术的成熟，单细胞藻类在贝类、虾蟹类、鱼类人工育苗中得到了广泛应用。

以下简述一下藻类培养的注意问题：一、培养方式根据藻种培养的目的和要求的不同，单细胞藻的培养方式也有多种。

根据藻的纯度一般分为纯种培养和单种培养。

培养方法主要分为保种室培养和生产性培养。

目前水产养殖过程中最为基础的培养是直接在自然水域中培养单细胞藻。

经过滤的海水或淡水里有硅藻、绿藻等各种单细胞藻；有轮虫、桡足类、枝角类等各种浮游动物；有多种小型底栖动物等，利用繁殖自然水体里本身就有的单细胞藻，促进浮游动物、底栖动物等基础饵料生物的生长繁殖。

而随着土池育苗的发展以及藻类在毒理学科研的需要，也可使用封闭或半封闭方式定向培养纯种单细胞藻。

二、扩种目前的生产性培养主要分为一级、二级和三级培养。

一级是藻种活化培养，一般在单细胞藻的保种室里进行，多采用250mL～5000mL的三角烧瓶，逐渐扩大培养；二级是藻种扩大培养，采用40L或50L的塑料桶、塑料袋充气培养单细胞藻；三级是在土池里投喂饵料的培养。

刚买回来的藻种一般进行一级扩种，扩种过程要求严格的无菌环境，最好每天早上7∶30左右，时间不易过早，待藻种上浮后扩种，取上层活跃藻体转接。

不宜在晚上接种，因为晚上不少藻类沉在底部，而白天藻类进行光合作用，趋光上浮，便于观察其运动能力，还可起到选种的作用；刚买回的藻种第一次转接时不易全部转接，转接其三分之一至二分之一即可，并放在温度较低、光线较弱的地方培养，待藻适应光照条件后再调至其生长所需正常温度、光照条件进行培养，20天左右转接一次。

培养绿藻的配方及优化方案分享

培养绿藻的配方及优化方案分享一、为什么说绿藻水体非常适合养殖水体(一)扁藻里的亚心型扁藻与青岛大扁藻：因其适应性强、生长繁殖快、极易培养又是虾、蟹、贝及其他海产动物早期幼体优质饵料，富含幼体所需多种维生素与脂肪酸，所以目前国内已广泛培养。

小球藻:作为第一个被人工培养的微藻，凭借其含有丰富的Pro、多糖、不饱和脂肪酸、繁殖速度快是地球上动植物中唯一能20h增值4倍的生物，因而在国内已大规模的工厂化的培养，也作为保健食品商品化。

小球藻中的多糖有增强免疫活性的功能。

也含有保肝、解毒成份，具有调节肠胃吸收等功能因而在饲料-鱼虾开口饵料中具有很高的实用价值。

盐生杜氏藻：主要体现在医学方面，其清洗血液血管，使硬化的毛细血管恢复生机，也是世界上最强的天然抗衰老剂。

也是某些经济动物幼体的优良饵料，目前国内已广泛进行工厂化养殖，并提取胡萝卜素、甘油、糖蛋白。

绿藻因富含大量多糖、不饱和脂肪酸、Pro、色素、维生素，有很高的经济价值而且易培养，因而国内外已广泛的培养。

二、理想中养殖水体绿藻的培养（二）很多人在养殖中都知道养殖鱼、虾最适合水体是硅藻水、绿藻水，那么怎么使普通水体变成硅藻水跟绿藻水呢？要肥绿藻水，必须要有藻源，使其成为优势种群，在实践生产中大家可能没有条件，有条件的大企业或者海洋学校在自然界中选择分离出所需藻种（分离纯化藻种把单一的藻类分离出来，也就是大量稀释后用毛细管来挑选所需藻种），在实验室接种，根据所需藻种营养液培养（先小烧杯小量培养等达到一定数量）然后到二级培养（18L 桶），必须添加营养盐，充足的光照，温度，定期活化过滤。

三级培养（大池）最后取藻液到虾塘。

这种方法是我认为以后技术成熟发展的必然步奏，但因目前防止藻种污染，保种都让一般企业犯愁，所以想要达到这种必然要有大的技术或者工艺流程的改进。

三、肥水、水体过肥的控制（三）接下来我们谈下如何使绿藻肥起来，主要有有机肥与无机肥、氨基酸肥、氨基酸有机质复合肥，有机肥有用发酵的鸡粪、猪粪，加黑糖使用亦可。

藻种培养：

藻种培养：1．藻种培养设施：藻种的培养要在保种室中进行，保种室要求通风条件好，光线条件好，温度可控性好，保种室要配有空调、冰箱、具有人工光源的培养架等。

培养中常用培养仪器有显微镜、解剖镜等，容器有三角烧瓶、广口玻璃瓶等。

保种室要严格消毒，防止病菌的侵入。

2．容器、工具的消毒：进行单细胞藻类的纯培养，容器、工具、培养基都要进行严格灭菌，但一般生产性的单种培养，则只须达到消毒目的就可以了。

常用的消毒方法有高温消毒法和化学药品消毒法。

高温消毒法是利用高温杀死微生物的方法。

不耐高温的容器如塑料和橡胶制品等不能利用高温法消毒。

a、直接灼烧消毒接种环、镊子等金属小工具，试管口、瓶口等可以直接在酒精灯火焰上短暂灼烧消毒。

载玻片、小刀等则最好先蘸酒精，然后在酒精灯火焰上点燃，等器具上的酒精烧完，也就完成了灭菌操作。

b、煮沸消毒把容器、工具放入锅中，加水煮沸消毒，一般煮沸10-20分钟。

大型锥形瓶消毒，可在瓶口上放一普通的玻璃漏斗，再在漏斗上放一称量瓶盖，在锥形瓶内加少量淡水，置电炉上加热煮沸5-10分钟，可使整个瓶壁消毒。

消毒完毕即用消毒的纸或消毒的纱布包扎瓶口。

此法适合消毒小型的容器工具。

c、烘箱干燥消毒将玻璃容器、金属工具用清水洗干净后，放入烘箱。

关闭烘箱门，打开通气孔，接通电源加热。

当温度上升到120℃时，关闭通气孔，停止加热。

如果进行纯培养，容器必须灭菌，当温度上升到105℃时，关闭通气孔，继续加热至160℃，保持温度，恒温2小时，然后停止加热。

必须要等到温度下降到60℃以下，才能打开烘箱门。

有棉塞和纸包扎的容器、工具灭菌，不能超过180℃，以免烘焦。

化学药品消毒主要用于生产性大量培养中，大型容器、工具、水泥池等常用化学药剂消毒。

a、漂白粉消毒工业用漂白粉一般含有效氯25%~35%，消毒时按万分之1-3的含量配成水溶液，把容器、工具在溶液中浸泡半小时，再用消毒水冲洗3~4次即可。

b、酒精消毒酒精消毒常用于中小形容器和工具，方法是用纱布蘸70%酒精在容器、工具的表面涂抹即可。

单胞藻类的实验室培养

• 静止期后的老化藻对扩大培养或投喂都不利
（2）封闭式培养和开放式培养
• 封闭式培养（closed culture）：指把培养液密封在透明的容器中，与外界空气隔离，暴露在阳光中，CO2完全采用人工供给的方法。各种反应器等 • 开放式培养：指把藻类培养在开敞容器中，如广口玻璃瓶、水族箱、玻璃钢水槽、水泥池等。
封闭式薄膜装置
封闭式塑料薄膜袋培养，方法简单，成本低、培养的藻细胞密度大，不易污染且生产周期短，效果很好
细砂布粗砂碎石筛板
粒径 0.1mm
厚度 60～80cm 2～3层网目<0.1mm的筛绢网
3～4mm
8～10cm 1层网目1mm的胶丝网布 2.5～3.5cm 5～8cm 1层网目1～2mm胶丝网布筛孔2cm 5cm
培养用水
海水沉淀砂滤脱脂棉烧开
冷却过滤器一级培养
水消毒池
二、三级培养
培养液的配制
配方极多，每种配方主要适用于一定藻种，这里介绍比较常用的几种：水生4号和克诺普（Knop）培养液，一般用于绿藻；蓝藻可用朱氏10号或水生105号无氮培养基（后者适于固氮蓝藻）；硅藻可用朱氏10号和水生硅1号培养基；另外还有海产绿藻、硅藻的培养基。常用培养基配方见下表。
以上用水量都是加至 1000mL，海藻培养液用海水，如无海水可用淡水 1000mL加30克食盐代替。
微藻的实验室培养
• 藻类的概述 • 培养的方式 • 实验室培养
绿藻
裸藻
黄藻
蓝藻门
一、藻类的概述
• 微藻（Microalgae），是原生生物界一类真核生物。 • 藻类植物共约为2100属,27000种。根据所含色素、细胞构造、生殖方法和生殖器官构造的不同，分为绿藻门、裸藻门、轮藻门、金藻门、黄藻门、硅藻门、甲藻门、蓝藻门、褐藻门和红藻门。色素的颜色划分，藻可分为3类：绿藻、褐藻和红藻 • 单胞藻具有利用太阳光能效率高、营养丰富、生长繁殖迅速、对环境的适应性强和容易培养等重要特性，因而受到重视。

单细胞藻类培养

单细胞藻类培养温度。

④注意酸碱变化 * CO2 被吸收利用，导致藻液 pH 上升。

* 其他营养物质的吸收，也会引起 pH 的上升或下降。

* 如 pH 过高或过低，可用 1mol/L 的盐酸或氢氧化钠调节。

2、培养藻类生长情况观察和检查* 藻类的生长情况，可以通过藻液呈现的颜色，藻细胞的运动或是悬浮情况，是否有沉淀和附壁现象；* 菌膜和敌害生物污染迹象的有无等观察而了解大概情况。

（六）防治敌害生物的措施 * 1、预防措施：* ①严格防止污染：* 防止污染的重点应该放在生产性藻种培养这一级上。

* 因为：藻种培养在室内，培养容器为玻璃瓶。

防止污染条件较好。

* 只要藻种级没有敌害生物污染，扩大培养到水池，生产周期短，就是发生污染敌害生物还需要一段生长、繁殖时间才能达到一定数量，所以影响不大。

②保持培养藻液的生长优势和数量优势* 首先接种的藻种最好取自指数生长期。

* 接种量大，从培养开始培养藻液在培养液中即占数量上的绝对优势。

③做好藻种的分离、培养和供应工作* 在培养过程中，严格防止污染是重要的，但从目前单细胞藻类的培养水平看，绝对防止敌害生物污染是不可能的，* 要根本的解决这个问题，就必须不断的补充新的“纯”藻种来取代在长期培养过程中已经受污染的藻种，这才可能使培养较好的顺利进行。

2、清除、抑制或杀灭敌害生物的方法* ①使用过滤方法清除大型敌害生物：* 饵料微藻都很小，对污染的大型敌害生物（如轮虫等）可用过滤方法清除。

* 清除轮虫等敌害生物可用网孔小于 60um 的密筛绢网过滤，必须连续过滤。

②使用药物抑制或杀灭敌害生物* 培养亚心形扁藻和湛江等鞭藻出现尖鼻虫危害时，在藻液中加 0.003%医用浓氨水，可有效杀死尖鼻虫不影响藻细胞生长繁殖。

* 如果在藻液中细菌大量繁殖时，致使藻细胞生长缓慢大量下沉， lL 藻液中加入少量青霉在素，可抑制细菌的生长。

③改变环境条件杀灭敌害生物* 利用亚心形扁藻耐高盐的特性，使用提高比重的方法杀灭敌害生物。

淡水藻类wc培养基配方

淡水藻类wc培养基配方全文共四篇示例，供读者参考第一篇示例：淡水藻类是一类生长在淡水环境中的微藻，以其在生态系统中的重要作用而备受关注。

为了研究淡水藻类的生长特性和生态学特征，科研人员经常需要利用培养基来培养淡水藻类。

淡水藻类wc培养基是一种常用的培养基，能够提供淡水藻类所需的营养物质和生长条件，促进其生长和繁殖。

淡水藻类wc培养基的配方包括多种成分，包括碳源、氮源、磷源、微量元素和维生素等。

下面我们将详细介绍一份常用的淡水藻类wc培养基配方：主要成分：1. 水：1000mL2. NaNO3（硝酸钠）：0.1g3. K2HPO4（磷酸氢二钾）：0.02g4. MgSO4（硫酸镁）：0.2g5. CaCl2（氯化钙）：0.02g6. FeSO4（硫酸亚铁）：0.001g7. EDTA-Na2（二乙二胺四乙酸二钠）：0.001g8. H3BO3（硼酸）：0.00004g9. MnCl2（氯化锰二水合物）：0.0001g10. ZnSO4（硫酸锌）：0.0001g11. CuSO4（硫酸铜）：0.0001g12. CoCl2（氯化钴）：0.0001g13. MoO3（氧化钼）：0.0001g14. NiSO4（硫酸镍）：0.0001g15. Vitamin B1（硫胺素）：0.0001g制备方法：1. 将硝酸钠、磷酸氢二钾、硫酸镁、氯化钙、硫酸亚铁、二乙二胺四乙酸二钠、硼酸、氯化锰二水合物、硫酸锌、硫酸铜、氯化钴、氧化钼、硫酸镍、硫胺素分别称量并溶解于水中，得到氮源、磷源、镁离子、钙离子、铁离子、螯合剂和微量元素的溶液。

2. 将上述溶液混合均匀成淡水藻类wc培养基溶液。

3. 调节溶液的pH值为7.0-7.5。

4. 将培养基溶液装入适量的培养瓶或培养皿中。

5. 通过高压灭菌或过滤等方法对培养基进行消毒处理。

淡水藻类wc培养基的配方中包含了各种重要的营养物质，如氮源、磷源、微量元素和维生素等，能够满足淡水藻类的生长和繁殖需要。

单胞藻培养

回培养方式
连续培养在国外应用较多，我国目前应用很少。连续培养在国外应用较多，我国目前应用很少。国外连续培养两种最普通的方式为“恒浊器” 国外连续培养两种最普通的方式为“恒浊器”和恒化器” “恒化器”。恒浊器是人为确定藻液收获密度，恒浊器是人为确定藻液收获密度，由光电仪器自动监测，当培养容器中藻细胞超过规定数值，监测，当培养容器中藻细胞超过规定数值，藻液自动流出，新培养液同时流入，动流出，新培养液同时流入，自动化仪器不断调整流出率，保持藻液细胞密度相对稳定；流出率，保持藻液细胞密度相对稳定；恒化器是以一种重要的营养物质（如硝酸盐）恒化器是以一种重要的营养物质（如硝酸盐）的浓度为指标，当这种营养物质的浓度降到某一水平时，度为指标，当这种营养物质的浓度降到某一水平时，收获一定量的藻液，收获一定量的藻液，同时加入等量的含有一定数量的营养物质的培养液，的营养物质的培养液，保持培养容器中藻细胞生长率的稳定。率的稳定。
2、培养设备与设施
单胞藻培养设备与设施主要包括：单胞藻培养设备与设施主要包括：工作室培养容器培养室与培养池水处理系统充气系统
（1）工作室
回培养设备
工作室是饵料培养工作人员进行单胞藻培养经常性工作的地方，常位于车间的一端。性工作的地方，常位于车间的一端。工作室配备显微镜、常用仪器、工具、试剂、工作室配备显微镜、常用仪器、工具、试剂、药肥料等；品、肥料等；工作室附设一保种间和一清洗消毒间。工作室附设一保种间和一清洗消毒间。保种间主要进行藻种的分离、保存和培养等工作，保种间主要进行藻种的分离、保存和培养等工作，面积视培养规模而定，一般为10 10～配有空调、面积视培养规模而定，一般为10～20m2，配有空调、冰箱、具人工光源的培养架等；冰箱、具人工光源的培养架等；清洗消毒间，主要供少量海水和容器、清洗消毒间，主要供少量海水和容器、工具等消毒用，设有清洗水池、消毒池、灭菌锅、毒用，设有清洗水池、消毒池、灭菌锅、电炉等面积一般10 10～面积一般10～15m2。

单细胞藻类的培养方法

中国海洋报/2003年/04月/04日/单细胞藻类的培养方法杨威单细胞藻类,简称单胞藻,因藻体微小,又称微藻。

单胞藻具有利用太阳光能效率高、营养丰富、生长繁殖迅速、对环境的适应性强和容易培养等重要特性,因而受到重视。

单胞藻的应用主要是直接作为水产经济动物幼体(如大多数贝类的幼虫、虾类的蚤状幼体和糠虾幼体、海参类的樽形幼体等)和成体的饵料。

其次,单胞藻可用于培养动物性生物饵料(如轮虫、枝角类、桡足类等),再以动物性生物饵料投喂,作为水产经济动物幼体(如虾类的糠虾幼体、仔虾;蟹类的蚤状幼体、大眼幼体;鱼类的仔鱼、稚鱼等)的饵料,单胞藻起到了间接饵料的作用。

此外,单胞藻在光合作用过程中能放出大量氧气并吸收水中的富营养化成分,起到净化水质的作用,同时还可提高虾、蟹、鱼类育苗的成活率。

单胞藻的培养过程可分为容器、工具的消毒,培养液的制备,接种和培养四个步骤。

一、容器、工具的消毒1.加热消毒法该法是利用高温杀死微生物的方法。

不能耐高温的容器和工具,如塑料和橡胶制品等不能用加热法消毒。

(1)直接灼烧灭菌此法可直接把微生物烧死,灭菌彻底,但只适用于小型金属或玻璃工具的消毒。

(2)煮沸消毒用水煮沸消毒,一般煮沸5分钟~10分钟,适用于小型容器、工具的消毒。

(3)烘干箱消毒亦称为恒温干燥箱消毒法。

2.化学药品消毒法在生产性大量培养中,大型容器、工具、玻璃钢水槽和水泥池,一般用化学药剂消毒。

(1)酒精浓度为70%的酒精常用于中、小型容器的消毒。

用纱布蘸酒精在容器、工具的表面涂抹,10分钟后,用消毒水冲洗两次即可。

酒精是一种较理想的消毒药品。

(2)高锰酸钾消毒时按300ppm配成高锰酸钾溶液,把洗刷洁净的容器、工具放在溶液中浸泡5分钟,取出,再用消毒水冲洗2次~3次即可。

二、培养液的制备单胞藻的培养液(液体培养基)是在消毒海水(或淡水)中加入各种营养物质配制而成。

1.海水的消毒(1)加热消毒法把经沉淀或沉淀后再经砂滤的海水,在烧瓶或铝锅中加温消毒,一般加温达90摄氏度左右维持5分钟或加热达到沸腾即停止加温。

单细胞藻类的培养器具的消毒

通常在配制培养液时以每1000mL水中加入母液1mL为宜(1:1000)。如配方中KNO3 用量为100mg/L，母液每毫升就应含KNO30.1g。
贮液：固体营养元素为减少每次称量的麻烦和使用方便而配成的重量百分比溶液。
如配1％KNO3 贮液，100ml水加1gKNO3 。
贮液可以是单项营养元素配成，也可以是两种或多种营养元素同配而成，但要尽量防止沉淀。
②漂白粉浓度 80～100ppm有效氯
使用漂白精，有效氯20ppm,充气10分钟，使之均匀分布于水中，6-8h消毒，【按每立方米水体25克的量加入硫代硫酸25mg/L】,强充气6-8小时。
检验余氯的常用方法：
1.用硫酸—碘化钾—淀粉试液测定无余氯存在即可使用； 2.也可用有运动能力的种类如扁藻做培养试验检测是否
4、高压蒸气灭菌
（二）化学药品消毒法
在生产性大量培养中，大型容器、工具、玻璃钢槽和水泥池消毒一般常用化学药剂消毒。
1、酒精（C2H5OH）
酒精即乙醇，能使生物体蛋白质脱水变性凝固，具有杀菌作用。浓度为70%-75%的酒精杀菌能力最强，常用于小、中型容型的消毒，方法是用纱布蘸酒精在容器、工具的表面涂抹。容器可在几分钟后，用消毒水冲洗。刚冲洗的容器可用纯酒精消毒。
2、煮沸消毒
把容器、工具放入锅中，加水煮沸消毒，一般煮沸15-30分钟。大型锥形瓶消毒，可在瓶口上放一只普通的玻璃漏斗，再在漏斗上放一称量瓶盖，在锥形瓶内加入少量淡水，置电炉上加热煮沸5-10分钟，可使整个瓶壁消毒，同时冷凝水回滴入锥形瓶。消毒完毕即用消毒的纸或消毒的纱布盖在瓶口。此法适合消毒小型的容器工具。如果在水中加入2%的碳酸钠效果更好。
简陋的设备也能用来消
毒

常用微藻培养液配方

二、常用微藻培养液配方微藻种类不同，培养液的配制方法也不同，即使同一种类，个人的惯用方法也不同。

现将硅藻、金藻、绿藻、黄藻和蓝藻常用的培养液配方介绍如下：（一）硅藻类培养液1、三角褐指藻、新月菱形藻培养液（1）人尿5毫升海泥抽取液20-50毫升海水1000毫升2、三角褐指藻、新月菱形藻培养液（2）硫酸铵[（NH4）2SO4]或硝酸铵（NH4NO3）30毫克过磷酸钙发酵尿液3毫升柠檬酸铁（FeC6H5O7) 0.5毫克海水1000毫升过磷酸钙发酵尿液是将1%的过磷酸钙加入尿中发酵而成，可补充尿液中的磷肥不足和保持氮肥。

3、三角褐指藻、新月菱形藻培养液（3）人尿1.5-2毫升硝酸钠（NaNO3) 50毫克磷酸二氢钾（KH2PO4）5毫克硫酸铁[Fe2(SO4)3](1%溶液）5滴柠檬酸钠（2Na3C6H507·11H2O) 10毫克硅酸钠（Na2SiO3) 10毫克维生素B12 0.2微克海水1000毫升适于小型和中继培养，加入10-20毫升海泥抽取液效果更好。

4、三角褐指藻、新月菱形藻培养液（4）硝酸铵（NH4NO3）30-50毫克磷酸二氢钾（KH2PO4）3-5毫克柠檬酸铁铵[Fe(NH4)3(C6H5O7)] 0.5-1.0毫克硅酸钾（K2SiO3) 20毫克海水1000毫升5、厄尔德-施赖伯培养液硝酸钠（NaNO3) 100毫克磷酸氢二钠（Na2HPO4·12H2O）20毫克海水1000毫克是最简单的配方，适应于硅藻的培养。

6、黄海所角毛藻培养液硝酸铵（NH4NO3) 5-20毫克磷酸二氢钾（KH2PO4）0.5-1.0毫克柠檬酸铁（FeC6H5O7) 0.5-2.0毫克海水1000毫升加入少量人尿，效果更好。

7、生产上用硅藻培养液硝酸钠60克（或15克硝酸钠+20尿素）磷酸二氢钾（KH2PO4）4克硅酸钠（Na2SiO3) 4.5克柠檬酸铁（FeC6H5O7) 0.045克消毒海水1米3适合生产上培养三角指藻、新月菱形藻和角毛藻。

单细胞藻类的培养液汇总

第六节单细胞藻类的培养液藻类的生长繁殖需要吸收各种营养元素，单细胞藻类的培养液必须具备这些营养元素,而且在营养成分和数量上都应该符合藻类的需要，各种藻类对营养的需要有很多共同点，所以一些培养液配方，能应用于多种藻类的培养。

然而，藻类的不同种类，对营养的要求是有差别的，各有其特殊性，不同种类的培养液配方，当然也应该不同。

只有较好地符合培养种类需要的配方，才可能获得较理想的效果。

一个培养液配方的提出，首先必须了解这种藻类对营养的要求，要达到这一点，进行一系列的试验是必要的。

还必须在使用中验证配方的效果，并在实践过程中不断总结经验，加以改进，使配方达到更理想的水平。

本节内容分培养液成分、培养液配方和培养液的配制三部分。

一、培养液成分单细胞藻类培养液的成分有下列七类。

(一)大量元素1．氮(N) 单胞藻培养液常用的氮源有硝酸钾(KNO3)、硝酸钠(NaNO3)、尿素(NH2CONH2)、硝酸铵(NH4NO3)、硝酸钙[Ca(NO)3)2]、氯化铵(NH4C1)、硫酸铵[(NH4)2SO4]、发酵人尿……等。

其中以硝酸钠和硝酸钾最常用。

但不同的藻类对硝酸态氮和铵态氮的吸收利用情况是不同的，必须根据不同的藻类选择合适的氮源。

2．磷(P) 单胞藻培养液常用的磷源有磷酸二氢钾(KH2PO4)、磷酸二氢钠、(NaH2PO4)、磷酸氢二钾(K2HPO4)、磷酸氢二钠(Na2HPO4)4种。

海水单胞藻培养液应用磷酸二氢钾，如用磷酸氢二钾所配培养液会产生大量沉淀。

3．铁(Fe) 单胞藻培养液常用的铁源有三氯化铁(FeCl3)、硫酸铁(FeSO4)、硫酸高铁[Fe2(SO4)3]、氧化铁(FeO)、柠檬酸铁(FeC6H5O7)、柠檬酸铁铵[Fe(NH4)3(C6H5O7)]等。

其中最常用的是三氯化铁和柠檬酸铁。

无机铁在水中容易形成一种胶体复合物，无可逆反应，不能为生物利用。

铁也容易产生沉淀。

所以尽管铁在数量上所需很少，但要满足藻类需要却很困难。

1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。

微藻工厂化培养经验分享（附单胞藻的培养配方）大家好，很高兴今天能跟大家交流一下微藻的规模培育。规模培育在水产养殖方面现在主要运用于大棚生物饵料方面(一定地点建立车间、浓缩之后近距离管道运输到养殖区域)、提取色素添加在饲料中，至于土塘泼洒，如何控制量、增氧和开口饵料这方面正在摸索，需要大家一起总结出经验。今天我跟大家主要跟大家分享一下藻种的工厂化规模化培育。

群里面应该很多人都培育过藻，大家都知道藻种的培育分为一级、二级、三级培养，今天我是简单从一级、二级、三级培养过程可能中遇到的问题、日常管理、接种、藻种营养配方这些方面做一下简单的交流。

因各地环境气候、温度、光照、水质条件不同。不同季节、藻种性质不同，单位水体养殖品种的需求量也不同。所以培养条件、营养盐配方等各有不同。今天我主要是以金藻为例，引申出其他藻种的营养配方，让大家学习一下其中的相似点。

国大部分水产育苗企业，在育苗生产中都是自备微藻养殖设施，自行生产各类饵料用微藻。但是一般育苗场都普遍缺乏相应的专业技术力量，只能利用各自的藻池和天然水体粗放培养，在饵料微藻种质、生产技术和应用方法上都各自为正，导致微藻种质混乱、供应不稳定、营养成分不平衡、饵料效价低、缺乏多品种集约化生产应用技术；同时，受限于微藻高密度养殖、采收技术和浓缩液保藏技术的限制，国几乎没有统一的、专业化的饵料微藻质量标准和集中供应点。所以工厂化育苗需要及时的补充藻种，开口饵料非常重要。

首先从工艺流程上来说一级培养：主要用于保种，主要用的仪器是锥形瓶，其能够完全消毒，所以应用在保种上面特别多。二级培养：主要是用塑料白桶（聚丙烯材料），生产上也用20L的饮水桶，但是瓶口小，操作不方便，消毒也不彻底；而用氧气袋又易破裂。在南方经常可以见到用玻璃制作的大型鱼缸和氧气袋。回复举报|来自Android客户端2楼2016-03-03 08:04 • •

• xiazaiba06

• •

知名人士 10

三级培养：主要有小型的10 m3、20 m3、30m3左右的室水泥池，采光良好，白色透明玻璃钢瓦或塑料薄膜于车间顶部用于培育藻种。

接下来我主要简单的讲一下容器和工具的洗涤、消毒。培藻过程中所有的容器和工具，比如锥形瓶、矿泉水桶、搅拌棒等必须经过去污渍、肥皂等刷洗，之后再用消毒后的蒸馏水冲洗3-4遍。

消毒的方法一般有加热消毒法、化学试剂消毒法、紫外线消毒法。一般小型仪器用加热消毒法，比如锥形瓶，方法是在锥形瓶瓶口放一培养皿，瓶中加水，煮沸，煮沸完之后，用牛皮纸或纱布包住，备用，这种方法能杀死营养体的部分芽孢。

大型仪器、工具、培养池用化学药品消毒（漂白粉、酒精、高锰酸钾、铬酸洗液等），漂白粉的有效氯含量一般是30-35%，漂白精的有效氯的含量是漂白粉的2倍，消毒时按1/10000-3/10000的含量配成水溶液，浸泡容器、工具半小时，再用消毒水冲洗3-4次（消毒水既是煮沸、沉淀、过滤其中的水）。水泥池的消毒可配成高浓度的浆糊状漂白溶液，淋洒池壁，半小时后用消毒水冲洗干净。也可以用较低含量的漂白粉进行全池浸泡后，用消毒水冲洗，停放12小时后才可使用。

酒精消毒一般用于人为操作，如在活化藻种、摇瓶或者搅拌的时候，涂抹手，消毒小的仪器上使用。酒精一般是配置成70-75%左右，杀菌效果是最显著的，使生物蛋白脱水变性凝固，故有杀菌效果。

海水的消毒，一般海水的消毒有过滤和加入化学消毒剂法。因为海水消毒主要用于三级培养，三级大规模培养时候主要用于杀灭有害生物，处理水必须无毒，对培养藻类的生长繁殖影响不大。水消毒必须简单、经济、易行，不然大规模运水特别多的时候培藻成本会加大。

补充：消毒海水时可根据培养的目的和方式选用以下方法之一。 1、加热消毒法：经沉淀、过滤的海水，一般加温至90℃左右维持5分钟或达到沸腾即可。由于海水中的一些对藻类生长有促进作用的有机物在高温时易遭破坏，所以加温时间不宜太长。 2、过滤除菌法：把经沉淀的海水先经砂滤，把大型生物和非生物杂质去除，再用瓷过滤罐过滤，除去微小生物。 3、次氯酸钠消毒法：按每立方米海水20毫克有效氯的量加入次氯酸钠溶液，充气10分钟后停气，经6~7小时消毒后，按每立方米水体25克的量加入硫代硫酸钠，强充气4~6小时，用硫酸-碘化钾-淀粉溶液测试，若无余氯即可使用。 4、紫外线消毒：有成型的紫外线消毒器可供选用。但此法不易杀灭较大的浮游动物。最好和过滤法结合使用。

加热消毒我们就不解释了。主要是过滤除菌消毒，沉淀后的海水经过纱虑池纱虑大型的生物及非生物杂质出去，再经瓷过滤罐过滤，除去微小生物，也可两次纱虑，两次纱虑也可以起到比较好的效果。

漂白粉和漂白液消毒的时候，向水中加入漂白粉和漂白液，用硫代硫酸钠中和余氯，中和余氯的过程以及操作流程的具体步骤如下：氯含量测定方法一

硫代硫酸钠滴定法需要的物品: 1%碘化钾溶液 (1 g溶于100ml水中) 1.58%硫代硫酸钠溶液 (1.58g溶于100ml水中 ) HCI 37% 样品溶于一定数量的水中的溶液（即稀释一定倍数）

程序在滴定瓶中加50ml碘化钾溶液，0.25ml HCI 和1ml样品溶液，这时候瓶中溶液应该变为褐色用硫代硫酸钠滴定，直到瓶中溶液变为澄清（没有颜色）。每ml硫代硫酸钠可以中和3.55ppt的氯样品溶液的氯浓度 = 硫代硫酸钠的毫升数×3.55 ×100/1000(%) 样品的氯含量=样品溶液的氯浓度×样品稀释倍数

方法二 1．试剂（1）KI溶液：10%。（2）淀粉溶液：0.5%。称取0.5克可溶性淀粉于小烧杯中，用少量水搅匀后加入 100ml的沸水中，加入后不断搅拌，并煮沸至溶液透明为止。加热时间不易过长且应迅速冷却，以免降低淀粉指示剂的灵敏性能。如需久存，可加入少量的HgI2或ZnCl2等防腐剂。（3）H2SO4溶液：2 mol/L。（4）K2Cr2O7标准溶液：0.1000 mol/L。将K2Cr2O7在150-180℃烘干2小时，放入干燥器中冷却至室温。准确称取1.2258克于100ml烧杯中，加蒸馏水溶解后转入250ml容量瓶中，用水稀释至刻度充分摇匀。（5）Na2S2O3溶液：0.1 mol/L。将12.5克Na2S2O3 ·5H2O溶解在500毫升新煮沸冷却后的水中，加入0.1克碳酸钠，储于棕色瓶中并摇匀，保存于暗处一周后标定使用。（低浓度的溶液需稀释）（6）丙二酸：20%溶液。

2．实验步骤（1）硫代硫酸钠溶液的标定用25毫升移液管吸取0.1000 mol/L重铬酸钾标准溶液三份，分别置于250毫升碘量瓶中，加入5毫升6N盐酸、5毫升20%KI，摇匀后在暗处放置约5min，待反应完全，用100毫升水稀释。用硫代硫酸钠溶液滴定至溶液由棕色到绿黄色，加入2毫升0.5%淀粉指示剂，继续滴定至溶液由蓝色至亮绿色即为终点。根据消耗的硫代硫酸钠溶液的毫升数计算其浓度。（低浓度的溶液标定类似）

（2）有效氯含量的测定取10毫升待测消毒溶液，置于250毫升碘量瓶中，加入2 mol/L 硫酸 10毫升，10%碘化钾溶液10毫升，此时溶液出现棕色。盖上盖并振摇混匀后加蒸馏水数滴于碘量瓶盖缘，在暗处放置约5min。打开盖，让盖缘蒸馏水流入瓶。用硫代硫酸钠溶液（装于25毫升棕色滴定管中）滴定游离碘，边滴边摇匀，待溶液呈浅棕黄色时，加入10滴0.5%淀粉指示剂，溶液立即变蓝色，继续滴定至溶液由蓝色至无色即为终点。记录消耗的硫代硫酸钠溶液的毫升数（V，ml）。重复测3次，取3次平均值进行以下计算。因1 mol/L硫代硫酸钠标准溶液

营养盐接下来说一下营养盐的加法。以金藻为例，金藻的生长繁殖过程中必须每个营养元素都有一个最低量，如果低于这个最低量，生长繁殖则会受到抑制，如果某种营养的含量过高也会对藻类产生毒害作用，甚至死亡，因为含量过高会破坏渗透压系统，让藻脱水死亡。今天我跟大家说一下金藻的营养盐，一般主要的营养盐配方是F/2，营养盐有大量元素、微量元素以及维生素，大量元素一般都是硝酸钠（NaNO3）、磷酸二氢钠（ NaH2PO4），微量元素有锌（Zn）、锰（Mn）、钼（Mo）、钴（Co）、铜（Cu）、铁(Fe)，维生素有维生素B1（VB1）：主要是辅助糖类代，对能量起到积极的作用、维生素B12（VB12）：有利于铁的利用，促进代等发育成熟、维生素B6（VB6）：活化多种酶，有助于VB12的吸收等、生物素（VBH）：脂肪和蛋白正常代不可或缺的物质，是一种维持生长、繁殖的营养素。

培藻过程中如果是人工繁殖时，在光照、营养盐、PH适合的情况它会非常大规模的繁殖。此时，水体中的二氧化碳会成为藻类繁殖的限制因子。现在金藻和其它藻在人工繁殖的时候，碳源的补充是非常重要的，因为其它营养盐可以通过正交分解得出最优的含量，而在藻体繁殖过程中光合作用需要大量的二氧化碳，从而导致碳源的需求量增大，这时根据情况人为补充碳源的话会起到非常好的繁殖效果，可通过气石、搅拌等方式补充二氧化碳。

培养金藻的时候，一般一、二级用康维方，康维方一般基于F/2配方基础上的一个配方，而三级培养的时候用金藻培养液。

金藻培养液：硝酸钠溶液：磷酸二氢钾溶液:柠檬酸铁氨=100：10：1，1000ml灭菌海水。在三级培养的时候，营养盐的添加都是1:1000的添加，就是1毫升的营养盐添加到1L的水体中。在生产时可以为了生产等便利，可以放大配方比例，在大规模的培养中1：10000的添加也是可以的。实验结果当然是1:1000最好，但是实验和实际生产中肯定有一定的误差，在实际生产中1:10000也可以正常的培育出高密度的金藻。当然在大规模的培养中1：10000的添加，起到的效果稍微差一点，但也不会差到哪里去。

接种接下来就是接种，接种其实也是一个很简单的操作，接下来我简单说明下。金藻在二级培养（高密度扩大培养的时候），能达到700——800万个cell/ML，扁藻能达到100——150万个cell/ML，小球藻也能达到1000万个cell/ML。

接种就是把作为藻种的藻液接入新配好的培养液中，进行丰富培养。接种的过程虽然简单，但要注意藻种的质量、藻种的密度、接入藻液的数量以及接种的时间等问题。