不同PH值PBS配制
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PBS缓冲液的配制
PBS是最普遍不过的实验室缓冲液,但其配方各异。以下是总结:
母液的配制:
0.2M Na2HPO4:称取 71.6g Na2HPO4-12H2O,溶于 1000ml 水
0.2M NaH2PO4:称取 31.2g NaH2PO4-2H2O,溶于1000ml 水
各种浓度PB(pH=7.4)的配制:
先配 0.2M PB (pH=7.4,100ml):取19ml 0.2mol/L的 NaH2PO4, 81ml 0.2mol/L 的 Na2HPO4, 即可。
然后只需将0.2M PB (pH=7.4)按相应比例适当稀释即可,如:
0.1M PB(PH=7.4):取 500ml 0.2M PB,加水稀释至 1000ml 即可。
0.01M PB (PH=7.4):取50ml 0.2M PB,加水稀释至 1000ml 即可。
0.02M PB (PH=7.4):取100ml 0.2 M PB,加水稀释至 1000ml 即可。
若需要 NaCl的话,加入 NaCl 至0.9%(g/100ml)即可。
另:其它各种另 PH值的 0.2M PB(100ml)配方:
pH 0.2M NaH2PO4(ml)0.2M Na2HPO4(ml)
5.7 93.5
6.5
5.8 92
8
5.9 90
10
6.0 8
7.7
12.3
6.1 85
15
6.2 81.5
18.5
6.3 7
7.5
22.5
6.4 73.5
26.5
6.5 68.5
31.5
6.6 62.5
37.5
6.7 56.5
43.5
6.8 51
49
6.9 45
55
7.0 38
62
7.1 33
67
7.2 28
72
7.3 23
77
7.4 19ml
81ml
7.5 16
84
7.6 13
87
7.7 10.5
0.5
7.8 8.5
91.5
7.9 7
93
8.0 5.3
94.7
0.01M 磷酸盐缓冲液(PBS)配制方法
称取8g NaCl、0.2g KCl、1.44g Na2HPO4和0.24g KH2PO4,溶于800ml蒸馏水中,用HCl调节溶液的pH值至7.4,最后加蒸馏水定容至1L即可。在15lbf/in2(1034×105Pa)高压下蒸气灭菌(至少20分钟),保存存于室温或4℃冰箱中。
需要注意的是,通常所说的浓度0.01M 指的是缓冲溶液中所有的磷酸根浓度,而非Na 离子或K 离子的浓度,Na 离子和K 离子只是用来调节渗透压的。如果是用于免疫组化的话,则需要在配置的时候分别加入100 u/ml青霉素和链霉素之后再调PH、定容、灭菌消毒。
PBS是磷酸缓冲液的简称,不仅伪狂犬病毒要用它稀释,一般的有活性的生物制剂都要用它来稀释,原因就是它具有盐平衡、可调整的适宜pH缓冲作用,蒸馏水不具有盐平衡作用,可以破坏生物蛋白的结构及生物特性;生理盐水不具有调整pH的作用,对完整的、具有活性的物质不能保证其在最适条件下参与生物反应,所以使用PBS是首选。 PBS也不是万能的,有的生物活性物质需要的条件比PBS还要高,就需要在平衡缓冲液中加入更多的成分,维持最佳的条件保证生物活性物质保持其最完整的特性。